一種磺胺間二甲氧嘧啶人工抗原、抗體及其制備方法和應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種磺胺間二甲氧嘧啶人工抗原、抗體及其制備方法和應用，將磺胺間二甲氧嘧啶小分子與EDC-HCl混合，加入無水N,N-二甲基甲酰胺DMF使其全部溶解，為A液，取載體蛋白溶于PBS中，為B液；將A液緩慢滴加到B液中，在室溫下攪拌反應；反應產物在PBS緩沖溶液中透析，得到純化的磺胺間二甲氧嘧啶人工抗原。本發(fā)明將磺胺間二甲氧嘧啶與非動物源的載體大豆11S球蛋白酸性亞基成功連接形成新型抗原，并順利生產出單克隆抗體。大豆11S球蛋白酸性亞基有穩(wěn)定的結構，可在有機溶劑條件下同磺胺間二甲氧嘧啶等小分子半抗原連接，并與免疫動物保持較遠的親緣關系，因此可作為新型的免疫載體，以嘗試取代牛血清白蛋白。
【專利說明】一種磺胺間二甲氧嘧啶人工抗原、抗體及其制備方法和應 用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種酶聯免疫分析方法檢測使用的抗原抗體，尤其涉及的是一種磺胺 間二甲氧嘧啶人工抗原、抗體及其制備方法和應用。
【背景技術】
[0002] 目前，農獸藥殘留已給我國食品的安全供應帶來嚴重的危害，藥物殘留涉及的藥 物種類越來越多，磺胺間二甲氧嘧啶（SDM)也是其中之一?；前烽g二甲氧嘧啶是一種人造 抗生素，作為飼料添加劑廣泛添加到動物飼料中。目前農獸藥殘留物的檢測多通過酶聯免 疫分析的方法，通過特異的抗體抗原反應，來檢測外來抗原的存在?；前烽g二甲氧嘧啶是小 分子化合物，必須同載體蛋白結合形成全抗原，從而誘導抗體的產生。目前，在ELISA中，t匕 較常用的載體是動物源的載體，但是存在一定的免疫缺陷。制備出的抗體的親和力較差，可 迅速被腎臟系統(tǒng)消除；與免疫動物的親緣關系較近，會一定程度上增加陽性克隆篩選的難 度和工作量；此載體蛋白質存在著很大的安全隱患，可能攜帶病毒。因而，探索并使用新型 的非動物源性的免疫載體將逐漸成為未來的發(fā)展趨勢。這種載體應該同免疫動物的親緣關 系較遠，且具有比較穩(wěn)定的結構和較強的水溶性，在有機溶劑存在的狀態(tài)下能和半抗原進 行交聯，制備抗體的親和力良好，檢測靈敏度較高。
[0003] IlS球蛋白分子量為302000-375000,它是由6個酸性亞基（A1、A2、A3、A4、A5、A6) 和6個堿性亞基（BI B2 B3 B4 B5 B6)構成的兩個環(huán)狀六角形結構，酸性和堿性亞基交互 對應，通過二硫鍵連接，形成比較穩(wěn)定的結構形式。酸性亞基A1、A2、A3的等電點為pH5. 15、 pH5. 40、pH4. 75,堿性亞基B1、B2、B3的等電點為ρΗ8. 0、ρΗ8· 25、pH8. 5。酸性亞基是大豆蛋 白中主要起抗原作用的亞基，因此可以嘗試在免疫反應中用作載體。大豆IlS球蛋白酸性 亞基溶解度較高，同免疫動物的親緣關系較遠，制備抗體的親和力良好，檢測靈敏度較高。
【發(fā)明內容】
[0004] 本發(fā)明的目的在于克服現有技術的不足，提供了一種磺胺間二甲氧嘧啶人工抗 原、抗體及其制備方法和應用。
[0005] 本發(fā)明是通過以下技術方案實現的，本發(fā)明一種磺胺間二甲氧嘧啶人工抗原，分 子結構式為：
[0006]
【權利要求】
1. 一種磺胺間二甲氧嘧啶人工抗原，其特征在于，分子結構式為：
所述載體蛋白protein為大豆IlS球蛋白酸性亞基。
2. 如權利要求1所述的一種磺胺間二甲氧嘧啶人工抗原的制備方法，其特征在于，包 括以下步驟： (1) 將0. 05mmol的磺胺間二甲氧嘧啶小分子與26. 26mg的EDC-HCl混合，加入無水 N，N-二甲基甲酰胺DMF使其全部溶解，為A液，取5mg的載體蛋白溶于0. 02M，pH= 7. 4的 PBS中，為B液； (2) 將A液緩慢滴加到B液中，在室溫下攪拌反應4?6h，然后4°C冰箱過夜； ⑶反應產物在pH= 7. 4的PBS緩沖溶液中透析3天，得到純化的磺胺間二甲氧嘧啶 人工抗原，測定其濃度，分裝，_20°C保存。
3. 根據權利要求2所述的一種磺胺間二甲氧嘧啶人工抗原的制備方法，其特征在于， 所述載體蛋白大豆IlS球蛋白酸性亞基的制備方法如下： (1) 以1:10的比例將大豆IlS球蛋白溶于Tris-HCl緩沖液，加β巰基乙醇之后調節(jié) 混合溶液的整體濃度至〇. 〇15mol.Γ1，調pH為8. 0,在90°C條件下水浴30min; (2) 收集除去堿性亞基的上清液，調pH至5. 0,4°C、6500r·HiirT1條件下離心20min分 離沉淀，調pH至中性，冷凍干燥后即得大豆IlS球蛋白酸性亞基。
4. 如權利要求1所述的一種磺胺間二甲氧嘧啶人工抗原用于制備磺胺間二甲氧嘧啶 抗體。
5. 根據權利要求4所述的一種磺胺間二甲氧嘧啶抗體，其特征在于，使用所述磺胺間 二甲氧嘧啶人工抗原作為免疫抗原免疫巴比氏小鼠得到單克隆細胞株，分離純化后得到磺 胺間二甲氧嘧啶單克隆抗體。
6. 如權利要求5所述的單克隆抗體在檢測磺胺類化合物中的應用。
【文檔編號】C07K16/44GK104311650SQ201410504596
【公開日】2015年1月28日 申請日期:2014年9月26日 優(yōu)先權日:2014年9月26日
【發(fā)明者】陳蕾, 朱華玲, 楊松, 閆曉明 申請人:安徽省農業(yè)科學院農產品加工研究所