專利名稱：用作生長激素促分泌劑的雜環(huán)芳族化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及能夠刺激生長激素內(nèi)源性產(chǎn)生和/或釋放的新型雜環(huán)芳族化合物，以及使用這些化合物治療肥胖、改善骨密度(用于治療骨質(zhì)疏松癥)和刺激肌肉質(zhì)量與肌肉強(qiáng)度增加的方法。
背景技術(shù)：
垂體分泌生長激素，它刺激具有生長能力的機(jī)體組織生長，并且通過在細(xì)胞中增大蛋白質(zhì)合成速率和降低碳水化合物的合成速率影響代謝過程。生長激素還能增強(qiáng)游離脂肪酸的活動(dòng)和游離脂肪酸在提供能量方面的作用。
現(xiàn)有技術(shù)中已經(jīng)有多篇專利/專利申請公開了可用作生長激素促分泌劑的化合物。
下列專利/專利申請公開了據(jù)稱可用于促進(jìn)生長激素釋放的苯并稠合內(nèi)酰胺化合物USP5,206,235；5,283,741；5,284,841；5,310,737；5,317,017；5,374,721；5,430,144；5,434,261；5,438,136；5,545,735；5,583,130；5,606,054；5,672,596和5,726,307；WO96-05195和WO95-16675。
下列專利/專利申請公開了可用于促進(jìn)生長激素釋放的不同化學(xué)型物質(zhì)USP5,536716；5,578,593；5,622,973；5,652,235；5,663,171；WO94-19367；WO96-22997；WO97-24369和WO98-58948。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了作為生長激素促分泌劑并且具有下式結(jié)構(gòu)的新型雜環(huán)芳族化合物 包括其可藥用鹽、其前藥酯以及其所有立體異構(gòu)體，其中R1為烷基，芳基，鏈烯基，炔基，芳烷基，環(huán)烷基，環(huán)烷基烷基，烷氧基烷基，芳基烷氧基烷基，芳氧基烷基，雜芳基，環(huán)烷基烷氧基烷基，雜芳基烷基，雜環(huán)烷基或雜環(huán)烷基烷基(其中上述這些基團(tuán)見下文定義)，并且這些基團(tuán)可任選地被1、2或3個(gè)選自鹵素、-OR8、-OC(O)R8、烷基、苯基、苯氧基、鹵代苯基、-CF3、-OCF3、-N(R8a)C(O)(R8)、或-N(R8a)(R8a)的取代基取代；R1a為H，烷基，或環(huán)烷基；Xa為雜芳基，優(yōu)選包括 A為氧，硫，-NH-，-N-R5，或-NC(O)-R2；B為-CR5b或-N-；Z為價(jià)鍵或-S-；G為氧或硫；U為氧，硫，-NH-，或-N-R5b；
R2為烷基，芳基，鏈烯基，炔基，芳烷基，環(huán)烷基，環(huán)烷基烷基，烷氧基烷基，芳氧基烷基，雜芳基，或雜芳基烷基(其中上述這些基團(tuán)的定義見下文)，并且這些基團(tuán)可任選地被1、2或3個(gè)選自鹵素、-OR8b-OC(O)R8b、烷基、苯基、苯氧基、鹵代苯基、-CF3、-OCF3、-N(R8c)C(O)(R8b)、或-N(R8c)(R8b)的取代基取代；R3為H，鹵素，烷基，芳基，鏈烯基，炔基，烷芳基，烷氧基，芳氧基或J1，并且其中的烷基、芳基、鏈烯基、炔基、芳烷基、烷氧基、或芳氧基可以任選地被1-3個(gè)J1取代；R4和R4a相同或不同，并且獨(dú)立地為H，鹵素，-CF3，烷基，或芳基；R5為H，烷基，芳基，鏈烯基，芳基鏈烯基，炔基，芳基烷基，芳基炔基，環(huán)烷基烷基，烷氧基烷基，芳氧基烷基，芳基烷氧基烷基，雜芳基，環(huán)烷基烷氧基烷基，-SO2T1，-SO2N(T1a)T1，或雜芳基烷基，并且其中的烷基、芳基、鏈烯基、芳基鏈烯基、炔基、芳基烷基、芳基炔基、環(huán)烷基烷基、烷氧基烷基、芳氧基烷基、芳基烷氧基烷基、雜芳基、雜芳氧基烷基、環(huán)烷基烷氧基烷基、或雜芳基烷基可以任選地被1-3個(gè)J1獨(dú)立取代；R5a和R5b相同或不同，并且獨(dú)立地為H，烷基，芳基，鏈烯基，芳基鏈烯基，炔基，芳烷基，芳基炔基，環(huán)烷基烷基，烷氧基烷基，芳氧基烷基，芳基烷氧基烷基，雜芳基，環(huán)烷基烷氧基烷基，雜芳基烷基，或J1，并且其中的烷基、芳基、鏈烯基、芳基鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基炔基、環(huán)烷基烷基、烷氧基烷基、芳氧基烷基、芳基烷氧基烷基、雜芳基、雜芳氧基烷基、環(huán)烷基烷氧基烷基、或雜芳基烷基可以任選地被1-3個(gè)J1獨(dú)立取代；Y為
其中x和y獨(dú)立地為0-3，并且z為1-3；Xc為價(jià)鍵，-N-R6a或-O-；R7和R7a相同或不同，并且獨(dú)立地為H，烷基，-CF3，苯基，芳基，芳烷基，和環(huán)烷基；或者R7和R7a中的一個(gè)或二者可獨(dú)立地與(Xb中的)R9和R10基團(tuán)中的一個(gè)或二者連接形成1-5個(gè)碳原子的亞烷基橋；或者R7與R7a一起連接形成3-7碳原子的環(huán)；R6，R6a，R6b，R6c，R8，R8a，R8b，R8c，R8d，R8e，R8f，R8g，R8h，R8i，R8k，R8l，和R8m相同或不同，并且獨(dú)立地為H，烷基，環(huán)烷基，鏈烯基或芳基；R8j為H，烷基，芳基，羥基或-OC(O)R8k；Xb為 R9和R10相同或不同，并且獨(dú)立選自H，烷基，和取代烷基，其中的取代基可以是1-3個(gè)羥基，1-3個(gè)C1-C10-烷酰氧基；1-3個(gè)C1-C6烷氧基，苯基，苯氧基，C1-C6-烷氧基羰基；或者R9與R10可一起形成-(CH2)tXd(CH2)u-，其中Xd為C(R8h)(R8j)，-O-或-N(R6b)，t和u獨(dú)立地為1-3；R11為H，C1-C6烷基，-CF3，芳基烷基，或芳基，并且所述烷基和芳基基團(tuán)任選被1-3個(gè)羥基，1-3個(gè)C1-C10烷酰氧基，1-3個(gè)C1-C6烷氧基，苯基，苯氧基或C1-C6烷氧基羰基取代；R12和R13獨(dú)立地為H，C1-C6烷基，-CF3，芳基，或鹵素，并且所述烷基和芳基基團(tuán)任選被1-3個(gè)羥基，1-3個(gè)C1-C10烷酰氧基，1-3個(gè)C1-C6烷氧基，或C1-C6烷氧基羰基取代；
J1為硝基，-(CH2)vN(T1a)C(O)T1，-(CH2)vCN，-(CH2)vN(T1a)C(O)OT1，-(CH2)vN(T1a)C(O)N(T1b)T1，-(CH2)vN(T1a)SO2T1，-(CH2)vC(O)N(T1a)T1，-(CH2)vC(O)OT1，-(CH2)vOC(O)OT1，-(CH2)vOC(O)T1，-(CH2)vOC(O)N(T1a)T1，-(CH2)vN(T1a)SO2N(T1b)T1，-(CH2)vOT1，-(CH2)vSO2T1，-(CH2)vSO2N(T1a)T1，-(CH2)vC(O)T1，-(CH2)vCH(OH)T1，雜環(huán)烷基，或如下定義的雜芳基，并且v為0-5；T1，T1a和T1b相同或不同，并且獨(dú)立地為H，烷基，鏈烯基，炔基，低級烷硫基烷基，烷氧基烷基，芳基，芳基烷基，雜芳基，雜芳基烷基，雜環(huán)烷基，或環(huán)烷基，它們中的每一基團(tuán)均可任選地被1、2或3個(gè)下列基團(tuán)取代鹵素、羥基、-NR8fC(O)NR8gR8i、-C(O)NR8fR8g、-NR8fC(O)R8g、-CN、-N(R8f)SO2R14、-OC(O)R8f、-SO2NR8fR8g、-SOR14、-SO2R14、烷氧基、-COOH、雜環(huán)烷基、或-C(O)OR14；或者T1與T1a或T1與T1b可一起形成-(CH2)wXe(CH2)z-，其中Xe為-C(R8m)(R81)，-O-，-S-，-SO-，-SO2-，-NC(O)OR14a，-NC(O)NR14aR14b，-NC(O)R14a或-N(R6c)，其中w和z各自獨(dú)立地為1-3；條件是當(dāng)T1與羰基或硫連接時(shí)，如在-C(O)T1或-SO2T1情形下，它不能為氫；R14，R14a，和R14b獨(dú)立地為C1-C6烷基，雜芳基，或芳基，它們各自任選被-(CH2)sOH取代，其中s為0-5；條件是，當(dāng)Xa為 時(shí)(1)如果R7和R7a中的一個(gè)或二者與R9和R10中的一個(gè)或二者形成亞烷基橋，那么當(dāng)R5為-(CH2)C(O)N(T1a)T1時(shí)，則T1a和T1中至少一個(gè)≠H；或(2)如果R1為芳烷基，并且R1a為H和R5為-(CH2)C(O)N(T1a)T1，則T1a或T1不能為
(3)如果R1和R7各自為2-萘基-CH2-，則R5≠苯乙基。
如結(jié)構(gòu)式I中的星號所示，本發(fā)明的所有化合物均含有至少一個(gè)不對稱中心。而且依據(jù)分子上不同取代基的性質(zhì)，分子中可能還存在有其它不對稱中心。每一個(gè)這種不對稱中心都將產(chǎn)生兩個(gè)旋光異構(gòu)體，因此所有這些旋光異構(gòu)體如分離得到的純凈或部分純化旋光異構(gòu)體或它們的外消旋物都包括在本發(fā)明范圍在內(nèi)。對于式I中星號所示的不對稱中心來講，當(dāng)R1a為H時(shí)，更具活性并且也因此更優(yōu)選的構(gòu)型是根據(jù)R/S規(guī)則確定的R構(gòu)型。異構(gòu)體可以用常規(guī)方法分離，例如色譜法或分級結(jié)晶。
本發(fā)明式I化合物的可藥用鹽包括堿金屬鹽如鋰、鈉或鉀鹽，堿土金屬鹽如鈣或鎂鹽，以及鋅或鋁鹽和其它陽離子(例如銨，膽堿，二乙醇胺，乙二胺，叔丁胺，叔辛胺，脫氫樅胺)的鹽，以及可藥用陰離子的鹽如磷酸鹽，扁桃酸鹽、氯化物，溴化物，碘化物，酒石酸鹽，乙酸鹽，甲磺酸鹽，馬來酸鹽，琥珀酸鹽，戊二酸鹽，和天然存在的氨基酸如精氨酸、賴氨酸、丙氨酸等的鹽，以及它們的前藥酯。
另外，本發(fā)明提供了一種增高內(nèi)源性生長激素水平或增加生長激素內(nèi)源性產(chǎn)生或釋放的方法，其中包括施用治療有效量的上述式I化合物。
再者，本發(fā)明還提供了一種預(yù)防或治療治療骨質(zhì)疏松(改善骨密度和/或強(qiáng)度)，或治療肥胖，或增強(qiáng)肌肉質(zhì)量和/或肌肉強(qiáng)度，或維持中老年人肌肉強(qiáng)度與機(jī)能，或逆轉(zhuǎn)或預(yù)防中老年人體虛的方法，其中包括施用治療有效量的上述式I化合物。
發(fā)明祥述除非在特定情形下另有限制，下列定義適用于本說明書全篇使用的術(shù)語。
除另有說明外，本文中單獨(dú)或作為其它基團(tuán)一部分使用的術(shù)語“低級烷基”、“烷基”或“烷-(alk)”包括正鏈中含有1-40個(gè)碳原子，優(yōu)選1-20個(gè)碳原子，更優(yōu)選1-6個(gè)碳原子的直鏈和支鏈烴，如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、叔丁基、異丁基、戊基、己基、異己基、庚基、4，4-二甲基戊基、辛基、2，2，4-三甲基戊基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基，它們的各種支鏈異構(gòu)體等以及包括1-3個(gè)取代基的這種基團(tuán)，所述取代基包括烷基、芳基、鏈烯基、炔基、羥基、芳烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、烷氧基、芳基烷氧基、烷酰氧基、氨基、鹵代芳基、CF3、OCF3、芳氧基、雜芳基、環(huán)烷基烷氧基烷基、或雜環(huán)烷基。
除非另外說明，本文中單獨(dú)或作為其它基團(tuán)一部分使用的術(shù)語“環(huán)烷基”包括飽和或部分飽和(含1或2條雙鍵)的環(huán)狀烴基，它們含有1-3個(gè)環(huán)(包括單環(huán)烷基，二環(huán)烷基和三環(huán)烷基)并總計(jì)含有3-20個(gè)成環(huán)碳原子，優(yōu)選4-7個(gè)成環(huán)碳原子，并且可以與如芳基部分所述的1個(gè)芳環(huán)稠合，它們包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)辛基、環(huán)癸基、環(huán)十二烷基、環(huán)己烯基、 這些基團(tuán)中的任何一個(gè)都可任選地被1-3個(gè)上面烷基中所定義的取代基取代。
本文中單獨(dú)或作為其它基團(tuán)一部分使用的術(shù)語“芳基”是指環(huán)部分含有6-10個(gè)碳的單環(huán)和二環(huán)芳基(如苯基或萘基)，它可任選地包含1-3個(gè)與“芳基”稠合的其它環(huán)(如芳基、環(huán)烷基、雜芳基或雜環(huán)烷基環(huán))，并且還可以任選地被1、2或3個(gè)選自如下的基團(tuán)通過碳原子取代氫、鹵素、鹵代烷基、烷基、鹵代烷基、烷氧基、鹵代烷氧基、鏈烯基、三氟甲基、三氟甲氧基、炔基、環(huán)烷基烷基、芴基、雜環(huán)烷基、雜環(huán)烷基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、芳氧基、芳氧基烷基、芳基烷氧基、芳硫基、芳基偶氮、雜芳基烷基、雜芳基鏈烯基、雜芳基雜芳基、雜芳氧基、羥基、硝基、氧代、氰基、氨基、其中的氨基包含1或2個(gè)取代基(即為烷基、芳基或定義中所述的任何其它芳基化合物)的取代氨基、巰基、烷硫基、芳硫基、雜芳硫基、芳硫基烷基、烷氧基芳硫基、烷基羰基、芳基羰基、烷基氨基羰基、芳基氨基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基羰氧基、芳基羰氧基、烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、芳基亞磺?；?、芳基亞磺酰基烷基、芳基磺?；被蚍蓟酋０被驶?，或者優(yōu)選上文所述的任何芳基取代基。
優(yōu)選芳基包括苯基、聯(lián)苯基或萘基。
本文中單獨(dú)或作為其它基團(tuán)一部分使用的術(shù)語“芳烷基”、“芳基-烷基”或“芳基低級烷基”是指具有芳基取代基的上述烷基，如芐基或苯乙基，或萘丙基，或如上所述的芳基。
本文中單獨(dú)或作為其它基團(tuán)一部分使用的術(shù)語“低級烷氧基”、“烷氧基”、“芳氧基”或“芳烷氧基”包括與氧原子連接的上述烷基、芳烷基或芳基。
本文中單獨(dú)或作為其它基團(tuán)一部分使用的術(shù)語“氨基”可任選地被一個(gè)或兩個(gè)諸如烷基、芳基、芳烷基、雜芳基、雜芳基烷基、雜環(huán)烷基、雜環(huán)烷基烷基和/或環(huán)烷基之類取代基取代。
本文中單獨(dú)或作為其它基團(tuán)一部分使用的術(shù)語“低級烷硫基”、“烷硫基”、“芳硫基”或“芳烷硫基”包括與硫原子連接的任何上述烷基、芳烷基或芳基基團(tuán)。
本文中單獨(dú)或作為基團(tuán)一部分使用的術(shù)語“低級烷基氨基”、“烷基氨基”、“芳基氨基”或“芳烷基氨基”包括與氮原子連接的任何上述烷基、芳基或芳烷基基團(tuán)。
本文中單獨(dú)使用或作為本文所述的其它基團(tuán)的一部分使用的術(shù)語“?；笔侵概c羰基(C＝O)連接的有機(jī)基團(tuán)；?；膶?shí)例包括鏈烷酰基，烯酰基，芳?；?，芳烷?；s芳?；h(huán)烷?；取?br> 本文中單獨(dú)或作為其它基團(tuán)一部分使用的術(shù)語“鏈烷?；卑ㄅc羰基連接的烷基。
除非另有說明，本文中單獨(dú)或作為其它基團(tuán)一部分使用的術(shù)語“低級鏈烯基”或“鏈烯基”是指正鏈中含2-20個(gè)碳，優(yōu)選3-12個(gè)碳，且更優(yōu)選2-6個(gè)碳的直鏈或支鏈基團(tuán)，其正鏈中包含1-6條雙鍵，如乙烯基、2-丙烯基、3-丁烯基、2-丁烯基、4-戊烯基、3-戊烯基、2-己烯基、3-己烯基、2-庚烯基、3-庚烯基、4-庚烯基、3-辛烯基、3-壬烯基、4-癸烯基、3-十一碳烯基、4-十二碳烯基、4，8，12-十四碳三烯基等，并且它們可任選地被1-4個(gè)取代基取代，這些取代基即鹵素、鹵代烷基、烷基、烷氧基、鏈烯基、炔基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基、氨基、羥基、雜芳基、雜環(huán)烷基、鏈烷?；被?、烷基酰胺基、芳基羰基氨基、硝基、氰基、巰基、烷硫基或本文所述的烷基中的任何取代基。
除非另有說明，本文中單獨(dú)或作為其它基團(tuán)一部分使用的術(shù)語“低級炔基”或“炔基”是指正鏈中含有2-20個(gè)碳，優(yōu)選2-12個(gè)碳，且更優(yōu)選2-8個(gè)碳的直鏈或支鏈基團(tuán)，其正鏈中包含一條三鍵，如2-丙炔基、3-丁炔基、2-丁炔基、4-戊炔基、3-戊炔基、2-己炔基、3-己炔基、2-庚炔基、3-庚炔基、4-庚炔基、3-辛炔基、3-壬炔基、4-癸炔基、3-十一碳炔基、4-十二碳炔基等，并且它們可任選地被1-4個(gè)下述取代基取代，即鹵素、鹵代烷基、烷基、烷氧基、鏈烯基、炔基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基、氨基、雜芳基、雜環(huán)烷基、羥基、鏈烷?；被?、烷基酰胺基、芳基羰基氨基、硝基、氰基、巰基、和/或烷硫基，或本文所述的烷基中的任何取代基。
本文中單獨(dú)或作為其它基團(tuán)一部分使用的術(shù)語“亞烷基”是指在兩個(gè)不同碳原子上具有與其它基團(tuán)連接單鍵的上述烷基，并且可以象上面“烷基”的定義一樣任選被取代。
本文中單獨(dú)或作為其它基團(tuán)一部分使用的術(shù)語“亞鏈烯基”和“亞炔基”分別是指在兩個(gè)不同碳原子上具有連接單鍵的上述定義鏈烯基和炔基。
(CH2)x、(CH2)y、(CH2)w、(CH2)v、(CH2)s、(CH2)t、(CH2)u或(CH2)z基團(tuán)(它們可以包括本文所定義的亞烷基、亞鏈烯基或亞炔基基團(tuán)，并且可任選包括1、2或3個(gè)取代基，而這些取代基可以是本文所述的任何烷基取代基)的實(shí)例如下-(CH2)2-，-(CH2)3-，-(CH2)4-， 或-(CH2)3-CF3.
本文中單獨(dú)或作為其它基團(tuán)一部分使用的術(shù)語“鹵素”或“鹵代”是指氯、溴、氟和碘以及CF3，并且優(yōu)選氯或氟。
術(shù)語“金屬離子”是指堿金屬離子(如鈉、鉀或鋰)和堿土金屬離子(如鎂和鈣)，以及鋅和鋁。
本文中單獨(dú)或作為其它基團(tuán)一部分使用的術(shù)語“雜環(huán)的”、“雜環(huán)-”或“雜環(huán)”是指“雜芳基”或“雜環(huán)烷基”基團(tuán)。
本文中單獨(dú)或作為其它基團(tuán)一部分使用的術(shù)語“雜環(huán)烷基”是指包括1-2個(gè)雜原子如氮、氧和/或硫的4-、5-、6-或7-元飽和或部分飽和環(huán)，它們通過碳原子或雜原子[可能的話，任選經(jīng)由連接基(CH2)p(定義如上)]進(jìn)行連接。這類基團(tuán)如 等等。上述基團(tuán)可以包含1-4取代基，如烷基、鹵素、氧代和/或本文所定義的任何芳基取代基。另外，任何上述環(huán)都可以與環(huán)烷基、芳基、雜芳基或雜環(huán)烷基環(huán)稠合。
本文中單獨(dú)或作為其它基團(tuán)一部分使用的術(shù)語“雜芳基”或“雜環(huán)狀芳基”是指包括1、2、3或4個(gè)雜原子如氮、氧或硫的5-或6-元芳香環(huán)，以及與芳基、環(huán)烷基、雜芳基或雜環(huán)烷基環(huán)稠合的這些環(huán)(如苯并噻吩基、吲哚基)，并且包括可能的N-氧化物，如 等等。
雜芳基可任選包含1-4個(gè)取代基，如本文所定義的任何芳基取代基。此外，任何上述環(huán)都可以與環(huán)烷基、芳基、雜芳基或雜環(huán)烷基環(huán)稠合。
術(shù)語式I化合物的“前藥酯”包括羥基化物和酚的酯，如本領(lǐng)域所知的乙酸酯、苯甲酸酯、新戊酸酯、硬脂酸酯、異丁酸酯等。一般合成流程本發(fā)明化合物可以按照下文的一般合成流程以及本領(lǐng)域技術(shù)人員使用的相關(guān)文獻(xiàn)公開方法制備。用于這些反應(yīng)的典型試劑與方法記載在下文及制備實(shí)施例中。除另有說明外，化合物的各種取代基的定義均同本發(fā)明式I化合物。
在下列反應(yīng)中，成酰胺鍵(肽偶聯(lián))反應(yīng)用本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)肽偶聯(lián)方法進(jìn)行。反應(yīng)最宜在溶劑如二甲基甲酰胺(DMF)中于0℃-室溫下利用下列物質(zhì)進(jìn)行1-乙基-3-(3-二甲氨基-丙基)碳二亞胺(EDAC)或(WSC)，1-羥基苯并三唑水合物(HOBt)或1-羥基-7-氮雜苯并三唑(HOAt)和堿，例如4-二甲氨基吡啶(DMAP)或Hunig堿。
非天然被護(hù)氨基酸可以從市場上購得或者按照本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)方法制備。手性制備方法包括Meyers，A.G.等人方法[J.Am.Chem.Soc.，119，656-673(1997)]。O-烷基化絲氨酸衍生物可以按照Mal igres，P.E.等人方法[Tetrahedron，53，10983-10992(1997)]由絲氨酸制備。
流程1，1a，和1b中形成苯并咪唑類或苯并噁唑類的環(huán)化反應(yīng)可以在本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)條件下進(jìn)行。合適的環(huán)化方法記載于Nestor，Jr.，J.J.，J.Med.Chem.，27，320-5(1984)，并且最好在酸性溶劑如乙酸中加熱(60-90℃)進(jìn)行。苯并噻唑類可以按照Spitulnik，M.J.所述[Synthesis，730(1976)]以及本領(lǐng)域已知的其它方法制備。
下述流程中的保護(hù)和脫保護(hù)反應(yīng)可以按照本領(lǐng)域公知的方法完成。例如，參見T.W.Greene，《有機(jī)合成中的保護(hù)基》，第2版，1991。下列流程中的PG表示氮保護(hù)基，最優(yōu)選BOC。BOC基團(tuán)以在酸性條件下除去，最宜使用HCl或三氟乙酸。
流程1c和1d中硝基的還原可以按照本領(lǐng)域已知的方法進(jìn)行。最優(yōu)選還原反應(yīng)在催化劑(鈀或鉑)存在下采用H2進(jìn)行。
流程2中包含的芳基化反應(yīng)可以在文獻(xiàn)已知的Suzuki偶聯(lián)條件，或本領(lǐng)域已知的使用金屬鋅或錫的其它條件下進(jìn)行。如果Rx為氯，則偶聯(lián)可按下列文獻(xiàn)所述利用鎳催化劑來進(jìn)行Indolese，A.F.，Tet.Lett.，38，3513-3516(1997)或Shen，W.Tet.Lett.，38，5575-5578(1997)。
流程3中的四唑形成反應(yīng)可以在本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)條件下進(jìn)行。合適的方法記載于Duncia等，J.Org.Chem.，56，2395(1991)。
流程4中的三唑形成反應(yīng)可以在本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)條件下進(jìn)行。合適的方法記載于Sung，K等，Heterocyc.Chem.，29，1101(1992)，Shukla，J.S.等，Indian J Chem.，30B，332(1991)，和Wilson，M.W.等，Molecular Diversity，3，95(1998)。
其它雜環(huán)化物的制備可采用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法以及A.Karitzky，Comprehensive Heterocyclic Chemistry，Vol.1和Vol.2，Elseveir中記載的方法。噁唑化物可以按照Hamada，Y.等，Tet.Lett.，23，235-6(1982)中記載的方法制備。噁唑化物的制備還可以見Zhang，X.等，J.Heterocyclic Chem.，34，1061-4(1997)，以及其中所引用的文獻(xiàn)。噻唑化物可以按照下列文獻(xiàn)方法制備Bredenkamp，M.W.等，Synth.Commun.，2235-2249(1990)或Aguilar，E.，Tet.Lett.，2473-2476(1994)。噁二唑的制備可參見Borg，S.等，J.Org.Chem.，60，3112-3120(1995)。
醇69轉(zhuǎn)化成疊氮基70以及75轉(zhuǎn)化成76的反應(yīng)(流程5和5a)可以按照本領(lǐng)域公知的方法進(jìn)行。Thompson，A.S.等[J.Org.Chem.，58，886(1993)]描述的一釜法是最優(yōu)選的轉(zhuǎn)化方法。
如流程5和5a所示制備咪唑類化物的方法可按照下列文獻(xiàn)中給出的方法進(jìn)行Chadwick，D.J.等，J.Chem.Soc.Perkin Trans，I，481(1984)和Iddon，B.，Heterocyclies，23，117(1985)。
流程6所示的四唑形成反應(yīng)可以在固相樹脂上進(jìn)行。
下文流程與實(shí)施例中的固體球用于表示固相樹脂，例如 所述樹脂可以是Merrifield型樹脂。
中間體28和42可進(jìn)一步如先前流程3所述進(jìn)行轉(zhuǎn)化。另一方面，可以用與樹脂(如Merrifield或Rink樹脂)鍵連的酸處理中間體28和42，產(chǎn)生樹脂鍵合酰胺，后者可裂解形成化合物VI和IX。流程6中所示的氨基甲酸酯樹脂連接基僅僅是一種可能的候選基團(tuán)(Hernandez，A.等，J.Org.Chem.，62，3153(1997))。除了I6之外，在全部流程中的化合物在現(xiàn)有技術(shù)中的已知方法，如還原性胺化或烷基化，與端基-NH-R部分可轉(zhuǎn)變?yōu)槭?的化合物。
流程1 X＝O，SH，NH2Ya＝O，S，NHPG＝保護(hù)基流程1a
流程1b
流程1c Ya＝O，S，NHZ＝-CO，-SO2
流程1d
流程1e
流程2
流程3四唑
流程3a四唑
流程3b
流程3c
流程3d
流程3e 流程3f
流程3g 流程3h
流程4三唑化物 45可以是任何天然或非天然α-氨基酸
流程4a 流程4b
流程4c
流程4d
流程5咪唑化物 R5b1和R5b2獨(dú)意為烷基或芳基流程5a
流程6 另一方法是，當(dāng)R5為-CH2(CH2)nCO2Rx時(shí) 在本文所述的一般合成流程中，各步使用的條件都是常規(guī)條件，且能夠進(jìn)行各種變化。而且它們僅用于說明目的，不得認(rèn)作是對本發(fā)明范圍的限制。
最終得到的化合物易可以很容易地通過重結(jié)晶、硅膠色譜、或反相制備HPLC純化。就使用反相制備HPLC進(jìn)行的純化而言，其中使用溶劑A(10％ MeOH/90％H2O/0.2％TFA)與溶劑B(90％MeOH/10％H2O/0.2％TFA)的混合物。
優(yōu)選的本發(fā)明式I化合物包括下列其中Xa具有所示結(jié)構(gòu)的化合物 優(yōu)選這些具有結(jié)構(gòu)I的本發(fā)明化合物，其中R1為芳基烷基，芳基烷氧基烷基，芳氧基烷基，雜環(huán)烷基烷基，雜芳基烷基，例如 R1a為H或烷基；并且(1)Xa為 其中R5為烷基，鏈烯基或雜芳氧基烷基，它們各自被J1取代，并且J1為-(CH2)vOC(O)N(T1a)(T1)，-(CH2)vCN，或雜芳基；或者(2)Xa為 其中A為NH，R4和R4a都為H且R3為J1；或者(3)Xa為 其中B為-N-；Z為價(jià)鍵或-S-；R5a為H，或各自被1-3個(gè)J1取代的烷基或芳烷基；R5為任選被J1取代的烷基；R6為H；Y為 其中x和y都為0，Xc為價(jià)鍵，且R7和R7a獨(dú)Xb為 R8j為羥基或-OC(O)R8k，其中R8k為烷基或芳基；R9和R10獨(dú)立地為H和取代烷基，其中的取代基可以是1個(gè)或2個(gè)羥基；J1為-(CH2)vCN，-(CH2)vN(T1a)SO2T1，-(CH2)vC(O)N(T1a)T1，-(CH2)vN(T1a)C(O)T1，-(CH2)vOC(O)N(T1a)T1，-(CH2)vN(T1a)C(O)N(T1b)T1，或雜芳基，且v為0-4；T1，T1a和T1b獨(dú)立地為烷基，低級烷硫基烷基，烷氧基烷基，芳基，芳烷基，雜芳基烷基，雜環(huán)烷基，或環(huán)烷基，它們各自任選被-OC(O)R8f、-C(O)NR8R8a、-(CH2)sOH(s為0-2)、-SO2NR8R8a、-SO2R14、或烷氧基取代；或者T1與T1a或T1與T1b可一起形成-(CH2)wXe(CH2)z-，其中Xe為C(R8m)(R81)；R14為任選被-(CH2)vOH(其中v為0-2)取代的C1-C6烷基；
優(yōu)選的本發(fā)明化合物包括下列化合物 更優(yōu)選的本發(fā)明化合物包括下列化合物 釋放生長激素的式I化合物可以給藥于包括人在內(nèi)的動(dòng)物，以便在體內(nèi)釋放生長激素。例如，化合物可以給藥于具有重要商業(yè)價(jià)值的動(dòng)物如豬、牛、羊等，以促進(jìn)和增加它們的生長速率與生長程度，和增加這些動(dòng)物的奶產(chǎn)量。
本發(fā)明在其范圍內(nèi)還包括藥物組合物，它包括作為活性成分的至少一種式I化合物以及可藥用的載體或稀釋劑。除了至少一種式I化合物外，藥物組合物的活性成分還任選包括生長促進(jìn)劑或表現(xiàn)出不同活性的其它組分，例如抗生素或其它藥物活性物質(zhì)。
生長促進(jìn)劑包括但不限于TRH，己烯雌酚，茶堿，腦啡肽，E系列前列腺素，USP3,239,345中公開的化合物(如右環(huán)十四酮酚)，以及USP4,036,979中公開的化合物(例如氧苯噻脲)或USP4,411,890中公開的肽類。
本發(fā)明公開的式I化合物的再進(jìn)一步用途是與其它生長激素促分泌劑如USP4,411,890中記載的GHRP-6，GHRP-1；以及WO89/07710和WO89/07111中的公開物和B-HT920，或生長激素釋放因子及其類似物或生長激素及其類似物或包括IGF-1與IGF-2在內(nèi)的生長肽激素結(jié)合使用。本發(fā)明公開的式I化合物的更進(jìn)一步用途是與甲狀旁腺激素或雙膦酸酯如MK-217(alendronate)聯(lián)合用于骨質(zhì)疏松的治療。
本發(fā)明公開的式I化合物的更進(jìn)一步用途是與雌激素、睪酮、選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(如三苯氧胺或雷洛昔芬)、或選擇性雄激素受體調(diào)節(jié)劑[如下列文獻(xiàn)中記載的這種調(diào)節(jié)劑Edwards，J.P.等，Bio Med.Chem.Let.，9，1003-1008(1999)和Hamann，L.G.等，J.Med.Chem.，42，210-212(1999)]聯(lián)合用于治療MetabolicSyndrome方面病癥，維持中老年人的肌肉強(qiáng)度與肌肉功能，逆轉(zhuǎn)或預(yù)防中老年人體虛，刺激并增強(qiáng)肌肉質(zhì)量和肌肉強(qiáng)度，減弱重大手術(shù)或創(chuàng)傷后的蛋白質(zhì)分解代謝應(yīng)答；減少由于慢性病如癌癥或艾滋病造成的惡病質(zhì)和蛋白損失；改善肌移動(dòng)性，并維持皮膚厚度。
正如本領(lǐng)域技術(shù)人員所知，生長激素的已知與潛在用途是多種多樣的。因此，為了刺激內(nèi)源性生長激素釋放之目的，給藥本發(fā)明化合物可以具有與給藥生長激素本身相同的效果或用途。生長激素的這些不同用途可以概述如下刺激中老年人的生長激素釋放；維持中老年人的肌肉強(qiáng)度與肌肉功能，逆轉(zhuǎn)或預(yù)防中老年人體虛，預(yù)防糖皮質(zhì)激素的分解代謝副作用，治療骨質(zhì)疏松，刺激并增加肌肉質(zhì)量與肌肉強(qiáng)度，刺激免疫系統(tǒng)，促進(jìn)創(chuàng)傷愈合，促進(jìn)骨折恢復(fù)，治療腎衰竭或?qū)е律L遲緩的腎機(jī)能不全，治療生理性身材矮小，包括生長激素缺乏的兒童，治療與慢性病有關(guān)的身材矮小，治療肥胖癥和與肥胖癥有關(guān)的生長遲緩，治療與Prader-Willis綜合癥和Turner綜合癥有關(guān)的生長遲緩；促進(jìn)燒傷患者恢復(fù)并縮短它們的住院治療時(shí)間；治療子宮內(nèi)生長遲緩、骨骼發(fā)育不良、腎上腺皮質(zhì)機(jī)能亢進(jìn)和Cushings綜合癥；誘導(dǎo)搏動(dòng)性生長激素釋放；置換緊張狀態(tài)病人(stressedpatients)體內(nèi)生長激素；治療骨軟骨發(fā)育不良、Noonans綜合癥、精神分裂癥、抑郁癥、Alzheimer病、創(chuàng)傷愈合延期、和精神社會(huì)性剝奪；治療肺機(jī)能不良和呼吸器依賴性；減弱重大手術(shù)或創(chuàng)傷后的蛋白質(zhì)分解代謝應(yīng)答；減少由于慢性病如癌癥或艾滋病造成的惡病質(zhì)和蛋白損失；治療包括胰島細(xì)胞增殖癥在內(nèi)的血胰島素增多癥，輔助治療排卵性誘導(dǎo)；刺激胸腺發(fā)育和預(yù)防胸腺功能的年齡相關(guān)性衰退；治療免疫抑制患者；改善肌肉移動(dòng)性，維持皮膚厚度、代謝內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，體弱中老年患者的腎臟內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定；刺激成骨細(xì)胞，骨再造型，和軟骨生長；刺激配對動(dòng)物的免疫系統(tǒng)和治療配對動(dòng)物的老化病癥；促進(jìn)牲畜生長；和刺激羊毛生長。
另外，如Johannsson J.Clin.Endocrinol，Meatb.，82，727-34(1997)中祥述的統(tǒng)稱為“Syndrome X”或Metabolic Syndrome的癥狀、病癥和疾病也可以使用本發(fā)明化合物治療。
本發(fā)明化合物是生長激素促分泌劑，可以給藥于需要這種治療的各種哺乳動(dòng)物，例如猴、狗、貓、鼠、人等。這些藥劑可以全身性給藥，例如口服或非腸道給藥。
本發(fā)明化合物可以摻入到常規(guī)的全身性給藥劑型中，例如片劑、膠囊劑、酏劑或注射劑。上述劑型還包括必需的生理上可接受的載體物質(zhì)、賦形劑、潤滑劑、緩沖劑、抗菌劑、填充劑(如甘露醇)，抗氧化劑(抗壞血酸或亞硫酸氫鈉)等。優(yōu)選口服劑型，但非腸道、鼻內(nèi)給藥劑型或氣霧劑也相當(dāng)令人滿意。
給藥劑量必須根據(jù)患者的年齡、體重和健康狀況以及給藥途徑、劑型與給藥方案以及所期望的結(jié)果小心調(diào)整。一般來講，上述各種劑型的給藥量為每千克體重約0.0001-約100mg，或者為每天約1-約1000mg，優(yōu)選約5-約500mg，單劑量或以每天1-4次的分劑量形式給藥。
下列實(shí)施例表示本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案。除非另有說明，所有的溫度均以℃為單位。實(shí)驗(yàn)概述術(shù)語HPLCa是指使用0-100％溶劑B[MeOH∶H2O∶0.2％H3PO4]4分鐘梯度洗脫的Shimadzu高效液相色譜(HPLC)，保留1分鐘，紫外線(UV)檢測器設(shè)定在220nM，并使用填充有YMC C185微米樹脂的柱(4.6×50mm)。術(shù)語HPLCb是指用0-100％溶劑B[MeOH∶H2O∶0.1％TFA]4分鐘梯度洗脫的Shimadzu HPLC，保留1分鐘，紫外線(UV)檢測器設(shè)定在220 nM，并使用填充有YMC C185微米樹脂的柱(4.6×50mm)。溶劑A(10％MeOH/90％H2O/O.2％TFA)與溶劑B(90％MeOH/10％H2O/0.2％TFA)的混合物用于自動(dòng)化Shimadzu系統(tǒng)中的制備反相HPLC。制備柱用YMC ODS C185微米樹脂填充。
實(shí)施例1 氮?dú)夥障?，向含羧?(5.0g，16.9 mmol，Sigma)、二苯胺 (2.3g，15mol，Aldrich)和1-羥基氮雜苯并三唑(HOAt)(2.5g，18mmol)的DMF(48mL)0℃溶液內(nèi)順序加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(EDAC或EDCI)(3.25g，17 mmol)和二異丙基乙胺(2.95ml，17mmol)。緩慢溫?zé)岱磻?yīng)混合物至室溫過夜。18小時(shí)后，加乙酸乙酯稀釋反應(yīng)物。有機(jī)層用碳酸氫鈉稀水溶液、水、鹽水洗滌，硫酸鈉干燥并真空濃縮，從而得到混有原料二苯胺的 系紅色油狀物(5.47g)(這里稱作粗制化合物)。上述粗制化合物無需進(jìn)一步純化便直接用于后續(xù)反應(yīng)。HPLCb rt＝3.19min.
取部分上述粗制化合物(1.25g，≤2.9mmol)溶于乙酸(45mL)，在69℃下加熱4.5小時(shí)。室溫?cái)嚢柽^夜后，真空除去揮發(fā)物，得到紅色油狀形式標(biāo)題化合物粗品，它無需進(jìn)一步純化而可以直接使用?；蛘?，將此紅色油狀物溶于乙酸乙酯，用1N鹽酸、水、鹽水提取三遍有機(jī)層，并用硫酸鈉干燥，然后真空濃縮，從而得到純凈標(biāo)題化合物(0.92g)，系深色油狀泡沫物。HPLCa rt＝3.99min. 用氯化氫/二噁烷溶液(6ml，4N)處理A部分化合物粗品(≤450mg，≤1.04mmol)，45分鐘后有棕色固體物從溶液中析出。2小時(shí)后真空蒸發(fā)揮發(fā)物得到深色固體。將此殘留物用熱乙酸乙酯研制三遍，得到棕色固體不純(粗制)化合物(338mg) 該粗制化合物無需進(jìn)一步純化直接用于下步反應(yīng)。HPLCa rt＝2.93min.
氮?dú)夥障拢蚝珺oc-甲基丙氨酸羧酸(256mg，1.26mmol，Aldrich)和上述粗制化合物(338mg，≤0.97mmol)以及HOAt(207mg，1.52mmol)的DMF(5ml)0℃溶液內(nèi)順序加入EDAC(245mg，1.28mmol)和二異丙基乙胺(0.39ml，2.25mmol)。緩慢溫?zé)岱磻?yīng)混合物至室溫。18小時(shí)后加乙酸乙酯稀釋反應(yīng)物。有機(jī)層用碳酸氫鈉稀水溶液、1N鹽酸、水、鹽水洗滌，硫酸鈉干燥并真空濃縮，從而得到深色油狀物(564mg)。將該殘留物粗品與另一相同反應(yīng)得到的產(chǎn)物(0.10mmol)混合，通過快速色譜(SiO2，40g)純化，以3.5％甲醇/二氯甲烷洗脫，由此得到橙色油狀物(305mg).HPLCb rt＝4.20min；LC/MS(電霧化，+離子)m/z498(M+H). 將B部分化合物(100mg，0.2mmol)在含有10％鈀-碳(15mg)的甲醇(2ml)中的溶液用氫氣驅(qū)氣，然后在氫氣氛中(氣囊)攪拌2小時(shí)。通過Nylon玻璃料過濾反應(yīng)混合物，用甲醇充分洗滌，然后蒸發(fā)溶劑得到胺化合物 為橙色泡沫物(82mg，88％粗回收率)，～80％純度[根據(jù)HPLCa rt＝3.0min]。該胺產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化直接用于下步反應(yīng)。LC/MS(電霧化，+離子)m/z 468(M+H).
氮?dú)夥障拢蛏鲜霭反制?82mg，0.18mmol)和三乙胺(35μl，0.25mmol)在二氯甲烷(18ml)中的溶液內(nèi)加入甲磺酰氯(18μl，0.23mmol)。2小時(shí)后，加乙酸乙酯稀釋反應(yīng)物，并將有機(jī)層用水、鹽水提取，硫酸鈉干燥然后濃縮。殘留物粗品進(jìn)而通過快速色譜(SiO2，10g)純化，以5.25％甲醇/二氯甲烷洗脫，從而得到橙色固體標(biāo)題化合物(30.7mg).HPLCa rt＝3.37min. 向純粹C部分化合物(31mg，56.8μmol)中加入氯化氫(0.8ml，4N二噁烷溶液)，攪拌所得混合物2.5小時(shí)。真空除去揮發(fā)物，并與二氯甲烷一起共蒸發(fā)兩次，得到褐色固體。將此殘留物粗品與另一相同反應(yīng)得到的產(chǎn)物(39.8μmol)合并，通過溶于9％甲醇/二氯甲烷(含有氫氧化銨)進(jìn)行中和。所得懸浮物進(jìn)而通過快速色譜(SiO2，5g)純化，以9％甲醇/二氯甲烷(含0.9％氫氧化銨)洗脫，得到玻璃狀固體(35mg)。將此殘留物溶于甲醇(2.5ml)，用三氟乙酸(4.5μ)處理。15分鐘后，真空除去揮發(fā)物，得到褐色固體標(biāo)題化合物(43mg)。HLPCbrt＝2.43min.MS(電霧化，+離子)m/z 446(M+H).
實(shí)施例2 在-18℃冷卻下，向N-Boc-O-芐基絲氨酸(2.91g，9.84mmol，Sigma)的THF(14.0mL)溶液內(nèi)加入N-甲基嗎啉(1.08mL，9.83mmol)和氯甲酸異丁酯(1.27mL，9.80mmol)?；旌衔镌?18℃下攪拌0.5小時(shí)后，加入3-氨基丙腈(0.73mL，9.89mmol)和N-甲基嗎啉(1.08mL，9.83mmol)在THF(6.0mL)中的-14℃溶液，在5.25小時(shí)內(nèi)溫?zé)崴没旌衔镏?6℃。然后過濾混合物，蒸發(fā)溶液至近干。進(jìn)而將殘留物吸收于EtOAc(70mL)，用5％NaHCO3(2×60mL)、水(60mL)和鹽水(60mL)洗滌。干燥(硫酸鈉)有機(jī)溶液，蒸發(fā)并層析純化(SiO2230-400目，1/1己烷/EtOAc)，獲得標(biāo)題化合物(3.33g，97％產(chǎn)率)LC/MS(電霧化，+離子)m/z 348(M+H). 向預(yù)先在0℃下冷卻的含A部分化合物(3.33g，9.60mmol)、三苯膦(2.52g，9.61mmol)和二異丙基乙胺(0.42mL，2.41mmol)的THF(30mL)溶液內(nèi)加入偶氮二羧酸二乙酯(1.51mL，9.59mmol)和疊氮三甲基硅烷(1.27mL，9.57mmol)。室溫?cái)嚢杷没旌衔镞^夜，然后在0℃下冷卻。分別加入另一份三苯膦(2.52g)、偶氮二羧酸二乙酯(1.51mL)和疊氮三甲基硅烷(1.27mL)，在室溫下繼續(xù)攪拌28小時(shí)。0℃冷卻反應(yīng)混合物，然后同硝酸鈰(IV)銨水溶液(2.63g/100mL)混合。將所得含水混合物用二氯甲烷(3×150mL)提取，并干燥(硫酸鈉)合并的有機(jī)相，蒸發(fā)、層析(SiO2230-400目，1/1己烷/EtOAc)，得到四唑(3.5g，混雜有1，2-二乙氧基羰基肼)和A部分化合物(1.47g，混雜有氧化三苯膦)。將不純四唑溶于氯仿，加入乙醚沉淀出無色固體標(biāo)題化合物(2.08g)MS(電霧化，+離子)m/z 373(M+H). 向B部分化合物(354mg，0.95mmol)的二氯甲烷(2.0mL)溶液內(nèi)加入4M HCl/二噁烷溶液(3.0mL)，然后放置所得溶液1.25小時(shí)。減壓除去溶劑，將殘留物溶于異丙醇(1.5mL)。加入鹽水(25.0mL)，然后通過加1M碳酸鉀調(diào)節(jié)水溶液的pH至10。所得水溶液用二氯甲烷(3×40mL)提取，合并有機(jī)層，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)，從而得到無色油狀標(biāo)題胺化合物(258mg)。該產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化而直接用于后續(xù)反應(yīng)。1H NMRδ(CDCl3ppm)7.31(m，5H)，4.80(m，2H)，4.54(m，3H)，3.88(m，2H)，2.99(m，2H)，1.82(寬單峰，2H). 在0℃下混合N-Boc-甲基丙氨酸 (285mg，1.40mmol，Sigma)、EDAC(272mg，1.42mmol)、HOAt(190mg，1.40mmol)、1，2-二氯乙烷(1，2-DCE)(1.6mL)與DMF(250μL)，攪拌15分鐘。然后通過注射器將所得混濁溶液轉(zhuǎn)移到C部分胺化合物粗品(258mg，0.95mmol)在1，2-DCE(1.4mL)中的0℃溶液內(nèi)，并在室溫下攪拌該混合物20小時(shí)。加入EtOAc(75mL)稀釋反應(yīng)混合物，爾后用飽和碳酸氫鈉(2×40mL)、水(40mL)和鹽水(40mL)洗滌。干燥(硫酸鈉)有機(jī)層，蒸發(fā)并層析純化(SiO2230-400目，1/1己烷/EtOAc)，得到無色油狀標(biāo)題化合物(338.5mg) 用15％TFA(4.0mL)處理D部分化合物(181mg，0.40mol)2.2小時(shí)，然后真空蒸發(fā)，殘留的TFA再與二氯甲烷一起共蒸發(fā)(5×6mL)。進(jìn)而將油狀殘留物粗品溶于二氯甲烷/甲醇(數(shù)滴)，加乙醚沉淀出白色固體標(biāo)題化合物(157mg)LC/MS(電霧化，+離子)m/z 358(M+H).
實(shí)施例3 在0℃預(yù)冷下，向?qū)嵤├?部分A化合物 (3.33g，9.60mmol)、三苯膦(2.52g，9.61mmol)和二異丙基乙胺(0.42mL，2.41mmol)在THF(30mL)中的溶液內(nèi)加入偶氮二羧酸二乙酯(1.51mL，9.59mmol)和疊氮三甲基硅烷(1.27mL，9.57mmol)。室溫?cái)嚢杷没旌衔镞^夜，然后再于0℃下冷卻。分別加入另一當(dāng)量的三苯膦(2.52g)、偶氮二羧酸二乙酯(1.51mL)和疊氮三甲基硅烷(1.27mL)，并在室溫下繼續(xù)攪拌28小時(shí)。然后在0℃下冷卻上述反應(yīng)混合物，并與硝酸鈰(IV)銨水溶液(2.63g/100mL)混合。用二氯甲烷(3×150mL)提取含水混合物，干燥(硫酸鈉)合并的有機(jī)相，蒸發(fā)并層析(SiO2230-400目，1/1己烷/EtOAc)，得到實(shí)施例2部分B化合物粗品(3.5g)。將含實(shí)施例2部分B化合物的不純殘留物溶于氯仿，通過加乙醚沉淀出實(shí)施例2部分B化合物(2.08g)，并濃縮濾液。然后將所得的實(shí)施例2部分B化合物含量更高的殘留物再溶于THF(12mL)，加入1M NaOH和一定量THF直至實(shí)施例2部分B化合物消失為止(根據(jù)TLC監(jiān)測(1/1己烷/EtOAc))。加鹽水(70 mL)稀釋最后得到的反應(yīng)混合物，并用乙醚(60mL)和氯仿(2×50mL)洗滌。爾后通過加1M磷酸調(diào)節(jié)水層的pH至3，并用乙酸乙酯(3×60mL)提取該溶液。合并的有機(jī)相用磷酸鹽緩沖液(2×40mL，pH3)和鹽水(40mL)洗滌，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)，從而得到標(biāo)題化合物(571mg)LC/MS(電霧化，+離子)m/z 320(M+H).
攪拌下，向A部分化合物(115mg，0.36mmol)和碳酸銫(258mg，0.79mmol)在乙腈(1.0mL)中的懸浮液內(nèi)加入芐基溴(54L，0.45mmol)，并室溫?cái)嚢杌旌衔?8小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物用二氯甲烷(20mL)稀釋，進(jìn)而用水(8mL)洗滌。水相用二氯甲烷反提取兩次，然后干燥(硫酸鈉)合并的有機(jī)相，蒸發(fā)并層析(SiO2230-400目，3/1己烷/EtOAc)，從而得到標(biāo)題化合物，系N-1/N-2四唑異構(gòu)體混合物(122mg)LC/MS(電霧化，+離子)m/z 410(M+H). 用15％TFA(3.0mL)處理B部分的異構(gòu)體混合物(122.2mg，0.30mmol)2.0小時(shí)，然后蒸發(fā)。向殘留物中加入異丙醇(2mL)和鹽水(15.0mL)，并通過加1M碳酸鉀調(diào)節(jié)水溶液的pH至10。水溶液再用二氯甲烷(3×25mL)提取，然后干燥(硫酸鈉)合并的有機(jī)層，蒸發(fā)后得到標(biāo)題胺(94mg)。該胺物質(zhì)無需進(jìn)一步純化直接用于下步反應(yīng)。LC/MS(電霧化，+離子)m/z 310(M+H).
0℃混合N-Boc-甲基丙氨酸(79mg，0.39mmol)、EDAC(75mg，0.39mmol)、HOAT(53mg，0.40mmol)、1，2-DCE(0.7 mL)和DMF(60μL)，并攪拌15分鐘。然后將所形成的渾濁溶液經(jīng)注射器轉(zhuǎn)移到上述胺粗品(94mg，0.30mmol)在1，2-DCE(0.6mL)中的0℃溶液內(nèi)，室溫?cái)嚢杷没旌衔?4小時(shí)。反應(yīng)混合物用乙酸乙酯(30mL)稀釋，進(jìn)而再用飽和碳酸氫鈉(2×20mL)、水(20mL)和鹽水(20mL)洗滌。干燥(硫酸鈉)有機(jī)層，蒸發(fā)并層析純化(SiO2230-400目，7/3氯仿/乙醚)，得到標(biāo)題化合物(44.6mg).LC/MS(電霧化，+離子)m/z 495(M+H). 用～2M HCl/CH2Cl2，MeOH，MeOAc(3.0mL，通過向8/1CH2Cl2/MeOH中加AcCl制得)處理C部分化合物(44.6mg，0.09mmol)2.3小時(shí)，爾后蒸發(fā)。殘留物進(jìn)一步在高真空下干燥，從而得到無色固體標(biāo)題化合物(41.1mg)LC/MS(電霧化，+離子)m/z 395(M+H).
實(shí)施例4 攪拌下，向?qū)嵤├?部分A化合物 (115mg，0.36mmol)和碳酸銫(258mg，0.79mmol)在乙腈(1.0mL)中的懸浮液內(nèi)加入芐基溴(54μL，0.45mmol)，室溫?cái)嚢杷没旌衔?8小時(shí)。然后用二氯甲烷(20mL)稀釋反應(yīng)混合物，并用水(8mL)洗滌。水相用二氯甲烷反提取兩次，干燥(硫酸鈉)合并的有機(jī)相，蒸發(fā)并層析純化(SiO2230-400目，3/1己烷/EtOAc)，得到標(biāo)題化合物，系N-1/N-2四唑異構(gòu)體混合物(122mg)LC/MS(電霧化，+離子)m/z410(M+H). 用15％TFA(3.0mL)處理A部分異構(gòu)體混合物(122.2mg，0.30mmol)2.0小時(shí)，然后蒸發(fā)。向殘留物中加入i-PrOH(2mL)和鹽水(15.0mL)，并通過加1M碳酸鉀調(diào)節(jié)水溶液的pH至10。水溶液用二氯甲烷(3×25mL)提取，干燥(硫酸鈉)合并的有機(jī)層，蒸發(fā)得到下式胺(94mg) 該產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化而直接用于下步反應(yīng)。LC/MS(電霧化，+離子)m/z 310(M+H).
將N-Boc-甲基丙氨酸(79mg，0.39mmol)、EDAC(75mg，0.39mmol)、HOAT(53mg，0.40mmol)、1，2-DCE(0.7mL)和DMF(60μL)在0℃下混合攪拌15分鐘。然后通過注射器將所得渾濁溶液轉(zhuǎn)移到上述胺粗品(94mg，0.30mmol)在1，2-DCE(0.6 mL)中的0℃溶液內(nèi)，室溫?cái)嚢柙摶旌衔?4小時(shí)。加乙酸乙酯(30mL)稀釋反應(yīng)混合物，并用飽和碳酸氫鈉(2×20mL)、水(20mL)和鹽水(20mL)洗滌。干燥(硫酸鈉)有機(jī)層，蒸發(fā)并層析純化(SiO2230-400目，7/3 CHCl3/乙醚)，得到白色固體標(biāo)題化合物(81.0mg)。LC/MS(電霧化，+離子)m/z 495(M+H). 用～2M HCl/CH2Cl2，MeOH，MeOAc(3.0mL，通過向8/1CH2Cl2/MeOH中加入AcCl制得)處理B部分化合物(81.0mg 0.09mmol)2.3小時(shí)，然后蒸發(fā)。殘留物進(jìn)一步在高真空下干燥，從而得到淺黃色固體標(biāo)題化合物(72.4mg)LC/MS(電霧化，+離子)m/z 395(M+H).
實(shí)施例5 向?qū)嵤├?部分D化合物 (308mg，0.67mmol)在6/1 THF/二噁烷(3.5 mL)中的溶液內(nèi)加入1MNaOH(0.67mL)和i-PrOH(0.50ml)，室溫?cái)嚢杷没旌衔?3小時(shí)。然后用鹽水(30mL)稀釋反應(yīng)混合物，并通過加入1M磷酸調(diào)節(jié)該水溶液的pH到3。水溶液隨后再用二氯甲烷(3×50mL)提取，干燥(硫酸鈉)合并的有機(jī)相，并蒸發(fā)得到標(biāo)題化合物(234mg)LC/MS(電霧化，+離子)m/z 405(M+H). 在0℃預(yù)冷卻下，向(+)-甲基-L-扁桃酸酯(56mg，0.34mmol，Aldrich)、A部分化合物(118.5mg，0.29mmol)和三苯膦(87mg，0.33mmol)在二氯甲烷(0.9mL)中的溶液內(nèi)加入二異丙基乙胺(10μL，57μmol)和偶氮二羧酸二乙酯(53μL，0.34mmol)。室溫?cái)嚢杌旌衔?4小時(shí)后，再加入一定量所用試劑三苯膦(99mg)，(+)-甲基-L-扁桃酸酯(56mg)和偶氮二羧酸二乙酯(53μL)。混合物在室溫下另外攪拌24小時(shí)，然后真空濃縮。層析所得殘留物(SiO2230-400目，4/1CH2Cl2/乙醚)得到混雜有1，2-二乙氧基羰基酰肼且含有標(biāo)題化合物的混合物(57.5mg)。進(jìn)而通過色譜(SiO2230-400目，95/5 CHCl3/MeOH)純化該混合物，得無色油狀標(biāo)題化合物(49.2mg，1/1非對映立體異構(gòu)體混合物)LC/MS(電霧化，+離子)m/z 553(M+H). 用～2M HCl/CH2Cl2，MeOH，MeOAc(3.0mL，通過向8/1CH2Cl2/MeOH中加入AcCl制得)處理B部分化合物(49.2mg，89μmol)2.3小時(shí)，然后蒸發(fā)。殘留物進(jìn)一步在高真空下干燥，從而得到白色固體標(biāo)題化合物(42.7mg，1/1非對映立體異構(gòu)體混合物)LC/MS(電霧化，+離子)m/z 453(M+H).
實(shí)施例6 在0℃預(yù)冷卻下，向(+)-甲基-L-扁桃酸酯(56mg，0.34mmol，Aldrich)、實(shí)施例5部分A化合物 (118.5mg，0.29mmol)和三苯膦(87mg，0.33mmol)在二氯甲烷(0.9mL)中的溶液內(nèi)加入二異丙基乙胺(10μL，57μmol)和偶氮二羧酸二乙酯(53μL，0.34mmol)。室溫?cái)嚢杌旌衔?4小時(shí)后，再加入一定量所用試劑三苯膦(99mg)，(+)-甲基-L-扁桃酸酯(56mg)和偶氮二羧酸二乙酯(53μL)。混合物在室溫下另外攪拌24小時(shí)，然后真空濃縮。層析所得殘留物(SiO2230-400目，4/1 CH2Cl2/乙醚)得到無色油狀標(biāo)題化合物(70.6mg，1/1非對映立體異構(gòu)體混合物)LC/MS(電霧化，+離子)m/z 553(M+H).
用～2M HCl/CH2Cl2，MeOH，MeOAc(3.0mL，通過向8/1CH2Cl2/MeOH中加入AcCl制得)處理A部分化合物(70.6mg，0.13mmol)2.5小時(shí)，然后蒸發(fā)。殘留物進(jìn)一步在高真空下干燥，從而得到白色固體標(biāo)題化合物(61.9mg，1/1非對映立體異構(gòu)體混合物)LC/MS(電霧化，+離子)m/z 453(M+H).
實(shí)施例7 向在0℃下預(yù)冷卻的160ml甲醇中緩慢加入乙酰氯(10g，128mmol)。0℃攪拌15分鐘后，加入O-芐基-D-絲氨酸 (5g，25.6mmol)，加熱回流所得溶液2天。然后除去溶劑，在高真空下干燥后得到白色固體標(biāo)題化合物(6.29g，100％).HPLCa rt＝1.90min. 向A部分化合物(3.65g，14.9mmol)在100ml無水二氯甲烷中的溶液內(nèi)依次加入二碳酸二叔丁酯(3.89g，17.8mmol)和三乙胺(2.25g，22.3mmol)。攪拌反應(yīng)物過夜，然后加50ml水終止反應(yīng)，并用(3×100ml)提取。合并有機(jī)層，用鹽水洗滌，硫酸鈉干燥，濃縮后得到油狀標(biāo)題化合物粗品(5.01g)。HPLCb rt＝3.24min.；LC/MS(電霧化，+離子)m/z 310(M+H). 向B部分化合物(0.98g，3.17mmol)在10ml無水甲醇中的溶液內(nèi)加入肼(0.447g，13.9mmol)。室溫?cái)嚢璺磻?yīng)3小時(shí)，繼而再加熱回流5小時(shí)。除去溶劑，將殘留物在高真空下干燥，從而獲得油狀標(biāo)題化合物(0.96g，98％)。HPLCb rt＝3.21min.；LC/MS(電霧化，+離子)m/z 310(M+H). 向C部分化合物粗品(0.53g，1.72mmol)在10ml無水乙醇中的溶液內(nèi)加入異氰酸芐酯(307mg，2.06mmol)。加熱回流反應(yīng)4小時(shí)。然后冷卻反應(yīng)物到室溫，真空除去溶劑。殘留物然后用1N NaOH處理，并加熱所得混合物至109℃保持4小時(shí)。冷卻至室溫后，過濾分離產(chǎn)生的白色沉淀。水洗所得固體物，進(jìn)而高真空干燥，從而獲得白色固體標(biāo)題化合物(0.36g，62％).HPLCb rt＝3.29min.；LC/MS(電霧化，+離子)m/z 341(M+H). 室溫、氮?dú)夥障?，向D部分化合物(153mg，0.45mmol)在4ml DMF中的溶液內(nèi)加入Boc-甲基丙氨酸羧酸(96mg，0.47mmol，Sigma)、HOAt(64mg，0.47mmol)、EDAC(91mg，0.47mmol)和二異丙基乙胺(61mg，0.47mmmol)。室溫?cái)嚢璺磻?yīng)混合物20小時(shí)，然后加水(10ml)終止反應(yīng)?；旌衔镉靡宜嵋阴?3×20ml)提取，然后用硫酸鈉干燥有機(jī)層，真空濃縮后得到黃色粗油。將殘留物粗品通過快速色譜純化，以己烷/乙酸乙酯(2∶1)洗脫，從而得到油狀標(biāo)題化合物(153mg，65％)。HPLCb rt＝4.13min.；LC/MS(電霧化，+離子)m/z 526(M+H). 用2ml TFA/CH2Cl2(1∶3)處理E部分化合物(133mg，0.25mmol)1小時(shí)，然后除去溶劑，并將殘留物通過制備HPLC純化(Shimadzu，30-100％B，30min.梯度，5min.保留，220nM)，從而得到標(biāo)題化合物(80mg，59％).HPLCb rt＝3.25min.；LC/MS(電霧化，+離子)m/z425(M+H).
實(shí)施例8 用2ml TFA/CH2Cl2(1∶3)處理實(shí)施例7部分E的化合物(133mg，0.25mmol)1小時(shí)，然后除去溶劑，并將殘留物通過制備HPLC純化(Shimadzu，30-100％B，30min.梯度，5min.保留，220nM)，從而得到標(biāo)題化合物(42mg，28％).HPLCb rt＝3.80min.；LC/MS(電霧化，+離子)m/z 481(M+H).
實(shí)施例9 向?qū)嵤├?部分E化合物(78mg，0.15mmol)在7.5ml THF中的溶液內(nèi)加入過氧化氫(0.33ml，30％w/w)。室溫?cái)嚢?天后，除去溶劑。殘留物然后在室溫下用3ml TFA/二氯甲烷(1∶3)處理1小時(shí)，除去溶劑，并將殘留物通過制備HPLC純化(Shimadzu，20-100％B，30min.梯度，5min.保留，220nM)，得到標(biāo)題化合物(59mg，79％).HPLCb rt＝2.99min.；LC/MS(電霧化，+離子)m/z 394(M+H).
實(shí)施例10 向咪唑(19.08g，0.28mol)在300ml無水苯中的懸浮液內(nèi)加入二甲基氯磺酰胺(26ml，0.24mol)和三乙胺(36ml，0.26mol)。反應(yīng)物在氮?dú)夥罩惺覝財(cái)嚢?4小時(shí)，然后過濾混合物，并濃縮濾液。減壓(0.03mmHg)蒸餾所得粗產(chǎn)物，得標(biāo)題化合物(36.4g，86％).HPLCb rt＝0.64min.；LC/MS(電霧化，+離子)m/z 176(M+H). -78℃及氮?dú)夥障?，向A部分化合物(1.88g，10.75mmol)在100ml無水THF中的懸浮液內(nèi)逐滴加入n-BuLi(4.60ml，2.5M己烷溶液，11.51mmol)。-78℃攪拌反應(yīng)物1小時(shí)，然后一次性加入4-苯基-丁醛 在20ml無水乙醚中的溶液?；旌衔镌?78℃攪拌5分鐘，然后升溫至室溫。室溫反應(yīng)3小時(shí)后，加飽和氯化銨溶液終止反應(yīng)?；旌衔镉靡宜嵋阴?3×20ml)提取，并將有機(jī)層用硫酸鈉干燥，然后真空濃縮，得到黃色粗油物。殘留物粗品進(jìn)而通過快速色譜純化，以己烷/乙酸乙酯(1∶3)洗脫，從而得到油狀標(biāo)題化合物(3.24g，93％).HPLCbrt＝3.44min.；LC/MS(電霧化，+離子)m/z 324(M+H)。 0℃、氮?dú)夥障?，向B部分化合物(3.2g，9.91mmol)和二苯基磷酰疊氮(3.27g，11.89mmol)在17ml無水甲苯中的混合液內(nèi)加入1，8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)(1.81g，11.89 mmol)。0℃攪拌反應(yīng)物2小時(shí)，然后在室溫下繼續(xù)攪拌20小時(shí)。加水驟冷所得兩相混合物，并用乙酸乙酯(3×20ml)提取。有機(jī)層用鹽水洗滌、硫酸鈉干燥、真空濃縮并通過快速色譜純化，使用3∶1己烷/乙酸乙酯洗脫，從而得到油狀標(biāo)題化合物(1.64g，48％)。HPLCb rt＝4.15min.；LC/MS(電霧化，+離子)m/z 349(M+H). 在1大氣壓氫氣壓下氫化C部分化合物(232mg，0.67mmol)和5％Pd/C(50mg)在3ml EtOH中的混合物。9小時(shí)后，濾除固體物，真空濃縮濾液獲得油狀D部分化合物(200mg，93％).HPLCb rt＝3.10min.；LC/MS(電霧化，+離子)m/z 323(M+H).
向D部分化合物(172mg，0.53 mmol)和Boc-甲基丙氨酸羧酸(114mg，0.56mmol，Sigma)在3ml乙腈中的溶液內(nèi)加入六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基-雙(二甲胺)磷鎓(BOP)(248mg，0.56mmol)。室溫?cái)嚢?0分鐘后，加入三乙胺(56.6mg，0.56mmol)，并在室溫下繼續(xù)攪拌反應(yīng)物5小時(shí)。蒸發(fā)除去溶劑，殘留物進(jìn)而通過快速色譜純化，以己烷/乙酸乙酯(1∶1)洗脫，從而得到油狀E部分化合物(238mg，88％)。HPLCb rt＝4.13min.；LC/MS(電霧化，+離子)m/z 508(M+H). 室溫下，用2ml TFA/CH2Cl2(1∶3)處理E部分化合物(167mg，0.33mmol)1小時(shí)，然后除去溶劑，并將殘留物通過制備HPLC純化(Shimadzu，30-100％B，30min.梯度，5min.保留，220nM)，得到標(biāo)題化合物(137mg).HPLCb rt＝3.33min.；LC/MS(電霧化，+離子)m/z 408(M+H).
下列化合物采用上文以及制備實(shí)施例中描述的方法制備。
實(shí)施例11-45實(shí)施例序號 結(jié)構(gòu)M+H正離子 實(shí)施例46 在-18℃冷卻下，向N-Boc-O-芐基-D-絲氨酸(6.73g，22.8mmol，Sigma)的THF(35mL)溶液內(nèi)加入N-甲基嗎啉(2.5mL)和氯甲酸異丁酯(2.88mL，22.8mmol)?；旌衔镌?18℃攪拌0.5小時(shí)后，加入含4-氨基丁酸甲酯鹽酸鹽 (3.53g，23mmol)和N-甲基嗎啉(5ml)的THF(15mL)與DMF(25mL)溶液，加料期間保持反應(yīng)混合物溫度低于-10℃。在-10℃至-15℃下攪拌所得混合物5小時(shí)。然后過濾混合物，用乙酸乙酯洗滌，并減壓蒸發(fā)溶液。殘留物進(jìn)而吸收到EtOAc(160mL)，用5％NaHCO3(2×40mL)、水(50mL)和鹽水(50mL)洗滌。干燥(硫酸鎂)有機(jī)溶液，蒸發(fā)并層析(SiO2230-400，4％甲醇/二氯甲烷)，得到無色漿狀標(biāo)題化合物(8.5g)LC/MS(電霧化，+離子)m/z 395(M+H). 向A部分化合物(8.5g，21.6mmol)、三苯膦(5.7g，21.6mmol)和二異丙基乙胺(1mL，5.4mmol)在THF(70mL)中的0℃溶液內(nèi)加入偶氮二羧酸二乙酯(13.4mL，21.6mmol)和疊氮三甲基硅烷(2.87mL，21.6mmol)。室溫?cái)嚢杷没旌衔?4小時(shí)，然后在0℃下冷卻。分別加入另一份三苯膦(5.7g)、偶氮二羧酸二乙酯(13.4mL)和疊氮三甲基硅烷(2.87mL)，并繼續(xù)在室溫下另攪拌48小時(shí)。然后真空濃縮反應(yīng)混合物至1/3初始體積，加乙酸乙酯(200mL)稀釋，隨后再冷卻到0℃。加入硝酸鈰(IV)銨水溶液(65g/250mL)，攪拌混合物15分鐘。分出有機(jī)層，水性混合物再用乙酸乙酯(150mL)再提取，然后干燥(硫酸鈉)合并的有機(jī)相。真空濃縮后，層析(SiO2230-400目，40％乙酸乙酯/己烷)殘留物，獲得固體標(biāo)題化合物(5.5g，含有低極性雜質(zhì))，并回收到A部分化合物(5.5g，含有氧化三苯膦雜質(zhì))。所得不純標(biāo)題化合物可直接用于后續(xù)反應(yīng)。或者，取部分不純標(biāo)題化合物(4.2g)進(jìn)行層析純化(SiO2230-400目，25％乙醚/二氯甲烷)，得到無色固體標(biāo)題化合物(3.5g)LC/MS(電霧化，+離子)m/z 420(M+H).
向B部分化合物(3.5g，8.48mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液內(nèi)加入4M HCl/二噁烷溶液(5mL)。3小時(shí)后，再加入4M HCl/二噁烷溶液(4mL)，然后反應(yīng)5小時(shí)。真空除去揮發(fā)物得到漿狀物。將此殘留物溶于二氯甲烷(200mL)，用1N NaOH(75mL)、鹽水(2×80mL)洗滌，干燥(硫酸鈉)并濃縮，從而得到漿狀標(biāo)題化合物(2.46g)。該產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化直接用于后續(xù)反應(yīng)LC/MS(電霧化，+離子)m/z320(M+H). 室溫?cái)嚢韬蠳-Boc-甲基丙氨酸 (1.88g，9.2mmol，Sigma)、C部分化合物(2.46g，7.7mmol)、HOAT(1.17g，8.5mmol)、和EDAC(1.62g，8.5mmol)的DMF(30mL)溶液20小時(shí)。然后真空濃縮反應(yīng)混合物，并將殘留物溶于二氯甲烷(200mL)。有機(jī)層用水(3×100mL)洗滌，硫酸鎂干燥后真空濃縮。層析純化殘留物(SiO2230-400目)，以40％乙醚/二氯甲烷洗脫，從而得到無色油狀標(biāo)題化合物(3.14g)LC/MS(電霧化，+離子)m/z 505(M+H).
向D部分化合物(1.4g，2.78mmol)的THF(8mL)溶液內(nèi)加入氫氧化鋰水溶液(143mg，6mmol，溶在2mL水中)，并室溫?cái)嚢杷没旌衔?0小時(shí)。然后用1N鹽酸(5mL)調(diào)節(jié)反應(yīng)混合物至pH 1-2，并用乙酸乙酯(200mL)提取水層。有機(jī)層用水(60mL)、鹽水(100mL)洗滌，干燥(硫酸鎂)且真空濃縮，從而獲得無色固體標(biāo)題化合物(1.32g)。該產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化便直接用于后續(xù)反應(yīng)LC/MS(電霧化，+離子)m/z 491(M+H). 向色胺 (24mg，0.15mmol)中加入含E部分化合物(50mg，0.1mmol)、EDAC(28.8mg，0.15mmol)和二甲氨基吡啶(18.3mg，0.15mmol，DMAP)的二氯甲烷(1ml)與DMF(0.5mL)溶液。振搖反應(yīng)混合物20小時(shí)，然后加甲醇(5mL)稀釋。將所得溶液通過SCX樹脂柱(1g)，以甲醇(15mL)洗脫。真空濃縮洗脫液得到中間體酰胺粗品 然后將所得殘留物溶于二氯甲烷/甲醇化HCl溶液(1.5mL，通過將乙酰氯(10.2mL)溶于3/2二氯甲烷/甲醇(40mL)制備，3.5M)，在室溫下攪拌4小時(shí)后減壓除去揮發(fā)物。所得殘留物進(jìn)而通過制備HPLC純化，得到深色泡沫狀標(biāo)題化合物(44mg)LC/MS(電霧化，+離子)m/z533(M+H).
按照制備實(shí)施例46化合物所述的類似方法，采用實(shí)施例46部分E的化合物(0.1 mmol)和相應(yīng)的胺(0.15-0.2mmol)制備下表所列實(shí)施例47-91的化合物。實(shí)施例47-50在二氯甲烷(1mL)中用三氟乙酸(0.4mL)和茴香硫醚(0.05mL)處理(替代HCl處理)，生成最終產(chǎn)物。除實(shí)施例70外的所有實(shí)施例均通過制備HPLC純化，使用含0.2％三氟乙酸的甲醇與水梯度體系洗脫。所有化合物均以三氟乙酸鹽形式分離得到。
在下面的表列化合物中，符號X1是指所示的特定基團(tuán)R與分子剩余部分的連接位置。
實(shí)施例47-91 實(shí)施例序號 X1-R M+H正離子 實(shí)施例92 在5℃冷卻下，向樹脂鍵合(叔烷氧基羰基)咪唑(8.68g，加載量0.72mmol/g) [注該步驟系Hernandez和Hodges的方法改進(jìn)(J.Org.Chem.1997，62，3153]在無水1，2-DCE(60.0mL)的懸浮液內(nèi)加入三氟甲磺酸甲酯(1.30mL，11.5mmol)。將所得混合物在此溫度下攪拌20分鐘，然后溫?zé)嶂潦覝卦贁嚢?5分鐘。加入DMAP(2.96g，24.2mmol)，繼續(xù)攪拌10分鐘。
向O-芐基-D-絲氨酸(3.54g，18.1mmol)的DMF(21mL)懸浮液內(nèi)加入N，O-雙(三甲基甲硅烷基)乙酰胺(4.48mL，18.1mmol)，室溫?cái)嚢柙摶旌衔?0分鐘。然后利用注射器將所得溶液轉(zhuǎn)移到上述樹脂攪拌懸浮液內(nèi)?；旌衔镌谑覝叵抡駬u8小時(shí)，爾后過濾。將樹脂鍵合O-芐基-D-絲氨酸用DMF(3次)、5％AcOH/DMF、MeOH(3次，共計(jì)100mL)、THF(3次)、以及二氯甲烷(3次)洗滌，進(jìn)而干燥9.58g；IR 1717(寬峰)cm-1；元素分析實(shí)測值C，80.78；H，8.00；N，0.91.基于N含量的負(fù)載量為0.65mmol/g。
取部分樹脂(27mg)，用10％TFA/CH2Cl2(1.0mL)處理4.5小時(shí)，爾后過濾。樹脂用二氯甲烷(三次)和MeOH(兩次)沖洗，然后蒸發(fā)濾液并干燥(真空，過夜)，又重新得到TFA鹽形式的O-芐基-D-絲氨酸(4.4mg)LC-MS 100％面積；LC/MS(電霧化，+離子)m/z 196(M+H).根據(jù)裂解量，樹脂結(jié)合O-芐基-D-絲氨酸的負(fù)載量0.53mmol/g。 向A部分的樹脂結(jié)合O-芐基-D-絲氨酸(1.75g，1.14mmol)中加入含β-丙氨酸甲酯鹽酸鹽(315mg，2.27mmol)、二異丙基乙胺(0.39mL，2.24mmol)和HOAT(308mg，.226mmol)的DMF(3.0mL)溶液，然后再加入EDAC(433mg，2.26mmol)的DMF(5.5mL)溶液。室溫?fù)u動(dòng)混合物24小時(shí)，然后過濾。加合物用DMF、THF和二氯甲烷各洗滌三次，得到樹脂結(jié)合O-芐基-D-絲氨酸-2-甲氧基-羰基乙基酰胺。
向樹脂結(jié)合酰胺中加入三苯膦(955mg，3.64mmol)的1，2-DCE(3.0mL)溶液，然后再加入在0℃下預(yù)冷卻的含三甲基甲硅烷基疊氮(0.48mL，3.62mmol)和偶氮二羧酸二乙酯(DEAD)(0.57mL，3.62mmol)在1，2-DCE(3.0mL)中的溶液。室溫?fù)u動(dòng)混合物24小時(shí)，然后過濾。樹脂用DMF(三次)和二氯甲烷(六次)洗滌，并再置于上述Mitsunobu反應(yīng)條件兩次。聚合物最后用DMF(三次)、THF(三次)和二氯甲烷(三次)洗滌，得到樹脂結(jié)合1-(2-甲氧基羰基乙基)-四唑。 向B部分樹脂結(jié)合甲基酯樹脂(307mg，＜0.20mmol)/正丁胺(2.0mL)中加入四正丁基氰化銨(40mg，0.15mmol)的甲醇(0.3mL)溶液，并50℃加熱所得混合物3.6小時(shí)。過濾后，聚合物用DMF、甲醇、THF和二氯甲烷各自洗滌三遍，得到樹脂結(jié)合酰胺。
用～3M HCl/CH2Cl2、MeOH、乙酸甲酯(4.0mL，通過向3/2CH2Cl2/MeOH溶液內(nèi)加入乙酰氯(AcCl)制備)處理上述樹脂4.5小時(shí)，然后過濾。樹脂用二氯甲烷(三次)和甲醇(兩遍)沖洗，蒸發(fā)濾液得到胺鹽酸鹽中間體。將該產(chǎn)物溶于異丙醇(1.5mL)與飽和NaCL(20mL)。滴加1M碳酸鉀調(diào)節(jié)水相的pH至10，并用二氯甲烷(3×30mL)提取所得溶液。干燥(硫酸鈉)合并的有機(jī)相，濃縮得到含有氧化三苯膦雜質(zhì)的游離胺(30.7mg)。
0℃混合N-Boc異丁酸(36mg，0.18mmol)、EDAC(34mg，0.18mmol)、HOAT(25mg，0.18mmol)、1，2-DCE(0.3mL)與DMF(30μL)15分鐘。然后將所得溶液加到上述胺粗品(30.7mg，＜0.09mmol)的1，2-DCE(0.2mL)0℃溶液內(nèi)。室溫?cái)嚢柙摶旌衔?2小時(shí)，然后加EtOAc(25mL)稀釋。溶液用飽和碳酸氫鈉(2×20mL)、水(20mL)以及飽和NaCl(20mL)洗滌，干燥并蒸發(fā)，從而得到C部分化合物粗品(44.4mg)。制備HPLC(溶劑B起始30％，最終90％；梯度時(shí)間15分鐘，流速20mL/min；波長220nM；柱YMC S5 ODS 20×100mm)純化得C部分化合物(19.0mg)LC/MS(電霧化，+離子)m/z 532(M+H). 用～3M HCl/CH2Cl2，MeOH，MeOAc(2.0mL，通過向3/2CH2Cl2/MeOH溶液中加入AcCl制備)處理部分C化合物(19.0mg，0.036mmol)2.2小時(shí)，然后濃縮。進(jìn)一步干燥殘留物(真空，2小時(shí))，得無色固體標(biāo)題化合物(16.6mg)LC-MS 96％面積；LC/MS(電霧化，+離子)m/z 432(M+H).
實(shí)施例93 在10℃冷卻下，向樹脂結(jié)合(叔烷氧基羰基)咪唑(5.06g，負(fù)載量0.70mmol/g) 在無水1，2-DCE(30mL)中的懸浮液內(nèi)加入三氟甲磺酸甲酯(Methyltriflate)(0.80mL，7.11mmol)。在此溫度下攪拌所得混合物15分鐘，然后溫?zé)嶂潦覝卦贁嚢?0分鐘。加入三乙胺(2.40mL，17.2mmol)后，繼續(xù)攪拌10分鐘。過濾含2-氨基異丁酸甲酯(1.14g，7.42mmol)和Et3N(0.98mL，7.04mmol)的DMF(13mL)懸浮液，并利用注射器將其轉(zhuǎn)移到上述攪拌著的樹脂懸浮液內(nèi)。室溫?fù)u動(dòng)混合物5.5小時(shí)，然后過濾。將與樹脂結(jié)合的A部分化合物用THF(三次)、1/1THF/MeOH、THF(三次)和二氯甲烷(三次)洗滌，進(jìn)而干燥IR 1728cm-1；元素分析實(shí)測值C，82.02；H，7.96；N，0.89.基于N含量的負(fù)載量為0.64mmol/g。 向部分A化合物(2.63g，負(fù)載量0..64mmol/g)中加入3/2二噁烷/0.25 M KOH溶液(40 mL)，75℃加熱該懸浮液4.5小時(shí)。過濾后，將聚合物用DMF(三次)、5％AcOH/DMF(三次，總計(jì)50 mL)、MeOH(三次)、THF(三次)和二氯甲烷(三次)洗滌，干燥后得部分B化合物化合物(2.50g)。
取部分上述樹脂(53mg)，用10％TFA/CH2Cl2(1.5mL)處理5小時(shí)后過濾。樹脂用二氯甲烷(三次)和甲醇(兩遍)沖洗，然后蒸發(fā)濾液并加以干燥(真空，過夜)，得到TFA鹽形式的純凈2-氨基丁酸(6.3mg)1H NMR δ(CD3OD，ppm)1.55(s，6H)。
基于裂解量，樹脂結(jié)合2-氨基丁酸部分B化合物的負(fù)載量為0.53mmol/g。 向?qū)嵤├?2，部分B化合物在苯乙胺(1.4.0mL)中的懸浮液內(nèi)加入四正丁基氰化銨(22mg，0.08mmol)的MeOH(0.3mL)溶液，并在60-65℃加熱該混合物3小時(shí)。過濾后，將聚合物用DMF、1/1THF/MeOH、THF和二氯甲烷各自洗滌三次，得到樹脂結(jié)合酰胺。
用～3M HCl/CH2Cl2、MeOH、MeOAc(3.0mL，通過向3/2CH2Cl2/MeOH溶液內(nèi)加入AcCl制備)處理上述樹脂5小時(shí)，然后過濾。樹脂用二氯甲烷(三次)和甲醇(兩次)沖洗，蒸發(fā)濾液得到胺中間體(69.3mg) 將上述中間體(69.3mg，0.18mmol)、部分A化合物(400mg，負(fù)載量0.53mmol/g)與含EDAC(115mg，0.60mmol)、HOAT(82mg，0.60mmol)和二異丙基乙胺(0.10mL，0.60mmol)的DMF(3.0mL)溶液混合，并在室溫下?lián)u動(dòng)所得混合物24小時(shí)。過濾后，將樹脂用DMF(三次)和二噁烷(三次)沖洗。然后將樹脂用3/2二噁烷/水溶脹，搖動(dòng)過夜，過濾并用THF(三次)和二氯甲烷(三次)洗滌。
用～3M HCl/CH2Cl2，MeOH，MeOAc(4.0mL，通過向3/2CH2Cl2/MeOH溶液中加入AcCl制備)處理上述樹脂6小時(shí)，然后過濾。將樹脂用二氯甲烷(兩遍)和甲醇沖洗，蒸發(fā)濾液得到標(biāo)題化合物粗品。進(jìn)而將該混合物粗品溶于乙腈/MeOH，通過陰離子交換柱(3.0g，CHQAX)，以乙腈(18mL)洗脫，得到胺(22.2mg)。進(jìn)一步用1/1乙腈/MeOH(20mL)洗脫，另外得到一定量胺(29.8mg)。將上述胺合并，進(jìn)一步通過制備HPLC純化(溶劑B起始30％，最終80％；梯度時(shí)間20分鐘，流速20mL/min；波長220 nM；柱YMC S5 ODS 20×100mm)，得標(biāo)題化合物(20.7mg)HPLC100％面積；LC/MS(電霧化，+離子)m/z 480(M+H).
實(shí)施例94和95 向肉桂酰乙腈(1.0g，5.84mmol，Maybridge)在4/1 MeOH/H2O(30mL)中的0℃冷溶液內(nèi)加入硼氫化鈉(110mg，2.92mmol)，攪拌所得混合物1.5小時(shí)。溫?zé)岬绞覝睾?，每?5分鐘加入少量硼氫化鈉直至反應(yīng)完全(另外反應(yīng)90分鐘)。真空蒸除大部分甲醇后，加入磷酸鉀緩沖液(pH3，45mL)，攪拌所得混合物15分鐘。然后加入5％NaHCO3(45mL)，用二氯甲烷提取含水混合物。合并有機(jī)相，干燥(Na2SO4)并濃縮。層析(SiO2230-400目，1/1 Hex/EtOAc)殘留物得黃色液體A部分化合物(842.5mg)LC/MS 98％面積；LC/MS(電霧化，+離子)m/z 156(M-OH)。 向預(yù)冷到0℃的A部分醇(198mg，1.14momol)、實(shí)施例5部分A化合物 (360mg，0.89mmol)和Ph3P(303mg，1.15mmol)在二氯甲烷(2.6mL)中的溶液內(nèi)加入二異丙基乙胺(31μL，0.18mol)和偶氮二羧酸二乙酯(0.18mL，1.14mmol)。室溫?cái)嚢璐嘶旌衔?4小時(shí)，然后蒸發(fā)。層析(SiO2230-400目，1/1 Hex/EtOAc)殘留物得到B部分N-1取代的四唑(98.3mg，20％產(chǎn)率，2個(gè)非對映異構(gòu)體)HPLC 98％非對映異構(gòu)體合并面積；LC/MS(電霧化，+離子)m/z 560(M-+H)。 用4M HCl/二噁烷溶液(1.5mL)處理B部分化合物(72mg，0.13mmol，2個(gè)非對映異構(gòu)體)與苯硫基甲烷(45μL，0.38mmol)在二氯甲烷(1.5mL)中的溶液1.2小時(shí)，爾后濃縮。制備HPLC(溶劑B起始40％，最終90％；梯度時(shí)間30min；流速20mL/min；波長220nm；柱YMC S5 DOS 20×100mm)純化得到無色固體實(shí)施例94的標(biāo)題化合物(23.8mg，32％產(chǎn)率，單一非對映異構(gòu)體)LC/MS 100％面積；LC/MS(電霧化，+離子)m/z 460(M+H)，和無色固體實(shí)施例95的標(biāo)題化合物(26.7mg，36％產(chǎn)率，另一非對映異構(gòu)體)LC/MS 100％面積；LC/MS(電霧化，+離子)m/z 460(M+H)。
下列化合物采用實(shí)施例96-101中描述的方法制備。實(shí)施例序號M+H正離子結(jié)構(gòu) 采用實(shí)施例102-117中所述方法以及制備實(shí)施例中詳述的一般方法，制備下列化合物。實(shí)施例序號 結(jié)構(gòu) M+H正離子
實(shí)施例118 向粗品 (如實(shí)施例7部分C所述制得)(7.84g，25.37mmol)的150ml無水乙醇溶液內(nèi)加入異硫氰酸甲酯(2.04g，27.91mmol)。加熱回流反應(yīng)物6小時(shí)。然后冷卻反應(yīng)物到室溫，利用蒸發(fā)器除去溶劑。殘留物然后用1N NaOH(70ml)處理，并加熱回流(113℃油浴)所得混合物12小時(shí)。冷卻反應(yīng)至室溫，真空除去溶劑。殘留物進(jìn)而用300ml二氯甲烷/甲醇(100∶7.5)處理。室溫?cái)嚢璐嘶旌衔?小時(shí)后過濾，濃縮濾液并與甲苯一起共蒸發(fā)，得到標(biāo)題化合物粗品(7.54g)。HPLCb保留時(shí)間(rt)＝2.37min.LC/MS(電霧化，+離子)m/z 265(M+H)。 室溫、氮?dú)夥障?，向A部分化合物(7.54g，28.6mmol)與Boc-甲基丙氨酸羧酸(6.95g，34.3mmol，Sigma)在100ml DMF中的溶液內(nèi)加入HOAt(5.05g，37.1mmol)和EDAC(8.21g，42.8mmol)，并在室溫下攪拌反應(yīng)混合物過夜。真空除去溶劑，殘留物用水(100ml)稀釋?；旌衔镞M(jìn)而用1/1乙酸乙酯/乙醚(3×200ml)提取，用硫酸鎂干燥有機(jī)層并過濾。將濾液在0℃下貯存，并通過過濾回收所產(chǎn)生的固體，從而得到B部分化合物(1.45g)。然后濃縮所得濾液，將殘留物通過快速色譜純化，以己烷/乙酸乙酯(2∶1)洗脫，進(jìn)一步得到白色固體B部分化合物(6.92g)。HPLCb保留時(shí)間(rt)＝3.19min.LC/MS(電霧化，+離子)m/z 450(M+H) 室溫下，向B部分化合物(67.4mg，0.15mmol)在1ml無水二噁烷中的溶液內(nèi)加入三乙胺(30.3mg，0.3mmol)和2-氰基芐基溴(58.8mg，0.3mmol)。搖動(dòng)反應(yīng)物過夜，然后真空除去溶劑，得到下式中間體 殘留物然后在室溫下用TFA/二氯甲烷(1ml，1∶3)處理2小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，將反應(yīng)混合物按下所述通過SCX柱(2g)純化柱先用甲醇(10mL)沖洗平衡，然后將溶在1mL甲醇中的反應(yīng)混合物填裝到柱上，接著加入甲醇(30mL)。產(chǎn)物然后用2N氨/甲醇溶液(7mL)洗脫。利用高速真空除去樣品中的溶劑，得到油狀標(biāo)題化合物(53mg，76％)；HPLCb rt＝3.15 min.LC/MS(電霧化，+離子)m/z 465(M+H)。
實(shí)施例119 室溫下，向?qū)嵤├?18部分B化合物(67.4mg，0.15mmol)在1mL無水二噁烷中的溶液內(nèi)加入三乙胺(30.3mg，0.3mmol)和4-(2-溴異戊酰基)-嗎啉(75mg，0.3mmol)。振搖反應(yīng)過夜，然后加入碳酸鉀(103mg，0.75mmol)，繼續(xù)振搖反應(yīng)24小時(shí)。濾除固體物，收集濾液，并真空除去溶劑。殘留物然后在室溫下用TFA/二氯甲烷(1ml，1∶3)處理2小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，進(jìn)而按下所述通過SCX柱(2g)純化反應(yīng)混合物柱先用甲醇(10mL)沖洗平衡，然后將溶在1mL甲醇中的反應(yīng)混合物填裝到柱上，接著加入甲醇(30mL)。產(chǎn)物隨后用2N氨/甲醇溶液(7mL)洗脫。利用高速真空除去樣品中的溶劑，得到油狀標(biāo)題化合物(41mg，53％)；HPLCb rt＝3.06min.LC/MS(電霧化，+離子)m/z519(M+H)。
實(shí)施例120 室溫下，向?qū)嵤├?18部分B化合物(67.4mg，0.15mmol)在1mL無水二噁烷中的溶液內(nèi)加入三乙胺(30.3mg，0.3mmol)和2-溴丁內(nèi)酯(49.5mg，0.3mmol)。搖動(dòng)反應(yīng)物過夜，然后加入碳酸鉀(103mg，0.75mmol)，繼續(xù)振搖反應(yīng)24小時(shí)。濾除固體物，收集濾液，并真空除去溶劑。反應(yīng)混合物然后按下所述通過短硅膠濾柱(2g)純化柱先用乙酸乙酯(10mL)沖洗平衡，然后將溶在1mL乙酸乙酯中的反應(yīng)混合物填裝到柱上，接著加入乙酸乙酯(7mL)。收集溶液，利用高速真空除去樣品中的溶劑。殘留物然后用TFA/二氯甲烷(1ml，1∶3)室溫處理2小時(shí)。真空除去溶劑，得到標(biāo)題化合物的TFA鹽(47.1mg，57％)；HPLC rt＝2.56min.LC/MS(電霧化，+離子)m/z 434(M+H)。
按照與制備實(shí)施例118-120化合物所述類似的方法，用實(shí)施例118部分B的化合物(0.15mmol)與相應(yīng)的溴化物(0.3mmol)制備下表所列實(shí)施例121-172的化合物。實(shí)施例159-172在用TFA脫保護(hù)之前需要進(jìn)一步加工。少數(shù)實(shí)施例通過制備HPLC純化，以含0.2％三氟乙酸的甲醇與水梯度體系洗脫。實(shí)施例121-172以三氟乙酸鹽或游離堿形式分離得到。
實(shí)施例121-127 實(shí)施例序號 X1-R M+H正離子 按照與制備實(shí)施例118-172化合物所述類似的方式，制備下表所列實(shí)施例173-216的化合物。
實(shí)施例173-216 實(shí)施例序號 X1-RM+H正離子
實(shí)施例217 在-18℃冷卻下，于氮?dú)夥罩邢騈-Boc-O-芐基-D-絲氨酸(5g，16.9mmol，ChemImpex)的THF(35mL)溶液內(nèi)加入N-甲基嗎啉(1.86mL，16.9mmol)和氯甲酸異丁酯(2.19mL，16.9mmol)。-18℃攪拌該混合物0.5小時(shí)后，加入N-Cbz-1-3-二甲氨基丁烷鹽酸鹽 (4.14g，16.9mmol)和N-甲基嗎啉(1.86mL，16.9mmol)在DMF(10mL)中的溶液，4小時(shí)內(nèi)溫?zé)崴没旌衔镏?5℃。過濾混合物，蒸發(fā)溶液至近干。將殘留物溶于EtOAc，用5％NaHCO3(3×50mL)、水和鹽水洗滌。干燥(硫酸鈉)有機(jī)溶液，蒸發(fā)得到A部分化合物(7.84g，97％產(chǎn)率)LC/MS(電霧化，+離子)m/z 486(M+H). 氮?dú)夥障?，向預(yù)先在0℃下冷卻的A部分化合物(7.92g，16.3mmol)與三苯膦(4.28g，16.3mmol)在THF(60mL)中的溶液內(nèi)加入偶氮二羧酸二乙酯(2.57mL，16.3mmol)和疊氮三甲基硅烷(2.16mL，16.3mmol)。室溫?cái)嚢杌旌衔镞^夜，然后在0℃下冷卻。分別加入另一當(dāng)量的三苯膦(4.28g)、偶氮二羧酸二乙酯(2.57mL)和疊氮三甲基硅烷(2.16mL)，在室溫下繼續(xù)攪拌24小時(shí)。在0℃下冷卻反應(yīng)混合物，加入硝酸鈰(IV)銨水溶液(75mL)(2.63g/100mL)，攪拌1小時(shí)。含水混合物用二氯甲烷提取，然后干燥(硫酸鈉)有機(jī)相，蒸發(fā)并進(jìn)行層析(SiO2230-400目，1/1己烷/EtOAc)，得到不純的B部分化合物。將污染的四唑溶于氯仿，加入乙醚沉淀出無色固體B部分化合物(2.6g)MS(電霧化，+離子)m/z 511(M+H). 向B部分化合物(2.5g，4.80mmol)的二氯甲烷溶液內(nèi)加入4MHCl/二噁烷(14.7mL)，攪拌3小時(shí)。減壓除去溶劑，殘留物在二氯甲烷中濃縮，進(jìn)而將所得殘留物再溶于少量i-PrOH。加入鹽水(150mL)，并通過加1M K2CO3調(diào)節(jié)水溶液的pH至10。水溶液用二氯甲烷提取，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)，從而得到胺中間體 該產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化而直接用于后續(xù)反應(yīng)。
在0℃下混合N-Boc-甲基丙氨酸(1.49g，7.35mmol，Sigma)、EDAC(1.14g，7.35mmol)、HOAt(1g，7.35mmol)、1，2-DCE和DMF(1.29mL)，并攪拌15分鐘。將所得溶液轉(zhuǎn)移到上面制備的胺中間體粗品在1，2-DCE的0℃溶液內(nèi)，室溫?cái)嚢杷没旌衔镞^夜。加EtOAc稀釋反應(yīng)混合物，然后用飽和碳酸氫鈉、水和鹽水洗滌。干燥(硫酸鈉)有機(jī)層，蒸發(fā)并進(jìn)行層析(SiO2230-400目，1/1己烷/EtOAc)，從而得到無色油狀C部分化合物(1.58g)MS(電霧化，+離子)m/z596(M+H) 在45psi氫氣壓下氫化包含C部分化合物(100mg，0.17mmol)和5％鈀-碳(50mg)的甲醇(3mL)溶液1小時(shí)。通過Celite過濾反應(yīng)混合物，濃縮得到中間體(68.1g) 將所得殘留物通過自動(dòng)制備HPLC純化，得到純凈中間體(47.6mg)MS(電霧化，+離子)m/z 462(M+H).
室溫、氮?dú)夥障拢蛑虚g體(75mg，0.16mmol)的二氯甲烷(1mL)溶液內(nèi)加入包含乙內(nèi)酰脲 (25.3mg，0.16mmol)、EDAC(31.3mg，0.16mmol)和二甲氨基吡啶(DMAP)(20.4mg，0.16mmol)的二氯甲烷(1mL)與DMF(0.5mL)溶液。室溫?cái)嚢璺磻?yīng)混合物過夜，然后真空除去揮發(fā)物。將所得殘留物溶于甲醇，通過SCX樹脂柱得到D部分化合物(72mg)MS(電霧化，+離子)m/z 602(M+H) 用HCl溶液(3.0mL；10.2ml AcCl/40ml 3/2 CH2Cl2/MeOH)處理D部分化合物(64.3mg，0.107mmol)的二氯甲烷溶液，然后真空蒸發(fā)。殘留物與二氯甲烷一起共蒸發(fā)四次，從而得到白色固體標(biāo)題化合物(51.4mg)LC/MS(電霧化，+離子)m/z 502(M+H).
實(shí)施例218 在-20℃冷卻下，于氮?dú)夥罩邢騈-Boc-O-芐基-D-絲氨酸(6g，20.3mmol，ChemImpex)的THF(30mL)溶液內(nèi)加入N-甲基嗎啉(2.23mL，20.3mmol)和氯甲酸異丁酯(2.64mL，20.3mmol)。-20℃攪拌混合物45分鐘后，加入乙醇胺(1.3g，21.4mmol)的THF(20mL)溶液，4小時(shí)內(nèi)溫?zé)崴没旌衔镏潦覝亍嚢柽^夜后，過濾混合物，并蒸發(fā)溶液至近干。將殘留物通過快速柱色譜(硅膠)純化，以己烷∶乙酸乙酯(1∶4)洗脫，從而得到A部分化合物(7.3g)LC/MS(電霧化，+離子)m/z 339(M+H). 室溫、氮?dú)夥障?，向A部分化合物(3.60g，10.7mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液內(nèi)加入吡啶(3.44mL，42.6mmol)和乙酐(1.1mL，11.7mmol)。14小時(shí)后，真空除去揮發(fā)物。所得殘留物進(jìn)而通過快速柱色譜(硅膠)純化，以己烷∶乙酸乙酯(2∶1)洗脫，從而得到B部分化合物(3.85g)LC/MS(電霧化，+離子)m/z 381(M+H). 向B部分化合物(3.83g，10.1mmol)的THF(30mL)溶液內(nèi)加入三苯膦(2.64g，10.1mmol)、偶氮二羧酸二乙酯(1.24mL，10.1mmol)和疊氮三甲基硅烷(1.34mL，10.1mmol)。室溫?cái)嚢杌旌衔?4小時(shí)，然后分別加入另一當(dāng)量的三苯膦(2.64g)、偶氮二羧酸二乙酯(1.24mL)和疊氮三甲基硅烷(1.34mL)，在室溫下繼續(xù)攪拌24小時(shí)。真空除去揮發(fā)物，進(jìn)而將殘留物通過快速色譜(SiO2230-400目，8/1己烷/EtOAc)純化，得到含一定雜質(zhì)的中間體(2.71g) 這種含雜質(zhì)四唑的純度足以適合后續(xù)反應(yīng)。
向上述中間體(2.71g，≤6.69mmol)中加入4M HCl/二噁烷溶液(10mL)，攪拌1.5小時(shí)。減壓除去溶劑，將殘留物同甲苯與甲醇的混合物一起共蒸發(fā)兩次，從而得到無色固體C部分化合物(2.28g)LC/MS(電霧化，+離子)m/z 381(M+H).
向C部分化合物(2.28g，6.7mmol)的二氯甲烷(25mL)溶液內(nèi)加入二異丙基乙胺(2.33mL，13.4mmol)、N-Boc-甲基丙氨酸(2.04g，10mmol，ChemImpex)、HOAt(1.36g，10mmol)和EDAC(1.92g，10mmol)，室溫?cái)嚢杷没旌衔镞^夜。加飽和氯化銨驟冷反應(yīng)混合物，并將水層用二氯甲烷洗滌三次。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌、干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)，從而得到其純度足以適合進(jìn)行后續(xù)反應(yīng)的中間體 將上述中間體在THF/MeOH溶液(20mL，20/1)中用2N氫氧化鋰(10mL)處理1小時(shí)。冷卻到0℃后，中和反應(yīng)混合物至pH 7，并用二氯甲烷提取水層(3次，每次100mL)。干燥(硫酸鎂)合并的有機(jī)層，過濾并真空濃縮。殘留物進(jìn)而通過快速色譜(SiO2230-400目，1/1己烷/EtOAc)純化，從而得到D部分化合物(1.69g)MS(電霧化，+離子)m/z 449(M+H). 0℃下，向D部分化合物(1.34g，3.0mmol)的THF(20mL)溶液內(nèi)加入吡啶(0.53mL，6.6mmol)。3分鐘后，加入對-硝基氯甲酸酯(1.33g，6.6mmol)的THF(10mL)溶液，0℃攪拌此混合物1小時(shí)，繼而室溫?cái)嚢?小時(shí)。然后過濾反應(yīng)混合物，并真空濃縮濾液。所得殘留物進(jìn)而通過快速色譜純化(SiO2230-400目，以1/1己烷/EtOAc洗脫)，從而得到E部分化合物(1.52g)LC/MS(電霧化，+離子)m/z614(M+H). 向E部分化合物(3.4g，5.55mmol)的THF(20mL)溶液中加入 (0.74g，8.32mmol)，室溫反應(yīng)3小時(shí)后，真空除去揮發(fā)物。將所得殘留物通過快速色譜(SiO2230-400目)純化，以1/2己烷/EtOAc(4/1-1/1)洗脫，從而得到純凈的F部分化合物(2.325g)以及一些低純度物質(zhì)(1.03g)LC/MS(電霧化，+離子)m/z 564(M+H). 用4N HCl/二噁烷溶液(15mL)處理F部分化合物(1.59g，2.82mmol)1.5小時(shí)。真空除去揮發(fā)物得到無色固體標(biāo)題化合物(1.44g)LC/MS(電霧化，+離子)m/z 464(M+H).
將上述中間體用4N HCl/二噁烷溶液處理3小時(shí)，爾后真空蒸發(fā)。殘留物進(jìn)而通過制備HPLC純化，得到白色固體標(biāo)題化合物(85mg)MS(電霧化，+離子)m/z 566(M+H).
實(shí)施例218的F部分中間體可以用實(shí)施例219所述的改進(jìn)條件制備。
實(shí)施例219 冷卻實(shí)施例218部分B化合物(47.0g，120mmol)的THF(250mL)溶液到1℃，加入三苯膦(32.6g，123mmol)和二異丙基乙胺(5.4mL，32mmol)。15分鐘內(nèi)逐滴加入偶氮二羧酸二乙酯(19.6mL，123mmol，DEAD)，加料期間保持溫度低于5℃，然后加入疊氮三甲基硅烷(16.5mL，123mmol)。室溫(rt)攪拌混合物24小時(shí)，然后如前所述分別加入另一當(dāng)量的三苯膦(32.6g)、DEAD(19.6mL)和疊氮三甲基硅烷(16.5mL)，在室溫下繼續(xù)攪拌24小時(shí)。再如前所述分別加入另一當(dāng)量的三苯膦(32.6g)、DEAD(19.6mL)和偶氮三甲基硅烷(16.5mL)，繼續(xù)在室溫下攪拌24小時(shí)。冷卻反應(yīng)物到1℃，45分鐘內(nèi)加硝酸鈰(IV)銨(136g)的水(500ml)溶液終止反應(yīng)。通過硅藻土過濾所得混合物，然后真空濃縮并用乙酸乙酯(250mL)提取兩次。合并的有機(jī)提取液用鹽水洗滌，硫酸鎂干燥，真空濃縮后得到橙色油狀物(236g)。將該油狀物溶于甲基叔丁基醚(1L，MTBE)，用1N NaOH(500mL)洗滌兩次，水(500mL)洗一次，最后再用鹽水(500mL)洗滌一次。然后硫酸鎂干燥并真空濃縮，得到一黃色固體物(166mg)。將該固體物通過硅膠墊(500g，230-400目)純化，以15-40％乙酸乙酯/己烷洗脫，從而得到黃色油狀乙酸酯中間體(20.6g，41％產(chǎn)率) 向上述中間體(106.6g，263mmol，合并眾多這種反應(yīng)的產(chǎn)物獲得)的二氯甲烷(600mL)溶液內(nèi)加入4M HCl/二噁烷溶液(325mL)，攪拌過夜。真空除去溶劑，將殘留物與甲苯同甲醇的混合物一起共蒸發(fā)兩次，得到棕色泡沫狀所需化合物(89.3g，100％產(chǎn)率)LC/MS(電霧化，+離子)m/z 381(M+H). 向A部分化合物(80.0g，262mmol)的二氯甲烷(1L)溶液內(nèi)加入二異丙基乙胺(120mL，262mmol)、N-Boc-甲基丙氨酸(80.0g，393mmol)、HOAt(53.5g，393mmol)、和EDAC(75.3g，393mmol)，室溫?cái)嚢杷没旌衔?小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物用水(500mL)、0.5MHCl(500mL)和飽和NaHCO3(500mL)洗滌，干燥(硫酸鎂)并蒸發(fā)，從而得到其純度足以適合后續(xù)反應(yīng)的黃色泡沫狀中間體(146.8g)。 將上述中間體在THF/MeOH(1.25L，4/1)中的溶液置于水浴內(nèi)，15分鐘內(nèi)加入2N氫氧化鋰(65mL)，加料期間保持溫度低于25℃。室溫?cái)嚢璺磻?yīng)1小時(shí)。然后真空濃縮反應(yīng)混合物得到油/固體混合物，進(jìn)而將其溶于水(500mL)，用1N HCl(40mL)調(diào)節(jié)pH至5.5。加入二氯甲烷(500mL)，攪拌混合物30分鐘。分出有機(jī)層，水層再用二氯甲烷(250mL)提取。合并的有機(jī)物然后用水(400mL)和鹽水(400mL)洗滌、干燥(硫酸鎂)、過濾并真空濃縮，得到亮黃色泡沫狀D部分化合物(123.2g)MS(電霧化，+離子)m/z 449(M+H). 0℃下，向B部分化合物(123g，260mmol)的二氯甲烷(350mL)溶液內(nèi)加入吡啶(32.0mL，391mmol)。10分鐘后，在1小時(shí)內(nèi)加入對-硝基氯甲酸酯(63.0g，313mmol)的二氯甲烷(150mL)溶液，并室溫?cái)嚢柙摶旌衔?小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物用水(300mL)、1N HCl(300mL)和鹽水(300mL)洗滌，干燥(硫酸鎂)，并真空濃縮，得到一棕色油狀物(187.3g)。進(jìn)而將此粗產(chǎn)物通過硅膠墊(500g，230-400目)純化，以30-50％乙酸乙酯/己烷洗脫，得到灰白色泡沫狀E部分化合物(130.89g，81.9％產(chǎn)率)LC/MS(電霧化，+離子)m/z 614(M+H).
在水浴中，向C部分化合物(117.5g，190mmol)的THF(600mL)溶液中逐滴加入氨基丁醇 (19.4mL，210mmol)，歷時(shí)30分鐘，然后在室溫下反應(yīng)1小時(shí)，再加入部分4-氨基-1-丁醇(1.7mL，18mmol)。在室溫下另攪拌30分鐘后，真空除去揮發(fā)物。將所得殘留物溶于EtOAc(600mL)，用1N HCl(200mL)、飽和碳酸氫鈉(1×500mL和2×200mL，乳液)、以及鹽水(3×200mL，緩慢分層)洗滌，干燥(硫酸鎂)并真空濃縮，得到一油狀物。進(jìn)而將此油狀物溶于MTBE(600mL)，用飽和碳酸氫鈉(1×300mL)和鹽水(2×500mL)洗滌，干燥(硫酸鈉)并真空濃縮，得到黃色油狀物(156.52g)。將該油狀物再溶于MTBE(1L)，用1N NaOH(500mL)和水洗滌。有機(jī)層再用1N NaOH(500mL)洗滌，并用MTBE(400mL)提取合并的NaOH洗滌物。合并的MTBE層用水(500mL)和鹽水(500mL)洗滌，干燥(硫酸鎂)并真空濃縮，從而得到亮黃色油狀D部分化合物(103.08g，95.5％產(chǎn)率)LC/MS(電霧化，+離子)m/z564(M+H).
按照與制備本發(fā)明上述化合物所述類似的方式以及本領(lǐng)域公知的方法制備實(shí)施例220-352。
實(shí)施例220-352 實(shí)施例序號X1-RM+H正離子 實(shí)施例序號 結(jié)構(gòu) M+H正離子 實(shí)施例353 向?qū)嵤├?18部分F化合物(929mg，1.65mmol)在無水二氯甲烷(8mL)中的溶液內(nèi)加入吡啶(400μl，4.95mmol)和DMAP(40mg，0.33mmol)，接著再加入苯甲酰氯(287μl，2.48mmol)。室溫?cái)嚢?小時(shí)后，真空除去溶劑，殘留物進(jìn)而通過快速柱色譜純化(SiO2，20％-50％EtOAc/己烷)，得到所需產(chǎn)物(1.09g，99％產(chǎn)率). 向A部分化合物(580mg)的二氯甲烷(3ml)溶液內(nèi)加入4N HCl/二噁烷溶液(3ml)。室溫?cái)嚢璺磻?yīng)混合物1.5小時(shí)。真空除去溶劑后得到所需產(chǎn)物(469mg，89％產(chǎn)率).LC/MS(電霧化，+離子)m/z 567(M+H).
實(shí)施例353另一種制法 向?qū)嵤├?19化合物(102.66g，182mmol)的無水二氯甲烷(650mL)溶液內(nèi)加入吡啶(37.0mL，455mmol)和DMAP(2.23g，18.2mmol)。將燒瓶浸入水浴中，20分鐘內(nèi)逐滴加入苯甲酰氯(25mL，219mmol)。室溫?cái)嚢?小時(shí)后，再逐滴加入另一份苯甲酰氯(6.0mL，54mmol)，繼續(xù)在室溫下攪拌反應(yīng)過夜。然后將反應(yīng)混合物用1N HCl(300mL)、飽和NaHCO3(300mL)和鹽水(300mL)洗滌，干燥(硫酸鎂)并真空濃縮，進(jìn)而將殘留物通過硅膠墊過濾(SiO2，650g，10％-85％EtOAc/己烷)，得到無色泡沫狀所需產(chǎn)物(116.34g，97％產(chǎn)率)。 30分鐘內(nèi)，向A部分化合物(116.0g，174mmol)的二氯甲烷(700ml)溶液內(nèi)逐滴加入4N HCl/二噁烷溶液(218ml，870mg)。室溫?cái)嚢璺磻?yīng)混合物4小時(shí)。真空除去溶劑。將殘留物溶于水(500mL)，用MTBE(250mL)洗滌。水層與二氯甲烷(300mL)混合，并用1N NaOH(190mL)調(diào)節(jié)至pH11。分出二氯甲烷層，水層進(jìn)一步用二氯甲烷(300mL)提取。合并的二氯甲烷層用鹽水(2×300mL)洗滌，干燥(硫酸鎂)并真空濃縮，從而獲得黃色油狀所需產(chǎn)物(92.8g，94％產(chǎn)率).LC/MS(電霧化，+離子)m/z 567(M+H).
實(shí)施例354 0℃下，向化合物219(100mg，0.18mmol)的1，2-二氯乙烷(250μl)溶液內(nèi)加入由2-苯基丙酸(50μl，0.37mmol)、EDAC(69mg，0.36mmol)、和DMAP(44mg，0.36mmol)在1，2-二氯乙烷(250μl)中形成的溶液。室溫?cái)嚢璺磻?yīng)混合物36小時(shí)。然后加EtAOc(50ml)稀釋反應(yīng)物，進(jìn)而用飽和碳酸氫鈉(2×25ml)、水(25ml)和鹽水(25ml)洗滌，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)，得到粗產(chǎn)物(128mg)。隨后將該產(chǎn)物通過快速柱色譜純化，以1∶1己烷∶EtOAc洗脫，從而得到所要產(chǎn)物(122.4mg，99％產(chǎn)率). 在10％TFA/二氯甲烷溶液(4.0ml)中攪拌A部分化合物(122mg，0.18mmol)2.5小時(shí)。真空除去溶劑。殘留的TFA通過與二氯甲烷(4×3ml)和甲醇(2×3ml)共蒸發(fā)除去。將殘留物溶于甲醇，60℃加熱8小時(shí)。真空除去溶劑，殘留物進(jìn)而通過制備HPLC純化(20％-100％B，12min.梯度，20ml/min，YMCS5 ODS 20×100mm)，得到所需產(chǎn)物(115.4mg，93％產(chǎn)率).LC/MS(電霧化，+離子)m/z 596(M+H).
按照與制備實(shí)施例353和354化合物類似的方式，使用實(shí)施例218的F部分化合物和相應(yīng)的酸或酰氯制備下表所列實(shí)施例355-392的化合物。
實(shí)施例355-392 實(shí)施例序號 X1-R M+H正離子 按照與制備實(shí)施例353和354的化合物類似的方式制備下表所列實(shí)施例393-424的化合物。
實(shí)施例393-424 實(shí)施例序號 X1-R M+H正離子 實(shí)施例序號 X1-RM+H正離子 實(shí)施例425 向R-(+)-3-BOC-2，2-二甲基-4-噁唑烷羧酸甲酯 (2.05g，7.75mmol，Aldrich，98％)的THF(24.0mL)溶液內(nèi)加入氯化鈣(437mg，3.94mmol)的EtOH(16.5mL)輕微懸浮液，在0℃下冷卻所得溶液。加入硼氫化鈉，0℃攪拌混合物2小時(shí)，然后在室溫下繼續(xù)攪拌4小時(shí)。將上述最終混合物在0℃下冷卻，并加入磷酸鉀緩沖液(pH3，40mL)。室溫?cái)嚢杷煤旌衔?0分鐘，然后用二氯甲烷(3×70mL)提取。干燥(硫酸鈉)合并的有機(jī)相，蒸發(fā)得到粗產(chǎn)物，進(jìn)而層析純化(SiO2，230-400目，3/2-1/1己烷/EtAOc)，獲得原料酯(409mg，20％回收率)和所需醇(1.46g，80％產(chǎn)率)1H NMRδ(CDCl3，ppm，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)4.18-3.56(4m，6H)，1.55和1.50(2s，15H). 向A部分化合物(2.90g，12.5mmol)、2-羥基吡啶(1.54g，15.7mmol)和三苯膦(4.11g，15.7mmol)在THF(27mL)中的溶液內(nèi)逐滴加入偶氮二羧酸二乙酯(2.47mL，15.7mmol)。室溫?cái)嚢杷萌芤?3.5小時(shí)，然后部分蒸發(fā)。將剩余溶液通過SiO2(230-400目)柱，以7/3己烷/EtOAc洗脫，從而獲得固體形式所需化合物(1.88g，49％產(chǎn)率)1H NMR δ(CDCl3，ppm，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)8.15(m，1H)，7.57(m，1H)，6.88(m，1H)，6.74(d，J＝8.2Hz，1H)，4.50(m，1H)，4.25-3.95(數(shù)個(gè)m，4H)，1.61-1.45(數(shù)個(gè)s，15H). 35℃加熱B部分化合物(434mg，1.41mmol)與對-甲苯磺酸一水合物(295mg，1.55mmol)在無水甲醇(14.1mL)中的溶液7小時(shí)，然后室溫?cái)嚢?.8小時(shí)。在0℃冷卻后，加入1M碳酸鉀溶液(0.8mL)，通過真空蒸發(fā)將混合物的體積減少到4mL。加入鹽水(50mL)，然后通過加1M碳酸鉀調(diào)節(jié)水溶液的pH到10。用二氯甲烷(4×50mL)提取，干燥(硫酸鈉)，蒸發(fā)并層析粗品(SiO2230-400目，1/1己烷/EtOAc)，獲得原料B部分化合物(93mg，21％回收率)和無色固體所需醇(249mg，66％產(chǎn)率)LC-MS 99％面積；LC/MS(電霧化，+離子)m/z269(M+H). 0℃冷卻下，向C部分化合物(1.34g，5.00mmol)和三苯膦(1.58g，6.02mmol)在二氯甲烷(34.0mL)中的溶液內(nèi)逐滴加入偶氮二羧酸二乙酯(0.95mL，6.03)，隨后室溫?cái)嚢?.75小時(shí)?；旌衔锿ㄟ^真空蒸發(fā)減少到8mL體積，然后將此剩余溶液通過SiO2柱(230-400目)，以7/3己烷/EtOAc洗脫，從而得到黃色油狀所需化合物(862mg，70％產(chǎn)率).
1H NMR δ(CDCl3，ppm)8.13(m，1H)，7.57(m，1H)，6.88(m，1H)，6.78(d，J＝8.2Hz，1H)，4.45(dd，J＝11.6，4.4Hz，1H)，4.36(dd，J＝11.6，5.5Hz，1H)，2.88(m，1H)，2.35(d，J＝6.0Hz，1H)，2.22(d，J＝3.9Hz，1H)，1.43(s，9H). 向D部分化合物(97mg，0.39mmol)和氰化鉀(51mg，0.78mmol)在DMSO(2.6 mL)中的懸浮液內(nèi)加入水(7μL)，在30-40℃下加熱所得混合物11小時(shí)。然后在室溫下繼續(xù)攪拌9小時(shí)，并將混合物用9/1己烷/EtOAc(60mL)稀釋。所得溶液用水(2×30mL)和鹽水(30mL)洗滌，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)，得92mg粗品。層析純化(SiO2230-400目，7/3己烷/EtOAc)獲得原料氮丙啶(8.0mg，8％回收率)和無色固體所需化合物(75.6mg，72％產(chǎn)率)LC-MS 100％面積；LC/MS(電霧化，+離子)m/z 278(M+H)。 向含有E部分化合物(199mg，0.72mmol)和茴香硫醚(254μL，2.16mmol)的燒瓶內(nèi)加入15％TFA溶液(6.0mL)，并在室溫下放置所得溶液4小時(shí)。蒸發(fā)溶液，殘留的TFA通過與二氯甲烷(2×5mL)和MeOH(3×5mL)共蒸發(fā)除去，接著高真空干燥1小時(shí)。所得胺鹽粗品 無需進(jìn)一步純化直接用于后續(xù)反應(yīng)。
將N-Boc-O-芐基-D-絲氨酸(298mg，1.00mmol)、EDAC(194mg，1.01mmol)、HOAT(137mg，1.01mmol)、1，2-DCE(0.47mL)和DMF(940μL)在0℃下混合，并攪拌15分鐘。然后利用注射液將所得渾濁溶液轉(zhuǎn)移到上述胺粗品在1，2-DCE(400μL)和DMF(470μL)中的0℃溶液內(nèi)，并在0℃下攪拌該混合物10分鐘。加入二異丙基乙胺，在室溫下繼續(xù)攪拌36小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物用EtOAc(80 mL)稀釋，并用飽和碳酸氫鈉(2×40mL)、水(40mL)和鹽水(40mL)洗滌。干燥(硫酸鈉)有機(jī)層，蒸發(fā)并加以層析(SiO2230-400目，1/1己烷/EtOAc)，從而獲得無色油狀所需化合物(311mg，95％產(chǎn)率)1H NMR δ(CDCl3，ppm)8.17(s，1H)，7.84(s，1H)，7.61(m，1H)，7.30(m，5H)，6.94(m，1H)，6.76(d，J＝7.9Hz，1H)，5.37(s，1H)，4.52(m，5H)，4.31(broad s，1H)，3.88(m，1H)，3.58(m，1H)，2.80(m，2H)，1.43(s，9H). 向F部分化合物(311mg，0.69mmol)和三苯膦(217mg，0.83mmol)在二氯甲烷(1.4mL)中的溶液內(nèi)加入偶氮二羧酸二乙酯(131μL，0.83mmol，DEAD)和疊氮三甲基硅烷(110μL，0.83mmol)。室溫?cái)嚢杌旌衔?2小時(shí)，再加入等同量的三苯膦(217mg)、DEAD(131μL)和疊氮三甲基硅烷(110μL)。在室溫下繼續(xù)攪拌24小時(shí)，然后將最后得到的混合物通過SiO2柱(230-400目)，以3/2-1/1己烷/EtOAc洗脫，得到無色粘稠油狀所需化合物(248mg，76％)1H NMR δ(CDCl3，ppm)8.11(m，1H)，7.55(m，1H)，7.33(m，3H)，7.20(m，2H)，6.92(t，J＝7.9Hz，1H)，6.76(d，J＝8.3Hz，1H)，5.45(d，J＝8.3Hz，1H)，5.44(m，2H)，4.73(dd，J＝11.6，4.9Hz，1H)，4.63(dd，J＝11.6，8.3Hz，1H)，4.50(d，J＝11.0Hz，1H)，4.44(d，J＝11.0Hz，1H)，4.00(dd，J＝8.3，5.5Hz，1H)，3.58(t，J＝8.8Hz，1H)，3.04(dd，J＝17.0，7.1Hz，1H)，2.86(dd，J＝17.0，7.1Hz，1H)，1.43(s，9H). 向含有G部分化合物(227mg，0.47mmol)和茴香硫醚(166μL，1.41mmol)的燒瓶內(nèi)加入5％TFA溶液(6.2mL)，并在室溫下放置所得溶液4小時(shí)。蒸發(fā)溶液，殘留的TFA通過與二氯甲烷(2×8mL)和MeOH(3×8mL)共蒸發(fā)除去，接著高真空干燥1小時(shí)。將殘留物于60℃下在甲醇(25mL)中加熱，然后濃縮該溶液。所得胺鹽粗品 無需進(jìn)一步純化直接用于后續(xù)反應(yīng)。
將N-Boc-O-甲基丙氨酸 (125mg，0.62mmol)、EDAC(117mg，0.61mmol)、HOAT(84mg，0.62mmol)、1，2-DCE(350μL)和DMF(700μL)在0℃下混合，并攪拌15分鐘。然后利用注射液將所得溶液轉(zhuǎn)移到上述胺粗品在1，2-DCE(300μL)和DMF(400μL)中的0℃溶液內(nèi)，并在0℃下攪拌該混合物15分鐘。加入二異丙基乙胺(205μL，1.18mmol)，在室溫下繼續(xù)攪拌25小時(shí)。將最后得到的混合物用EtOAc(75mL)稀釋，并用飽和碳酸氫鈉(2×30mL)、水(30mL)和鹽水(30mL)洗滌。干燥(硫酸鈉)有機(jī)層，蒸發(fā)并加以層析(SiO2230-400目，3/2-2/3己烷/EtOAc)，從而獲得無色泡沫狀所需化合物(175.4mg，66％產(chǎn)率)1H NMR δ(CDCl3，ppm)8.13(m，1H)，7.57(m，1H)，7.42(d，J＝8.8H，1H)，7.31(m，3H)，7.19(m，2H)，6.93(m，1H)，6.77(d，J＝8.2Hz，1H)，5.75(m，1H)，5.49(m，1H)，4.97(s，1H)，4.73(dd，J＝11.6，5.5Hz，1H)，4.66(dd，J＝11.6，7.7Hz，1H)，4.50(d，J＝11.6Hz，1H)，4.43(d，J＝11.5Hz，1H)，4.04(m，1H)，3.52(t，J＝8.8Hz，1H)，3.02(dd，J＝17.1，6.6Hz，1H)，2.85(dd，J＝17.0，7.7Hz，1H)，1.50(s，3H)，1.44(s，3H)，1.36(s，9H). 用15％TFA(14.0mL)處理H部分化合物(492mg，0.87mmol)2.5小時(shí)，然后在真空下濃縮該溶液。殘留的TFA與二氯甲烷(3×10mL)和MeOH(2×10mL)一起共蒸發(fā)，進(jìn)而在高真空下干燥1小時(shí)。在甲醇(40mL)中60℃加熱殘留物10小時(shí)，濃縮此溶液得到所需化合物粗品。用甲醇/乙醚連續(xù)沉淀得到所需化合物(418mg)。蒸發(fā)母液，并將殘留物通過制備HPLC純化(Shimadzu，10-100％B[MeOH∶H2O∶0.1％TFA]，30min，梯度，20mL/min.流速，220nm，YMC S5 ODS20×100mm)，另外得到一定量標(biāo)題化合物(67.6mg)合并產(chǎn)率，96％；LC-MS 99％面積；LC/MS(電霧化，+離子)m/z 465(M+H).
下列化合物采用上文以及制備實(shí)施例中描述的方法制備。
實(shí)施例426-477 實(shí)施例序號 X1-R M+H正離子 實(shí)施例478-498 實(shí)施例序號 X1-R M+H正離子
實(shí)施例499-530 實(shí)施例序號X1-R M+H正離子 實(shí)施例531-554 實(shí)施例序號 X1-R M+H正離子 實(shí)施例555-583 實(shí)施例序號 X1-RM+H正離子 實(shí)施例序號 X1-R M+H正離子
權(quán)利要求
1.包括其可藥用鹽、其前藥酯以及其所有立體異構(gòu)體在內(nèi)的下式結(jié)構(gòu)化合物 其中R1為烷基，芳基，鏈烯基，炔基，芳烷基，環(huán)烷基，環(huán)烷基烷基，烷氧基烷基，芳基烷氧基烷基，芳氧基烷基，雜芳基，環(huán)烷基烷氧基烷基，雜芳基烷基，雜環(huán)烷基或雜環(huán)烷基烷基，并且這些基團(tuán)可任選地被1、2或3個(gè)選自鹵素、-OR8、-OC(O)R8、烷基、苯基、苯氧基、鹵代苯基、-CF3、-OCF3、-N(R8a)C(O)(R8)、或-N(R8a)(R8a)的取代基取代；R1a為H，烷基，或環(huán)烷基；Xa為下述雜芳基 A為氧，硫，-NH-，-N-R5，或-NC(O)-R2；B為-CR5b或-N-；Z為價(jià)鍵或-S-；G為氧或硫；U為氧，硫，-NH-，或-N-R5b；R2為烷基，芳基，鏈烯基，炔基，芳烷基，環(huán)烷基，環(huán)烷基烷基，烷氧基烷基，芳氧基烷基，雜芳基，或雜芳基烷基，并且這些基團(tuán)可任選地被1、2或3個(gè)選自鹵素、-OR8b、-OC(O)R8b、烷基、苯基、苯氧基、鹵代苯基、-CF3、-OCF3、-N(R8c)C(O)(R8b)、或-N(R8c)(R8b)的取代基取代；R3為H，鹵素，烷基，芳基，鏈烯基，炔基，烷芳基，烷氧基，芳氧基或J1，并且其中的烷基、芳基、鏈烯基、炔基、芳烷基、烷氧基、或芳氧基可以任選地被1-3個(gè)J1取代；R4和R4a相同或不同，并且獨(dú)立地選自H，鹵素，-CF3，烷基，或芳基；R5為H，烷基，芳基，鏈烯基，芳基鏈烯基，炔基，芳基烷基，芳基炔基，環(huán)烷基烷基，烷氧基烷基，芳氧基烷基，芳基烷氧基烷基，雜芳基，環(huán)烷基烷氧基烷基，-SO2T1，-SO2N(T1a)T1，或雜芳基烷基，并且其中的烷基、芳基、鏈烯基、芳基鏈烯基、炔基、芳基烷基、芳基炔基、環(huán)烷基烷基、烷氧基烷基、芳氧基烷基、芳基烷氧基烷基、雜芳基、雜芳氧基烷基、環(huán)烷基烷氧基烷基、或雜芳基烷基可以任選地被1-3個(gè)J1獨(dú)立取代；R5a和R5b相同或不同，且獨(dú)立地選自H，烷基，芳基，鏈烯基，芳基鏈烯基，炔基，芳烷基，芳基炔基，環(huán)烷基烷基，烷氧基烷基，芳氧基烷基，芳基烷氧基烷基，雜芳基，環(huán)烷基烷氧基烷基，雜芳基烷基，或J1，并且其中的烷基、芳基、鏈烯基、芳基鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基炔基、環(huán)烷基烷基、烷氧基烷基、芳氧基烷基、芳基烷氧基烷基、雜芳基、雜芳氧基烷基、環(huán)烷基烷氧基烷基、或雜芳基烷基可以任選地被1-3個(gè)J1獨(dú)立取代；Y為 其中x和y獨(dú)立地為0-3，并且z為1-3；XC為價(jià)鍵，-N-R6a或-O-；R7和R7a相同或不同，且獨(dú)立地選自H，烷基，-CF3，苯基，芳基，芳烷基，和環(huán)烷基；或者R7和R7a中的一個(gè)或二者可獨(dú)立地與(Xb中的)R9和R10基團(tuán)中的一個(gè)或二者連接形成1-5個(gè)碳原子的亞烷基橋；或者R7與R7a一起連接形成3-7碳原子的環(huán)；R6，R6a，R6b，R6c，R8，R8a，R8b，R8c，R8d，R8e，R8f，R8g，R8h，R8i，R8k，R8l，和R8m相同或不同，并且獨(dú)立地為H，烷基，環(huán)烷基，鏈烯基或芳基；R8j為H，烷基，芳基，羥基或-OC(O)R8k；Xb為 R9和R10相同或不同，并且獨(dú)立選自H，烷基，和取代烷基，其中的取代基可以是1-3個(gè)羥基，1-3個(gè)C1-C10-烷酰氧基；1-3個(gè)C1-C6烷氧基，苯基，苯氧基，C1-C6-烷氧基羰基；或者R9與R10可一起形成-(CH2)tXd(CH2)u-，其中Xd為C(R9h)(R8j)，-O-或-N(R6b)，t和u獨(dú)立地為1-3；R11為H，C1-C6烷基，-CF3，芳基烷基，或芳基，并且所述烷基和芳基基團(tuán)任選被1-3個(gè)羥基，1-3個(gè)C1-C10烷酰氧基，1-3個(gè)C1-C6烷氧基，苯基，苯氧基或C1-C6烷氧基羰基取代；R12和R13獨(dú)立地為H，C1-C6烷基，-CF3，芳基，或鹵素，并且所述烷基和芳基基團(tuán)任選被1-3個(gè)羥基，1-3個(gè)C1-C10烷酰氧基，1-3個(gè)C1-C6烷氧基，或C1-C6烷氧基羰基取代；J1為硝基，-(CH2)vN(T1a)C(O)T1，-(CH2)vCN，-(CH2)vN(T1a)C(O)OT1，-(CH2)vN(T1a)C(O)N(T1b)T1，-(CH2)vN(T1a)SO2T1，-(CH2)vC(O)N(T1a)T1，-(CH2)vC(O)OT1，-(CH2)vOC(O)OT1，-(CH2)vOC(O)T1，-(CH2)vOC(O)N(T1a)T1，-(CH2)vN(T1a)SO2N(T1b)T1，-(CH2)vOT1，-(CH2)vSO2T1，-(CH2)vSO2N(T1a)T1，-(CH2)vC(O)T1，-(CH2)vCH(OH)T1，雜環(huán)烷基，或雜芳基，并且v為0-5；T1，T1a和T1b相同或不同，并且獨(dú)立地為H，烷基，鏈烯基，炔基，低級烷硫基烷基，烷氧基烷基，芳基，芳基烷基，雜芳基，雜芳基烷基，雜環(huán)烷基，或環(huán)烷基，它們中的每一個(gè)基團(tuán)都可任選地被1、2或3個(gè)選自如下的基團(tuán)取代鹵素、羥基、-NR8FC(O)NR8gR8i、-C(O)NR8fR8g、-NR8fC(O)R8g、-CN、-N(R8f)SO2R14、-OC(O)R8f、-SO2NR8fR8g、-SOR14、-SO2R14、烷氧基、-COOH、雜環(huán)烷基、或-C(O)OR14；或者T1與T1a或T1與T1b可一起形成-(CH2)wXe(CH2)z-，其中Xe為-C(R8m)(R81)，-O-，-S-，-SO-，-SO2-，-NC(O)OR14a，-NC(O)NR14aR14b，-NC(O)R14a或-N(R6c)，其中w和z各自獨(dú)立地為1-3；條件是當(dāng)T1與羰基或硫連接時(shí)，如在-C(O)T1或-SO2T1情形下，它不能為氫；R14，R14a，和R14b獨(dú)立地為C1-C6烷基，雜芳基，或芳基，它們各自任選被-(CH2)sOH取代，其中s為0-5；條件是，當(dāng)Xa為時(shí) (1)如果R7和R7a中的一個(gè)或二者與R9和R10中的一個(gè)或二者形成亞烷基橋，那么當(dāng)R5為-(CH2)C(O)N(T1a)T1時(shí)，則T1a和T1中至少一個(gè)≠H；或(2)如果R1為芳烷基，并且R1a為H和R5為-(CH2)C(O)N(T1a)T1，則T1a或T1不能為 (3)如果R1和R7各自為2-萘基-CH2-，則R5≠苯乙基。
2.權(quán)利要求1所述的化合物，其中Xa為
3.權(quán)利要求1所述的化合物，它具有下述結(jié)構(gòu)
4.權(quán)利要求1所述的化合物，它具有下式結(jié)構(gòu)
5.權(quán)利要求1所述的化合物，其中R1為芳烷基，芳基烷氧基烷基，雜環(huán)烷基烷基，芳氧基烷基或雜芳基烷基。
6.權(quán)利要求1所述的化合物，其中R1a為H或烷基。
7.權(quán)利要求1所述的化合物，其中R1為芳基烷氧基烷基且R1a為H。
8.權(quán)利要求1所述的化合物，其中R6為H。
9.權(quán)利要求7所述的化合物，其中(1)Xa為 其中R5為烷基或鏈烯基或雜芳氧基烷基，它們各自被J1取代，并且J1為-(CH2)vOC(O)N(T1a)(T1)，-(CH2)vCN，或雜芳基；或者(2)Xa為 其中A為NH，R4和R4a都為H且R3為J1；或者(3)Xa為 其中B為-N-或CR5b；Z為價(jià)鍵或-S-；R5為任選被J1取代的烷基；且R5a為H，或各自被1-3個(gè)J1取代的烷基或芳烷基；R6為H。
10.權(quán)利要求1所述的化合物，其中Y為 其中x和y都為O，Xc為價(jià)鍵，且R7和R7a獨(dú)立地為烷基。
11.權(quán)利要求1所述的化合物，其中Xb為 R9和R10相同或不同，且獨(dú)立地選自H和取代烷基，其中的取代基可以是1-2個(gè)羥基。
12.權(quán)利要求1所述的化合物，其中J1為-(CH2)vCN，-(CH2)vC(O)N(T1a)T1，-(CH2)vN(T1a)C(O)T1，-(CH2)vOC(O)N(T1a)T1，-(CH2)vN(T1a)C(O)N(T1b)T1，或雜芳基，且v為0-4；T1，T1a和T1b相同或不同，并且獨(dú)立地選自烷基，低級烷硫基烷基，烷氧基烷基，芳基，芳烷基，雜芳基烷基或雜環(huán)烷基，它們各自可任選地被-OC(O)R8f、-C(O)NR8fR8g、-(CH2)sOH(s為0-2)、-SO2NR8fR8g、或-SO2R14取代；或者T1與T1a或T1與T1b可一起形成-(CH2)wXe(CH2)z-，其中Xe為C(R8m)(R81)；R8f為烷基或芳基。
13.具有下述結(jié)構(gòu)的權(quán)利要求1所述的化合物或其可藥用鹽
14.具有下述結(jié)構(gòu)的權(quán)利要求1所述化合物或其可藥用鹽
15.具有下述結(jié)構(gòu)的權(quán)利要求1所述的化合物或其可藥用鹽
16.具有下述結(jié)構(gòu)的權(quán)利要求15所述的化合物或其可藥用鹽
17.具有下述結(jié)構(gòu)的權(quán)利要求15所述的化合物或其可藥用鹽
18.一種藥物組合物，它包括權(quán)利要求1所述的化合物和可藥用載體。
19.一種提高內(nèi)源性生長激素水平的方法，該方法包括對需要治療的患者給藥治療有效量的權(quán)利要求1所述的化合物。
20.一種治療肥胖癥、骨質(zhì)疏松、腎病、心肌病、惡病質(zhì)、HIV消耗綜合癥、長期危象疾病、肌肉減少，和/或刺激創(chuàng)傷愈合和/或免疫系統(tǒng)，或增加肌肉質(zhì)量和/肌肉強(qiáng)度，或維持中老年人的肌肉強(qiáng)度與肌肉功能，或逆轉(zhuǎn)或預(yù)防中老年人體虛的方法，該方法包括對需要治療的患者給藥治療有效量的權(quán)利要求1所述的化合物。
21.一種治療Syndrome X的方法，該方法包括對需要治療的患者給藥治療有效量的權(quán)利要求1所述的化合物。
22.一種預(yù)防和/或治療糖尿病和/或增加消瘦身體質(zhì)量的方法，該方法包括對需要質(zhì)量的患者給藥治療有效量的權(quán)利要求1所述的化合物。
23.一種預(yù)防或治療骨質(zhì)疏松癥的方法，該方法包括對需要治療的患者給藥治療有效量的權(quán)利要求1所述的化合物。
24.一種治療骨質(zhì)疏松癥的方法，該方法包括對需要治療的患者聯(lián)合給藥治療有效量的權(quán)利要求1所述化合物與甲狀旁腺激素或雙膦酸酯。
25.一種治療Syndrome X、惡病質(zhì)、HIV消耗綜合癥、長期危象疾病、或肌肉減少，或增加肌肉質(zhì)量和/或肌肉強(qiáng)度，或維持中老年人的肌肉強(qiáng)度與肌肉功能，或逆轉(zhuǎn)或預(yù)防中老年人體虛的方法，該方法包括對需要治療的患者聯(lián)合給藥治療有效量的權(quán)利要求1所述化合物與雌激素、睪酮、選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑、或選擇性雄激素受體調(diào)節(jié)劑。
全文摘要
本發(fā)明提供了可用于刺激生長激素內(nèi)源性產(chǎn)生或釋放以及用于治療肥胖、骨質(zhì)疏松(改善骨密度)和改善肌肉質(zhì)量與肌肉強(qiáng)度的雜環(huán)芳族化合物。包括其可藥用鹽和其所有立體異構(gòu)體在內(nèi)的這些雜環(huán)芳族化合物具有結(jié)構(gòu)(I),其中X
文檔編號A61K31/4245GK1344160SQ00804667
公開日2002年4月10日 申請日期2000年3月2日 優(yōu)先權(quán)日1999年3月12日
發(fā)明者J·羅布, J·A·蒂諾, A·S·赫爾南德茲, J·J·李, 李鈞, S·G·斯瓦茨 申請人:布里斯托爾-邁爾斯斯奎布公司