專利名稱：快速檢測地溝油的試劑盒及其檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種快速檢測地溝油的試劑盒及其檢測方法。
背景技術(shù)：
目前，市場上食用油的質(zhì)量良莠不齊，一小部分油脂加工生產(chǎn)商為了節(jié)約成本、牟取暴利，違法加工提煉地溝油，或是在普通食用油中摻入地溝油來欺騙消費者，這些不法行為給食品安全帶來了隱患，嚴(yán)重危害了消費者的健康與利益。地溝油是質(zhì)量、衛(wèi)生極差，過氧化值、酸價、水分、羰基價、丙二醛等指標(biāo)嚴(yán)重超標(biāo)的非食用油，一般分為3類一是狹義的地溝油，即將下水道中的油膩漂浮物或者將賓館、酒樓的剩飯、剩菜(通稱泔水)經(jīng)過簡單加工、提煉出的油；二是劣質(zhì)動物肉類、動物內(nèi)臟、動物皮脂加工以及提煉后產(chǎn)出的油；三是用于油炸食品的油使用次數(shù)超過規(guī)定要求后，再被重復(fù)使用或往其中添加一些新油后重新使用的油。地溝油中的重金屬、毒素(如丙烯醛)等嚴(yán)重超標(biāo)，過氧化值一般高于0. 4%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過國家標(biāo)準(zhǔn)0. 15%，長期攝入會使細(xì)胞功能衰竭，誘發(fā)多種疾病，甚至致癌。日本曾發(fā)生食用過氧化值為7. 5%的劣質(zhì)油脂而造成集體急性中毒事件。目前國內(nèi)對地溝油的鑒別和檢測主要是從感官和理化檢驗兩個方面進(jìn)行。理化檢測分別檢驗水分含量、比重、折光率、皂化值、酸值、羰基值、過氧化值、碘值重金屬、脂肪酸相對不飽和度、膽固醇、殘留檢測、氧化產(chǎn)物等指標(biāo)。地溝油由于經(jīng)過水洗、蒸餾、脫色、脫臭等精煉工藝后，或者與普通食用植物油摻兌之后，已經(jīng)很難用常規(guī)的感官分析或者理化指標(biāo)等進(jìn)行區(qū)分。目前國內(nèi)尚缺乏能夠有效鑒別地溝油的檢測方法。

發(fā)明內(nèi)容
基于此，本發(fā)明依據(jù)地溝油的加工原料與普通食用油原料存在較大的差異，提供了一種快速檢測地溝油的試劑盒及其檢測方法。利用試劑盒對地溝油中的基因成分進(jìn)行檢測，通過檢測結(jié)果判斷地溝油的加工原料，從而達(dá)到快速檢測地溝油的目的。 一種快速檢測地溝油的試劑盒，包括(I) DNA提取緩沖液所述DNA提取緩沖液的組成為十六烷基三甲基溴化胺(簡稱CTAB)、90 110nmol/L三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽(簡稱Tris-HCl)、15 25mmol/L乙二胺四乙酸二鈉(簡稱 EDTA2Na)、I. 3 I. 5mol/L 氯化鈉(簡稱 NaCl)、0. 09 0. 12g/L 蛋白酶 K ；(2) Taq DNA聚合酶，所述Taq DNA聚合酶的濃度為125IU ；(3) PCR 反應(yīng)液所述PCR反應(yīng)液的組成為2. 7 3. 3mmol/L氯化鎂，0. 3 0. 5 y mol/L引物，0.3 0. 5mmol/L的三磷酸脫氧核苷酸；所述引物為針對動物源性基因序列的通用引物SEQ ID NO :1和SEQ ID N0:2、以及針對植物源性基因序列的通用引物SEQ ID NO :3和SEQ ID NO 4 ；(4)上樣緩沖液所述上樣緩沖液的組成為2. 0 3. Og/L溴酚藍(lán)、350 450g/L蔗糖。在其中一些實施例中，所述引物還包括針對牛、羊、豬或雞的線粒體基因序列的弓I物。在其中一個實施例中，所述針對牛線粒體基因序列的引物為SEQ ID NO :5和SEQID NO :6。 在其中一個實施例中，所述針對羊線粒體基因序列的引物為SEQ ID NO :7和SEQID NO :8。在其中一個實施例中，所述針對豬線粒體基因序列的引物為SEQ ID NO :9和SEQID NO :10。在其中一個實施例中，所述針對雞線粒體基因序列的引物為SEQ ID NO 11和SEQID NO :12。在其中一個實施例中，所述引物還包括針對玉米的內(nèi)源基因序列的引物SEQ IDN0:13和SEQ ID NO :14、針對大豆的內(nèi)源基因序列的引物SEQ ID N0:15和SEQ ID NO 16,針對大米的內(nèi)源基因序列的引物SEQ ID N0:17和SEQ IDNO :18、針對花生的內(nèi)源基因序列的引物SEQ ID N0:1^PSEQ ID NO :20或針對油菜籽的內(nèi)源基因序列的引物SEQ ID NO:21 和 SEQ ID NO :22。一種快速檢測地溝油的方法，采用上述試劑盒，包括以下步驟(I)制備樣品DNA取離心管，每管加入20 50mL油樣與等體積雙蒸水，振蕩儀上振蕩30 60min，高速離心15 20min，棄去上層油脂，保留下層水相。再向離心管中加入20 50mL油樣，繼續(xù)振蕩，離心，上述過程重復(fù)7 8次，所萃取油樣的體積約為300 400mL。萃取到下層水相渾濁后，高速離心，棄去上層油脂，將水相轉(zhuǎn)移至平面皿中，濃縮干燥，干燥濃縮過程約3 5小時；充分干燥后，向平面皿中加入2 3mL的DNA提取緩沖液，混勻后，轉(zhuǎn)移懸濁液于離心管中。將離心管置于65°C放置45 60min，不時搖動，使樣品充分裂解。用氯仿異戊醇體積比為24 I的混合液進(jìn)行提取，離心。取上清，加入異丙醇沉淀核酸，_20°C放置2小時，使得異丙醇與核酸充分反應(yīng)，高速離心，獲得DNA沉淀。再用70%的乙醇溶液洗沉淀物，沉淀物加水溶解，即得樣品DNA ；(2) PCR擴增反應(yīng)取PCR反應(yīng)液、Taq DNA聚合酶置于反應(yīng)管中，混勻,加入樣品DNA,離心后置于擴增儀上進(jìn)行擴增，反應(yīng)參數(shù)95°C預(yù)變性5min后，按94°C 30sec,55°C 45sec，72°C 60sec程序進(jìn)行40個循環(huán)，最后72°C延伸lOmin，于4°C結(jié)束反應(yīng)；(3)產(chǎn)物檢測反應(yīng)產(chǎn)物，加上樣緩沖液，充分混勻后點樣，用DNA Marker作為分子量標(biāo)準(zhǔn)，用含溴化己錠染色的I. 5%瓊脂糖凝膠電泳，結(jié)束后，置紫外燈下觀察，出現(xiàn)目標(biāo)特異性條帶的為含有某物種基因成分，否則為不含該物種基因成分。
本發(fā)明針對地溝油基質(zhì)復(fù)雜，干擾因素多，且地溝油中基因降解較嚴(yán)重等問題，開發(fā)建立了高效的地溝油DNA的提取方法，成功地從數(shù)十份地溝油樣品中提取獲得了較高質(zhì)量的DNA。再進(jìn)一步根據(jù)地溝油中可能含有的基因成分的品種，設(shè)計特異性、專一性的引物序列進(jìn)行PCR反應(yīng)擴增，根據(jù)檢測結(jié)果快速鑒定所提取地溝油樣品中的動物源性基因成分與植物源性基因成分。本發(fā)明中的地溝油DNA提取方法增大了提取樣品的體積，采用300mL以上的地溝油樣品進(jìn)行提取，采用雙蒸水與地溝油充分混合的方式萃取地溝油中的基因成分，利用DNA提取緩沖液使地溝油中的細(xì)胞裂解，釋放核酸。用氯仿、異戊醇混合溶液除去溶液中的蛋白，最后用異丙醇在低溫條件下使DNA沉淀，獲得純化的地溝油DNA。獲得地溝油DNA后，篩選特異性引物對所提取地溝油中的基因組分進(jìn)行檢測，首先檢測地溝油中的動物內(nèi)源基因成分與植物內(nèi)源基因成分。檢測到動物內(nèi)源基因后，再根據(jù)設(shè)計好的特異性的動物物種基因擴增引物，具體鑒別是牛、羊還是豬等物種的基因序列；檢測到植物內(nèi)源基因后，再根據(jù)設(shè)計好的大豆、玉米、花生、油菜籽等物種特異性的植物物種基因擴增引物，準(zhǔn)確鑒別待測油樣標(biāo)識種類與基因成分種類是否一致。檢測結(jié)果表明，提取的地溝油DNA的質(zhì)量滿足PCR 檢測要求，采用的擴增引物特異性好、靈敏度高，可在地溝油樣品中檢測到動物內(nèi)源基因成分與植物內(nèi)源基因成分。本發(fā)明的發(fā)明人探索建立了地溝油的快速檢測方法，在現(xiàn)有研究的基礎(chǔ)上，改進(jìn)并優(yōu)化了從地溝油基因的提取到PCR檢測整個過程中的提取試劑與反應(yīng)條件等關(guān)鍵控制性因素，建立了穩(wěn)定性高、快速簡便的一整套地溝油檢測試劑盒。本發(fā)明從基因的角度對地溝油成分進(jìn)行鑒別，針對地溝油檢測具有特異性強、靈敏度高、方法重現(xiàn)性好、檢測快速簡便等優(yōu)點，彌補了當(dāng)前檢測方法的空白。本發(fā)明方法具有重大的推廣應(yīng)用價值，對于有效監(jiān)管地溝油，保護(hù)廣大消費者利益具有重大意義。本發(fā)明可廣泛應(yīng)用于油脂基因的提取、油脂品種鑒定以及開發(fā)油脂核酸快速檢測試劑盒等方面，具有良好的經(jīng)濟(jì)與社會效益。


圖I為實施例2的疑似地溝油樣品中動物內(nèi)源基因的PCR擴增產(chǎn)物電泳圖譜；其中:M為DNA Marker ;P1、P2為陽性對照(牛肉DNA，稀釋至50ng/y L) ;1、2為陰性對照(玉米DNA，稀釋至50ng/iiL) ;3 10 :本發(fā)明方法提取的疑似地溝油樣品DNA ;11、食用大豆油樣品(金龍魚，20111209) ;12、食用玉米油樣品(金龍魚，20120309) ;13、食用花生油樣品(胡姬花，20120108) ;14、食用菜籽油樣品(南海油脂，20120215) ;15、食用葵花籽油樣品(多力，20120318) ;CK1、CK2 :空白對照;圖2為實施例2中疑似地溝油樣品中植物內(nèi)源基因的PCR擴增產(chǎn)物電泳圖譜；其中M為DNA Marker ;P1、P2為陽性對照(玉米DNA，稀釋至50ng/y L) ;1 8 :本發(fā)明方法提取的疑似地溝油樣品DNA ;9、牛肉DNA，稀釋至50ng/y L ;10、羊肉DNA，稀釋至50ng/y L ；11、豬肉DNA，稀釋至50ng/iiL;12、食用大豆油樣品(金龍魚，20111209) ;13、食用玉米油樣品(金龍魚，20120309) ;14、食用花生油樣品(胡姬花，20120108) ;15、食用菜籽油樣品(南海油脂，20120215) ;CK1、CK2 :空白對照；圖3為實施例2中疑似地溝油樣品中牛內(nèi)源基因的PCR擴增產(chǎn)物電泳圖譜；其中M為DNA Marker ;P1、P2為陽性對照(牛肉DNA，稀釋至50ng/y L) ;1 5 :檢測出含有動物內(nèi)源基因的疑似地溝油樣品DNA，樣品編號分別為地溝油1、2、4、6、7 ;6、玉米DNA ;7、大豆DNA ;8、羊肉DNA ;9、豬肉DNA ;10、雞肉DNA ;11、食用大豆油樣品(金龍魚，20111209) ;12、食用玉米油樣品(金龍魚，20120309) ;13、食用花生油樣品(胡姬花，20120108) ;14、食用菜籽油樣品(南海油脂，20120215) ;15、食用葵花籽油樣品(多力，20120318) ;CK1、CK2 :空白對照。
具體實施例方式以下結(jié)合具體實施例來詳細(xì)說明本發(fā)明。實施例I快速檢測地溝油的試劑盒包括以下成分(可供進(jìn)行50份PCR反應(yīng))
(I) DNA 提取緩沖液(IOOmL)分別稱取2.00mg CTAB (十六烷基三甲基溴化銨)、I. 2 Img Tris. HCl (三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽)、0. 58g EDTA2Na(乙二胺四乙酸二鈉)和8. 18g NaCl于容量瓶中，用水定容至IOOmL,混勻。經(jīng)過120°C、30min,高溫消毒滅菌后,再加入10. OOmg購置的蛋白酶K(購自大連寶生物公司)；(2) Taq DNA 聚合酶(25 U I)；購置Taq DNA聚合酶25 iU共125IU (購自大連寶生物公司)；(3) PCR 反應(yīng)液(1000 U I)首先制備引物，制備的引物濃度為100nmol/L。按照本領(lǐng)域常規(guī)方法制備引物。在DNA自動合成儀(采用美國ABI公司的ABI3949型全自動DNA合成儀)上按照制造商的說明書進(jìn)行合成。分別合成如下引物動物基因成分通用引物，正向5’-aagacgagaagacccttggacttta-3’ (SEQ IDNO. I)；動物基因成分通用引物，反向5’-gattgcgctgttatccctagggta-3’ (SEQ IDNO. 2)；植物基因成分通用引物，正向5’-cgaaatcggtagacgctacg-3’ (SEQ ID NO. 3)；植物基因成分通用引物，反向:5，-ttccattgagtctctgcacct-3，(SEQID NO. 4)；牛線粒體基因的正向引物5’-gccatatactctccttggtgaca-3’ (SEQ ID NO. 5)；牛線粒體基因的反向引物5’-gtaggcttgggaatagtacga-3’ (SEQ ID NO. 6)；羊線粒體基因的正向引物5’-tattaggcctcccccttgtt-3’ (SEQ ID NO. 7)；羊線粒體基因的反向引物5’-ccctgctcataagggaatagcc-3’ (SEQ ID NO. 8)；豬線粒體基因的正向引物5’-atgaaacattggagtagtcctactatttacc-3’ (SEQ IDNO. 9)；豬線粒體基因的反向引物5’-ctacgaggtctgttccgatataagg-3’(SEQID NO. 10)；雞線粒體基因的正向引物:5，-gggacaccctcccccttaatgaca-3’(SEQ ID NO. 11)；雞線粒體基因的反向引物:5，-ggagggctggaagaaggagtg-3’(SEQ ID NO. 12)；玉米內(nèi)源基因的正向引物5’-ccgctgtatcacaagggctggtacc-3’(SEQID NO. 13)；玉米內(nèi)源基因的反向引物5’-ggagcccgtgtagagcatgacgatc-3’(SEQID NO. 14)；
大ii內(nèi)源基因的正向引物:5，-gccctctactccacccccatcc-3’(SEQ ID NO. 15)；大豆內(nèi)源基因的反向引物:5，-gcccatctgcaagcctttttgtg-3，(SEQID NO. 16)；大米內(nèi)源基因的正向引物5’-ttgcgcctgaacggatat-3’ (SEQ ID NO. 17)；大米內(nèi)源基因的反向引物:5，-ggagaagcactggacgagg-3’(SEQ ID NO. 18)；花生內(nèi)源基因的正向引物:5，-tatgatcctcgttgtgtctatgac-3’(SEQ ID NO. 19)；花生內(nèi)源基因的反向引物5’-tctccagtcttcttctctttcac-3’ (SEQ ID NO. 20)；油菜籽內(nèi)源基因的正向引物5’-ccagttcttggagccgcttga-3’ (SEQ ID NO. 21)；油菜籽內(nèi)源基因的反向引物5’-aagggccagtccaaatgcaga-3’ (SEQ ID NO. 22)；馬鈴薯內(nèi)源基因的正向引物5’-tgacctggacaccacagttat-3’ (SEQ ID NO. 23)；馬鈴薯內(nèi)源基因的反向引物5’-gtggatttcaggagttcttcga-3’ (SEQ ID NO. 24)；稱取0. 285mg MgCl2,用500 ii L水溶解,經(jīng)過120°C、30min,高溫消毒滅菌后,分別加入0. 5iimol的一對引物和0. 5mmol的三磷酸脫氧核苷酸,用滅菌水定容至IOOOiiL;(4)上樣緩沖液(IOOii I)分別稱取2. 5g溴酚藍(lán)、400g蔗糖于IL容量瓶中，用水定容、混勻。實施例2利用實施例I的試劑盒檢測地溝油中的基因成分檢測方法包括以下步驟(I)樣品DNA的制備a疑似地溝油、食用植物油樣品量取300 500mL樣品；取離心管,每管加入50mL油樣與50mL雙蒸水,振蕩儀上振蕩60min, 12000r/min離心lOmin，棄去上層油脂，保留下層水相。再向離心管中加入50mL油樣，繼續(xù)振蕩，離心，上述過程重復(fù)8次,所萃取油樣的體積約為400mL。萃取到下層水相渾池后，12000r/min離心lOmin，棄去上層油脂，將水相轉(zhuǎn)移至平面皿中，濃縮干燥，干燥濃縮過程約3小時；充分干燥后，向平面皿中加入2mL試劑盒中的DNA提取緩沖液，混勻后，轉(zhuǎn)移懸濁液于離心管中。將離心管置于65°C放置60min，不時搖動，使樣品充分裂解。用氯仿異戊醇體積比為24 I的混合液進(jìn)行提取,小心的混合兩相，12000r/min離心lOmin。將上清液移至一新的離心管中，加入2倍體積的預(yù)冷的異丙醇，充分混勻，_20°C放置2小時，使得異丙醇與核酸充分反應(yīng)，12000r/min離心lOmin，獲得DNA沉淀。再用70%的乙醇溶液洗沉淀物2次，室溫離心12000r/min，IOmin收集DNA，盡可能除去乙醇。用IOOiU雙蒸水溶解DNA沉淀，使DNA完全溶解后，即得樣品DNA，置于-20°C保存。b動物肉類(牛肉、羊肉、豬肉、雞肉)、常見植物物種(玉米、大豆、花生、油菜籽、馬鈴薯)樣品分別將牛肉、羊肉、豬肉、雞肉、大米、玉米、大豆、花生、油菜籽、馬鈴薯等試驗材料，使用經(jīng)過120°C、30min高壓消毒過的固體粉碎機或研缽粉碎制成粉樣。分別稱取IOOmg研磨粉碎后的樣品于離心管中，加入ImL試劑盒中的DNA提取緩沖液，混勻。將離心管置于65°C放置60min，不時搖動，使樣品充分裂解。用氯仿異戊醇體積比為24 I的混合液進(jìn)行提取，小心的混合兩相，12000r/min離心5min。將上清液移至I. 5mL離心管中，加入2倍體積預(yù)冷的異丙醇,充分混勻，12000r/min離心5min,獲得DNA沉淀。再用70%的乙醇溶液洗沉淀物2次，室溫離心12000r/min，5min收集DNA，盡可能除去乙醇。用100 u I雙蒸水溶解DNA沉淀，使DNA完全溶解后，即得樣品DNA，置于_20°C保存。、
(2)檢查DNA的純度和含量在石英比色皿中加入50 ill按10倍稀釋的DNA樣品(5 U I DNA樣品加水45 U I混勻)，分別測定DNA樣品在260nm和280nm處的紫外光吸收值，并計算A26(l/A28(l值。A26tl/A280應(yīng)介于I. 7 I. 9之間，低于I. 7則表明制備物中存留顯著蛋白質(zhì)，應(yīng)重新提取DNA ’大于I. 9則表明DNA樣品中含有RNA，此時應(yīng)加入RNA酶進(jìn)行消化。計算DNA 濃度:10 X A260 (u g/u I) 0疑似地溝油樣品、食用植物油、常見肉類及植物組織DNA提取結(jié)果見表I。表I樣品DNA提取結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種快速檢測地溝油的試劑盒，其特征在于，包括 (1)DNA提取緩沖液 所述DNA提取緩沖液的組成為15 25mg/L CTAB、90 11OnmoI/L Tris-HCl、15 25mmol/L EDTA2Na'I. 3 I. 5mol/L NaCl、0. 09 0. 12g/L 蛋白酶 K ; (2)Taq DNA聚合酶，所述Taq DNA聚合酶的濃度為125IU ; (3)PCR反應(yīng)液 所述PCR反應(yīng)液的組成為2. 7 3. 3mmol/L MgCl2,0. 3 0. 5iimol/L引物，0. 3 0.Smmol /T, dNTPs ； 所述引物為針對動物內(nèi)源性基因序列的通用引物SEQ ID NO :1和SEQ ID NO :2，以及針對植物內(nèi)源性基因序列的通用引物SEQ ID NO :3和SEQ ID NO 4 ； (4)上樣緩沖液 所述上樣緩沖液的組成為2. 0 3. Og/L溴酚藍(lán)、350 450g/L蔗糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的快速檢測地溝油的試劑盒，其特征在于，所述引物還包括針對牛、羊、豬或雞的線粒體基因序列的引物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的快速檢測地溝油的試劑盒，其特征在于，所述針對牛線粒體基因序列的引物為SEQ ID NO 5和SEQ ID NO :6。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的快速檢測地溝油的試劑盒，其特征在于，所述針對羊線粒體基因序列的引物為SEQ ID NO 7和SEQ ID NO :8。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的快速檢測地溝油的試劑盒，其特征在于，所述針對豬線粒體基因序列的引物為SEQ ID NO 9和SEQ ID NO :10。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的快速檢測地溝油的試劑盒，其特征在于，所述針對雞線粒體基因序列的引物為SEQ ID N0:11和SEQ ID NO 120
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項所述的快速檢測地溝油的試劑盒，其特征在于，所述引物還包括針對玉米的內(nèi)源基因序列的引物SEQ ID N0:13和SEQ ID NO : 14、針對大豆的內(nèi)源基因序列的引物SEQ ID N0:15和SEQ ID NO :16、針對大米的內(nèi)源基因序列的引物SEQ IDN0:17和SEQ ID NO :18、針對花生的內(nèi)源基因序列的引物SEQ ID N0:19和SEQ ID NO 20或針對油菜籽的內(nèi)源基因序列的引物SEQ ID N0:21和SEQ ID NO :22。
8.一種快速檢測地溝油的方法，其特征在于，采用權(quán)利要求1-7任一項所述的試劑盒，包括以下步驟 (1)制備樣品DNA 取20 50mL油樣與等體積雙蒸水，振蕩離心，棄去上層油脂，再加入20 50mL油樣，繼續(xù)振蕩離心，重復(fù)7 8次，。待下層水相渾濁后，高速離心，棄去上層油脂，得到300 400mL油樣，將水相濃縮干燥3 5小時后，加入2 3mL的DNA提取緩沖液，混勻后，置于65°C放置45 60min，不時搖動，用體積比為24 I的氯仿異戊醇混合液進(jìn)行提取，離心，取上清，加入異丙醇，-20°C放置2 3小時，高速離心，獲得DNA沉淀，再用70%的乙醇溶液洗沉淀物，沉淀物加水溶解，即得樣品DNA ； (2)PCR擴增反應(yīng) 取PCR反應(yīng)液、Taq DNA聚合酶置于反應(yīng)管中，混勻,加入樣品DNA,離心后置于擴增儀上進(jìn)行擴增，反應(yīng)參數(shù)95°C預(yù)變性5min后，按94°C 30sec, 57°C 45sec，72°C 60sec程序進(jìn)行40個循環(huán)，最后72°C延伸lOmin，于4°C結(jié)束反應(yīng)。
(3)產(chǎn)物檢測反應(yīng)產(chǎn)物，加上樣緩沖液，充分混勻后點樣，用DNA Marker作為分子量標(biāo)準(zhǔn)，用含溴化己錠染色的I. 5%瓊脂糖凝膠電泳，結(jié)束后，置紫外燈下觀察，出現(xiàn)目標(biāo)特異性條帶的為含有某物種基因成分，否則為不含該物種基因成分。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種快速檢測地溝油的試劑盒及其檢測方法，所述試劑盒包括DNA提取緩沖液、Taq DNA聚合酶、PCR反應(yīng)液、上樣緩沖液。本發(fā)明在現(xiàn)有研究的基礎(chǔ)上，改進(jìn)并優(yōu)化了從地溝油基因的提取到PCR檢測整個過程中的提取試劑與反應(yīng)條件等關(guān)鍵控制性因素，建立了穩(wěn)定性高、快速簡便的一整套地溝油檢測試劑盒。本發(fā)明從基因的角度對地溝油成分進(jìn)行鑒別，針對地溝油檢測具有特異性強、靈敏度高、方法重現(xiàn)性好、檢測快速簡便等優(yōu)點，彌補了當(dāng)前檢測方法的空白。具有重大的推廣應(yīng)用價值，對于有效監(jiān)管地溝油，保護(hù)廣大消費者利益具有重大意義。
文檔編號C12Q1/68GK102758025SQ201210281698
公開日2012年10月31日 申請日期2012年8月8日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月8日
發(fā)明者侯向昶, 冼燕萍, 吳文海, 吳玉鑾, 柯振華, 王斌, 羅東輝, 羅海英, 郭新東, 陳意光, 陳立偉 申請人:廣州市質(zhì)量監(jiān)督檢測研究院