可用于輔助診斷瘧疾的試劑盒的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明主要設(shè)及試劑盒W及診斷方法。具體而言，本發(fā)明設(shè)及用于輔助診斷追疾 感染，特別是用于輔助診斷惡性追原蟲感染的診斷試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002] 追疾仍然是全球公共衛(wèi)生的緊要問題，每年死亡達0. 7 - 2. 7百萬。在過去的35 年，追疾的發(fā)病率增長了 2 - 3倍。在1955年，世界衛(wèi)生組織（WHO)開始了一項通過應(yīng)用氯 哇進行臨床治療和應(yīng)用DDT (二氯二苯Ξ氯乙燒）控制蚊群而根除追疾的宏大計劃。在20 世紀60年代后期逐步停止，運項計劃雖然在全世界許多國家引起重要且持續(xù)的疾病負擔(dān) 減輕。然而，在許多國家追疾仍有復(fù)發(fā)，其主要是由于耐藥寄生蟲的出現(xiàn)和傳播導(dǎo)致的。耐 殺蟲劑蚊子的出現(xiàn)，人口密度的增加（自1963年，世界人口已經(jīng)翻了一番），全球變暖（運 種帶菌者擴散至W前沒有到達的范圍），持續(xù)貧窮，政治動蕩，W及由于傳染性疾病導(dǎo)致的 生產(chǎn)力的損失，所有的運些因素破壞了治療和控制追疾的穩(wěn)定的公共衛(wèi)生基礎(chǔ)的維持。
[0003] 追疾寄生蟲屬于追原蟲屬，能后感染許多脊椎動物宿主，包括多種非人類靈長類 物種。四種追原蟲屬寄生于人類：惡性追原蟲（Plasmodium, fal-ciparum)、^日追原蟲 (P. malariae)、卵形追原蟲化ovale)和間日追原蟲（P. vivax)。其中，惡性追原蟲和間日 追原蟲分別與大部分追疾的發(fā)病率和死亡率相關(guān)。
[0004] 由于追疾治療藥物的特殊性，精確快速的診斷不僅能及時發(fā)現(xiàn)并治療追疾患者， 大大降低病死率，也能通過早期排除追疾，及時挽救感染了其它傳染性疾病患者的生命。W 此同時，精確快速的早期診斷也是對追疾實時流行病監(jiān)測和控制的必要手段。到目前為止， 對可疑病人采血制作厚薄血片經(jīng)染色后顯微鏡檢查法（簡稱鏡檢法）一直被認為是追疾診 斷的"金標準"，其優(yōu)點是費用低，能鑒定追原蟲蟲種，但是也存在著缺陷，即需要非常專業(yè) 的檢驗人員，當原蟲密度較低時，可出現(xiàn)假陰性，引起誤診或漏診，同時還需要顯微鏡、染色 液等一些輔助設(shè)備。隨著臨床機構(gòu)，特別是一些現(xiàn)代化程度高的醫(yī)院，由于檢驗人員更依賴 儀器設(shè)備，對鏡檢能力的掌握明顯下降；而在一些欠發(fā)達地區(qū)，由于種種原因，未能配備鏡 檢相關(guān)的設(shè)備和試劑。運些因素限制了臨床對追疾快速有效的診斷。因此，研究新的追疾 快速診斷方法成為目前研究的熱點。

【發(fā)明內(nèi)容】
陽〇化]本發(fā)明的目的在于提供新的用于輔助診斷追疾，特別是輔助診斷惡性追疾的試劑 盒。
[0006] 本發(fā)明人提供了 16條多膚。令人驚奇的是，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，雖然所述16條多膚單 獨診斷追疾時的檢出率均在30. 7%~57. 5%之間，遠遠未達到作為檢測工具的要求，但在 W受試者來源的生物樣本是否對所述16條多膚中的至少一條或一條W上有響應(yīng)作為判定 受試者是否已被追原蟲感染的指標的情況下，卻可高達95. 8%的檢出率（且假陽性率 低至1. 9% )診斷追疾，進而診斷追疾。
[0007] 因此，本發(fā)明包括：
[000引 1. 一種試劑盒，其包括一個或多個固體載體，W及獨立地連接于所述一個或多個 固體載體上的下述多膚集合1 :
[0009] SEQ ID NO :1所示的多膚或其變體；
[0010] SEQ ID NO :2所示的多膚或其變體； W11] SEQ ID NO :3所示的多膚或其變體； 陽01引 SEQ ID NO :4所示的多膚或其變體； 陽01引 SEQ ID NO :5所示的多膚或其變體；
[0014] SEQ ID NO :6所示的多膚或其變體； 陽01引 SEQ ID NO :7所示的多膚或其變體；
[0016] SEQ ID NO :8所示的多膚或其變體；
[0017] SEQ ID NO :9所示的多膚或其變體； 陽01引 SEQ ID NO : 10所示的多膚或其變體；
[0019] SEQ ID NO : 11所示的多膚或其變體；
[0020] 沈Q ID NO : 12所示的多膚或其變體； 陽02U SEQ ID NO : 13所示的多膚或其變體；
[0022] 沈Q ID NO : 14所示的多膚或其變體； 陽02引 SEQ ID NO : 15所示的多膚或其變體訊
[0024] 沈Q ID NO : 16所示的多膚或其變體； 陽〇2引其中，變體是指：
[00%] (a)在親本多膚中缺失、取代、插入和/或添加1個或多個氨基酸而得的，且具有與 親本多膚等同的功能的多膚；或
[0027] 化）與親本多膚具有50% W上氨基酸同源性，且具有與親本多膚等同的功能的多 膚。
[0028] 2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其用于診斷追疾。
[0029] 3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其用于診斷惡性追原蟲感染。
[0030] 4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其中，全部多膚獨立地連接于同一固體載體上。
[0031] 5.下述多膚集合1在制備用于診斷追疾的試劑盒中的用途： 陽0巧多膚集合1
[0033] SEQ ID NO :1所示的多膚或其變體；
[0034] SEQ ID NO :2所示的多膚或其變體；
[0035] SEQ ID NO :3所示的多膚或其變體；
[0036] SEQ ID NO :4所示的多膚或其變體；
[0037] SEQ ID NO :5所示的多膚或其變體；
[0038] SEQ ID NO :6所示的多膚或其變體；
[0039] SEQ ID NO :7所示的多膚或其變體；
[0040] SEQ ID NO :8所示的多膚或其變體； 陽04U SEQ ID NO :9所示的多膚或其變體；
[0042] 沈Q ID NO : 10所示的多膚或其變體；
[0043] 沈Q ID NO :11所示的多膚或其變體；
[0044] 沈Q ID NO : 12所示的多膚或其變體；
[0045] 沈Q ID NO : 13所示的多膚或其變體；
[0046] 沈Q ID NO : 14所示的多膚或其變體；
[0047] SEQ ID NO : 15所示的多膚或其變體訊
[0048] 沈Q ID NO : 16所示的多膚或其變體；
[0049] 所述變體是指：
[0050] (a)在親本多膚中缺失、取代、插入和/或添加1個或多個氨基酸而得的，且具有與 親本多膚等同的功能的多膚；或
[0051] 化）與親本多膚具有50% W上氨基酸同源性，且具有與親本多膚等同的功能的多 膚。
[0052] 6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用途，其中，所述診斷追疾包括診斷惡性追感染。
[0053] 7. -種診斷受試者是否為追疾患者的方法，該方法包括：
[0054] 使用權(quán)利要求1~4中任一項所述的試劑盒檢測SEQ ID NO :1~8所示的多膚或 其變體是否對受試者來源的血液樣本有響應(yīng)；其中， 陽化5] 當檢測到分別來自下述多膚組1~16中的至少一個或一個W上多膚組中的至少 任意一個或一個W上的多膚對所述受試者來源的血液樣本有響應(yīng)時，判定受試者是追疾患 者；否則，判定受試者不是追疾患者；
[0056] 多膚組1 :SEQ ID NO :1所示的多膚或其變體；
[0057] 多膚組2 :SEQ ID NO :2所示的多膚或其變體；
[0058] 多膚組3 :SEQ ID NO :3所示的多膚或其變體；
[0059] 多膚組4 :SEQ ID NO :4所示的多膚或其變體； W60] 多膚組5 :SEQ ID NO :5所示的多膚或其變體； 陽06U 多膚組6 :SEQ ID NO :6所示的多膚或其變體； 陽06引多膚組7 :SEQ ID NO :7所示的多膚或其變體； 陽06引多膚組8 :SEQ ID NO :8所示的多膚或其變體；
[0064] 多膚組9 :SEQ ID NO :9所示的多膚或其變體； W65] 多膚組10 :SEQ ID NO : 10所示的多膚或其變體；
[0066] 多膚組11 :SEQ ID NO : 11所示的多膚或其變體；
[0067] 多膚組12 :SEQ ID NO : 12所示的多膚或其變體； W側(cè)多膚組13 :SEQ ID NO : 13所示的多膚或其變體； W例多膚組14 :SEQ ID NO : 14所示的多膚或其變體；
[0070] 多膚組15 :SEQ ID NO : 15所示的多膚或其變體訊 陽〇7U 多膚組16 :SEQ ID NO : 16所示的多膚或其變體； 陽0巧所述變體是指：
[0073] (a)在親本多膚中缺失、取代、插入和/或添加1個或多個氨基酸而得的，且具有與 親本多膚等同的功能的多膚；或
[0074] 化）與親本多膚具有50% W上氨基酸同源性，且具有與親本多膚等同的功能的多 膚。
[00巧]8根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中，所述血液樣本為全血、血漿或血清。
[0076] 9.根據(jù)權(quán)利要求1~4中任一項所述的試劑盒、根據(jù)權(quán)利要求5或6的用途、或根 據(jù)權(quán)利要求7或8任一項所述的方法，其中，所述的多膚和變體來源于惡性追原蟲。
[0077] 發(fā)巧的具體連施方式
[0078] 《化集合巧《化紀
[0079] 本說明書中，多膚集合1是下述多膚組1~16的全部：
[0080] 多膚組1 :SEQ ID NO :1所示的多膚或其變體，其中，SEQ ID NO :1所示的多膚相當 于惡性追疾原蟲的紅細胞結(jié)合蛋白-175的1486位~1502位； 陽0川多膚組2 :SEQ ID NO :2所示的多膚或其變體，其中，SEQ ID NO :2所示的多膚相當 于惡性追疾原蟲的成熟帶蟲紅細胞表面蛋白的223位~252位； 陽0間多膚組3 :SEQ ID NO :3所示的多膚或其變體，其中，SEQ ID NO :3所示的多膚相當 于惡性追疾原蟲的裂殖子成帽蛋白1的286位~315位； 陽08引多膚組4 :SEQ ID NO :4所示的多膚或其變體，其中，SEQ ID NO :4所示的多膚相當 于惡性追疾原蟲的裂殖子成帽蛋白1的346位~375位；
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