本發(fā)明屬于醫(yī)藥學技術領域，尤其涉及一種中藥復方試劑及其制備方法。

背景技術：

我國傳統(tǒng)醫(yī)學治療性功能障礙歷來以補腎壯陽法為主。^[1]補腎是指應用補腎的藥物，治療腎虛癥的一種方法；壯陽主要是指壯腎陽，興陽事，恢復或亢奮性功能。現(xiàn)代藥理學研究證實，眾多的補腎壯陽中成藥及方劑是通過性激素及促性腺素、附性器官、“陽痿”動物模型和免疫等方面的影響，而顯示出其壯陽的藥理學效應。且人體的生長發(fā)育和衰老與腎氣的關系極為密切。衰老的遲早、老化的速度及壽命的長短，很大程度上決定于腎氣的強弱。因此，補腎也是中醫(yī)藥學中延緩衰老的主要方法。此傣藥補腎壯陽方是國家十二五傣藥學科重點資助項目，云南少數(shù)民族傣族民間醫(yī)生長期運用此方治療腎虛證，取得了較好的療效。采用中藥治療腎虛證不僅作用溫和且療效持久，還能改善病人整體癥狀，提高生活質(zhì)量，避免并發(fā)癥，減少副反應延長壽命。因此，研究此中藥復方制劑補腎壯陽的藥效及作用機制，既可以為民族藥廣泛運用于臨床提供部分實驗依據(jù)，也是研發(fā)補腎壯陽藥的有效途徑之一。

綜上所述，在過去中藥復方制劑補腎壯陽的藥方中，大都是以補氣補陽的藥物為主，而缺乏滋陰的藥物調(diào)節(jié)，其結(jié)果陽盛而陰不足。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種中藥復方試劑及其制備方法，旨在解決背景技術的問題。

本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的，一種中藥復方試劑，該中藥復方試劑由傣藥補腎壯陽方DRB藥物和水組成，所述傣藥補腎壯陽方DRB藥物按質(zhì)量比由3味中藥組成，即鐵皮石斛8；肉蓯蓉15：西洋參8，目標濃度—藥物和水的質(zhì)量比為1:1。

本發(fā)明另一目的在于提供一種中藥復方制劑的制備方法，該中藥復方制劑的制備方法包括：

取傣藥補腎壯陽方DRB原藥材2公斤，加入傣藥補腎壯陽方DRB原藥材8倍質(zhì)量的純凈水浸泡30min，煎煮35min，濾過，得第一濾液；

取藥渣，加入傣藥補腎壯陽方DRB原藥材的6倍質(zhì)量的純凈水煎煮30min，濾過，得第二濾液；

取藥渣，加入傣藥補腎壯陽方DRB原藥材的4倍質(zhì)量的純凈水煎煮25min，濾過，得第三濾液；

合并第一濾液、第二濾液、第三濾液；靜置12h后，取上清液濃縮，得到中藥復方制劑。

本發(fā)明另一目的在于提供一種驗證權上述的中藥復方制劑藥效的雄性大鼠模型。

本發(fā)明另一目的在于提供一種雄性大鼠模型的構建方法，該雄性大鼠模型的構建方法為：

取SD雄性大鼠40只，SD雌性大鼠40只自主飲食，適應性飼養(yǎng)1周，1周后將雄性大鼠編號，隨機分為4組：空白組﹑中成藥龜鹿補腎片組﹑萬艾可組、傣藥DRB補腎壯陽方組；

空白組給予等體積蒸餾水，灌胃體積5ml·kg^-1，每天2次；中成藥龜鹿補腎片組以0.93g/kg、傣藥DRB補腎壯陽方組以3.24g/kg提取物灌胃，每天2次，共3周；

萬艾可組0.09g/kg于最后一天實驗前1h灌胃給藥，灌胃體積均為1ml/100g；

每天稱量雄性SD大鼠的食量，每周測量雄性SD大鼠大鼠的體重。

進一步，中成藥龜鹿補腎片的制備為：

龜鹿補腎片用研缽研磨成細粉，加入超純水溶解，調(diào)配至濃度為0.81g/ml。

本發(fā)明提供的中藥復方試劑及其制備方法，(4結(jié)果就是提供支持積極效果的試驗數(shù)據(jù)，)與空白組比較，陽性對照藥萬艾可能明顯縮短雄性大鼠捕捉潛伏期、明顯增加捕捉次數(shù)、顯著縮短交配潛伏期、明顯增加20min內(nèi)交配次數(shù)；中成藥龜鹿補腎片能縮短雄性大鼠捕捉潛伏期、增加捕捉次數(shù)、縮短交配潛伏、明顯增加20min內(nèi)交配次數(shù)；傣藥補腎壯陽方DRB能縮短雄性大鼠捕捉潛伏期，增加捕捉次數(shù)，能明顯縮短交配潛伏期，增加20min內(nèi)交配次數(shù)?？梢姳景l(fā)明中藥復方制劑具有提高雄性大鼠性行為的作用。

與空白組比較，陽性對照藥龜鹿補腎片可升高雄性大鼠血清睪丸酮含量，降低雌二醇含量；傣藥補腎壯陽方DRB可升高雄性大鼠血清睪丸酮含量，降低雌二醇含量?？梢姳景l(fā)明傣藥補腎壯陽方DRB與性激素調(diào)節(jié)有關。

本發(fā)明劑量的設置為按人用日劑量折算的大鼠等效量的3倍。本發(fā)明中有鐵皮石斛這一強有力的滋陰藥，陰陽互補；發(fā)揮其補腎壯陽的藥效。同時，鐵皮石斛又是目前國內(nèi)力推的藥材，全國十多個省都在大力發(fā)展，屬于九大仙草之一的藥物。

附圖說明

圖1是本發(fā)明實施例提供的中藥復方試劑的制備方法流程圖。

具體實施方式

為了使本發(fā)明的目的、技術方案及優(yōu)點更加清楚明白，以下結(jié)合實施例，對本發(fā)明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。

下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的應用原理作進一步描述。

本發(fā)明實施例提供的中藥復方試劑，該中藥復方試劑由傣藥補腎壯陽方DRB藥物和水組成，所述傣藥補腎壯陽方DRB藥物按質(zhì)量比由3味中藥組成，即鐵皮石斛8；肉蓯蓉15：西洋參8，目標濃度—藥物和水的質(zhì)量比為1:1。

如圖1所示：本發(fā)明實施例提供的中藥復方制劑的制備方法，方法包括：

S101：取傣藥補腎壯陽方DRB原藥材2公斤，加入傣藥補腎壯陽方DRB原藥材8倍質(zhì)量的純凈水浸泡30min，煎煮35min，濾過，得第一濾液；

S102：取藥渣，加入傣藥補腎壯陽方DRB原藥材的6倍質(zhì)量的純凈水煎煮30min，濾過，得第二濾液；

S103：取藥渣，加入傣藥補腎壯陽方DRB原藥材的4倍質(zhì)量的純凈水煎煮25min，濾過，得第三濾液；

S104：合并第一濾液、第二濾液、第三濾液；靜置12h后，取上清液濃縮，得到中藥復方制劑。

本發(fā)明實施例提供一種驗證權上述的中藥復方制劑藥效的雄性大鼠模型。

本發(fā)明實施例提供一種雄性大鼠模型的構建方法，該雄性大鼠模型的構建方法為：

取SD雄性大鼠40只，SD雌性大鼠40只自主飲食，適應性飼養(yǎng)1周，1周后將雄性大鼠編號，隨機分為4組：空白組﹑中成藥龜鹿補腎片組﹑萬艾可組、傣藥DRB補腎壯陽方組；

空白組給予等體積蒸餾水，灌胃體積5ml·kg^-1，每天2次；中成藥龜鹿補腎片組以0.93g/kg、傣藥DRB補腎壯陽方組以3.24g/kg提取物灌胃，每天2次，共3周；

萬艾可組0.09g/kg于最后一天實驗前1h灌胃給藥，灌胃體積均為1ml/100g；

每天稱量雄性SD大鼠的食量，每周測量雄性SD大鼠大鼠的體重。

下面結(jié)合實施例對本發(fā)明的應用原理進一步說明。

1.試驗簡介

1.1觀察和檢測指標的選擇

本發(fā)明選擇的觀察指標為大鼠性行為參數(shù)，檢測指標為血清中睪酮和雌二醇含量。

大鼠性行為參數(shù)：撲捉潛伏期(自雌鼠投入至雄鼠第一次撲捉雌鼠的時間，)；20分鐘內(nèi)雄鼠撲捉雌鼠的次數(shù)；交配潛伏期(自雌鼠投入至雄鼠第1次與雌鼠交配的時間)；20分鐘內(nèi)交配次數(shù)。以上參數(shù)用以評價大鼠性欲、性喚醒的啟動速度、勃起功能的高低。

雄鼠性行為是按一定次序進行的連續(xù)過程，通過現(xiàn)場觀察可發(fā)現(xiàn)，大鼠交配有以下特點：首先，雄鼠在騎跨雌鼠之前，一般會去主動嗅雌鼠的肛門生殖器區(qū)，然后開始騎跨雌鼠。如果雌鼠的發(fā)情狀態(tài)良好，就有一個“弓背”動作，所謂的弓背，就是雌鼠的脊柱向下彎曲成弓形，尾巴偏向一側(cè)，陰部暴露于正后方，可能這種姿勢更有利于交配。接下來就是騎跨和插入，當雄鼠陰莖插入到雌鼠陰道時，伴隨雄鼠后腿及骨盆向前推動，此時雄鼠的背常常彎曲成弓形，前爪緊抱著雌鼠的背部。經(jīng)過多次的插入達到射精，射精時雄鼠會出現(xiàn)劇烈的顫動，在此過程中，雄鼠前肢緊抱著雌鼠持續(xù)數(shù)秒。射精后，雄鼠有長達數(shù)分鐘的不應期。雄鼠每次插入以后，常常會有一個舔自己陰部的動作，而且，雄鼠的每一次騎跨并不一定伴有插入。

1.2.選擇龜鹿補腎片作為陽性對照藥

本發(fā)明的試驗使用的龜鹿補腎片這種中成藥作為陽性藥。龜鹿補腎膠囊收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準》中藥成方制劑第十七冊，龜鹿補腎片由龜鹿補腎膠囊改劑型而成，由菟絲子(炒)、淫羊藿(蒸)、續(xù)斷(蒸)、鎖陽(蒸)、狗脊(蒸)、酸棗仁(炒)、制何首烏、炙甘草、陳皮(蒸)等17味藥材組成。本方枸杞子、肉蓯蓉、巴戟天均入腎經(jīng)，能溫腎助陽、補命門之火兼益精氣；炙黃芪補益中氣，以消除陽明之氣衰；陰陽互損，腎陽虛損日久，必然導致腎陰之不足，故又以熟地滋補腎陰兼補肝血；龜鹿二味均為骨肉有情之品，既可滋腎壯陽，填精補髓，又可防止補陽藥物燥熱傷陰之弊，使陰陽保持相對平衡。諸藥合用，具有補腎壯陽，填精補髓，益氣補中之功，故臨床應用每可取得滿意效果。

且藥效學實驗證實本藥具有提高小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)對炭粒的廓清能力，能促進雄性幼鼠及去勢小鼠生殖系統(tǒng)的生長發(fā)育，包皮腺指數(shù)、精囊腺指數(shù)、睪丸指數(shù)，提高腎陽虛雄性大鼠血清中皮質(zhì)醇、睪丸酮、腎上腺素、去甲腎上腺素的含量，說明龜鹿補腎片能增強非特異性免疫功能，具有雄激素樣作用。

1.3選擇萬艾可作為陽性對照藥

目前，臨床治療性功能障礙的一線口服藥物主要是萬艾可。萬艾可藥物于1998年美國上市，由于其獨特的效果，尤其是能全面地治療各種原因引起的性功能障礙，一經(jīng)問世，便受到世人的矚目。為評價枸櫞酸西地那非的療效。Ochiai A等進行了一項研究。在1999年3月和2003年3月之間，281個ED患者接受了枸櫞酸西地那非(50mg)治療。在281個病人中，有206個可供評估。其中，服用枸櫞酸西地那非后完成性交的總成功率為77.2％。功能性和器質(zhì)性ED男性的成功率分別為91.4％和65.5％。16名患者發(fā)生了輕微短暫的副作用(8％)，僅2人(1％)發(fā)生了嚴重的副作用(水腫和眩暈)。西地那非治療ED成功率高、耐受性好，可被推薦為ED首選用藥。

通過本發(fā)明實驗，得出結(jié)論：傣藥補腎壯陽方DRB可縮短雄性大鼠捕捉潛伏期、明顯增加大鼠捕捉次數(shù)、顯著縮短交配潛伏期、明顯增加20min內(nèi)交配次數(shù)，體內(nèi)血清睪酮含量明顯升高，體內(nèi)雌二醇含量明顯降低，為臨床治療和進一步研究提供基礎依據(jù)。

2.材料

2.1動物

SD大鼠共80只，分別為雄性大鼠40只，雌性大鼠40只，體重200+20g,由成都達碩生物科技有限公司提供。SPF級，合格證號：0018412。動物分籠飼養(yǎng)，食固體飼料、墊料由蘇州雙獅實驗動物飼料科技有限公司提供。

2.2藥物與試劑

傣藥補腎壯陽方DRB，由云南省高校民族醫(yī)藥現(xiàn)代研究重點實驗室提供；龜鹿補腎片，廣東心寶制藥有限公司，產(chǎn)品批號：20150808；睪酮(T)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒，伊萊瑞特生物科技有限公司，產(chǎn)品貨號：E-EL-0072c；雌二醇(E2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒，伊萊瑞特生物科技有限公司，產(chǎn)品貨號：E-EL-0065c。

2.3儀器

VariceKna全波長掃描式多功能酶標分析儀(北京普朗新技術有限公司)、Primo R臺式高速冷凍離心機(Thermofisher公司)、REVCO UxF300雙門立式超低溫冰箱(Thermofisher公司)、Smart 2Pure Uv/VF超純水機(Thermofisher公司)、海爾BCD-226TX冰箱(海爾公司)、BS224電子天平(北京賽爾利斯儀器系統(tǒng)有限公司)、HW-1000超級恒溫水浴槽(成都泰盟科技有限公司)、101型電熱鼓風干燥箱(北京市永光明醫(yī)療儀器廠)、微量移液器等。

3方法

3.1制備

3.1.1中藥復方制劑制備方法的確定

傣藥補腎壯陽方DRB由3味中藥組成，根據(jù)臨床使用經(jīng)驗和相關文獻研究，臨床用藥為水煎劑，故采用水提法。

3.1.2中藥復方制劑的制備

傣藥補腎壯陽方DRB藥材由云南省高校民族醫(yī)藥現(xiàn)代研究重點實驗室提供。取傣藥補腎壯陽方DRB原藥材2公斤，加入8倍量的純凈水浸泡30min，煎煮35min，濾過；繼續(xù)以6倍純凈水煎煮30min，濾過；繼續(xù)以4倍純凈水煎煮25min，濾過。合并濾液，靜置12h后，取上清液濃縮至目標濃度。

3.1.3陽性藥溶液的制備

龜鹿補腎片用研缽研磨成細粉，加入超純水溶解，調(diào)配至濃度為0.81g/ml。

3.2分組、給藥

取SD雄性大鼠40只，SD雌性大鼠40只自主飲食，適應性飼養(yǎng)1周，1周后將雄性大鼠編號，隨機分為4組：空白組﹑中成藥組(龜鹿補腎片0.93g/kg)﹑萬艾可組、傣藥補腎壯陽方DRB組(3.24g/kg)?？瞻捉M給予等體積蒸餾水，灌胃體積5ml·kg^-1，每天2次，陽性對照組以0.93g/kg(按人給藥劑量換算)、傣藥DRB組以3.24g/kg(按人給藥劑量換算)提取物灌胃，每天2次，共3周。萬艾可組(0.09g/kg)于最后一天實驗前1h灌胃給藥，灌胃體積均為1ml/100g。每天稱量雄性SD大鼠的食量，每周測量雄性SD大鼠大鼠的體重。

3.3交配實驗

3.3.1發(fā)情雌鼠的準備

為消除雌性大鼠在進行交配實驗時動情期的不同，進行雙側(cè)卵巢切除術，并同時注射雌激素，方法為：雌性大鼠在10％水合氯醛(0.3ml/100g)麻醉下，背部朝上固定于鼠板上，在大鼠最末肋骨下，腋中線和距脊柱外側(cè)約2cm交叉處剪除長毛，切開皮膚和背肌，有乳白色發(fā)亮的脂肪團，其中便包埋著卵巢。用小鑷子輕夾脂肪團，拉出切口外，分離脂肪，即見粉紅色卵巢。取一絲線將卵巢下輸卵管及脂肪一并結(jié)扎，剪下卵巢，將子宮角送回腹腔，然后摘取對側(cè)卵巢，術后肌注青霉素20萬U/kg抗感染治療3天，常規(guī)飼養(yǎng)，3周后進行交配試驗，試驗前48小時皮下注射苯甲酸雌二醇0.2mg/只，4小時前再次經(jīng)皮下注射黃體酮0.4mg/只。

3.4檢測指標

3.4.1性行為學指標檢查

于末次給藥后1h晚上7-11時進行，將雄性大鼠單獨放入籠中(55cm×35cm×20cm)5min，使其適應環(huán)境。^[11]保持安靜，使用微弱的燈光照明，將光線調(diào)暗至能夠觀察即可。10分鐘后將發(fā)情雌鼠輕放入雄鼠籠內(nèi)，觀察記錄撲捉潛伏期(自雌鼠投入至雄鼠第一次撲捉雌鼠的時間，)；20分鐘內(nèi)雄鼠撲捉雌鼠的次數(shù)；交配潛伏期(自雌鼠投入至雄鼠第1次與雌鼠交配的時間)；20分鐘內(nèi)交配次數(shù)。以上參數(shù)用以評價大鼠性欲、性喚醒的啟動速度、勃起功能的高低。

3.4.2血清標本采集

測定時間為實驗第29天，將上述已測完性行為學的大鼠用10％水合氯醛0.3mL/100g腹腔注射麻醉后，腹主動脈取血6mL，分2份各3mL，存于真空采血管中，4℃混勻，3000r/min離心15分鐘，取上置血清，放置于-20℃冰箱保存，待測血清睪酮和雌二醇的含量。采用酶標儀試劑盒測定，操作依照試劑盒說明書。

3.4.3大鼠血清睪酮、雌二醇含量的測定

采用酶聯(lián)免疫法測定血清睪酮、雌二醇的含量。

3.5統(tǒng)計學方法

實驗數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準差表示，先進行方差齊性檢驗，計量資料符合正態(tài)分布、方差齊者用t檢驗；方差不齊者用校正t檢驗；多組比較用單因素方差分析，兩兩比較采用最小差異法(LSD)；不符合正態(tài)分布者用秩和檢驗，計數(shù)資料用x²檢驗，以α＝0.05為檢驗標準。

4結(jié)果

4.1傣藥補腎壯陽方DRB對大鼠性行為的影響

傣藥補腎壯陽方DRB對大鼠性行為的影響結(jié)果見表1。各數(shù)值使用單因素方差分析法。

表1傣藥補腎壯陽方DRB對大鼠性行為的影響

注：與空白組比較*P<0.05，ΔP<0.01.

由表1可以看出：與空白組比較，陽性對照藥萬艾可能明顯縮短雄性大鼠捕捉潛伏期、明顯增加捕捉次數(shù)、顯著縮短交配潛伏期、明顯增加20min內(nèi)交配次數(shù)，經(jīng)統(tǒng)計學處理，p<0.01，差異有非常顯著性意義；中成藥龜鹿補腎片也能縮短雄性大鼠捕捉潛伏期(p<0.05)，增加捕捉次數(shù)(p<0.05)，縮短交配潛伏期(p<0.05)、明顯增加20min內(nèi)交配次數(shù)(p<0.01)；傣藥補腎壯陽方DRB能縮短雄性大鼠捕捉潛伏期(p<0.05)，增加捕捉次數(shù)(p<0.05)，能明顯縮短交配潛伏期(p<0.01)，增加20min內(nèi)交配次數(shù)(p<0.05)。

4.2傣藥補腎壯陽方DRB對大鼠血清睪酮、雌二醇含量的影響

傣藥補腎壯陽方DRB對大鼠血清睪酮、雌二醇含量的影響結(jié)果見表2。各數(shù)值使用單因素方差分析法。

表2傣藥補腎壯陽方DRB對雄性大鼠血清睪酮、雌二醇含量的影響(n＝10,x±s)

注：與空白組比較*P<0.05,ΔP<0.01.

試驗結(jié)果表明，龜鹿補腎片、傣藥補腎壯陽方DRB均可升高雄性大鼠血清睪丸酮含量，降低雌二醇含量(p<0.05)，說明對性激素有一定影響。

5討論：

本發(fā)明實驗結(jié)果顯示，與空白組比較，陽性對照藥萬艾可能明顯縮短雄性大鼠捕捉潛伏期、明顯增加捕捉次數(shù)、顯著縮短交配潛伏期、明顯增加20min內(nèi)交配次數(shù)；中成藥龜鹿補腎片能縮短雄性大鼠捕捉潛伏期、增加捕捉次數(shù)、縮短交配潛伏、明顯增加20min內(nèi)交配次數(shù)；傣藥補腎壯陽方DRB能縮短雄性大鼠捕捉潛伏期，增加捕捉次數(shù)，能明顯縮短交配潛伏期，增加20min內(nèi)交配次數(shù)?？梢娭兴帍头街苿┚哂刑岣咝坌源笫笮孕袨榈淖饔?。

與空白組比較，陽性對照藥龜鹿補腎片可升高雄性大鼠血清睪丸酮含量，降低雌二醇含量；傣藥補腎壯陽方DRB可升高雄性大鼠血清睪丸酮含量，降低雌二醇含量?？梢姶鏊幯a腎壯陽方DRB與性激素調(diào)節(jié)有關。

劑量的設置為按人用日劑量折算的大鼠等效量的3倍。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進等，均應包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。