一種快速檢測凝結(jié)芽孢桿菌的多重pcr試劑盒的制作方法
【專利摘要】本實用新型具體涉及芽孢桿菌的檢測技術(shù)，本實用新型的目的是提供一種快速檢測凝結(jié)芽孢桿菌的多重PCR試劑盒，使用該試劑盒檢測快速準(zhǔn)確，敏感性高，且操作簡單成本低。一種快速檢測凝結(jié)芽孢桿菌的多重PCR試劑盒，包括盒體。所述盒體內(nèi)包含裝有coag基因正向引物的coag-F引物試劑容器和裝有coag基因反向引物的coag-R引物試劑容器；包含裝有coaK基因正向引物的coaK-F引物試劑容器和裝有coaK基因反向引物的coaK-R引物試劑容器。本實用新型提供的試劑盒中包含多個裝有檢測所需試劑的試劑容器，便于檢測時使用，能快速檢測出樣品中是否存在凝結(jié)芽孢桿菌。
【專利說明】
-種快速檢測凝結(jié)芽抱桿菌的多重PCR試劑盒
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本實用新型設(shè)及芽抱桿菌的檢測技術(shù)，具體設(shè)及一種快速檢測凝結(jié)芽抱桿菌的多 重PCR試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002] 凝結(jié)芽抱桿菌(Bacillus coagulans)為革蘭氏陽性菌，菌體呈桿狀，芽抱端生，可 發(fā)酵糖類產(chǎn)生k乳酸，所W又被稱為"有抱子性乳酸菌"。由于菌株自身的安全性、有效性、 經(jīng)濟性和環(huán)境友好性，成為我國農(nóng)業(yè)部《飼料添加劑品種目錄》(2008)批準(zhǔn)使用的新型微生 物飼料添加劑。凝結(jié)芽抱桿菌不僅具有普通乳酸菌的益生保健功能，還具較強的耐胃酸、耐 高溫高壓、易培養(yǎng)和儲存等優(yōu)勢，是益生菌領(lǐng)域中的后起之秀，被廣泛應(yīng)用于醫(yī)療、保健、食 品、畜禽及水產(chǎn)養(yǎng)殖等領(lǐng)域。
[0003] 目前，市場上凝結(jié)芽抱桿菌產(chǎn)品制劑較多，但缺乏規(guī)范的管理及科學(xué)的評估手段 和參數(shù)標(biāo)準(zhǔn)，使得一部分微生態(tài)制劑生產(chǎn)廠家提供的產(chǎn)品質(zhì)量、價格參差不齊。市面上一些 廠家利用甲基營養(yǎng)型芽抱桿菌、解淀粉芽抱桿菌、枯草芽抱桿菌或地衣芽抱桿菌冒充凝結(jié) 芽抱桿菌高價售賣，牟取暴利，嚴(yán)重影響了用戶對該類產(chǎn)品的選擇。因而，建立一種快速、高 效、準(zhǔn)確的鑒定方法顯得非常重要。
[0004] 近年來分子生物學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，已有應(yīng)用PCR技術(shù)和環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)，檢 測凝結(jié)芽抱桿菌的方法。CN102533743B"-種用于擴增凝結(jié)芽抱桿菌的特異性引物及其應(yīng) 用"，公開了通過特異性的擴增ComK基因來檢測凝結(jié)芽抱桿菌的方法，用該方法擴增凝結(jié)芽 抱可獲得400bp的特異性片段，擴增炭痘芽抱桿菌、蠟樣芽胞桿菌、枯草芽抱桿菌、紅球菌 時，則無特異性片段。該檢測方法僅擴增凝結(jié)芽抱桿菌的一段基因序列，易出現(xiàn)假陽性。
[0005] CN104152543A"-種凝結(jié)芽抱桿菌檢測引物組、試劑盒及其方法"，用該方法能從 凝結(jié)芽抱桿菌DNA中擴增出大量的梯度大小核酸片段，而未能從其他屬細(xì)菌DNA中擴增出核 酸片段。所述其他屬細(xì)菌為枯草芽胞桿菌、蠟狀芽抱桿菌、地衣芽抱桿菌、巨大芽抱桿菌和 大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)株。
[0006] 然而與凝結(jié)芽抱桿菌分子序列相似度較高的甲基營養(yǎng)型芽抱桿菌與解淀粉芽抱 桿菌，在上述方法中均沒有進(jìn)行檢測，難W保證檢測方法的準(zhǔn)確性。此外，巧光定量PCR和環(huán) 介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)，存在儀器昂貴、人員要求較高或難定量、非特異性高等缺陷。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本實用新型的目的是提供一種快速檢測凝結(jié)芽抱桿菌的多重PC時式劑盒，使用該 試劑盒檢測快速準(zhǔn)確，敏感性高，且操作簡單成本低。
[000引為實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本實用新型所采用的技術(shù)方案是:一種快速檢測凝結(jié)芽抱 桿菌的多重PC時式劑盒，包括盒體。所述盒體內(nèi)包含裝有PCR擴增引物的引物試劑容器;所述 引物試劑容器有兩組，一組為coag基因引物組，包含裝有coag基因正向引物的coag-F引物 試劑容器和裝有coag基因反向引物的coag-R引物試劑容器；另一組為CoaK基因引物組，包 含裝有coaK基因正向引物的coaK-F引物試劑容器和裝有coaK基因反向引物的coaK-R引物 試劑容器。
[0009]其中，所述引物序號可W如下：
[00 …]coag-F:GAAGAAATCGGGATGGTG
[0011] coag-R：CGTTTGAGGACAAGGAGC
[0012] comK-F：ACTTTGGAAGCGATTACG
[0013] comK-R：CCCTGTATCCCTGTTGTT
[0014] 當(dāng)然，具體的引物也可W是采用其他具體產(chǎn)品替換。
[0015] 優(yōu)選的，所述盒體內(nèi)還包含PCR反應(yīng)試劑容器，陽性對照樣品試劑容器及陰性對照 樣品試劑容器。
[0016] 優(yōu)選的，所述盒體內(nèi)設(shè)置襯墊，襯墊上設(shè)有孔桐;所述孔桐與所述的試劑容器形狀 相吻合，用于放置試劑容器。
[0017] 優(yōu)選的，所述Coag基因引物組的試劑容器規(guī)格小于COaK基因引物組的試劑容器。
[0018] 優(yōu)選的，所述coag-F引物試劑容器和CoaK-F引物試劑容器配套有相似的容器蓋； 所述coag-R引物試劑容器和CoaK-R引物試劑容器配套有相似的容器蓋;所述coag-F引物試 劑容器和coag-R引物試劑容器上的容器蓋相區(qū)別。
[0019] 優(yōu)選的，所述試劑容器為帶有密封蓋的錐形離屯、管。
[0020] 優(yōu)選的，所述襯墊包括兩層，分別為上層的海綿襯墊和下層的塑料襯墊;所述塑料 襯墊上設(shè)有與離屯、管下部相吻合的錐形孔桐，所述海綿襯墊上設(shè)有與離屯、管中部相吻合的 圓形孔桐。
[0021] 本實用新型具有W下有益效果:本實用新型提供的試劑盒中包含多個裝有檢測所 需試劑的試劑容器，便于檢測時使用。使用該試劑盒能快速檢測出樣品中是否存在凝結(jié)芽 抱桿菌，且操作簡單成本低。試劑盒中提供的擴增引物可W特異的擴增凝結(jié)芽抱桿菌基因 組中的coag基因和ComK基因序列，而不會擴增得到其他細(xì)菌的基因片段，特異性強。
【附圖說明】
[0022] 圖1為本實用新型的結(jié)構(gòu)示意圖。
【具體實施方式】
[0023] 如圖1所示的，一種快速檢測凝結(jié)芽抱桿菌的多重PC時式劑盒，包括盒體1。所述盒 體1內(nèi)包含裝有PCR擴增引物的引物試劑容器;所述引物試劑容器有兩組，一組為coag基因 引物組，包含裝有coag基因正向引物的coag-F引物試劑容器2和裝有coag基因反向引物的 coag-R引物試劑容器3;另一組為coaK基因引物組，包含裝有coaK基因正向引物的CoaK-F引 物試劑容器4和裝有coaK基因反向引物的CoaK-R引物試劑容器5。本實用新型提供的試劑盒 中包含多個裝有檢測所需試劑的試劑容器，便于檢測時使用，能快速檢測出樣品中是否存 在凝結(jié)芽抱桿菌。
[0024] 其中，所述引物序號可W如下：
[00 巧]coag-F:GAAGAAATCGGGATGGTG [00%] coag-R:CGTTTGAGGACAAGGAGC
[0027] comK-F：ACTTTGGAAGCGATTACG
[0028] comK-R：CCCTGTATCCCTGTTGTT
[0029] 上述引物均由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成。
[0030] 試劑盒中提供的擴增引物可W特異的擴增凝結(jié)芽抱桿菌基因組中的Coag基因和 ComK基因序列，而不會擴增得到其他細(xì)菌的基因片段，特異性強。特別是與凝結(jié)芽抱桿菌分 子序列相似度較高的甲基營養(yǎng)型芽抱桿菌與解淀粉芽抱桿菌，不能擴增得到基因片段。能 夠準(zhǔn)確、有效的檢測出待檢樣品中是否存在凝結(jié)芽抱桿菌。
[0031] 優(yōu)選的，所述盒體1內(nèi)還包含PCR反應(yīng)試劑容器6,陽性對照樣品試劑容器7及陰性 對照樣品試劑容器8。所述盒體1內(nèi)設(shè)置襯墊9,襯墊9上設(shè)有孔桐;所述孔桐與所述的試劑容 器形狀相吻合，用于放置試劑容器。試劑盒內(nèi)包含檢測時所用的試劑，便于擴增體系的配 置，有效提高檢測效率。檢測時所用coag基因引物量少于CoaK基因引物量，因此更好的是， 所述coag基因引物組的試劑容器規(guī)格小于CoaK基因引物組的試劑容器，并且其容積比例為 1:5,與實際用量比例相一致。
[0032] 所述coag-F引物試劑容器巧PcoaK-F引物試劑容器4配套有相似的容器蓋;所述 coag-R引物試劑容器3和CoaK-R引物試劑容器5配套有相似的容器蓋;所述coag-F引物試劑 容器2和coag-R引物試劑容器3上的容器蓋相區(qū)別。所述區(qū)別可W是容器蓋顏色上的區(qū)別， 例如coag-F引物試劑容器2和CoaK-F引物試劑容器4配套有紅色的容器蓋，coag-R引物試劑 容器3和CoaK-R引物試劑容器5配套有綠色的容器蓋?；蛘呤侨萜魃w形狀的區(qū)別，如圓形、楠 圓形、矩形等。也可W是貼有不同的標(biāo)簽，均能實現(xiàn)有效區(qū)分。運樣通過容器的規(guī)格及容器 蓋的區(qū)別，能有效區(qū)分運四個引物試劑容器，避免因混淆而引起的操作失誤，保證操作及 結(jié)果的正確性。
[0033] 所述試劑容器為帶有密封蓋的錐形離屯、管。所述襯墊9包括兩層，分別為上層的海 綿襯墊10和下層的塑料襯墊11;所述塑料襯墊11上設(shè)置與離屯、管下部相吻合的錐形孔桐， 所述海綿襯墊10上設(shè)置與離屯、管中部相吻合的圓形孔桐。下層的塑料襯墊11可W固定離屯、 管的位置，上層的海綿襯墊10能起到很好的保護(hù)作用，避免運輸途中的磕碰破損。
[0034] 本實用新型所提供試劑盒的使用方法如下：
[0035] 1.提取樣品DNA
[0036] 2. PCR 擴增
[0037] 取步驟1提取的樣品DNA作為DNA模板，用PCR擴增引物進(jìn)行擴增，使用試劑盒進(jìn)行 PCR總體系的配置。
[003引PCR總體系為25化，各組分含量分別為： 10XPCR Mix 12.日 wL dd 11,0 9.1 U L D臟模板 1.0 U L
[0039] coag-F 0.2 uL CQag-R 0. 2 U L comK-F 1.0 U L CQfflK-R 1.0 U L
[0040] 反應(yīng)程序:94°C預(yù)變性10min，94°C變性30s，54°C退火30s，72°C延伸Imin，擴增30 個循環(huán)，最后72°C溫育5min。
[0041 ] 3.結(jié)果檢測
[0042] 取扣L擴增產(chǎn)物，采用1%的瓊脂糖凝膠電泳，在恒壓120V條件下電泳45min，置于 凝膠成像系統(tǒng)下觀察PCR擴增結(jié)果。只有檢測電泳圖出現(xiàn)兩條清晰條帶，且大小分別約為 345bp與769bp時，樣品中存在凝結(jié)芽抱桿菌。
[0043] 實施例1
[0044] 引物特異性實驗
[0045] -、實驗方法
[0046] 1. DNA模板制備
[0047] 按照無菌操作要求，分別培養(yǎng)各類細(xì)菌并提取DNA。具體如下：
[004引a.凝結(jié)芽抱桿菌標(biāo)準(zhǔn)株(CICC 20138)、解淀粉芽抱桿菌和甲基營養(yǎng)型芽抱桿菌： 接種至凝結(jié)芽抱桿菌液體培養(yǎng)基，37 °C恒溫靜置培養(yǎng)36h，取2mL菌夜提取DNA，制備DAN模 板；
[0049] b.葡萄球菌、枯草芽抱桿菌和地衣芽抱桿菌:接種至LB液體培養(yǎng)基，37°C恒溫振蕩 培養(yǎng)(180r/min) 24h，取2mL菌夜提取DNA，制備DAN模板；
[0050] C.糞腸球菌、嗜酸乳桿菌和唾液乳桿菌:接種至MRS液體培養(yǎng)基中，37°C恒溫靜置 培養(yǎng)2地，取2mL菌夜提取DNA，制備DAN模板。
[0051] 各株細(xì)菌DNA提取操作步驟如下：
[0化2] (1)取培養(yǎng)的細(xì)菌菌液4mL，10 0(K)r/min離屯、Imin,盡量吸盡上清液。
[0053] (2)向菌體沉淀中加入20化L緩沖液(稱取20mg的溶菌酶溶解在ImL TE緩沖液中， 審IJ成終濃度為20mg/mL的溶菌酶液，0.22皿微孔過濾后保存?zhèn)溆茫?7°C處理40min。
[0化4] (3)向管中加入20化Proteinase K溶液，混勻。
[0055] (4)加入22化L緩沖液GB，振蕩15s，70°C放置IOmin，溶液變清亮，簡短離屯、，去除管 蓋內(nèi)壁水珠。
[0056] (5)加入22化L無水乙醇，充分振蕩15s，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀。
[0057] (6)將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管 中），12 0(K)r/min離屯、30s，倒掉廢液，將吸附柱CB3放入收集管中。
[0化引 （7)向吸附柱CB3中加入5(K)化緩沖液GD(使用前已加入無水乙醇），12 OOOr/min 離屯、30s，倒掉廢液，將吸附柱CB3放入收集管中。
[0化9] (8)向吸附柱CB3中加入60化L漂洗液PW(使用前已加入無水乙醇），12 0(K)r/min離 屯、30s，倒掉廢液，將吸附柱CB3放入收集管中。
[0060] (9)重復(fù)操作步驟(8)。
[0061 ] (10)將吸附柱CB3放回收集管中，12 00化/min離屯、2min，倒掉廢液，將吸附柱CB3 置于室溫放置數(shù)分鐘，W徹底驚干吸附材料中殘留的漂洗液。
[0062] (11)將吸附柱CB3轉(zhuǎn)入一個干凈的離屯、管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加10化L 無菌雙蒸水，室溫放置5min，12 00化/min離屯、2min，將溶液收集到離屯、管中。
[00創(chuàng) 2. PCR擴增
[0064] 取步驟1所制備的DNA模板，用PCR擴增引物進(jìn)行擴增。
[0065] PCR總體系為2如L，各組分含量分別為： IOXPCR Mix 12.日 UL dd 11,0 9. 1 WL DNA 模板 1.0 PL
[0066] coag-F 0.2 P L coag-R 0. 2 W L comK-F I. 0 P L CO曲K-民 1. 0 P L
[0067] 反應(yīng)程序:94°C預(yù)變性10min，94°C變性30s，54°C退火30s，72°C延伸Imin，擴增30 個循環(huán)，最后72°C溫育5min。
[0068] 3.結(jié)果檢測
[0069] 取扣L PCR擴增產(chǎn)物，采用1 %的瓊脂糖凝膠電泳，在恒壓120V條件下電泳45min， 置于凝膠成像系統(tǒng)下觀察PCR擴增結(jié)果。
[0070] 二、結(jié)果
[0071] 1號泳道為凝結(jié)芽抱桿菌標(biāo)準(zhǔn)株(CICC 20138)的擴增結(jié)果;2-9號泳道分別為解 淀粉芽抱桿菌、甲基營養(yǎng)型芽抱桿菌、葡萄球菌、枯草芽抱桿菌、地衣芽抱桿菌、糞腸球菌、 嗜酸乳桿菌和唾液乳桿菌的擴增結(jié)果。
[0072] 僅有凝結(jié)芽抱桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株（CICC 20138)出現(xiàn)兩條清晰條帶，大小分別約為 345bp與769bp。雖然其他菌株能擴增得到一定條帶，但所有對照菌株均不能擴增到目的條 帶。
[0073] 本實例表明了本實用新型提供的試劑盒檢測凝結(jié)芽抱桿菌的特異性強，可W準(zhǔn)確 的將凝結(jié)芽抱桿菌與其他芽抱桿菌或乳酸菌準(zhǔn)確的區(qū)別開，特別是與凝結(jié)芽抱桿菌分子序 列相似度較高的甲基營養(yǎng)型芽抱桿菌與解淀粉芽抱桿菌。
[0074] 實施例2
[0075] 引物靈敏性實驗
[0076] 一、實驗方法
[0077] I. DNA模板制備
[0078] 按照無菌操作要求，將凝結(jié)芽抱桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株(CICC 20138)接種于凝結(jié)芽抱桿菌 培養(yǎng)液體培養(yǎng)基，37 °C恒溫靜置培養(yǎng)36h，取2mL菌液提取DNA。細(xì)菌基因組DNA提取操作步驟 如下：
[00巧](1)取培養(yǎng)的細(xì)菌菌液4mL，10 0(K)r/min離屯、Imin,盡量吸盡上清液。
[0080] (2)向菌體沉淀中加入20化L緩沖液(稱取20mg的溶菌酶溶解在ImL TE緩沖液中， 審IJ成終濃度為20mg/mL的溶菌酶液，0.22皿微孔過濾后保存?zhèn)溆茫?7°C處理40min。
[0081 ] (3)向管中加入20化Proteinase K溶液，混勻。
[0082] (4)加入220化緩沖液GB，振蕩15s，70°C放置IOmin，溶液變清亮，簡短離屯、，去除管 蓋內(nèi)壁水珠。
[0083] (5)加入22化L無水乙醇，充分振蕩15s，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀。
[0084] (6)將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管 中），12 0(K)r/min離屯、30s，倒掉廢液，將吸附柱CB3放入收集管中。
[00化](7)向吸附柱CB3中加入50化L緩沖液GD(使用前已加入無水乙醇），12 0(K)r/min離 屯、30s，倒掉廢液，將吸附柱CB3放入收集管中。
[00化](8)向吸附柱CB3中加入60化L漂洗液PW(使用前已加入無水乙醇），12 0(K)r/min離 屯、30s，倒掉廢液，將吸附柱CB3放入收集管中。
[0087] (9)重復(fù)操作步驟(8)。
[0088] (10)將吸附柱CB3放回收集管中，12 00化/min離屯、2min，倒掉廢液，將吸附柱CB3 置于室溫放置數(shù)分鐘，W徹底驚干吸附材料中殘留的漂洗液。
[0089] (11)將吸附柱CB3轉(zhuǎn)入一個干凈的離屯、管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加10化L 無菌雙蒸水，室溫放置5min，12 00化/min離屯、2min，將溶液收集到離屯、管中。
[0090] 測定提取的細(xì)菌基因組DNA濃度，確定濃度后，對DNA樣品依次按照10倍、20倍、50 倍、IO2倍、IO 3倍、IO4倍、IO5倍、IO6倍、IO7倍進(jìn)行稀釋后，制備DNA模板。
[00川 2. PCR擴增
[0092]取步驟1所制備的DNA模板，用PCR擴增引物進(jìn)行擴增。
[009引PCR總體系為25化，各組分含量分別為： 10 乂P邸 Mix 12.日 IiL Cid ILO 9. 1 UL DNA 模板 1.0 PL
[0094] coag-F 0.2 P L coag-R 0. 2 W L comK-F I. 0 P L comK-R 1.0 y L
[0095] 反應(yīng)程序:94°C預(yù)變性10min，94°C變性30s，54°C退火30s，72°C延伸Imin，擴增30 個循環(huán)，最后72°C溫育5min。
[0096] 3.結(jié)果檢測
[0097] 取扣L擴增產(chǎn)物，采用1%的瓊脂糖凝膠電泳，在恒壓120V條件下電泳45min，置于 凝膠成像系統(tǒng)下觀察PCR擴增結(jié)果。
[009引二、結(jié)果
[0099] 凝結(jié)芽抱桿菌DNA濃度測定結(jié)果為78ngAiL，因此稀釋后濃度依次為7. SngAiU 3.化g/化、1.56ngAiL、7.8 X 1 Q-Vg/化、7.8 X 1 〇-2ng/化、7.8 X 1 〇-3ng/化、7.8 X 1 〇-4〇邑/化、 7.8 X 1 〇-5雌/化、7.8 X 1 〇-6叫/化。
[0100] 結(jié)果1-5號泳道均能出現(xiàn)清晰條帶，5號泳道所對應(yīng)的濃度為7.8X ICT2IigAiL。因此 可準(zhǔn)確測定凝結(jié)芽抱桿菌的最低模板濃度為7.8 X l(T2ngAiL。即使用本實用新型提供的試 劑盒檢測待檢樣本可準(zhǔn)確檢測凝結(jié)芽抱桿菌濃度不低于1.6 X IO4C化/mL的待檢樣品。
[0101] 本實例表明了本實用新型提供的試劑盒檢測凝結(jié)芽抱桿菌的靈敏度高。
【主權(quán)項】
1. 一種快速檢測凝結(jié)芽孢桿菌的多重PCR試劑盒，包括盒體（1)，其特征在于:所述盒體 (1) 內(nèi)包含裝有PCR擴增引物的引物試劑容器;所述引物試劑容器有兩組，一組為coag基因 引物組，包含裝有coag基因正向引物的coag-F引物試劑容器(2)和裝有coag基因反向引物 的coag-R引物試劑容器（3);另一組為coaK基因引物組，包含裝有coaK基因正向引物的 coaK-F引物試劑容器(4)和裝有coaK基因反向引物的coaK-R引物試劑容器(5)。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速檢測凝結(jié)芽孢桿菌的多重PCR試劑盒，其特征在于:所述 盒體(1)內(nèi)還包含PCR反應(yīng)試劑容器(6)，陽性對照樣品試劑容器(7)及陰性對照樣品試劑容 器(8) 〇3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速檢測凝結(jié)芽孢桿菌的多重PCR試劑盒，其特征在于:所述 盒體（1)內(nèi)設(shè)置襯墊(9)，襯墊(9)上設(shè)有孔洞;所述孔洞與所述的試劑容器形狀相吻合，用 于放置試劑容器。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速檢測凝結(jié)芽孢桿菌的多重PCR試劑盒，其特征在于:所述 coag基因引物組的試劑容器規(guī)格小于coaK基因引物組的試劑容器。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的快速檢測凝結(jié)芽孢桿菌的多重PCR試劑盒，其特征在于:所述 coag-F引物試劑容器(2)和coaK-F引物試劑容器(4)配套有相似的容器蓋;所述coag-R引物 試劑容器（3)和coaK-R引物試劑容器（5)配套有相似的容器蓋;所述coag-F引物試劑容器 (2) 和coag-R引物試劑容器(3)上的容器蓋相區(qū)別。6. 根據(jù)權(quán)利要求3-5任意一項中所述的快速檢測凝結(jié)芽孢桿菌的多重PCR試劑盒，其特 征在于:所述試劑容器為帶有密封蓋的錐形離心管。7. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的快速檢測凝結(jié)芽孢桿菌的多重PCR試劑盒，其特征在于:所述 襯墊(9)包括兩層，分別為上層的海綿襯墊（10)和下層的塑料襯墊（11);所述塑料襯墊（11) 上設(shè)置與離心管下部相吻合的錐形孔洞，所述海綿襯墊（10)上設(shè)置與離心管中部相吻合的 圓形孔洞。
【文檔編號】C12Q1/04GK205420443SQ201520905874
【公開日】2016年8月3日
【申請日】2015年11月13日
【發(fā)明人】茍小蘭, 黃丹, 蘇艷秋, 劉梅, 羅國強
【申請人】通威股份有限公司