16 (m，2H)，3. 98 (s，3H)，3. 24-3. 19 (m，1H)， 2. 98-2. 88 (m，1H)，2. 69 (s，3H)，2. 66-2. 59 (m，1H)，2. 21-2. 10 (m，1H)，2. 03-2. 10 (m，1H)， I. 83-1. 59 (m, 8H), I. 41-1. 37 (m, 18H), I. 26-1. 20 (m, 8H) ；HRMS Calcd for C45H63N6O10NaPS2, [M+Na]m/z 965. 3682, found 965.3671.
[0048] 實(shí)施例4
[0049] 化合物1-4的制備
[0051] 參照實(shí)施例1的制備方法，將亞磷酸二甲酯替換成亞磷酸二苯酯制得化合物1-4 : 1HNMR(300MHz, MeOD) δ 7. 75 (d, J = 9Hz, 1H), 7. 59 (s, 1H), 7. 28 (s, 1H), 7. 20-7. 15(m,5H), 7. 12-7. 03 (m, 5H), 6. 98-6. . 92 (m, 2H), 5. 91-5. 74 (m, 1H), 5. 53 (s, 1H), 5. 38-5. 30 (m, 1H), 5. 16(d, J = 9Hz, 1H) ,4. 60-4. 53 (m, 1H) ,4. 37(d, J = 12Hz, 1H) ,4. 24-4. 19 (m, 1H), 3. 98 (s, 3H)，3. 22-3. 14 (m, 2H)，3. 01-2. 94 (m, 1H)，2. 61 (s, 3H)，2. 48-2. 40 (m, 1H)，2. 29-2. 19 (m， lH)，2.05-1.92(m，lH)，1.79-1.60(m，8H)，1.41(d，J = 9Hz，6H)，1.13-l.ll(m，8H) ;HRMS Calcd for C51H59N6O10NaPS2, [M+Na]m/z 1033. 3369, foundl033. 3383.
[0052] 實(shí)施例5
[0053] 化合物1-5的制備
[0055] 參照實(shí)施例1的制備方法，將亞磷酸二甲酯替換成亞磷酸二芐酯制得化合物1-5 : 1HNMR(300MHz, MeOD) δ 8. 06 (s, 1H), 7. 63 (s, 1H), 7. 34-7. 29 (m, 10H) ,7. 26-7. 24(m,2H), 5· 77-5. 69 (m, 1H)，5· 57 (s, 1H)，5· 37-5. 28 (m, 1H)，5· 18-5. 13 (m, 1H)，4· 71-4. 68 (m, 1H)， 4· 37-4. 34 (m，1Η)，4· 22-4. 12 (m，2Η)，3· 99 (s，3Η)，3· 33 (d，J = 12Hz，4Η)，3· 35-3. 18 (m， 1Η)，3· 02-2. 94 (m，1Η)，2· 86-2. 77 (m，2Η)，2· 63 (s，3Η)，2· 57-2. 52 (m，2Η)，2· 46-2. 36 (m， 1Η)，2· 33-2. 24 (m，1Η)，2· 19-1. 99 (m，1Η)，1· 94-1. 80 (m，1Η)，1· 40 (d，J = 6Hz，6Η)， 1. 18(s,9H).
[0056] 實(shí)施例6
[0057] 化合物1-6的制備
[0059] 將40mg化合物1-5溶解于Iml甲醇中，加入I. 5mg 10% Pd-C，室溫下通入氫氣 攪拌10分鐘，過(guò)濾，將濾液濃縮旋干得到化合物1-6(21. 3mg，收率87% ) =1H NMR(300MHz， MeOD) δ 8. 08 (d, J = 12Hz, 1H), 7. 64-7. 63 (m, 1H), 7. 39 (d, J = 12Hz, 1H), 7. 35 (s, 1H), 5. 82-5. 69 (m, 1H) , 5. 60 (s, 1H) , 5. 43-5. 28 (m, 1H) , 5. 20-5. 12 (m, 1H) , 4. 71-4. 66 (m, 1H),4. 36(d, J = 15Hz,lH),4. 21(dd, J = 12,3Hz),4. 12 (d, J = 6Hz, 1H), 4. 00 (s, 3H), 3. 30-3. 17 (m, 1H)，2. 97-2. 95 (m, 1H)，2. 79-2. 72 (m, 1H)，2. 62 (s, 3H)，2. 69-2. 62 (m, 2H)， 2. 43-2. 37 (m，1H)，2. 32-2. 23 (m，1H)，2. 02 (s，1H)，I. 91-1. 80 (m，1H)，I. 40 (d，J = 6Hz)， I. 71(s,l〇H).
[0060] 實(shí)施例7
[0061] 化合物1-7的制備
[0063] 參照實(shí)施例1的制備方法，將化合物VI用三氟乙酸脫Boc保護(hù)基，再與亞磷酸二 甲酯反應(yīng)制得化合物1-7 :MS[M+l]+m/z 861. 30.
[0064] 實(shí)施例8
[0065] 化合物1-13的制備
[0067] 參照實(shí)施例1的制備方法，將化合物VII用三氟乙酸脫Boc保護(hù)基，再與亞磷酸二 甲酯反應(yīng)制得化合物1-13 :MS[M+l]+m/z 771. 23.
[0068] 實(shí)施例9
[0069] 化合物1-28的制備
[0071] 參照實(shí)施例1的制備方法，將化合物VIII用三氟乙酸脫Boc保護(hù)基，再與亞磷酸 二甲酯反應(yīng)制得化合物1-28 :MS[M+l]+m/z 797. 25.
[0072] 實(shí)施例10
[0073] 化合物II-I的制備
[0074]
[0075] 參照實(shí)施例1的制備方法，將化合物IX用三氟乙酸脫Boc保護(hù)基，再與亞磷酸二 甲酯反應(yīng)制得化合物Π -1 :MS[M+l]+m/z 728. 25.
[0076] 實(shí)施例11
[0077] 化合物II-3的制備
[0079] 參照實(shí)施例1的制備方法，將化合物X用三氟乙酸脫Boc保護(hù)基，再與亞磷酸二甲 酯反應(yīng)制得化合物II-3 :MS[M+l]+m/z 754. 26.
[0080] 實(shí)施例12
[0081] 化合物1-17的制備
[0083] 參照實(shí)施例1的制備方法，將化合物XI用三氟乙酸脫Boc保護(hù)基，再與亞磷酸二 甲酯反應(yīng)制得化合物1-17 :MS[M+l]+m/z 754. 26.
[0084] 實(shí)施例13
[0085] 抗HCV體外藥效學(xué)試驗(yàn)
[0086] 藥品：受試化合物（上述實(shí)施例制備）、陽(yáng)性對(duì)照藥為T(mén)elaprevir和Sofosbuvir.
[0087] 細(xì)胞模型：采用GTlb丙肝病毒復(fù)制子細(xì)胞系統(tǒng)測(cè)定化合物的體外活性。將 GTlbHCV基因（野生型）重新構(gòu)建，剪切掉一部分片段，并增加了新的片段，這其中包括抗生 素耐受基因和熒光素酶基因。將新構(gòu)建的重組基因轉(zhuǎn)染入人肝癌細(xì)胞系Huh-7中。通過(guò)在 含有硫酸新霉素（G418)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)后，可以獲得G418耐受的細(xì)胞克隆，這些細(xì)胞克隆 可以持續(xù)的表達(dá)HCV復(fù)制子RNA，從而建立有效復(fù)制的HCV細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)。通過(guò)檢測(cè)熒光素 酶基因的表達(dá)高低可以確定丙肝病毒的復(fù)制水平。
[0088] 實(shí)驗(yàn)步驟：
[0089] 1.化合物與細(xì)胞共孵育：種GTlb復(fù)制子細(xì)胞到96孔板，每孔8000個(gè)細(xì)胞；每個(gè) 化合物濃度進(jìn)行復(fù)孔檢測(cè)，3倍系列稀釋10個(gè)點(diǎn)，DMSO終濃度為0. 5 % ;二氧化碳培養(yǎng)箱培 養(yǎng)細(xì)胞72小時(shí)；
[0090] 2.向每孔細(xì)胞中加入細(xì)胞活力檢測(cè)試劑，檢測(cè)細(xì)胞活力。隨后向細(xì)胞中加入熒光 素酶發(fā)光底物，等5分鐘用化學(xué)發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)。分析數(shù)據(jù)并計(jì)算化合物細(xì)胞毒性和抗 丙肝病毒GT Ib基因型復(fù)制子的活性。
[0091] 3.對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行非線性擬合，計(jì)算化合物的CC5?；駿C5。。
[0092] 結(jié)果：通過(guò)化學(xué)發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)受試化合物對(duì)HCV抑制活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1 所示。結(jié)果表明，本發(fā)明受試化合物的抗HCV活性（EC 5。范圍在4nM~388nM)均顯著優(yōu)于 抗丙型肝炎藥物Telaprevir (EC5。= 1000 nM)，且均表現(xiàn)出較低的細(xì)胞毒性（CC5。> 10 μ M)。 尤其令人驚喜的是，若干化合物（如化合物I-I :EC5。= 4ηΜ)顯示了極強(qiáng)的抗HCV活性，顯 著優(yōu)于"重磅炸彈型"抗丙型肝炎藥物S〇f〇Sb UVir(EC5。= 152ηΜ)。以上結(jié)果提示本發(fā)明化 合物有望開(kāi)發(fā)成為安全、有效的新型抗丙型肝炎藥物。
[0093] 表1.受試化合物的抗HCV作用
[0095] 實(shí)施例14
[0096] 片劑
[0097] 將實(shí)施例1中制得的化合物I-I (50g)、羥丙甲基纖維素 E(150g)、淀粉（200g)、聚 維酮K30適量和硬脂酸鎂（Ig)混合，制粒，壓片。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 具有式I或式II的化合物，? 或其藥學(xué)上可接受的鹽或醋或溶劑化物或其立體異構(gòu)體，其中， Ri為氨、Ci-Ce直鏈或支鏈烷基、Cs-Ce環(huán)烷基或因素； R2為Ci-Ce直鏈或支鏈烷基、C3-C7環(huán)烷基、Cz-Ce帰基、C3-C7環(huán)帰基或雜環(huán)烷基； 或者，Ri與R2通過(guò)共價(jià)連接形成Cs-Cg飽和或不飽和的姪鏈； R3和R4獨(dú)立地為氨、Ci-Ci。直鏈或支鏈烷基、C3-C7環(huán)烷基、予基、苯基或取代苯基； X為，其中，R5為氨、Ci-Ce直鏈或支鏈烷基、C3-C7環(huán) 烷基、苯基或取代苯基； R6和R7獨(dú)立地為氨、因素、CN、N02、CFs、OCF3、Ci-Ce直鏈或支鏈烷基或C3-C7環(huán)烷基； Y為氧或NH ; Z為芳基、取代的芳基、雜環(huán)芳基或取代的雜環(huán)芳基。2. 如權(quán)利要求1所述的式I或式II化合物，其特征在于，Ri為氨；R2為Ci-Ce直鏈或支 鏈烷基或C3-C7環(huán)烷基；或者，Ri與R2通過(guò)共價(jià)連接形成Cs-Cg飽和或不飽和的姪鏈；R3和 R4獨(dú)立地為Ci-Ci。直鏈或支鏈烷基、C3-C7環(huán)烷基、予基或苯基；X為或 k/d戶其中，R5為氨或C3-C7環(huán)烷基；Y為氧；Z為取代的芳基或取代的雜環(huán)芳基；R6和R 7 > 獨(dú)立地為氨、因素、CN、N02、CFs或OCF3。3. 如權(quán)利要求1所述的式I或式II化合物，其特征在于，Ri為氨；R2為環(huán)己基、叔了基 或異丙基；或者，Ri與R 2通過(guò)共價(jià)連接形成Ce-C,飽和或不飽和的姪鏈；R3和R4獨(dú)立地為甲基、己基、異丙基或叔了基；X為 其中，R5為氨或C3-C7環(huán)烷基；Y為氧； ? R6和R7獨(dú)立地為氨或因素；Z為取代的雜環(huán)芳基。4. 如權(quán)利要求1所述的式I化合物，其特征在于，Y為氧，且Z具有如下結(jié)構(gòu)：5.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，所述式I或式II化合物具有如下結(jié)構(gòu)：6. 如權(quán)利要求1所述的式I化合物的制備方法，如下反應(yīng)式：具體包括下列步驟： 式III化合物或其鹽與相應(yīng)的亞磯酸二醋發(fā)生偶聯(lián)反應(yīng)得到式I化合物；式III化合 物的鹽為其鹽酸鹽、H氣己酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、H氣甲焼礙酸鹽、甲焼礙酸鹽或?qū)妆降K 酸鹽；在上述反應(yīng)式中，Ri、R2、r3、R 4、X、Y和Z如權(quán)利要求1中的式I和式II化合物中所 定義。7. 如權(quán)利要求1所述的式II化合物的制備方法，如下反應(yīng)式：具體包括下列步驟： 式IV化合物或其鹽與相應(yīng)的亞磯酸二醋發(fā)生偶聯(lián)反應(yīng)得到式II化合物；式IV化合物 的鹽為其鹽酸鹽、H氣己酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、H氣甲焼礙酸鹽、甲焼礙酸鹽或?qū)妆降K酸 熬；在上述反應(yīng)式中，31、1?2、1?3、護(hù)、1?6、護(hù)^和￥如權(quán)利要求1中的式1和式11化合物中所 定義。8. 如權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或醋或溶劑化物或 其立體異構(gòu)體在制備抗丙型肝炎藥物中的用途。9. 一種預(yù)防或治療丙型肝炎的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物中含有權(quán)利 要求1至5中任一項(xiàng)所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或醋或溶劑化物或其立體異構(gòu)體 和藥學(xué)上可接受的載體。10. 如權(quán)利要求9的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物為片劑、膠囊、顆粒劑、 散劑、糖漿劑、口服液或注射劑。
【專利摘要】本發(fā)明涉及制藥領(lǐng)域，具體涉及式I或式II所示的氨基磷酸酯衍生物、其制備方法及其在制藥中的用途，尤其涉及氨基磷酸酯衍生物在制備抗丙型肝炎病毒藥物中的用途。
【IPC分類】A61P31/14, A61P1/16, A61K38/06, C07K5/083, C07K5/087
【公開(kāi)號(hào)】CN105504007
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410548830
【發(fā)明人】孫宏斌, 張帆, 金超, 溫小安
【申請(qǐng)人】中國(guó)藥科大學(xué)
【公開(kāi)日】2016年4月20日
【申請(qǐng)日】2014年10月14日