一種檸檬苦素類化合物、制備方法和心肌保護(hù)的用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及從吳茱萸的干燥近成熟果實(shí)中分離得到的一 種檸檬苦素類化合物，含其的藥物組合物及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 吳茱萸為傳統(tǒng)中藥，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為中品。其味辛、苦，性熱，有小毒;具 有散寒止痛，降逆止嘔，助陽止瀉的功效。主要用于治療厥陰頭痛，寒疝腹痛，寒濕腳氣等。 1977-2010版《中國藥典》均收載吳茱萸為蕓香科植物吳茱萸Evodia rutaecarpa( Juss .) Benth ·，石虎E · Rutaecarpa( Juss ·) Benth · var · Officinal is (Dode)Huang 或疏毛吳茱萸 E .Rutaecarpa(Juss ·)Benth · var .Bodinieri (Dode)Huang的干燥近成熟果實(shí)。常綠灌木或 小喬木，主要分布在中國的貴州、四川、湖南、湖北、江西、廣西、安徽和浙江省等。
[0003] 吳茱萸主要包括生物堿類、檸檬苦素類、揮發(fā)油類、黃酮類等化學(xué)成分。生物堿是 吳茱萸成分研究的主流。目前，從該屬植物中已經(jīng)分離鑒定出多種生物堿，主要有吲哚類、 喹諾酮類、呋喃喹啉類和吖喧酮類生物堿，另外，還有其他類型生物堿。檸檬苦素也是吳茱 萸的重要活性成分，主要包括檸檬苦素(C 26H3qO8),吳茱萸苦素，吳茱萸內(nèi)酯醇，黃柏酮，吳茱 萸苦素乙酸酯，格羅苦素甲等化合物。吳茱萸富含揮發(fā)油，主要成分是月桂烯（占揮發(fā)油總 量的45.37 % )。此外，還包括萜類，異戊烯黃酮類黃酮化合物，香豆精，留體(β-谷留醇），木 質(zhì)素，多糖，花色苷，多種氨基酸類化合物及微量元素和脂肪酸類化合物等。
[0004] 現(xiàn)代藥理研究表明，吳茱萸具有鎮(zhèn)痛作用，體溫上升作用，對消化系統(tǒng)具有抗?jié)?瘍、雙向調(diào)節(jié)腸運(yùn)動和保肝利膽作用，對子宮平滑肌和支氣管具有雙向調(diào)節(jié)作用，對心血管 系統(tǒng)具有降低血壓，溶栓、增加血流量、擴(kuò)張血管等作用，其中生物堿、檸檬苦素類化合物為 其主要有效成分。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種從吳茱萸的干燥近成熟果實(shí)中分離得到的一種檸檬苦 素類化合物，含其的藥物組合物及其制備方法和應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：
[0007] 具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物(I):
[0009]所述的化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將吳茱萸的干燥近成熟果 實(shí)粉碎，用70~80%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯 和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步 驟(a)中乙酸乙酯萃取物用大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫6個柱體積，再用70%乙醇洗 脫8個柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70 %乙醇 洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為40:1、20:1、10:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度 洗脫得到4個組分；（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為8:1、5:1和 2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反 相硅膠分離，用體積百分濃度為70 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~12個柱體積洗脫液， 洗脫液減壓濃縮得到純的化合物(I)。
[0010] 進(jìn)一步地，所述用乙醇熱回流提取采用的乙醇濃度為75%。
[0011] 進(jìn)一步地，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0012] 藥物組合物，其中含有治療有效量的所述的化合物(I)和藥學(xué)上可接受的載體。
[0013] 所述的化合物(I)在制備心肌保護(hù)的藥物中的應(yīng)用。
[0014] 所述的藥物組合物在制備心肌保護(hù)的藥物中的應(yīng)用。
[0015] 本發(fā)明化合物用作藥物時，可以直接使用，或者以藥物組合物的形式使用。
[0016] 該藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明化合物（I)，其余為藥物學(xué)上可接受的、對 人和動物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0017] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 以及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明藥物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等;用于注射時，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質(zhì)體或乳劑等。
【附圖說明】
[0018] 圖1為化合物(I)結(jié)構(gòu)式；
[0019] 圖2為化合物（I)計(jì)算E⑶和實(shí)驗(yàn)E⑶圖。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實(shí)施例對本發(fā)明作了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。
[0021 ] 主要材料、試劑來源及儀器類型：
[0022]乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化學(xué)試劑有限 公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。
[0023] 經(jīng)鑒定吳茱萸為蕓香科植物吳茱萸Evodia rutaecarpa(Juss. )Benth.的干燥近 成熟果實(shí)。
[0024]實(shí)施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0025] (a)吳茱萸的干燥近成熟果實(shí)（IOkg)粉碎，用75%乙醇熱回流提取(25LX3次），合 并提取液，濃縮至無醇味(6L)，依次用石油醚(6L X 3次）、乙酸乙酯(6L X 3次)和水飽和的正 丁醇(6LX3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物(377g)和正丁醇萃取物；（b) 步驟(a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫6個柱體積，再用70% 乙醇洗脫8個柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物（129g); (c)步驟 (b)中70 %乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為40:1 (8個柱體積）、20:1 (8個 柱體積）、10:1(8個柱體積)和5:1(10個柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分； (d)步驟（c)中組分4(24g)用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為8:1(8個柱體積）、5:1 (10個柱體積)和2:1(8個柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得至1」3個組分；（e)步驟(d)中組 分2 (15g)用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為70 %的甲醇水溶液等度 洗脫，收集8~12個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物(I)(242mg)。
[0026] 結(jié)構(gòu)確證:無色晶體（甲醇）；冊43頂3顯示[1+他]+為111/2 477.1922，結(jié)合核磁特 征可得分子式為〇26113()〇7，不飽和度為12。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)51^。111，〇]\^〇-(16,50〇]\0^):!1-1 (6.66，d，J=12.0)，H-2(5.69，d，J=12.0)，H-5(2.48，d，J=13.0)，H-6(1.36，dt，J=13.0， 3.5)，H-6(1.84，t，J=13.0)，H-7(3.41，d，J = 3.5)，H-9(1.75，s)，H-ll(3.21，d，J = 4.5)， H-12(3.11，d，J=4.5)，H-14(2.79，s)，H-17(4.34，s)，H-18(0.61，s)，H-19(1.50，s)，H-21 (7.49，s)，H-22(6.48，s)，H-23(7.49，s)，H-28(1.25，s)，H-29(1.29，s)，H-30(1.15，s)，7-OH(4.79，d，J = 3.5);核磁共振碳譜數(shù)據(jù) δ。（ ppm，DMSO-Cl6，125MHz): 159 · 5 (CH，I-C)，120 · 3 (CH，2-C)，166.4(C，3-C)，84.6(C，4-C)，47.0(CH，5-C)，28.2(CH2,6-C)，68.8(CH，7-C)， 39.1(C，8-C)，40.0(CH，9-C)，42.7(C，10-C)，53.8(CH，11-C)，65.7(CH，12-C)，44.5(C，13-C)，57.3(CH，14-C)，201.8(C，15-C)，197.7(C，16-C)，35.2(CH，17-C)，21.1(CH 3，18-C)， 16.9(CH3，19-C)，123.3(C，20-C)，140.1(CH，2hC)，111.2(CH，22-C)，141.8(CH，23-C)， 31.7(〇1 3,28-〇,26.2(〇13,29-〇，19.3(〇13,30-〇;碳原子標(biāo)記參見圖1。紅外波譜表明該 化合物含有羥基(3464CHT 1)，羰基（1727CHT1)和烯烴（1681cnf1)等基團(tuán)；且其在232nm有紫外 吸收，表明含有α，β-不飽和酯羰基部分。1H匪R譜顯示五個甲基信號（δΗΙ. 50，1.29，1.25， 1.15,〇.61，各3!1，8)，|3型取代的呋喃環(huán)0!17.49,7.49和6.48，各1!1，8)，以及€[，0-不飽和酯 羰基部分[δH6·66(lH，d，J=12·0Hz)和5·69(lH，d，J=12·0Hz)]。 13CNMR、DEPT和HSQC譜中 顯示有26個碳信號，包括五甲基，一個亞甲基，十二個次甲基(三個含氧碳和五個烯烴碳）， 以及八個季碳(三個羰基碳，一個含氧碳和一個烯烴碳）。上述數(shù)據(jù)表示，該化合物為檸檬苦 素類化合物，再結(jié)合不飽和數(shù)表明該化合物為五環(huán)結(jié)構(gòu)。HMBC譜中H-I與C-3，C-5和C-IO; H-2與C-3;Me-28和Me-29與C-4;Me-19與C-I的相關(guān)性表明A環(huán)為α，β-不飽和七元內(nèi)酯環(huán)。HMBC 譜中，質(zhì)子(δΗ3.41，d，J = 3.5Hz)與C-7 (δ〇68.8)的相關(guān)性表明B環(huán)的C-7位連有一個羥基。 此外，兩個含氧碳信號[SC53.8(CH，11-C)和65.7(CH，12-C)]以及氫質(zhì)子信號[3.21(d，J = 4.5抱，!1-11)，3.11((1，1 = 4.5抱，!1-12)]表明(：環(huán)存在一個11，12-環(huán)氧基團(tuán)。通過圓8(：譜中 H-17與C-20，C-21和C-22的相關(guān)性可知呋喃環(huán)位于C-17位上。ROESY譜中，Η-6β與Me-19，Me-19 與 Me-29，Me-19 與 Me-30，Me-30 與 H-7，Me-30 與 H-12 以及 H-12 與 H-17 的相關(guān)性表明!1-7，!1-12，H-17，Me-19，Me-29 和 Me-30 為 β 構(gòu)型。此外，Η-6α 與 H-5，H-5 與 Me-28，H-5 與 H-9，H-9 與 H-14，H-14與7-OH，以及H-14與Me-18的相關(guān)性表明它們均為α構(gòu)型。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和 ROESY譜，以及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如圖1所示，立體構(gòu)型進(jìn)一 步通過E⑶試驗(yàn)確定，理論值與實(shí)驗(yàn)值基本一致(圖2)。
[0027]實(shí)施例2:化合物（I)藥理作用試驗(yàn) [0028] -、材料和儀器
[0029] 新生1~3天SD大鼠乳鼠（SPF級），雌雄不拘，由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供 (試驗(yàn)動物生產(chǎn)許可證:SCXK桂2009-0002)。化合物（I)(純度2 98% )為自制。胎牛血清購于 Hy Clone公司，DMEM培養(yǎng)基購于GIB⑶公