技術(shù)特征：

1.一種耐碳青霉烯類抗生素病菌的熒光探針，其特征在于，所述熒光探針的結(jié)構(gòu)通式為：

，

在結(jié)構(gòu)通式中：

X為碳原子或硫原子；當(dāng)X為CH時，R¹為甲基，能夠為R或S構(gòu)型；或者X為CH₂或S；

Y熒光基團芳香環(huán)上的氧原子、硫原子或連接基團（linker），包括4-羥甲基芐基或4-羥基或巰基芐基或氨基甲酸酯連接基團。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的耐碳青霉烯類抗生素病菌的熒光探針，其特征在于，所述熒光基團為吸收和發(fā)射的熒光基團，如7-羥基香豆素、熒光素、萘酰亞胺類染料或菁染料。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的耐碳青霉烯類抗生素病菌的熒光探針，其特征在于，所述熒光探針包括其羧酸酯或者羧酸鹽，所述熒光探針能與生物標(biāo)記物碳青霉烯酶選擇性識別，從而起到檢測碳青霉烯酶的作用。

4.一類耐碳青霉烯類抗生素病菌的熒光探針，其特征在于，所述熒光探針是在培南類抗生素母核的3’-位引入具有離去功能性的熒光基團或者發(fā)色基團，在碳青霉烯酶的作用下使β-內(nèi)酰胺環(huán)開環(huán)，從而釋放出熒光基團或者發(fā)色基團，產(chǎn)生光學(xué)性質(zhì)的變化，使所述熒光探針具有用于檢測青霉烯酶及其耐藥菌的性質(zhì)，其結(jié)構(gòu)通式的表示為：

，

在結(jié)構(gòu)通式中：

X為碳原子或硫原子；當(dāng)X為CH時，R¹為甲基，能夠為R或S構(gòu)型；或者X為CH₂或S；

Y熒光基團芳香環(huán)上的氧原子、硫原子或連接基團（linker），包括4-羥甲基芐基或4-羥基或巰基芐基或氨基甲酸酯連接基團。

5.權(quán)利要求1所述的耐碳青霉烯類抗生素病菌的熒光探針的合成方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）化合物2的制備

在氬氣保護下，將叔丁基二甲基氯硅烷（TBDMSCl）與咪唑依次加入到美羅培南中間體F9的干燥DMF溶液中；在20℃反應(yīng)5小時后加入乙酸乙酯，用水和飽和食鹽水洗滌，再用無水硫酸鈉（Na₂SO₄）干燥、濃縮，經(jīng)硅膠柱柱層析純化后得到白色固體的化合物2；

（2）中間體3,4的制備

將步驟（1）得到的化合物 2及四醋酸銠（Rh₂(OAc)₄加入到干燥二氯化鋅(ZnCl₂)的二氯甲烷體系中，在氬氣保護下，將反應(yīng)體系加熱回流90分鐘；通過薄層色譜（TLC）監(jiān)測反應(yīng)完全后即可得到中間體3；

將反應(yīng)體系冷卻至-55℃，將2,2,6,6-四甲基哌啶與二異丙基乙二胺混合后滴加到反應(yīng)體系；然后，滴加三氟甲磺酸酐（Tf₂O）；反應(yīng)完全后，將反應(yīng)液經(jīng)硅膠柱柱層析純化后得到白色固體的中間體4；

（3）化合物5的制備

將ZnCl₂與N,N-甲基吡咯烷酮（NMP）體系在真空狀態(tài)下脫氣置換氬氣（Ar）；之后依次加入中間體4、三（2-呋喃）磷、三（二亞芐基丙酮）二鈀（Pd₂dba₃），將所得溶液在25℃下攪拌10min，然后緩慢地加入三丁基乙烯基錫；將反應(yīng)體系在30℃下反應(yīng)10消失后用乙酸乙酯稀釋，再用水洗兩次以及用飽和食鹽水洗一次，將有機相用無水硫酸鈉干燥、濃縮；經(jīng)硅膠柱柱層析純化后得到白色固體的化合物5；

（4）化合物6的制備

將步驟（3）得到的化合物5溶解于四氫呋喃（THF）與水中，加入四氧化鋨（OsO₄）水溶液，同時加入高碘酸鈉（NaIO₄）和高碘酸（H₅IO₆）；將反應(yīng)體系在25℃室溫下攪拌25min，之后倒入到10%的硫代硫酸鈉（Na₂S₂O₃）水溶液中，用乙酸乙酯萃取，無水硫酸鈉干燥、濃縮，經(jīng)硅膠柱柱層析純化后得到黃色固體的化合物6；

（5）化合物7的制備

在氬氣保護下，向反應(yīng)瓶中加入步驟（4）得到的化合物6及干燥的四氫呋喃，冷卻到-15℃后加入硼烷-四氫呋喃復(fù)合物，將反應(yīng)體系在-15℃溫度下攪拌10min，之后向反應(yīng)體系中加入冰冷乙酸乙酯與水，用乙酸乙酯萃取，用無水硫酸鈉干燥、濃縮，得到化合物7，無需純化直接進行下一步反應(yīng)；

（6）化合物8的制備

在氬氣保護下，在反應(yīng)瓶中加入步驟（5）得到的化合物7及二氯甲烷, 冷卻到 0℃后緩慢加入吡啶及異丁基氯甲酸酯，在0℃條件下反應(yīng)4h，經(jīng)硅膠柱柱層析純化后得到化合物8；

（7）化合物9的制備

在氬氣保護下，在反應(yīng)瓶中加入步驟（5）得到的化合物8及甲苯和四氫呋喃，將所述溶液在液氮乙醇體系中冷卻到-60℃，脫除溶液中的氣體；加入（二亞芐基丙酮）二鈀-氯仿加合物（Pd₂dba₃-CHCl₃）和亞磷酸三乙酯；將反應(yīng)體系在25℃室溫下攪拌2h，之后加入步驟（5）得到的化合物8和7-羥基香豆素；將反應(yīng)體系再脫氣后，在30℃條件下反應(yīng)18小時；將反應(yīng)液去除溶劑后，用石油醚、乙酸乙酯作為流動相在硅膠柱上純化得到白色固體的化合物9；

（8）化合物10的制備

將步驟（7）得到的化合物9溶解于N-甲基吡咯烷酮與N,N-二甲基甲酰胺的混合液中，N-甲基吡咯烷酮與N,N-二甲基甲酰胺的質(zhì)量比為1:3，加入二氟化氫銨，在室溫下反應(yīng)40h，之后加入乙酸乙酯稀釋反應(yīng)體系，將乙酸乙酯相用水洗，再用飽和食鹽水洗，用無水硫酸鈉干燥、濃縮；將所得混合物用石油醚與乙酸乙酯作為流動相經(jīng)硅膠柱柱層析純化后得到化合物10 ；

（9）化合物CPC-1的制備

將步驟（9）得到的化合物10溶解于四氫呋喃中，加入pH為7.0 的0.2M磷酸鹽緩沖液（PB）以及5%的鉑碳催化劑（Pt/C），置換氫氣后在25℃下反應(yīng)2h；將反應(yīng)液過濾除掉鉑碳后加入去離子水，用乙酸乙酯萃取，將水相用反相C18制備柱純化，冷凍干燥，得到白色固體的化合物CPC-1，即所述的熒光探針：

所述熒光探針（CPC-1）的合成路徑及結(jié)構(gòu)通式為：

。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的合成方法，其特征在于，所述化合物8為關(guān)鍵中間體，以此為衍生物能夠合成其他熒光基團的熒光探針化合物，或者是以4-羥基、氨基甲酸酯為連接基團的熒光探針化合物。

7.權(quán)利要求1所述的熒光探針在檢測碳青霉烯酶和含有碳青霉烯耐藥菌以及在生物、預(yù)防保健、臨床診斷各領(lǐng)域的應(yīng)用。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述熒光探針能制成試紙、試劑盒或者檢測芯片用于檢測。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用的方法包括以下步驟：

（1）將本發(fā)明的熒光探針與待測樣品在一定條件下混合，形成具有光學(xué)性質(zhì)的化合物；

（2）測量具有光學(xué)性質(zhì)的化合物的光學(xué)信號變化，從而確定待測樣品中碳青霉烯酶或者含有碳青霉烯耐藥菌的含量或濃度。