本發(fā)明涉及分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種檢測(cè)鮑曼不動(dòng)桿菌耐碳青霉烯類抗生素基因的引物、探針、方法及試劑盒。

背景技術(shù)：

鮑曼不動(dòng)桿菌在醫(yī)院環(huán)境中廣泛分布，是目前引起院內(nèi)感染的重要病原菌，主要引起呼吸道感染，也可引發(fā)敗血癥、泌尿系統(tǒng)感染、繼發(fā)性腦膜炎等。鮑曼不動(dòng)桿菌院內(nèi)感染最常見(jiàn)的部位是肺部，是醫(yī)院獲得性肺炎、尤其是呼吸機(jī)相關(guān)肺炎重要的致病菌。鮑曼不動(dòng)桿菌具有在體外長(zhǎng)期存活能力，易造成克隆播散。

鮑曼不動(dòng)桿菌感染危險(xiǎn)因素包括：長(zhǎng)時(shí)間住院、入住監(jiān)護(hù)室、接受機(jī)械通氣、侵入性操作、抗菌藥物暴露以及嚴(yán)重基礎(chǔ)疾病等鮑曼不動(dòng)桿菌感染可延長(zhǎng)病人的治療時(shí)間。近年來(lái)由于多重耐藥菌株的增加，鮑曼不動(dòng)桿菌已成為最難治療和控制的院內(nèi)獲得性感染。鮑曼不動(dòng)桿菌感染易發(fā)生在重癥監(jiān)護(hù)室(ICU)和燒傷病房。且由于使用抗生素使得鮑曼不動(dòng)桿菌具有高度的耐藥性和多重耐藥性，對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)有助于防護(hù)其對(duì)病人的危害。

目前國(guó)內(nèi)醫(yī)院主要采用細(xì)菌培養(yǎng)鑒定及藥敏試驗(yàn)法鑒定鮑曼不動(dòng)桿菌和耐碳青霉烯類鮑曼不動(dòng)桿菌CRAB，這種檢測(cè)方法不僅操作繁瑣、費(fèi)時(shí)費(fèi)力、靈敏度較低，重復(fù)性差，無(wú)法了解抗性引起的分子生物學(xué)機(jī)制。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供一種檢測(cè)鮑曼不動(dòng)桿菌耐碳青霉烯類抗生素基因的引物、探針、方法及試劑盒，解決現(xiàn)有技術(shù)中采用細(xì)菌培養(yǎng)鑒定及藥敏試驗(yàn)法鑒定鮑曼不動(dòng)桿菌和耐碳青霉烯類鮑曼不動(dòng)桿菌CRAB，不僅操作繁瑣、費(fèi)時(shí)費(fèi)力、靈敏度較低，重復(fù)性差，無(wú)法了解抗性引起的分子生物學(xué)機(jī)制的技術(shù)問(wèn)題。

本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

一種檢測(cè)鮑曼不動(dòng)桿菌耐碳青霉烯類抗生素基因的引物和探針，檢測(cè)鮑曼不動(dòng)桿菌苯唑西林酶OXA51基因的引物核苷酸序列如SEQIDNO：2～3所示，檢測(cè)鮑曼不動(dòng)桿菌苯唑西林酶OXA51基因的Taqman探針的核苷酸序列如SEQIDNO：4所示；檢測(cè)耐碳青霉烯類抗生素苯唑西林酶OXA23基因的引物核苷酸序列如SEQIDNO：6～7所示，檢測(cè)耐碳青霉烯類抗生素苯唑西林酶OXA23基因的Taqman探針的核苷酸序列如SEQIDNO：8所示。

一種檢測(cè)鮑曼不動(dòng)桿菌耐碳青霉烯類抗生素基因的方法，包括：

樣本核酸制備，以獲得核酸模板；

分別針對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌苯唑西林酶OXA51基因及耐碳青霉烯類抗生素苯唑西林酶OXA23基因設(shè)計(jì)特異性引物和熒光標(biāo)記探針，其中，檢測(cè)鮑曼不動(dòng)桿菌的引物核苷酸序列如SEQIDNO：2～3所示，檢測(cè)鮑曼不動(dòng)桿菌的Taqman探針的核苷酸序列如SEQIDNO：4所示；檢測(cè)耐碳青霉烯類抗生素基因的引物核苷酸序列如SEQIDNO：6～7所示，檢測(cè)耐碳青霉烯類抗生素基因的Taqman探針的核苷酸序列如SEQIDNO：8所示；

配置酶試劑，其中，所述酶由水生棲熱菌DNA聚合酶(Taq酶)和尿嘧啶-N-糖基化酶(UNG酶)混合組成；

取陽(yáng)性對(duì)照品、陰性對(duì)照品置于離心管中，分別加入核酸抽提液充分混勻，并進(jìn)行加熱和離心處理，取上清液用于熒光PCR檢測(cè)；

將OXA51基因PCR檢測(cè)混合液與酶試劑震蕩混勻，進(jìn)行離心處理；將OXA23基因PCR檢測(cè)混合液與酶試劑震蕩混勻，進(jìn)行離心處理；

分別取加酶混勻后的PCR檢測(cè)混合液置于熒光PCR管中，取抽提后的DNA模板、陰性對(duì)照品和陽(yáng)性對(duì)照品上清液加入已有PCR檢測(cè)混合液的熒光PCR管中，進(jìn)行熒光PCR擴(kuò)增，反應(yīng)條件為：37℃ 2分鐘，94℃ 2分鐘，循環(huán)1次；93℃ 15秒，56℃15秒，60℃30秒，循環(huán)40次，并在此采集熒光信號(hào)；

采用熒光PCR儀上的FAM通道進(jìn)行擴(kuò)增，通過(guò)熒光定量PCR儀所收集數(shù)據(jù)確定檢測(cè)位點(diǎn)的基因型。

一種檢測(cè)鮑曼不動(dòng)桿菌耐碳青霉烯類抗生素基因的試劑盒，包括核酸抽提液、第一引物探針混合液、第二引物探針混合液、PCR反應(yīng)酶系、陰性對(duì)照品、陽(yáng)性對(duì)照品和分隔并集中包裝這些試劑瓶或管的包裝盒，其中，第一引物探針混合液由脫氧核糖核苷三磷酸dN(U)TP、鮑曼不動(dòng)桿菌苯唑西林酶OXA51基因的上、下游引物及一條熒光標(biāo)記探針組成，第二引物探針混合液由脫氧核糖核苷三磷酸dN(U)TP、耐碳青霉烯類抗生素苯唑西林酶OXA23基因的上、下游引物及一條熒光標(biāo)記探針組成；

其中，OXA51基因特異性的上游和下游引物的序列如SEQIDNO：2～3所示，OXA51基因的Taqman探針序列如SEQIDNO：4所示，OXA51基因特異性的上游和下游引物的序列如SEQIDNO：6～7所示，OXA23基因的Taqman探針序列如SEQIDNO：8所示，兩個(gè)探針的5’端結(jié)合有熒光報(bào)告基團(tuán)FAM，3’端合有淬滅基團(tuán)TAMRA。

本發(fā)明的有益效果：本試劑盒具有準(zhǔn)確率高，臨床試驗(yàn)結(jié)果與DNA測(cè)序結(jié)果總符合率99％以上；特異性強(qiáng)，與痰液中常見(jiàn)的致病菌白喉?xiàng)U菌、流感嗜血桿菌、變形桿菌、奇異變形桿菌、陰溝腸桿菌、白色念珠菌、腦膜炎奈瑟菌、肺炎鏈球菌、糞腸球菌、表皮葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、肺炎克雷伯氏菌、產(chǎn)酸克雷伯菌、洋蔥伯克霍爾德菌、銅綠假單胞菌均無(wú)交叉反應(yīng)；靈敏度高，按照質(zhì)?？截悢?shù)確定的最低檢測(cè)限為10³copies/mL，按照菌培養(yǎng)法確定的最低檢測(cè)限為10³CFU/mL。本發(fā)明可用于體外定性檢測(cè)人痰液樣本中鮑曼不動(dòng)桿菌苯唑西林酶基因OXA51和耐碳青霉烯類抗生素苯唑西林酶基因OXA23，為臨床確定CRAB感染提供輔助診斷方法，為臨床醫(yī)生用藥提供參考。

附圖說(shuō)明

為了更清楚地說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，顯而易見(jiàn)地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實(shí)施例，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)性的前提下，還可根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。

圖1為本發(fā)明實(shí)施例四的鮑曼不動(dòng)桿菌感染樣本的熒光定量PCR曲線圖；

圖2為本發(fā)明實(shí)施例四的耐碳青霉烯類鮑曼不動(dòng)桿菌CRAB感染樣本的熒光定量PCR曲線圖。

具體實(shí)施方式

為使本發(fā)明的上述目的、特征和優(yōu)點(diǎn)能夠更加明顯易懂，下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明。

實(shí)施例一

本發(fā)明實(shí)施例提供了一種檢測(cè)鮑曼不動(dòng)桿菌耐碳青霉烯類抗生素基因的引物和探針，檢測(cè)鮑曼不動(dòng)桿菌苯唑西林酶OXA51基因的引物核苷酸序列如SEQIDNO：2～3所示，檢測(cè)鮑曼不動(dòng)桿菌苯唑西林酶OXA51基因的Taqman探針的核苷酸序列如SEQIDNO：4所示；檢測(cè)耐碳青霉烯類抗生素苯唑西林酶OXA23基因的引物核苷酸序列如SEQIDNO：6～7所示，檢測(cè)耐碳青霉烯類抗生素苯唑西林酶OXA23基因的Taqman探針的核苷酸序列如SEQIDNO：8所示；

其中，針對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌苯唑西林酶OXA51基因設(shè)計(jì)的特異性引物的序列如下：

上游引物P-OXA51-F：5’-TTTATCAAGATTTAGCTCGT-3’

下游引物P-OXA51-R：5’-AATTATCGACTTGGGTACCGAT-3’

針對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌苯唑西林酶OXA51基因的TaqMan熒光標(biāo)記探針序列如下：

T-OXA51：5’-FAM-ACACGCTTCACTTCATTAGACATGAG-TAMRA-3’

針對(duì)耐碳青霉烯類抗生素苯唑西林酶OXA23基因設(shè)計(jì)的特異性引物的序列如下：

上游引物P-OXA23-F：5’-TCTGCAGTCCCAGTCTATCAGG-3’

下游引物P-OXA23-R：5’-ACCTGCTGTCCAATTTCAGCA-3’

針對(duì)耐碳青霉烯類抗生素苯唑西林酶OXA23基因的TaqMan熒光標(biāo)記探針序列如下：

T-OXA23：5’-FAM-TTGCGCGACGTATCGGTCTTGATCTCAT-TAMRA-3’

上述兩種Taqman探針的核苷酸序列5’端標(biāo)記的熒光報(bào)告基團(tuán)為FAM，3’端標(biāo)記的淬滅基團(tuán)為T(mén)AMRA。

實(shí)施例二

本發(fā)明實(shí)施例中又提供了一種檢測(cè)鮑曼不動(dòng)桿菌耐碳青霉烯類抗生素基因的方法，包括：

步驟101、樣本核酸制備，以獲得核酸模板；

步驟102、分別針對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌苯唑西林酶OXA51基因及耐碳青霉烯類抗生素苯唑西林酶OXA23基因設(shè)計(jì)特異性引物和熒光標(biāo)記探針；

其中，檢測(cè)鮑曼不動(dòng)桿菌的引物核苷酸序列如SEQIDNO：2～3所示，檢測(cè)鮑曼不動(dòng)桿菌的Taqman探針的核苷酸序列如SEQIDNO：4所示；檢測(cè)耐碳青霉烯類抗生素基因的引物核苷酸序列如SEQIDNO：6～7所示，檢測(cè)耐碳青霉烯類抗生素基因的Taqman探針的核苷酸序列如SEQIDNO：8所示。

步驟103、配置酶試劑，其中，所述酶由水生棲熱菌DNA聚合酶(Taq酶)和尿嘧啶-N-糖基化酶(UNG酶)混合組成；

步驟104、取陽(yáng)性對(duì)照品、陰性對(duì)照品置于離心管中，分別加入核酸抽提液充分混勻，并進(jìn)行加熱和離心處理，取上清液用于熒光PCR檢測(cè)；

步驟105、將OXA51基因PCR檢測(cè)混合液與酶試劑震蕩混勻，進(jìn)行離心處理；將OXA23基因PCR檢測(cè)混合液與酶試劑震蕩混勻，進(jìn)行離心處理；

其中，PCR檢測(cè)混合液由3.2μL 2.5mmol/L dN(U)TP、1.2μL 10μmol/L 引物、0.4μL 10μmol/L探針、4μL 10×PCR Buffer、4μL25mmol/LMgCl₂及20.6μL滅菌純化水組成。

步驟106、分別取加酶混勻后的PCR檢測(cè)混合液置于熒光PCR管中，取抽提后的DNA模板、陰性對(duì)照品和陽(yáng)性對(duì)照品上清液加入已有PCR檢測(cè)混合液的熒光PCR管中，進(jìn)行熒光PCR擴(kuò)增，反應(yīng)條件為：37℃ 2分鐘，94℃ 2分鐘，循環(huán)1次；93℃ 15秒，56℃15秒，60℃30秒，循環(huán)40次，并在此采集熒光信號(hào)；

步驟107、采用熒光PCR儀上的FAM通道進(jìn)行擴(kuò)增，通過(guò)熒光定量PCR儀所收集數(shù)據(jù)確定檢測(cè)位點(diǎn)的基因型。

其中，檢測(cè)結(jié)果根據(jù)C_T值進(jìn)行判定，儀器C_T欄顯示Undet.(ABI StepOnePlus)或不顯示C_T值(Eppendorf Mastercycler ep realplex熒光定量PCR檢測(cè)系統(tǒng))，表示檢測(cè)樣品低于檢測(cè)限，報(bào)告為陰性；待檢樣品C_T≤35，檢測(cè)結(jié)果報(bào)告為陽(yáng)性；待檢樣品C_T顯示在35～40之間，需重復(fù)測(cè)定，C_T顯示仍在35～40之間，且擴(kuò)增曲線呈S型，則判斷為陽(yáng)性；若擴(kuò)增結(jié)果為一直線，則判斷為陰性。

本發(fā)明的技術(shù)方法是采用Taqman探針實(shí)時(shí)熒光PCR法，在同源性比對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌特異性基因OXA51、耐碳青霉烯類抗生素基因OXA23序列的基礎(chǔ)上，選取保守片段分別設(shè)計(jì)針對(duì)這2個(gè)基因的特異性引物和特異性的熒光標(biāo)記探針。探針5’端標(biāo)記FAM熒光素為熒光報(bào)告基團(tuán)(用R表示)，3’端標(biāo)記TAMRA熒光素為熒光淬滅基團(tuán)(用Q表示)，它在近距離內(nèi)能吸收5’端熒光報(bào)告基團(tuán)發(fā)出的熒光信號(hào)。PCR反應(yīng)進(jìn)入退火階段時(shí)，探針先與模板上的目的基因結(jié)合，隨后引物與目的基因結(jié)合，此時(shí)探針上R基團(tuán)發(fā)出的熒光信號(hào)被Q基團(tuán)吸收，儀器檢測(cè)不到熒光信號(hào)；當(dāng)反應(yīng)進(jìn)行到延伸階段時(shí)，Taq DNA聚合酶的5’→3’的外切核酸酶功能將探針降解。這樣探針上的R基團(tuán)游離出來(lái)，所發(fā)出的的熒光信號(hào)沒(méi)被Q基團(tuán)吸收，檢測(cè)器能檢測(cè)到熒光信號(hào)。隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，PCR產(chǎn)物與熒光信號(hào)的增長(zhǎng)呈現(xiàn)對(duì)應(yīng)關(guān)系。通過(guò)熒光信號(hào)增長(zhǎng)曲線，實(shí)現(xiàn)目的基因的檢測(cè)。

實(shí)施例三

本發(fā)明實(shí)施例還提供了一種檢測(cè)鮑曼不動(dòng)桿菌耐碳青霉烯類抗生素基因的試劑盒，包括核酸抽提液、第一引物探針混合液、第二引物探針混合液、PCR反應(yīng)酶系、陰性對(duì)照品、陽(yáng)性對(duì)照品和分隔并集中包裝這些試劑瓶或管的包裝盒，其中，第一引物探針混合液由脫氧核糖核苷三磷酸dN(U)TP、鮑曼不動(dòng)桿菌苯唑西林酶OXA51基因的上、下游引物及一條熒光標(biāo)記探針組成，第二引物探針混合液由脫氧核糖核苷三磷酸dN(U)TP、耐碳青霉烯類抗生素苯唑西林酶OXA23基因的上、下游引物及一條熒光標(biāo)記探針組成；

其中，OXA51基因特異性的上游和下游引物的序列如SEQIDNO：2～3所示，OXA51基因的Taqman探針序列如SEQIDNO：4所示，OXA51基因特異性的上游和下游引物的序列如SEQIDNO：6～7所示，OXA23基因的Taqman探針序列如SEQIDNO：8所示，兩個(gè)探針的5’端結(jié)合有熒光報(bào)告基團(tuán)FAM，3’端合有淬滅基團(tuán)TAMRA。

所述核酸抽提液由3％(M/V)Chelex-100、0.5％(V/V)Tris-HCl，1M，pH9.0組成。

所述第一引物探針混合液和所述第二引物探針混合液分別由3.2μL 2.5mmol/L dN(U)TP、1.2μL 10μmol/L引物及0.4μL 10μmol/L探針組成。

所述第一引物探針混合液和所述第二引物探針混合液中還包括4μL 10×PCR Buffer、4μL25mmol/LMgCl₂及20.6μL滅菌純化水。

PCR反應(yīng)酶系由5U/μL Taq DNA聚合酶和2U/μL UNG酶按體積比3∶1比例混合組成。

PCR擴(kuò)增的條件為：37℃×2min，94℃×2min，循環(huán)1次；93℃×15s，56℃×15s，60℃×30s，循環(huán)40次；反應(yīng)體系為40μL，選用FAM通道進(jìn)行擴(kuò)增。

所述陽(yáng)性對(duì)照品為含有滅活的含有OXA51基因片段的工程菌E-OXA51、含有OXA23基因片段的工程菌E-OXA23的菌溶液，菌濃度為10⁶CFU/mL；陰性對(duì)照品為含有滅活的大腸桿菌溶液，菌濃度為10⁶CFU/mL。

本試劑盒具有準(zhǔn)確率高，臨床試驗(yàn)結(jié)果與DNA測(cè)序結(jié)果總符合率99％以上；特異性強(qiáng)，與痰液中常見(jiàn)的致病菌白喉?xiàng)U菌、流感嗜血桿菌、變形桿菌、奇異變形桿菌、陰溝腸桿菌、白色念珠菌、腦膜炎奈瑟菌、肺炎鏈球菌、糞腸球菌、表皮葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、肺炎克雷伯氏菌、產(chǎn)酸克雷伯菌、洋蔥伯克霍爾德菌、銅綠假單胞菌均無(wú)交叉反應(yīng)；靈敏度高，按照質(zhì)?？截悢?shù)確定的最低檢測(cè)限為10³copies/mL，按照菌培養(yǎng)法確定的最低檢測(cè)限為10³CFU/mL。本發(fā)明可用于體外定性檢測(cè)人痰液樣本中鮑曼不動(dòng)桿菌苯唑西林酶基因OXA51和耐碳青霉烯類抗生素苯唑西林酶基因OXA23，為臨床確定CRAB感染提供輔助診斷方法，為臨床醫(yī)生用藥提供參考。

實(shí)施例四

實(shí)際應(yīng)用過(guò)程中，首先收集臨床樣本，經(jīng)細(xì)菌培養(yǎng)鑒定與藥敏試驗(yàn)法確定為鮑曼不動(dòng)桿菌感染、CRAB感染、陰性樣本各3例，采用本試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，統(tǒng)計(jì)結(jié)果符合率。

1、樣本核酸制備

痰液：取痰液加入4倍體積的4％NaOH，搖勻室溫下放置30min以上，待液化完全，取1.0mL樣品至1.5mL離心管中，加0.5mL 4％NaOH消化10min，12,000rpm離心5min，棄上清；沉淀加1mL無(wú)菌生理鹽水打勻洗滌，12,000rpm離心5min，棄上清；用生理鹽水重復(fù)洗滌一次。去盡上清，沉淀中直接加入50μL核酸抽提液，充分混勻，98℃加熱10min(誤差不超過(guò)1min)。12,000rpm離心5min，取上清5μL用于熒光PCR檢測(cè)。

2、對(duì)照品準(zhǔn)備

取陽(yáng)性對(duì)照品、陰性對(duì)照品各100μL置于1.5mL離心管中(凍存試劑融解后震蕩混勻10s)，分別加入核酸抽提液50μL充分混勻，98℃加熱10min(誤差不超過(guò)1min)。12,000rpm離心5min，取上清5μL用于熒光PCR檢測(cè)。

3、酶試劑配制

取n×35μL鮑曼不動(dòng)桿菌苯唑西林酶基因51(OXA51)PCR檢測(cè)混合液與n×0.4μL酶(Taq+UNG)，震蕩混勻，3000rpm離心數(shù)秒。取n×35μL鮑曼不動(dòng)桿菌耐碳青霉烯類抗生素苯唑西林酶基因23(OXA23)PCR檢測(cè)混合液與n×0.4μL酶(Taq+UNG)，震蕩混勻，3000rpm離心數(shù)秒。

4、加樣

分別取35μL加酶混勻后的PCR檢測(cè)混合液置于熒光PCR管中，取抽提后的標(biāo)本、陰性對(duì)照品和陽(yáng)性對(duì)照品上清液各5μL分別加入已有PCR檢測(cè)混合液的熒光PCR管中，蓋好管蓋，進(jìn)行熒光PCR擴(kuò)增。

5、PCR擴(kuò)增

反應(yīng)管置于熒光PCR儀上，推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：37℃×2min，94℃×2min，循環(huán)1次；93℃×15s，56℃×15s 60℃×30s，循環(huán)40次；單點(diǎn)熒光檢測(cè)在60℃，反應(yīng)體系為40μL，熒光通道檢測(cè)選擇：選用FAM通道。

6、結(jié)果判定

檢測(cè)結(jié)束后，基線調(diào)整取6-15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)，閾值設(shè)定原則以閾值線剛好超過(guò)陰性對(duì)照品檢測(cè)熒光曲線的最高點(diǎn)。儀器C_T欄顯示Undet(ABI StepOnePlus)或不顯示C_T值(Eppendorf Mastercycler ep realplex)熒光定量PCR檢測(cè)系統(tǒng)，表示檢測(cè)樣品低于檢測(cè)限，報(bào)告為陰性；待檢樣品C_T≤35，檢測(cè)結(jié)果報(bào)告為陽(yáng)性；待檢樣品C_T顯示在35～40之間，需重復(fù)測(cè)定，C_T顯示仍在35～40之間，且擴(kuò)增曲線呈S型，則判斷為陽(yáng)性；若擴(kuò)增結(jié)果為一直線，則判斷為陰性。

7、檢測(cè)結(jié)果檢驗(yàn)

本發(fā)明的檢測(cè)結(jié)果與細(xì)菌培養(yǎng)鑒定與藥敏試驗(yàn)結(jié)果一致，熒光PCR檢測(cè)結(jié)果如圖1和圖2所示，圖1為鮑曼不動(dòng)桿菌感染樣本的熒光定量PCR曲線圖，可見(jiàn)隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，OXA51對(duì)應(yīng)的PCR產(chǎn)物與熒光信號(hào)的增長(zhǎng)呈現(xiàn)對(duì)應(yīng)關(guān)系，可判斷OXA51為陽(yáng)性，OXA23為陰性。通過(guò)熒光信號(hào)增長(zhǎng)曲線；圖2為耐碳青霉烯類鮑曼不動(dòng)桿菌CRAB感染樣本的熒光定量PCR曲線圖，可判斷OXA51和OXA23均為陽(yáng)性。

以上對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)介紹，本文中應(yīng)用了具體個(gè)例對(duì)本發(fā)明的原理及實(shí)施方式進(jìn)行了闡述，以上實(shí)施例的說(shuō)明只是用于幫助理解本發(fā)明的方法及其核心思想；同時(shí)，對(duì)于本領(lǐng)域的一般技術(shù)人員，依據(jù)本發(fā)明的思想，在具體實(shí)施方式及應(yīng)用范圍上均會(huì)有改變之處，綜上所述，本說(shuō)明書(shū)內(nèi)容不應(yīng)理解為對(duì)本發(fā)明的限制。