專利名稱：用于治療蛋白激酶依賴性疾病的吡唑并[1,5－a]嘧啶－7－基－胺衍生物的制作方法
發(fā)明概述本發(fā)明涉及吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺衍生物在治療蛋白激酶依賴性疾病(protein kinase dependent diseases)中的用途或者用于制備治療所述疾病的藥物組合物的用途，涉及用吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺衍生物治療所述疾病的方法，涉及用于治療所述疾病的包含吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺衍生物的藥物制品，涉及新的吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺衍生物，涉及制造新的吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺衍生物和藥物制品的方法，涉及上述吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺衍生物的用途或使用方法，和/或涉及這些用于治療動物或人體的吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺衍生物。
背景技術(shù)：
已有文獻(xiàn)報道吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基-胺衍生物為苯并二氮雜受體的配體(例如S.Selleri等人，Bioorg.Med.Chem 7(12)，2705-11(1999))、促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子的拮抗劑(EP 1097709)、血管緊張素II受體拮抗劑(例如S.Takeshi等人，Japn.Pharm.Bull.47(7)，928-38(1999))、單氧化物合成酶抑制劑(JP 10101671)、鎮(zhèn)痛藥(WO 9535298)、殺真菌劑(EP071792)或者抗炎劑(WO 9218504)。
我們現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基亞胺殘基也可用作設(shè)計有效激酶抑制劑的模板。
考慮到大量的蛋白激酶抑制劑和眾多增生性和其他蛋白激酶相關(guān)的疾病，總是存在提供用作蛋白激酶抑制劑并因此用于治療相關(guān)疾病的新類型化合物的需要。
從增生性疾病的可能療法觀點來看，所需的是有過剩的化合物類型，其每一類型適合特定的蛋白激酶或蛋白激酶類型，從而允許實現(xiàn)特定的治療。因此，存在發(fā)現(xiàn)允許此類特定抑制作用的新類型化合物的強烈需要。
發(fā)明概述驚奇地發(fā)現(xiàn)在此描述的吡唑[1，5a]嘧啶-7-基胺化合物類型，尤其是落入這種類型的新化合物具有藥學(xué)有利的性質(zhì)，允許抑制特定類型或種類或組的激酶，尤其允許抑制c-Abl、Bcr-Abl、c-Kit、c-Raf、Flt-1、Flt-3、KDR、Her-1、PDGFR激酶、c-Src、RET受體激酶、FGF-R1、FGF-R2、FGF-R3、FGF-R4、肝配蛋白受體激酶(例如EphB2激酶、EphB4激酶和相關(guān)的Eph激酶)、酪蛋白激酶(CK-1、CK-2、G-CK)、Pak、ALK、ZAP70、Jak1、Jak2、Axl、Cdk1、cdk4、cdk5、Met、FAK、Pyk2、Syk、胰島素受體激酶、Tie-2或激酶如Bcr-Abl、c-Kit、c-Raf、Flt-3、FGF-R3、PDGF受體、RET和Met的組成型激活突變(激活的激酶)。在此所述的吡唑并[1，5a]嘧啶-7-基胺化合物類型還抑制所述激酶的突變體。除了這種確定的活性外，吡唑并[1，5a]嘧啶-7-基胺衍生物還具有主鏈允許多種取代模式的優(yōu)勢，其中所述的多種取代模式提供了實現(xiàn)與靶激酶結(jié)合位點的特定相互作用的精確調(diào)節(jié)的廣泛可能性，從而打開了新的有前景的并提供不同程度特異性的激酶抑制劑。
考慮到這些活性，化合物可用于此類激酶、尤其是那些提到的激酶的異?；蜻^度活性相關(guān)疾病的治療。
發(fā)明詳述在一個實施方案中，本發(fā)明涉及式(I)化合物或其可藥用鹽用于治療蛋白激酶依賴性疾病的用途
其中R2為H；取代的或未取代的芳基；取代的或未取代的雜芳基；取代的或未取代的脂肪族殘基；官能團；或者通過一個連接基團或原子與吡唑并[1，5a]嘧啶基環(huán)連接的取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的雜芳基或取代的或未取代的脂肪族殘基；R3可為H、取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的雜芳基、取代的或未取代的脂肪族殘基、官能團、或者可通過連接基團或原子與吡唑并[1，5a]嘧啶基環(huán)連接的取代的或未取代的脂肪族殘基，R2或R3中至少之一為取代的或未取代的芳基；取代的或未取代的雜芳基；或者通過一個連接基團或原子與吡唑并[1，5a]嘧啶基環(huán)連接的取代的或未取代的雜芳基或者取代的或未取代的芳基殘基；A為H、鹵素(如溴)、脂族部分、官能團、取代的或未取代的芳基或取代的或未取代的雜芳基，且R1為H、鹵素或低級烷基。
優(yōu)選的實施方案是這樣的上述化合物或其可藥用鹽用于治療蛋白激酶依賴性疾病的用途其中R2為H；低級烷基；環(huán)烷基；芐基；低級烷基取代的苯并噻吩基、吲哚基；任選地由低級烷基取代的吡啶基或噻唑基；未取代的苯基或由一個或兩個取代基取代的苯基，其中所述取代基選自鹵素、羥基、烷氧基、芐氧基、環(huán)烷基、氨基、乙酰氨基、由一個或兩個鹵素取代的低級烷基磺酰胺基和苯磺酰胺基；R3為H；任選地由鹵素取代的低級烷基；苯基；吡啶基或唑基；A為(a)H、鹵素、苯并噻吩基、吡啶基、甲基哌嗪基苯氧基、低級烷基取代的吲哚基，(b)未取代的或者一個或多個取代基取代的苯基，其中所述的取代基選自單、二或三低級烷氧基；二低級烷基胺基；任選地由烷基二取代的嗎啉基；由一個或多個取代基取代的哌嗪基，其中所述的取代基選自低級烷基、低級烷氧基、低級烷基哌嗪基、吡咯烷基、二烷基氨基和低級鏈烷醇；且R1為H。
蛋白激酶依賴性疾病優(yōu)選地為一種依賴于c-Abl、Bcr-Abl、c-Kit、c-Raf、Flt-1、Flt-3、Her-1、KDR、PDGFR激酶、c-Src、RET受體激酶、FGF-R1、FGF-R2、FGF-R3、FGF-R4、肝配蛋白受體激酶(例如EphB2激酶、EphB4激酶和相關(guān)的Eph激酶)、酪蛋白激酶(CK-1、CK-2、G-CK)、Pak、ALK、ZAP70、Jak1、Jak2、Axl、Cdk1、cdk4、cdk5、Met、FAK、Pyk2、Syk、胰島素受體激酶、Tie-2或激酶如Bcr-Abl、c-Kit、c-Raf、Flt-3、FGF-R3、PDGF受體、RET和Met的組成型激活突變(激活的激酶)的疾病以及(尤其是異常高度表達(dá)或激活的)激酶依賴性疾病或者依賴于激酶途徑活化的疾病，或者依賴于剛剛提到的激酶中任意兩個或多個的疾病。
蛋白激酶依賴性疾病更優(yōu)選地為依賴于c-abl、Flt-3、KDR、c-Src、RET、EphB4、c-kit、cdk1、FGFR-1、c-raf、Her-1、Ins-R或Tek的一種疾病，最優(yōu)選地，待治療的疾病為增生性疾病，優(yōu)選地為良性或尤其是惡性腫瘤，更優(yōu)選地為腦、腎臟、肝臟、腎上腺、膀胱、乳房、胃(尤其是胃腫瘤)、卵巢、結(jié)腸、直腸、前列腺、胰、肺、陰道、甲狀腺的癌、肉瘤、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、多發(fā)性骨髓瘤或胃腸癌，尤其為結(jié)腸癌或結(jié)腸直腸腺瘤，或者頸部和頭部腫瘤、表皮過度增殖尤其是牛皮癬、前列腺增生、瘤形成，尤其是上皮特征的瘤形成，優(yōu)選地為乳房癌或白血病。
在另一個實施方案中，待治療的疾病為持續(xù)的血管發(fā)生引起的疾病，如牛皮癬；卡波濟肉瘤；再狹窄，例如支架誘導(dǎo)的再狹窄；子宮內(nèi)膜異位癥；節(jié)段性回腸炎；霍奇金病；白血病；關(guān)節(jié)炎，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；血管瘤；血管纖維瘤；眼疾病，如糖尿病性視網(wǎng)膜病和新血管青光眼；腎臟疾病，如腎小球腎炎；糖尿病性腎病；惡性腎硬化；血栓性微血管病綜合征；移植排斥和腎小球?。焕w維化疾病，如肝臟的硬化；腎小球系膜細(xì)胞增生性疾病；動脈硬化；神經(jīng)組織損傷。
本發(fā)明的化合物也可用于抑制氣囊導(dǎo)管治療后的血管再閉塞，用于血管修復(fù)或用于插入保持血管開放的機械裝置如支架后，用作免疫抑制劑，用作無疤創(chuàng)傷愈合的輔助，用于治療老年斑和接觸性皮炎。
在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及這樣的式(I)的化合物或其可藥用鹽 其中R2為H；取代的或未取代的芳基；取代的或未取代的雜芳基；脂肪族殘基；官能團；或者通過一個連接基團或原子與吡唑并[1，5a]嘧啶基環(huán)連接的取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的雜芳基或脂肪族殘基；R3可為H、取代的或未取代的芳基、雜芳基、脂肪族殘基、官能團、或者可通過連接基團或原子與吡唑并[1，5a]嘧啶基環(huán)連接的脂肪族殘基，R2或R3中至少之一為取代的或未取代的芳基；取代的或未取代的雜芳基；或者通過一個連接基團或原子與吡唑并[1，5a]嘧啶基環(huán)連接的取代的或未取代的雜芳基或取代的或未取代的芳基殘基；并且條件是R2和A不可都為未取代的苯基；A為H、鹵素(如溴)、脂族部分、官能團、取代的或未取代的芳基或雜芳基；且R1為H、鹵素或低級烷基。
優(yōu)選的實施方案是這樣的上述化合物，其中R2為H；低級烷基；環(huán)烷基；芐基；低級烷基取代的苯并噻吩基、吲哚基；任選地由低級烷基取代的吡啶基或噻唑基；未取代的苯基或由一個或兩個取代基取代的苯基，其中所述取代基選自鹵素、羥基、烷氧基、芐氧基、環(huán)烷基、氨基、乙酰氨基、由一個或兩個鹵素取代的低級烷基磺酰胺基和苯磺酰胺基；R3為H；任選地由鹵素取代的低級烷基；苯基；吡啶基或唑基；A為(a)H、鹵素、苯并噻吩基、吡啶基、甲基哌嗪基苯氧基、低級烷基取代的吲哚基，(b)未取代的或者一個或多個取代基取代的苯基，其中所述的取代基選自單、二或三低級烷氧基；二低級烷基胺基；任選地由烷基二取代的嗎啉基；由一個或多個取代基取代的哌嗪基，其中所述的取代基選自低級烷基、低級烷氧基、低級烷基哌嗪基、吡咯烷基、二烷基氨基和低級鏈烷醇；R1為H；并且條件是R2和A不可都為未取代的苯基。
最優(yōu)選地，化合物選自3-{7-氨基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-酚、6-(3-芐氧基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基}-酚、6-(3-甲氧基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3，5-二甲氧基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-芐氧基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(4-氯-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-氯-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-6-苯基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、5-甲基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-6-苯基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-甲基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-5-苯基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、N-{4-[7-氨基-3-(4-二甲基氨基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基]-苯基}-2，3-二氯-苯磺酰胺、4-氯-苯磺酸4-[7-氨基-3-(4-二甲基氨基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基]-苯基酯、6-(4-甲氧基-苯基)-5-甲基-3-苯基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、3-(4-甲氧基-苯基)-5-甲基-6-苯基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(4-溴-苯基)-3-(4-甲氧基-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(4-溴-苯基)-5-甲基-3-苯基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(2，6-二氯-苯基)-3-苯基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、3-(3-甲氧基-苯基)-6-苯基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、3-溴-5-苯基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-苯并[b]噻吩-3-基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、3-(4-溴-苯基)-5-苯基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-6-噻吩-3-基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、3-苯并[b]噻吩-3-基-6-(3-甲氧基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-苯并-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-甲氧基-苯基)-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(4-甲氧基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(2-甲氧基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-甲氧基-苯基)-3-吡啶-3-基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、3-{7-氨基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-酚、6-(3-芐氧基-苯基)-3-[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、3-{7-氨基-3-[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-酚、6-(2-芐氧基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、2-{7-氨基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]}嘧啶-6-基}-酚、6-(4-芐氧基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、4-{7-氨基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-酚、6-(2-芐氧基-苯基)-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、2-{7-氨基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-酚、6-(4-芐氧基-苯基)-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、4-{7-氨基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-酚、6-(2-芐氧基-苯基)-3-[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、2-{7-氨基-3-[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-酚、6-(4-芐氧基-苯基)-3-[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、4-{7-氨基-3-[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-酚、6-(3-芐氧基-苯基)-3-[1-甲基-1H-吲哚-3-基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、3-[7-氨基-3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基]-酚、3-[7-氨基-3-吡啶-3-基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基]-酚、6-(3-芐氧基-苯基)-3-(2-甲氧基-苯基)-吡唑[1，5-a]嘧啶-7-基胺、3-[7-氨基-3-(2-甲氧基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基]-酚、3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-6-噻吩-3-基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、3-(2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基)-6-噻吩-3-基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-6-吡啶-4-基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-氨基-苯基)-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-氨基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(2-氨基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-6-(4-甲基-噻唑-2-基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-苯并[b]噻吩-3-基-3-[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-苯并[b]噻吩-3-基-3-[4-甲氧基-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、3-(3-甲氧基-苯基)-6-噻吩-3-基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-芐氧基-苯基)-3-(3-甲氧基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、3-[7-氨基-3-(3-甲氧基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基]-酚、(4-{7-氨基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-苯基)-氨基甲酸乙酯、6-(3-氯-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-氯-苯基)-5-甲基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-氯-苯基)-3-[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-氯-苯基)-3-[2-甲氧基-4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、3-{7-氨基-3-[2-甲氧基-4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-酚、6-(2-氯-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(2-氯-苯基)-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(4-氟-苯基)-5-甲基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺、6-(4-氟-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-氯-苯基)-5-甲基-3-{3-[4-(1-甲基-哌啶-4-基)-哌嗪-1-基]-苯基}-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-氯-4-氟-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-氯-4-氟-苯基)-5-甲基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-溴-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-溴-芐基)-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-溴-苯基)-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-氯-苯基)-5-甲基-3-(3-嗎啉-4-基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-氯-苯基)-3-(4-甲氧基-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-氯-苯基)-3-[3-((2R，6S)-2，6-二甲基-嗎啉-4-基)-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、2-(4-{3-[7-氨基-6-(3-氯-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-苯基}-哌嗪-1-基)-乙醇、6-芐基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-氯-苯基)-3-(3，4-二甲氧基-苯基)-5-氟甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-氯-苯基)-3-(3，4-二甲氧基-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-氯-4-氟-苯基)-3-(3，4-二甲氧基-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-氯-4-氟-苯基)-3-(4-甲氧基-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(4-氟-苯基)-3-(4-甲氧基-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、2-(4-{3-[7-氨基-6-(4-氟-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-苯基}-哌嗪-1-基)-乙醇、6-(3，4-二氟-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3，4-二氟-苯基)-3-(3，4-二甲氧基-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、2-(4-{3-[7-氨基-6-(3-氯-4-氟-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-苯基}-哌嗪-1-基)-乙醇、2-(4-{3-[7-氨基-6-(3，4-二氟-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-苯基}-哌嗪-1-基)-乙醇、6-(3-氯-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-吡咯烷-1-基-哌啶-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(4-氟-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-吡咯烷-1-基-哌啶-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-氯-苯基)-3-[3-(4-二乙基氨基-哌啶-1-基)-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、3-[3-(4-二乙基氨基-哌啶-1-基)-苯基]-6-(4-氟-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(4-氟-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-甲基-4-氧基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(4-氟-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-甲基-1，4-二氧基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-氯-苯基)-3-[3-(4-二甲基氨基-哌啶-1-基)-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3，4-二氟-苯基)-3-[3-(4-二甲基氨基-哌啶-1-基)-苯基]-5-甲基-吡唑[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-氯-苯基)-5-甲基-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3，4-二氟-苯基)-5-甲基-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-氯-苯基)-3-(3-甲氧基-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-[7-氨基-3-(3，4-二甲氧基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基]-吡啶-2-醇、6-芐基-3-(3，4-二甲氧基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺和3-(3，4-二甲氧基-苯基)-6-(3-氟-芐基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺。
還有另一個實施方案是上述化合物在制備藥物組合物中的用途。
還有另一個實施方案是包含上述化合物的藥物組合物。
藥物組合物優(yōu)選地包含上述化合物和可接受的藥物載體。
在另一個實施方案中，提供了根據(jù)上文的化合物在制備用于治療激酶依賴性疾病的藥物組合物中的用途。
另一個實施方案是制備上述化合物的方法，其包括(a)在存在有機溶劑的條件下使腈A-CH2-C≡N與甲酸乙酯反應(yīng)以形成取代的3-氧代-丙腈，(b)在有機溶劑中縮合步驟(a)的取代的3-氧代-丙腈與一水合肼以形成式(III)的2H-吡唑-3-基胺 (c)在存在乙醇鹽和甲酸乙酯的條件下甲?；〈碾嬉灾苽涫?II)的3-氧代-丙腈 (d)在存在有機溶劑的條件下縮合式(II)的3-氧代-丙腈和式(III)的2H-吡唑-3-基胺以形成式(I)的化合物。
本發(fā)明尤其涉及式(I)的吡唑并[1，5a]嘧啶-7-基胺化合物或其可藥用鹽， 其中R2為H；取代的或未取代的芳基；取代的或未取代的雜芳基；取代的或未取代的脂肪族殘基；官能團；或者通過一個連接基團或原子與吡唑并[1，5a]嘧啶基環(huán)連接的取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的雜芳基或取代的或未取代的脂肪族殘基；R3為H、取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的雜芳基、取代的或未取代的脂肪族殘基、官能團、或者可通過連接基團或原子與吡唑并[1，5a]嘧啶基環(huán)連接的脂肪族殘基，R2或R3中至少之一為取代的或未取代的芳基；取代的或未取代的雜芳基；或者通過一個連接基團或原子與吡唑并[1，5a]嘧啶基環(huán)連接的取代的或未取代的雜芳基或者取代的或未取代的芳基殘基；A為H、鹵素(如溴)、脂族部分、官能團、取代的或未取代的芳基、或取代的或未取代的雜芳基，且R1為H、鹵素或低級烷基，所述化合物或其可藥用鹽用于治療蛋白激酶(尤其是酪氨酸蛋白激酶)依賴性疾病或用于制備治療所述疾病的藥物組合物、使用式(I)的化合物用于治療所述疾病的方法、或者用于治療所述疾病的包含式(I)化合物的藥物制品。
本發(fā)明尤其涉及這樣的式(I)化合物或其可藥用鹽其中R2為H；取代的或未取代的芳基；取代的或未取代的雜芳基；取代的或未取代的脂肪族殘基；官能團；或者通過一個連接基團或原子與吡唑并[1，5a]嘧啶基環(huán)連接的取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的雜芳基或取代的或未取代的脂肪族殘基；R3為H、取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的雜芳基、取代的或未取代的脂肪族殘基、官能團、或者可通過連接基團或原子與吡唑并[1，5a]嘧啶基環(huán)連接的脂肪族殘基，R2或R3中至少之一為取代的或未取代的芳基；取代的或未取代的雜芳基；或者通過一個連接基團或原子與吡唑并[1，5a]嘧啶基環(huán)連接的取代的或未取代的雜芳基或者取代的或未取代的芳基殘基，且條件是R2和A不可都為未取代的苯基；A為H、鹵素(如溴)、脂族部分、官能團、取代的或未取代的芳基或雜芳基，且R1為H、鹵素或低級烷基，所述化合物或其可藥用鹽用于治療蛋白激酶(尤其是酪氨酸蛋白激酶)依賴性疾病或用于制備治療所述疾病的藥物組合物、使用式(I)的化合物用于治療所述疾病的方法、或者用于治療所述疾病的包含式(I)化合物的藥物制品、用于治療所述疾病的式(I)化合物。
本發(fā)明也涉及治療激酶依賴性疾病的方法，其包括給溫血動物，尤其是人施用式(I)的吡唑并[1，5a]嘧啶-7-基胺化合物。本發(fā)明還涉及包含式(I)的吡唑并[1，5a]嘧啶-7-基胺化合物的藥物制品，尤其是用于治療激酶依賴性疾病，涉及新的式(I)的吡唑并[1，5a]嘧啶-7-基胺化合物，涉及制造式(I)的吡唑并[1，5a]嘧啶-7-基胺化合物的方法和用于制備它們的新原材料和中間體。本發(fā)明也涉及式(I)的化合物在制備治療激酶依賴性疾病的藥物制品中的用途。
除非另外指出，上文和下文中所用的通用術(shù)語優(yōu)選地具有此公開背景中的下列意義“芳基”為具有6-14個碳原子的芳基，尤其是苯基、萘基、茚基、薁基或蒽基，且未取代或由一個或多個，優(yōu)選地由一個或兩個取代基取代，其中取代基選自以下定義的官能團中的任何一個并包括低級鹵素；烷基；取代的烷基，鹵代低級烷基例如三氟甲基、低級烯基、低級炔基、低級烷?；?、低級烷氧基、羥基、另一個芳基、醚化或酯化的羥基、氨基、單或二取代的氨基、氨基低級烷基、氨基低級烷氧基、乙酰氨基、脒基、鹵素、硝基、氰基、氰基低級烷基、羧基、酯化羧基，尤其是低級烷氧基羰基，例如甲氧基羰基、正丙氧基羰基或異丙氧基羰基、烷?；?、苯甲酰基、氨基甲?；?、N-單或N，N-二取代的氨基甲?；?、氨基甲酸酯、烷基氨基甲酸酯、脒基、胍基、尿素、脲基、巰基、磺基、低級硫代烷基、磺基氨基、磺酰胺基、苯并磺酰胺基、磺酸基、苯基、芐基、苯氧基、芐氧基、苯基硫基、苯基-低級烷基硫基、烷基苯基硫基、低級烷基亞硫酰基、苯基亞硫?；?、苯基-低級烷基亞硫?；?、烷基苯基亞硫酰基、低級烷磺酰基、苯磺?；?、苯基-低級烷基磺酰基、烷基苯基磺酰基、鹵素低級烷基巰基、鹵素-低級烷基磺?；?、如尤其是三氟甲磺?；?、二羥基硼(-B(OH)2)、雜環(huán)基和在環(huán)的相鄰碳原子處結(jié)合的低級亞烷基二氧基，如亞甲二氧基、膦?；?-P(＝O)(OH)2)、羥基-低級烷氧基磷酰基或二低級烷氧基磷?；?、氨基甲?；?、單或二低級烷基氨基甲?；位蚨?羥基-低級烷基)-氨基甲?；?，或-NR4R5，其中R4和R5可相同或不同并且為獨立的H、低級烷基(例如甲基、乙基或丙基)；或者R4和R5與N原子一起形成含1-4個氮、氧或硫原子的3-8元雜環(huán)(例如哌嗪基、低級烷基-哌嗪基、氮雜環(huán)丁基、吡咯烷基、哌啶子基、嗎啉基、咪唑啉基)。
芳基更優(yōu)選地為未取代的或獨立地由一個或兩個選自加溶基的取代基取代的苯基，其中所述的加溶基選自鹵素(如Cl、Br或F)、羥基、低級烷基(如C1-C3低級烷基或甲基)、芳基(如苯基或芐基)、氨基、氨基低級烷基(如二甲基氨基)、乙酰氨基、氨基低級烷氧基(如乙氧基胺)、取代的低級烷基(如氟乙基)、烷氧基(如甲氧基或芐氧基，其中芐基環(huán)可為取代的或未取代的，如3，4-二氯芐氧基)、磺氨基、取代的或未取代的磺酰胺基(如苯并磺酰胺基、氯苯磺酰胺基或2，3-二氯苯磺酰胺基)、取代的或未取代的磺酸基(如氯-苯基磺酸基)、取代的尿素(如3-三氟-甲基-苯基尿素或4-嗎啉-4-基-3-三氟甲基-苯基-尿素)、烷基氨基甲酸酯或氨基甲酸酯類(如乙基-N-苯基-氨基甲酸酯)或-NR4R5，其中R4和R5可相同或不同并且獨立地為H、低級烷基(例如甲基、乙基或丙基)；或者R4和R5與N原子一起形成含1-4個氮、氧或硫原子的3-8元雜環(huán)(例如哌嗪基、低級烷基-哌嗪基、吡啶基、吲哚基、噻吩基、噻唑基、嗎啉基正甲基哌嗪基、苯并噻吩基、氮雜環(huán)丁基、吡咯烷基、哌啶子基或咪唑啉基)，其中當(dāng)R4和R5與N原子一起形成雜環(huán)時，該雜環(huán)可由在此所述的取代基中的1個、2個或多個取代，優(yōu)選地由哌嗪基；吡咯烷基；烷基，如甲基；或羥基烷基，如ethanyl取代。R4和R5與N原子一起形成的雜環(huán)的實例包括嗎啉基，其可為未取代的或用甲基或二甲基取代；未取代的或用1個、2個或3個取代基，優(yōu)選地為甲基、氧基或乙醇取代的哌嗪基；或未取代的或用1個、2個或3個取代基，優(yōu)選地為吡咯烷基、胺、烷基胺、甲基胺、二烷基胺、二甲基胺或二乙基胺取代的piperadinyl。
雜芳基優(yōu)選地為單環(huán)，但是可為二或三環(huán)，且包含3-24個，優(yōu)選地4-16個環(huán)原子，其中至少一個或多個，優(yōu)選地1-4個環(huán)碳原子被選自O(shè)、N或S的雜原子替代。優(yōu)選地，雜芳基選自吡啶基、吲哚基、嘧啶基、吡唑基、唑基、噻吩基、苯并噻吩基、2H-吡咯基、吡咯基、咪唑基、苯并咪唑基、吡唑基、吲唑基、嘌呤基、吡嗪基、噠嗪基、4H-喹嗪基、異喹啉基、喹啉基、2，3-二氮雜萘基、1，5-二氮雜萘基、喹喔啉基、喹唑啉基、quinnolinyl、中氮茚基、3H-吲哚基、異吲哚基、異唑基、噻唑基、異噻唑基、三唑基、四唑基、呋咱基和苯并[d]吡唑。
更優(yōu)選地，雜芳基選自吡啶基、吲哚基、嘧啶基、吡唑基、唑基、噻吩基或苯并噻吩基。
雜芳基可為未取代的或者由一個或多個取代基取代，其中所述的取代基選自上面定義的芳基的取代基，最優(yōu)選地由羥基、鹵素、低級烷基如甲基或低級烷氧基如甲氧基或乙氧基取代。
在此使用的脂肪族指任何基于非芳香碳的殘基。脂肪族殘基的實例包括取代的或未取代的烷基、環(huán)烷基、鏈烯基和炔基。烷基包括低級烷基，優(yōu)選地為具有不超過7個碳原子的烷基，優(yōu)選地具有1-5個包括5個碳原子，為線性或分支的；優(yōu)選地，低級烷基為戊基，如正戊基，丁基，如正丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基，丙基如正丙基或異丙基，乙基或甲基。優(yōu)選地，低級烷基為甲基、丙基或叔丁基。
環(huán)烷基優(yōu)選地為環(huán)戊基、環(huán)己基或環(huán)庚基，且可為未取代的或者由一個或多個，尤其由一個或兩個這樣的取代基取代，其中所述的取代基選自上面定義的芳基的取代基，最優(yōu)選地由低級烷基，如甲基；低級烷氧基，如甲氧基或乙氧基；或羥基取代。
鏈烯基和炔基優(yōu)選地具有不超過7個碳原子，優(yōu)選地具有1-5個包括5個碳原子，且可為線性或分支的。
烷基、環(huán)烷基、鏈烯基和炔基可為取代的或未取代的，且當(dāng)為取代的時可具有不超過3個取代基，其包括其他烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、上面定義的芳基取代基中的任何一個或者下面定義的官能團中的任何一個。
鹵素優(yōu)選地為氟、氯、溴或碘，最優(yōu)選地為氟、氯或溴。
在此使用的術(shù)語“連接原子或基團”包括烷基(如-CH2-)、氧基-O-、酮類-CO-、硫基-S-、磺?；?SO2-、亞砜-SO-、胺-NH-或-NR-、羧酸、醇、酯(-COO-)、酰胺(--CONR-，-CONHR′-)、磺酰胺基(-SO2NH-、-SO2NR′-)、砜(-SO2-)、亞砜(-SO-)、氨基、尿素(-NH-CO-NH-、-NR-CO-NH-、-NH-CO-NR-、-NR-CO-NR-)、醚(-O-)、氨基甲酸酯(-NH-CO-O-、-NR-CO-O-)或倒轉(zhuǎn)的酰胺、磺酰胺和酯(-NH-CO-、-NR-CO-、-NH-SO2-、-NR-SO2-、-OOC-)。
在此使用的術(shù)語“官能團”包括羧酸、羥基、鹵素、氰基(-CN)、醚(-OR)、酮(-CO-R)、酯(-COOR)、酰胺(-CONH2、-CONHR、-CONRR′)、硫醚(-SR)、磺酰胺(-SO2NH2、-SO2NHR、-SO2NRR′)、砜(-SO2-R)、亞砜(-SO-R)、胺(-NHR、NR′R)、尿素(-NH-CO-NH2、-NH-CO-NHR)、醚(-O-R)、鹵素、氨基甲酸酯(-NH-CO-OR)、醛官能團(-CHO)，然后也可為倒轉(zhuǎn)的酰胺、磺酰胺基和酯(-NH-CO-R、-NH-SO2-R、-OOC-R)，R和R′可為相同的或不同的，且可為H或任何如上定義的脂肪族、芳基或雜芳基部分。
當(dāng)復(fù)數(shù)用于化合物、鹽、藥物制品、疾病等等時，也意指單個的化合物、鹽等等。鹽尤其是式I化合物的可藥用鹽。
此類鹽從具有堿性氮原子的式(I)化合物優(yōu)選地與有機或無機酸形成為如酸加成鹽，尤其是可藥用鹽。合適的無機酸為例如鹵素酸如鹽酸、硫酸或磷酸。合適的有機酸為例如羧酸；膦酸；磺酸或氨基磺酸；為例如乙酸；丙酸；辛酸；癸酸；正十二烷酸；乙二醇酸；乳酸；反丁烯二酸；琥珀酸；己二酸；庚二酸；辛二酸；壬二酸；蘋果酸；酒石酸；檸檬酸；氨基酸，如谷氨酸或天冬氨酸；馬來酸；羥基-馬來酸；甲基馬來酸；環(huán)己烷羧酸；金剛烷羧酸；苯甲酸；水楊酸；4-氨基水楊酸；苯二甲酸；苯乙酸；扁桃酸；肉桂酸；甲磺酸或乙磺酸；2-羥基乙烷磺酸；乙烷-1，2-二磺酸；苯磺酸；2-萘磺酸；1，5-萘-二磺酸；2-、3-或4-甲基苯磺酸；甲基硫酸；乙基硫酸；十二烷基硫酸；N-環(huán)己氨基磺酸；N-甲基-、N-乙基-或N-丙基-氨基磺酸；或其他有機質(zhì)子酸，如抗壞血酸。
在存在負(fù)電基團，如羧基或磺基條件下，鹽也可與堿形成，其中所述堿例如金屬鹽或銨鹽，如堿金屬鹽或堿土金屬鹽，例如鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽或鈣鹽，或帶有氨或適當(dāng)有機胺的銨鹽，如叔單胺，例如三乙基胺或三(2-羥基乙基)胺，或雜環(huán)堿，例如N-乙基-哌啶或N，N′-二甲基哌嗪。
當(dāng)堿性基團和酸性基團存在于同一個分子中時，式(I)的化合物也可形成內(nèi)鹽。
為分離或純化目的，也可能使用不可藥用鹽，例如苦味酸鹽或過氯酸鹽。為治療用途，只利用可藥用鹽或游離化合物(當(dāng)以藥物制品形式應(yīng)用時)，且因此這些是優(yōu)選的。
考慮游離形式化合物和其鹽形式的化合物間密切關(guān)系，其中所述的鹽包括可用作例如在化合物、互變異構(gòu)體或互變異構(gòu)體混合物和其鹽的純化和鑒定中的中間體的那些鹽，上文和下文中談及的化合物尤其是式(I)化合物根據(jù)需要和有利地并且如果沒有另外指出的話理解為也指這些化合物，尤其是式I化合物的相應(yīng)互變異構(gòu)體；這些化合物，尤其是式I的化合物的互變異構(gòu)體混合物；或這些中任何一個的鹽。
當(dāng)提及“化合物......、其互變異構(gòu)體或其鹽”等時，這是指“化合物......、其互變異構(gòu)體，或者化合物或互變異構(gòu)體的鹽”。
任何不對稱碳原子可以(R)-、(S)-或(R，S)-構(gòu)型存在，優(yōu)選地以(R)-或(S)-構(gòu)型存在。具有飽和鍵的環(huán)原子的取代基，如果可能的話，可以順-(＝Z-)或反(＝E-)形式存在。因此化合物可以異構(gòu)體混合物存在，或優(yōu)選地以純的異構(gòu)體存在，優(yōu)選地以對映異構(gòu)體純的非對映體或純的對映異構(gòu)體存在。
本發(fā)明也涉及式(I)化合物的前體藥物，其在體內(nèi)這樣轉(zhuǎn)變成式(I)的化合物。因此任何談及式(I)的化合物根據(jù)需要和有利地理解為也指式(I)的化合物的相應(yīng)前體藥物是適當(dāng)和便利的。
式(I)的化合物具有有價值的藥理學(xué)性質(zhì)并用于治療激酶依賴性疾病，例如用作治療增生性疾病的藥物。術(shù)語“酪氨酸蛋白激酶依賴性疾病的治療”指所述疾病的尤其是下面提到的疾病的預(yù)防性或優(yōu)選地治療性(包括減輕的和/或治愈的)治療。
在隨后提及術(shù)語“用途”時，如果不另外指出的話，這根據(jù)需要和有利地分別包括本發(fā)明的任何一個或多個以下實施方案在治療(尤其是酪氨酸)蛋白激酶依賴性疾病中的用途，用于制備治療所述疾病的藥物組合物的用途，吡唑并[1，5a]嘧啶-7-基胺用于治療所述疾病的方法，用于治療所述疾病的包含吡唑并[1，5a]嘧啶-7-基胺的藥物制品和用于治療所述疾病的吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基-胺衍生物。特別地，待治療的疾病和因此優(yōu)選的式(I)的化合物應(yīng)用的疾病選自下面提到的(尤其是酪氨酸)蛋白激酶依賴性(“依賴性”也是指“支持”，不僅僅是“完全地依賴”)疾病，尤其是相應(yīng)的增生性疾病，更尤其是依賴于c-Abl、Bcr-、Abl、c-Kit、c-Raf、Flt-1、Flt-3、KDR、Her-1、PDGFR激酶、c-Src、RET受體激酶、FGF-R1、FGF-R2、FGF-R3、FGF-R4、肝配蛋白受體激酶(例如EphB2激酶、EphB4激酶和相關(guān)的Eph激酶)、酪蛋白激酶(CK-1、CK-2、G-CK)、Pak、ALK、ZAP70、Jak1、Jak2、Axl、Cdk1、cdk4、cdk5、Met、FAK、Pyk2、Syk、胰島素受體激酶、Tie-2或激酶如Bcr-Abl、c-Kit、c-Raf、Flt-3、FGF-R3、PDGF受體、RET和Met的組成型激活突變(激活的激酶)(下文中稱為“所述激酶”)的疾病，化合物因此可用于治療激酶依賴性疾病，尤其是依賴于所述激酶的疾病和(尤其是異常高表達(dá)或組成型激活的)所述激酶依賴性疾病或依賴于所述激酶途徑或者兩個或多個提到的激酶的任何聯(lián)合的疾病。
最優(yōu)選的為式(I)的化合物用于治療依賴于c-abl、Flt-3、KDR、c-Src、RET、EphB4、c-kit、cdk1、FGFR-1、c-raf、Her-1、Ins-R和Tek的疾病的用途，和式(I)的化合物用作c-abl、Flt-3、KDR、c-Src、RET、EphB4、c-kit、FGFR-1、c-raf、cdk1、Her-1、Ins-R和Tek的抑制劑的用途。
也有證明式(I)的化合物在體內(nèi)抗癌活性的實驗。
式(I)的化合物具有有價值的藥學(xué)性質(zhì)且在治療蛋白激酶依賴性疾病中有用，例如用作治療增生性疾病的藥物。
如下測量RET的抑制用桿狀病毒供體載體pFB-GSTX3產(chǎn)生重組桿狀病毒，其表達(dá)與RET的野生型激酶結(jié)構(gòu)域?qū)?yīng)的人RET-Men2A(wtRET)和RET-Men2B的胞質(zhì)內(nèi)激酶結(jié)構(gòu)域的氨基酸區(qū)域658-1072(Swiss prot No.Q9BTB0)，其中所述RET-Men2B與wtRET不同在于活化環(huán)M918T的激活突變。通過PCR從質(zhì)粒pBABEpuroRET-Men2A和pBABEpuro RET-Men2B擴增wtRET和RET-Men2B的胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域編碼序列。通過用SaII和KpnI消化使擴增的DNA片段和pFB-GSTX3載體適合連接反應(yīng)。通過這些DNA片段的連接分別得到桿狀病毒供體質(zhì)粒pFB-GX3-RET-Men2A和pFB-GX3-RET-Men2B。
病毒的產(chǎn)生將含有激酶結(jié)構(gòu)域的轉(zhuǎn)移載體轉(zhuǎn)染到DH10Bac細(xì)胞系(GIBCO)中并鋪到選擇性瓊脂平板上。未在病毒基因組中插入融合序列(由細(xì)菌攜帶)的菌落為藍(lán)色。選取單個白色菌落并通過標(biāo)準(zhǔn)的質(zhì)粒純化步驟從細(xì)菌中分離病毒DNA(桿粒)。然后使用Cellfectin試劑在25cm2瓶中用病毒DNA轉(zhuǎn)染Sf9細(xì)胞或Sf21(美國典型培養(yǎng)物保藏中心)細(xì)胞。
測定Sf9細(xì)胞中小規(guī)模蛋白質(zhì)的表達(dá)從轉(zhuǎn)染細(xì)胞培養(yǎng)物中收集合病毒的培養(yǎng)基并用于感染以增加其滴度。兩輪感染之后獲得的含病毒的培養(yǎng)基用于大規(guī)模的蛋白質(zhì)表達(dá)。為進(jìn)行大規(guī)模蛋白質(zhì)表達(dá)，以5×107個細(xì)胞/平板接種100cm2圓形組織培養(yǎng)平板并用1mL含病毒的培養(yǎng)基(大約5MOIs)感染。3天后從平板上刮下細(xì)胞并500轉(zhuǎn)/分離心5分鐘。將來自10-20個100cm2平板的細(xì)胞沉淀重懸于50mL冰冷的裂解緩沖液中(25mM tris-HCI，pH 7.5，2mM EDTA，1％NP-40，1mM DTT，1mMPMSF)。冰上攪拌細(xì)胞15分鐘，然后5,000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘。
GST標(biāo)簽蛋白質(zhì)的純化將經(jīng)離心的細(xì)胞裂解物加入2mL谷胱甘肽瓊脂糖柱中(Pharmacia)并用10mL 25mM tris-HCI，pH 7.5，2mM EDTA，1mM DTT，200mM NaCl洗滌3次。然后通過10次使用(每次1mL)25mM tris-HCI，pH 7.5，10mM還原谷胱甘肽，100mM NaCl，1mM DTT，10％甘油洗脫GST標(biāo)簽蛋白質(zhì)并存于-70℃。
酶活性的測量用經(jīng)純化的GST-wtRET或GST-RET-Men2B蛋白質(zhì)在含15ng GST-wtRET或GST-RET-Men2B蛋白質(zhì)，20mM tris-HCI，pH 7.5，1mM MnCl2，10mM MgCl2，1mM DTT，3μg/mL聚(Glu，Tyr)4∶1，1％DMSO，2.0μM ATP(γ-[33P]-ATP 0.1μCi)的30μL終體積中進(jìn)行酪氨酸蛋白激酶測定法。在存在或不存在抑制劑的條件下通過測量[γ33P]ATP的33P摻入聚(Glu，Tyr)4∶1中測定活性。測定在如下所述條件下在96孔板中于室溫進(jìn)行15分鐘并通過加入20μL 125mM EDTA終止。隨后將40μL反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移到預(yù)先用甲醇浸潤5分鐘的Immobilon-PVDF膜上(Millipore)，用水漂洗然后用0.5％H3PO4浸潤5分鐘并置于與真空源脫連接的真空總腔。點上所有的樣品后，連接真空裝置并用200μL 0.5％H3PO4漂洗每一個孔。移開膜并在搖床上用1.0％H3PO4洗滌4次，用乙醇洗滌1次。室溫干燥后計數(shù)膜，其中所述膜置于PackardTop Count 96孔支架上并加入10μL/孔的Microscint TM(Packard)。通過每一化合物一式兩份在4個濃度(通常為0.01、0.1和10μM)的百分比抑制的線性回歸分析計算IC50值。一個單位的蛋白激酶活性定義為37℃1納摩爾33P ATP從[γ33P]ATP轉(zhuǎn)移到底物蛋白質(zhì)/分鐘/毫克蛋白質(zhì)。
IC50計算在Immobilon膜上輸入3×4μL終止測定，不經(jīng)洗滌背景(3個孔)用H2O測定而不用酶陽性對照(4個孔)3％DMSO而不是化合物批對照(1個孔)無反應(yīng)混合物通過每一種化合物在4個濃度的(通常從10μM開始3或10倍的稀釋系列)百分比抑制的對數(shù)回歸分析計算IC50值。
在每一實驗中，參考化合物的實際抑制用于將IC50值歸一化至參考抑制劑平均值的基準(zhǔn)歸一化的IC50＝測定的IC50·參考化合物IC50平均值/測定的參考化合物IC50例如實驗中參考抑制劑為0.4μM，平均為0.3μM實驗中受試化合物為1.0μM，歸一化為0.3/0.4＝0.75μM。
例如，星形孢菌素或合成的星形孢菌素衍生物用作參考化合物。
使用這個方案，發(fā)現(xiàn)式(I)的化合物對RET抑制顯示0.005-100μM范圍的IC50值，優(yōu)選地顯示0.01-2μM范圍的IC50。
可如下證明本發(fā)明的化合物作為c-Abl蛋白質(zhì)-酪氨酸激酶活性的抑制劑的效率如Geissler等人，Cancer Res.1992；524492-4498所述的過濾結(jié)合測定法在96孔板中進(jìn)行體外酶測定法，其具有如下修改?？寺〗M氨酸標(biāo)簽的c-Abl激酶結(jié)構(gòu)域并如Bhat等人，J.Biol.Chem.1997；27216170-16175中所述在桿狀病毒/Sf9系統(tǒng)中表達(dá)。通過鈷金屬螯合柱然后是陰離子交換柱的兩步流程純化37kD(c-Abl激酶)的蛋白質(zhì)，產(chǎn)量為1-2mg/L Sf9細(xì)胞(Bhat等人，引用的參考文獻(xiàn))。通過SDS-PAGE在考馬斯亮藍(lán)染色后鑒定c-Abl激酶的純度大于90％。該測定法含有(總體積30μL)c-Abl激酶(50ng)、20mM Tris HCI，pH 7.5、10mM MgCl2、10μMNa3VO4、1mM DTT和存在1％DMSO條件下用30μg/mL聚-Ala，Glu，Lys，Tyr-6∶2∶5∶1(Poly-AEKY，Sigma P1152)的0.06pCi/測定[γ33P]-ATP(5μM ATP)。
通過加入10μL 250mM EDTA終止反應(yīng)并將30μL反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移到預(yù)先在甲醇中浸泡5分鐘的Immobilon-PVDF膜上(Millipore，Bedford，MA，USA)，用水漂洗，然后用0.5％H3PO4浸泡5分鐘并置于與真空源脫連接的真空總腔。點上所有樣品后連接真空裝置并用200μL 0.5％H3PO4漂洗每一個孔。取下膜并在搖床上用0.5％H3PO4洗滌(4次)和用乙醇洗滌一次。室溫干燥后計數(shù)膜，置于Packard Top Count 96孔支架中，并加入10μL/孔的Microscint TM(Packard)。
使用這個檢測系統(tǒng)，式I的化合物對c-Abl抑制顯示0.002-100μM范圍的抑制IC50值，通常顯示0.002-5μM范圍的抑制IC50值。
本發(fā)明的化合物作為KDR蛋白質(zhì)-酪氨酸激酶活性抑制劑的功效可如下證明VEGF誘導(dǎo)的受體自磷酸化的抑制可在細(xì)胞中，如轉(zhuǎn)染的CHO細(xì)胞中用另一個體外實驗驗證，其中所述細(xì)胞持續(xù)地表達(dá)人VEGF-R2受體(KDR)，接種于6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中的完全培養(yǎng)基中(含10％胎牛血清＝FCS)并在5％CO2條件下于37℃溫育直到其表現(xiàn)大約80％的匯合。然后將待檢測的化合物稀釋于培養(yǎng)基中(無FCS，含0.1％的牛血清白蛋白)并加入到細(xì)胞中。(對照包含無待檢測化合物的培養(yǎng)基)。37℃溫育兩個小時之后加入重組VEGF，最終的VEGF濃度為20ng/ml。37℃再溫育5分鐘后，用冰冷的PBS(磷酸鹽緩沖液)洗滌細(xì)胞兩次并立即在100μL每孔的裂解緩沖液中裂解。然后離心裂解物以去除細(xì)胞核，用商品化的蛋白質(zhì)測定法(BIORAD)測定上清液的蛋白質(zhì)濃度。然后裂解物可立即使用或如果需要的話存于-20℃。
進(jìn)行夾心酶聯(lián)免疫吸附測定法測量VEGF-R2磷酸化將VEGF-R2的單克隆抗體(例如Mab 1495.12.14；ProQinase，F(xiàn)reiburg，Germany)固定于黑色ELISA平板上(購自Packard的OptiPlateTM HTRF-96)。然后洗滌平板并用溶于含Tween 20(聚氧乙烯(20)-失水山梨糖醇單月桂酸酯，ICI/Uniquema)的磷酸鹽緩沖液(PBST)的3％TopBlock(Juro，Cat#TB232010)飽和其余的游離蛋白質(zhì)結(jié)合位點。然后在這些平板中于4℃孵育細(xì)胞裂解物(20μg蛋白質(zhì)/孔)和與堿性磷酸酶偶聯(lián)的抗磷酸酪氨酸抗體(PY20AP，來自Zymed)過夜。(再次洗滌平板)然后用發(fā)光AP底物(CDP-Star，即用型，含Emerald II；Applied Biosystems)證明抗磷酸酪氨酸抗體與捕獲的磷酸化受體的結(jié)合。在Packard Top Count MicroplateScintillation Counter中測量發(fā)光。陽性對照(用VEGF刺激)的信號和陰性對照(未用VEGF刺激)的信號間的差異與VEGF誘導(dǎo)的VEGF-R2磷酸化對應(yīng)(＝100％)。受檢測物質(zhì)的活性計算為VEGF誘導(dǎo)的VEGF-R2磷酸化的百分比抑制，其中誘導(dǎo)半數(shù)最大抑制的物質(zhì)濃度定義為IC50(50％抑制的量)。式I的化合物在此對KDR抑制顯示0.005-20μM范圍的IC50，優(yōu)選地顯示0.005-1μM之間的IC50。
如下測定Flt3激酶抑制用桿狀病毒供體載體pFbacG01(GIBCO)產(chǎn)生表達(dá)人Flt-3胞質(zhì)激酶結(jié)構(gòu)域的氨基酸563-993氨基酸區(qū)域的重組桿狀病毒。通過PCR從人c-DNA文庫(Clontech)中擴增Flt-3胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域的編碼序列。通過用BamHI和HindIII消化使擴增的DNA片段和pFbacG01載體適合連接反應(yīng)。這些DNA片段的連接產(chǎn)生桿狀病毒供體質(zhì)粒Flt-3(1.1)。病毒的產(chǎn)生、sf9細(xì)胞中蛋白質(zhì)的表達(dá)和GST融合蛋白的純化如下進(jìn)行病毒的產(chǎn)生將含F(xiàn)lt-3激酶結(jié)構(gòu)域的轉(zhuǎn)移載體(pFbacG01-Flt-3)轉(zhuǎn)染到DH10Bac細(xì)胞系(GIBCO)中并將轉(zhuǎn)染的細(xì)胞鋪于選擇性瓊脂平板上。沒有在病毒基因組中插入融合序列(由細(xì)菌攜帶)的菌落為藍(lán)色。選擇單個白色菌落并通過標(biāo)準(zhǔn)的質(zhì)粒純化流程從細(xì)菌中分離病毒DNA(桿粒)。然后在搖瓶中使用Cellfectin試劑用病毒DNA轉(zhuǎn)染Sf9或Sf21細(xì)胞(美國典型培養(yǎng)物保藏中心)。
Sf9細(xì)胞中小規(guī)模蛋白質(zhì)表達(dá)的確定從轉(zhuǎn)染的細(xì)胞培養(yǎng)物中收集含病毒的培養(yǎng)基并用于感染以增加其滴度。兩輪感染之后獲得的含病毒的培養(yǎng)基用于大規(guī)模的蛋白質(zhì)表達(dá)。為大規(guī)模的蛋白質(zhì)表達(dá)，用5×107個細(xì)胞/平板接種100cm2的圓形組織培養(yǎng)板并用1mL含病毒的培養(yǎng)基(大約5MOI)感染。3天后從平板上刮下細(xì)胞并500轉(zhuǎn)/分離心5分鐘。將來自10-20個100cm2平板的細(xì)胞沉淀重懸于50mL冰冷的裂解緩沖液中(25mMTris-HCI，pH7.5，2mM EDTA，1％NP-40，1mM DTT，1mM PMSF)。冰上攪拌細(xì)胞15分鐘然后5000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘。
GST標(biāo)簽蛋白質(zhì)的純化將經(jīng)離心的細(xì)胞裂解物加到2mL谷胱甘肽瓊脂糖柱上(Pharmacia)并用10mL 25mM Tris-HCI，pH 7.5，2mMEDTA，1mM DTT，200mM NaCl洗滌3次。然后通過10次(每次1mL)用25mM Tris-HCI，pH 7.5，10mM還原谷胱甘肽，100mM NaCl，1mMDTT，10％甘油洗脫GST標(biāo)簽的蛋白質(zhì)并存于-70℃。
酶活性的測量在30μl終體積中進(jìn)行純化GST-Flt-3的酪氨酸蛋白激酶測定，其中所述的30μl終體積中含200-1800ng酶蛋白質(zhì)(取決于比活性)，20mM Tris-HCl，pH 7.6，3mM MnCl2，3mM MgCl2，1mM DTT，10μM Na3VO4，3μg/mL聚(Glu，Tyr)4∶1，1％DMSO，8.0μM ATP和0.1μCi[γ33P]ATP。在存在或不存在抑制劑條件下通過測量[γ33P]ATP的33P摻入到聚(Glu，Tyr)底物中測定活性。在如下所述的條件下在96孔板中于室溫20分鐘進(jìn)行測定(30μL)并通過加入20μl 125mM EDTA終止。隨后將40μL反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移到預(yù)先用甲醇浸泡5分鐘的Immobilon-PVDF膜上(Millipore，Bedford，MA，USA)，用水漂洗然后用0.5％H3PO4浸泡5分鐘并置于與真空源脫連接的真空總腔。點上所有的樣品后連接真空裝置并用200μL 0.5％H3PO4漂洗每一個孔。移開膜并在搖床上用1.0％H3PO4洗滌4次，用乙醇洗滌一次。室溫干燥后計數(shù)膜并置于Packard Top Count96孔支架中，加入10μL/孔的Microscint TM(Packard)。通過一式兩份的四個濃度(通常為0.01、0.1、1和10μM)的每一種化合物的百分比抑制的線性回歸分析計算IC50值。一個蛋白激酶活性單位定義為37℃1納摩爾33P ATP從[γ33P]ATP轉(zhuǎn)移到底物蛋白質(zhì)的每分鐘每毫克蛋白質(zhì)。式I的化合物對Flt-3顯示0.01-100μM范圍的IC50抑制值，優(yōu)選地顯示0.05-10μM的IC50抑制值。式I的化合物也抑制其他酪氨酸蛋白激酶，如尤其是c-Src激酶、c-Kit、VEGF-R和/或FGFR，其全部參與動物的，尤其是哺乳動物細(xì)胞，包括人細(xì)胞的生長調(diào)節(jié)和轉(zhuǎn)化。適當(dāng)?shù)臏y定法在Andrejauskas-Buchdunger等人，Cancer Res.52，5353-8(1992)中描述。使用這個檢測系統(tǒng)，式I的化合物對c-Src抑制顯示0.005-100μM范圍的IC50，通常顯示0.005-5μM范圍的IC50。式I的化合物也對c-kit抑制顯示0.005-10μM范圍的IC50，通常顯示0.005-5μM范圍的IC50，并且對FGFR-1抑制在10μM顯示高達(dá)95％的抑制。
IGF-1R和Ins-R的抑制可如下測定使用桿狀病毒供體載體pfbgx3lGFIRcd產(chǎn)生表達(dá)人IGF-IR成熟肽胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域的氨基酸區(qū)域950-1337的重組桿狀病毒。使用pC5hinsR產(chǎn)生編碼人胰島素受體胞質(zhì)內(nèi)激酶結(jié)構(gòu)域的氨基酸區(qū)域919-1343的cDNA片段。使用重組桿狀病毒產(chǎn)生的Bac-to-BacTM系統(tǒng)(GIBCO BRL)克隆、表達(dá)人IGF-IR和Ins-R的片段并小規(guī)模純化因子Xa-可切割的谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST)融合蛋白。從轉(zhuǎn)染的細(xì)胞培養(yǎng)物中收集含病毒的培養(yǎng)基并用于感染以增加其滴度。兩輪感染后獲得的含病毒的培養(yǎng)基用于大規(guī)模的蛋白質(zhì)表達(dá)。制備細(xì)胞提取物并加到谷胱甘肽瓊脂糖(Pharmacia)柱上。洗滌之后，然后用含谷胱甘肽的緩沖液洗脫GST標(biāo)簽蛋白質(zhì)。將純化的蛋白質(zhì)存于-70℃的洗脫緩沖液中。在含20mM Tris-HCl，pH 7.6，10mM MgCl2，0.01mM Na3VO4，1％DMSO，1mM DTT，3μg/ml poly(Glu，Tyr)4∶1和10μM ATP(γ-[33P]-ATP0.1μCi)的30μl終體積中進(jìn)行純化GST-IGF-1R和GST-lns-R的酪氨酸蛋白激酶測定法。室溫20分鐘在96孔板中進(jìn)行測定并通過加入25μl 0.05MEDTA pH 7.0終止。將40μl份的液量用多通道點樣器點樣至連接至低真空源的置于Millipore Microtiter濾器總管中的Whatman P81膜上。除去液體后，將膜轉(zhuǎn)移至一系列的4個含有0.5％H3PO4的洗浴和一個EtOH洗浴(每個搖動孵育10分鐘)、干燥、置于添加了10μl Microscint的Hewlett Packard TopCount總管并計數(shù)。式I的化合物在10,000nM顯示對Ins-R高達(dá)90％的抑制，優(yōu)選地顯示60-90％的抑制。
Tek的抑制可如下測定Fabbro等人，Pharmacol.Ther.82(2-3)293-301(1999)已經(jīng)描述了表達(dá)、純化和測定這些激酶的流程。簡言之，用EcoRV和EcoRI從pAcG1載體(Pharmingen)切出谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GST)基因并插入Fast-Bac桿狀病毒載體(GIBCO)的克隆位點中建立具有來源于pAcG1融合載體(FBG0)的N端克隆位點的5530bp的載體。C端克隆位點可為所用N端克隆位點下游的任一克隆位點(來源于Fast-Bac載體)。從ProQinase，F(xiàn)reiburg，Germany獲得N端GST融合的(pAcG1，Pharmingen)KDR、Flt-1、Flk-1、Tek和PDGFR-β激酶結(jié)構(gòu)域。通過EcoRI切出并連入EcoRI消化的FBG1將Tek再次克隆到FBG1載體中(FBG1-Tek)。分別從人子宮和人骨髓cDNA文庫(Clontech)通過PCR擴增c-Kit全部胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域(氨基酸544-976)和c-Fms的全部胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域(氨基酸538-972)的編碼序列。通過將擴增的DNA片段作為BamHI-EcoRI插入片段克隆到FBG1中與GST融合，產(chǎn)生FBG1-c-Kit和FBG1-c-Fms。通過EcoRI切出并連接到EcoRI消化的FBG0中將Tek再次克隆到FBG0轉(zhuǎn)移載體中(FBG-Tie2/Tek)。通過PCR從人A431細(xì)胞獲得FGFR-1和c-met激酶結(jié)構(gòu)域。N端引物含有突出的EcoRI位點，而C端引物含有XhoI位點以輔助克隆到轉(zhuǎn)移載體中。PCR片段和FBG0都消化之后凝膠純化切割產(chǎn)物并連接到一起形成激酶構(gòu)建體(FBG-Met，F(xiàn)BG-FGFR-1)。
根據(jù)GIBCO提供的方案構(gòu)建每一個激酶的病毒。簡言之，將含激酶結(jié)構(gòu)域的轉(zhuǎn)移載體轉(zhuǎn)染到DH10Bac細(xì)胞系(GIBCO)中，鋪于含推薦濃度的Blue-Gal、IPTG、卡那霉素、四環(huán)素和慶大霉素的瓊脂板上。沒有在病毒基因組中插入融合序列(由細(xì)菌攜帶)的菌落為藍(lán)色。通常挑出單個白色菌落并通過標(biāo)準(zhǔn)的質(zhì)粒小量制備流程從細(xì)菌中分離病毒DNA(桿粒)。然后使用與Bac-to-Bac試劑盒(GIBCO)一起提供的方案在25cm2搖瓶中用病毒DNA轉(zhuǎn)染Sf9細(xì)胞或High Five細(xì)胞(GIBCO)。從轉(zhuǎn)染的細(xì)胞培養(yǎng)物中收集含病毒的培養(yǎng)基并用于感染以增加其滴度。兩輪感染之后獲得的含病毒的培養(yǎng)基用于大規(guī)模的蛋白質(zhì)表達(dá)。對于大規(guī)模的蛋白質(zhì)表達(dá)，用5×107個細(xì)胞/平板接種100cm2的圓形組織培養(yǎng)板并用1mL含病毒的培養(yǎng)基(大約5MOI)感染。3天后從平板上刮下細(xì)胞并500轉(zhuǎn)/分離心5分鐘。
將來自10-20個100cm2平板的細(xì)胞沉淀重懸于50mL冰冷的裂解緩沖液中(25mM Tris-HCI，pH7.5，2mM EDTA，1％ NP-40，1mM DTT，1mM PMSF)。冰上攪拌細(xì)胞15分鐘然后5000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘。將上清液加到2ml谷胱甘肽瓊脂糖柱上并用10ml的25mM Tris-HCl，pH 7.5，2mM EDTA，1mM DTT，200mM NaCl洗滌三次。然后通過10次(每次1ml)用25mM Tris-HCl，pH 7.5，10mM還原谷胱甘肽，100mM NaCl，1mM DTT，10％甘油洗脫GST標(biāo)簽蛋白質(zhì)并存于-70℃。
測定法(30μl)含有200-1800ng的酶蛋白質(zhì)(取決于比活性)，20mMTris-HCl，pH 7.6，3mM MnCl2，3mM MgCl2，1mM DTT，10μMNa3VO4，3μg/ml聚(Glu，Tyr)4∶1，8μM ATP(γ-[33P]-ATP 0.1μCi)。室溫孵育反應(yīng)20分鐘然后通過加入25μl 0.25M EDTA(pH 7.0)停止反應(yīng)。將40μl份的液量用多通道點樣器點樣至連接至低真空源的置于MilliporeMicrotiter濾器總管中的Whatman P81膜上。除去液體后，將膜轉(zhuǎn)移至一系列的4個含有0.5％H3PO4的洗浴和一個EtOH洗浴(每個搖動孵育10分鐘)、干燥、置于添加了10μl Microscint的Hewlett Packard TopCount總管并計數(shù)。通過線性回歸分析計算式(I)化合物對Tek抑制顯示大約0.1-100μM IC50值。
Cdk1的抑制可如下測定Cdk1/cycB:Cdk1/cycB從ProQinase，F(xiàn)reiburg，Germany獲得。用10μM 1-甲基腺嘌呤誘導(dǎo)海星卵母細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞周期的M期，在液氮中冷凍并存于-80℃。需要的時候，如(Arion等人，Cell 55371-378(1988)和Rialet等人，Anticancer Res.111581-1590(1991))所述勻漿卵母細(xì)胞并離心。在p9CKShs-瓊脂糖珠上純化Cdk1/cycB激酶并如(Azzi等人，Eur.J.Biochem.203353-360.(1992))所述用重組人p9CKShs洗脫。簡言之，持續(xù)旋轉(zhuǎn)條件下在4℃平衡來源于卵母細(xì)胞的上清液與p9CKShs-瓊脂糖顆粒30分鐘。充分洗滌珠并用純化的p9CKShs(3mg/ml)洗脫有活性的cdk1/cycB激酶。如(Arion等人，Cell 55371-378(1988)，Meijer等人，EMBO J.1989；82275-2282和Meijer等人，EMBOJ.1991；82275-2282)所述測量Cdk1/cycB活性。于室溫在96孔板中進(jìn)行稍加修改的測定法20分鐘。30μl的終體積中含有0.1-0.3U的Cdk1/cycB，1mg/ml組蛋白H1作為底物，60mM β-甘油磷酸，30mM硝基苯基磷酸酯，25mM MOPS，5mM EGTA，15mM MgCl2，1mM DTT，0.1mMNa3VO4，15μM ATP和0.1μCiγ-33P-ATP(75μM，8800cpm/pmole)。通過加入25μl 0.05M EDTA pH 7.0終止反應(yīng)。將40μl份的液量用多通道點樣器點樣至連接至低真空源的置于Millipore Microtiter濾器總管中的Whatman P81膜上。除去液體后，將膜轉(zhuǎn)移至一系列的4個含有0.5％H3PO4的洗浴和一個EtOH洗浴(每個搖動孵育10分鐘)、干燥、置于添加了10μl Microscint的Hewlett Packard TopCount總管并計數(shù)。式(I)的化合物在10,000nM顯示高達(dá)100％的Cdk1抑制。
c-Raf-1的抑制可如下測定通過用GST-c-Raf-1重組桿狀病毒和v-Src和v-Ras重組桿狀病毒一起三重感染Sf21細(xì)胞獲得重組c-Raf-1蛋白質(zhì)的產(chǎn)生，其中所述的v-Src和v-Ras重組桿狀病毒為活性c-Raf-1激酶產(chǎn)生所需要的(Williams等人，PNAS 1992；892922-2926)。招募c-Raf-1至細(xì)胞膜需要活化的Ras(v-Ras)并且磷酸化c-Raf-1需要v-Src，以充分活化它(Williams等人，PNAS 1992；892922-2926)。每個150mm平皿接種2.5×107個細(xì)胞并允許其在室溫與150mm平皿粘附1小時。對培養(yǎng)基(含10％FBS的SF900II)抽氣并以分別為3.0、2.5和2.5的MOI在4-5mL的總體積中加入重組桿狀病毒GST-C-Raf-1、v-Ras和v-Src。室溫孵育細(xì)胞1小時然后加入15mL培養(yǎng)基。27℃孵育感染的細(xì)胞48-72hr。刮下感染的Sf21細(xì)胞，收集到50mL離心管中并在Sorvall離心機中于4℃以1100g離心10分鐘。用冰冷的PBS洗滌細(xì)胞沉淀一次并且每2.5×107個細(xì)胞用0.6mL裂解緩沖液裂解。不時吹打在冰上，10分鐘后實現(xiàn)細(xì)胞的完全裂解。用SS-34轉(zhuǎn)子在Sorvall離心機中于4℃以14,500g離心細(xì)胞裂解物10分鐘并將上清液轉(zhuǎn)移到新管中且存于-80℃。對每2.5×107個細(xì)胞用100uL冰冷的PBS平衡的填充有谷胱甘肽瓊脂糖4B珠從細(xì)胞裂解物中純化c-Raf-1。允許GST-c-Raf-1與珠在4℃搖動結(jié)合1hr。將與珠結(jié)合的GST-c-Raf-1轉(zhuǎn)移到柱子中。柱子用裂解緩沖液洗滌一次并用冰冷的Tris緩沖鹽溶液洗滌兩次。加入冰冷的洗脫緩沖液并停止柱子流動以允許游離的谷胱甘肽破壞GST-c-Raf-1與谷胱甘肽瓊脂糖珠的相互作用。將級分(1mL)收集到預(yù)冷的試管中。每一試管含有10％甘油(終濃度)以在凍融循環(huán)中保持激酶活性。將經(jīng)純化的GST-c-Raf-1激酶蛋白質(zhì)級分存于-80℃。
IκB用作c-Raf-1激酶的底物。IκB在細(xì)菌中表達(dá)為His標(biāo)簽的蛋白質(zhì)(由Eder博士克隆并惠贈；ABM，Novartis，Basel)。含IκB質(zhì)粒的BL21LysS細(xì)菌在LB培養(yǎng)基中生長到OD600為0.6然后用IPTG(1mM終濃度)于37℃3小時誘導(dǎo)其表達(dá)IκB，然后通過超聲處理裂解細(xì)菌(微尖端界線設(shè)置為在超聲緩沖液[50mM Tris pH 8.0，1mM DTT，1mM EDTA]中每一分鐘三次)并10,000g離心15分鐘。將上清液與硫酸銨混合得到30％的終濃度。于4℃搖動混合物15分鐘然后10,000g離心15分鐘。然后將沉淀重懸于含10mM BSA的結(jié)合緩沖液中(Novagen)。將此溶液用于Ni-agarose(Novagen)并根據(jù)Novagen手冊洗滌。用洗脫緩沖液(0.4M咪唑，0.2M NaCl，8mM Tris pH 7.9)從柱子上洗脫IκB。在50mM Tris pH8，1mM DTT中透析含有蛋白質(zhì)的級分。
在存在或不存在抑制劑的條件下通過測量33P從[γ33P]ATP摻入到IB中測定c-Raf-1蛋白激酶的活性。在96孔板中于室溫60分鐘進(jìn)行此測定法。其含有(30μl的終體積)c-rafl1激酶(400ng)，25mM Tris·HCl，pH7.5，5mM MgCl2，5mM MnCl2，10μM Na3VO4，1mM DTT和0.3μCi/測定[γ33P]-ATP(10μM ATP)，使用600ng IB并存在1％DMSO。通過加入10μL 250mM EDTA終止反應(yīng)并將30μL反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移到預(yù)先用甲醇浸泡5分鐘的Immobilon-PVDF膜上(Millipore，Bedford，MA，USA)，用水漂洗，然后用0.5％H3PO4浸泡5分鐘并置于與真空源脫連接的真空總腔。點上所有的樣品之后，連接真空并用200μL 0.5％H3PO4漂洗每一個孔。移下膜并在搖床上用0.5％H3PO4洗滌4次，用乙醇洗滌一次。室溫干燥，置于Packard TopCount 96孔支架中并加入10μL/孔的MicroscintTM(Packard)后計數(shù)膜。
式(I)的化合物在0.1-50μM范圍內(nèi)，優(yōu)選地在0.1-10μM范圍內(nèi)顯示c-Raf-1抑制。
體內(nèi)證明式(I)化合物抗腫瘤活性的實驗例如，為了測試諸如下文實施例1給出的式(I)化合物是否體內(nèi)抑制VEGF介導(dǎo)的血管發(fā)生，在小鼠中測試了所述化合物對由生長因子移植體模型中的VEGF誘導(dǎo)的血管發(fā)生的影響在多孔的特氟隆小室中裝入0.8％W/V的包含肝素(20單位/毫升)(含或不含生長因子(2pg/ml人VEGF))的瓊脂，然后將其皮下植入C57/C6小鼠背部側(cè)面。從植入該小室當(dāng)天開始用所述待測試化合物(例如每天一次25、50或100mg/kg p.o.)或載體處理上述小鼠，并持續(xù)四天。處理結(jié)束時，處死小鼠，并移去小室。小心地移出生長在小室周圍的血管化組織，將其稱重，并通過測量該組織的血紅蛋白含量來評定血液含量(Drabkins法；Sigma，Deisenhofen，德國)。先前已經(jīng)證實這些生長因子誘導(dǎo)這些生長在小室周圍的組織(組織學(xué)上的特征為包含成纖維細(xì)胞和小血管)在重量和血液含量上呈現(xiàn)劑量依賴性的增長，并且已經(jīng)證實所述反應(yīng)被特異中和VEGF的抗體阻斷(見Wood JM等人，Cancer Res.60(8)，2178-2189，(2000)以及Schlaeppi等人，J.Cacner Res.Clin.Oncol.125，336-342，(1999))。利用這個模型，能夠證實式(I)化合物的抑制作用。
合成方法式(I)的化合物通過類似于Alicade，E；De Mendoza，J；Garcia-Marquina，JM；Almera，C；J.Heterocycl.Chem.11，423(1974)所述的方法制備而得(a)在有機溶劑中將腈A-CH2-C≡N和甲酸乙酯反應(yīng)，生成取代的3-氧代-丙腈，(b)在有機溶劑中縮合步驟(a)的取代的3-氧代-丙腈與一水合肼以形成式(III)的2H-吡唑-3-基胺 (d)在存在乙醇鹽和甲酸乙酯的條件下甲酰化取代的腈以制備式(II)的3-氧代-丙腈 (c)在存在有機溶劑的條件下縮合式(II)的3-氧代-丙腈和式(III)的2H-吡唑-3-基胺以形成式(I)的化合物。
具體地，式(I)的化合物通過在乙醇鹽酸(ethanolic HCl)中縮合3-氧代-丙腈(II)和相應(yīng)的2H-吡唑-3-基胺(III)而制備得到(圖2)。上述2H-吡唑-3-基胺(III)通過縮合一水合肼和溶于有機溶劑如乙醇、二烷或AcOH的對應(yīng)3-氧代-丙腈、并在高溫(優(yōu)選100℃)加熱數(shù)小時制備而成。制備標(biāo)題化合物吡唑部分的優(yōu)選方法是在100℃下在乙酸中攪拌一水合肼和對應(yīng)的3-氧代-丙腈2-3小時，然后加入含水鹽酸，并進(jìn)一步回流反應(yīng)混合物20分鐘。當(dāng)R1不是H時，則使用相應(yīng)取代的肼。上述3-氧代-丙腈(I)和(II)由相應(yīng)的腈通過使用新鮮制備的乙醇鈉和甲酸乙酯(在乙醇中回流一個小時)進(jìn)行經(jīng)典的甲酰化反應(yīng)合成得到。備選地，也可以使用相應(yīng)的3，3-二烷氧基-丙腈(類似于Seneci，P.、Nicola，M.、Inglesi，M.、Vanotti，E.、Resnati，G.Synth.Commun.29(2)，311-341(1999)所述的方法)或3-二甲基氨基-丙烯腈替換3-氧代-丙腈進(jìn)行縮合反應(yīng)。
圖2.
備選地，式(I)的化合物可以通過先合成攜帶相應(yīng)官能團(X，見圖3)的吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺核心支架進(jìn)行制備，其中殘基A、R2或R3可以分別通過如圖3顯示的已知反應(yīng)引入。
圖3其中R1、R2、R3和X如式(I)化合物的定義，并且當(dāng)需要時，在反應(yīng)(a)、(b)或(c)之后將可獲得的式(I)化合物轉(zhuǎn)化為不同的式(I)化合物；將可獲得的式(I)化合物的鹽轉(zhuǎn)化為游離的化合物或不同的鹽，或者將可獲得的游離的式(I)化合物轉(zhuǎn)化為鹽；和/或?qū)⒖色@得的式(I)化合物的異構(gòu)體混合物分離成為單獨的異構(gòu)體；其中對于所有反應(yīng)，原材料中不參與反應(yīng)的官能團(如果需要的話)通過容易移去的保護基團以受保護形式存在，而且隨后任何保護基團都將被移去。
分別優(yōu)選下列反應(yīng)條件在本文范疇之內(nèi)，除非文中另外指明，否則只有易于去除的不是式(I)特定目的終產(chǎn)物成分的基團稱為“保護基團”。此類保護基團的官能團保護作用、保護基團自身以及它們的斷裂反應(yīng)已有描述，例如在諸如J.F.W.McOmie，“有機化學(xué)中的保護基團”，Plenum Press，London和New York1973、T.W.Greene和P.G.M.Wuts，″有機合成中的保護基團″，第三版，Wiley，New York 1999、″肽″第3卷(編輯E.Gross和J.Meienhofer)，Academic Press，London和New York 1981、″Methoden der organischenChemie″(有機化學(xué)方法)，Houben Weyl，第4版，Volume15/1，GeorgThieme Verlag，Stuttgart 1974、H.-D.Jakubke和H.Jeschkeit，″aminosauren，Peptide，Proteine″(氨基酸、肽、蛋白質(zhì))，Verlag Chemie，Weinheim，Deerfield Beach和Basel 1982以及Jochen Lehmann，″Chemieder KohlenhydrateMonosaccharide und Derivate″(碳水化合物化學(xué)單糖及其衍生物)，Georg Thieme Verlag，Stuttgart 1974的標(biāo)準(zhǔn)參考工作中。保護基團的特征在于能夠通過例如溶劑分解作用、還原作用、光分解作用或者備選地在生理條件下(例如通過酶解作用)輕易移去(即不發(fā)生不希望的續(xù)發(fā)反應(yīng))。
可以通過本身已知的方式制備具有至少一個成鹽基團的式(I)化合物的鹽。例如，可以通過用諸如適當(dāng)有機羧酸的堿金屬鹽(例如2-乙基己酸的鈉鹽)的金屬化合物、諸如相應(yīng)的氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽諸如氫氧化鈉或鉀、碳酸鹽或碳酸氫鹽的有機堿金屬或堿土金屬化合物、也可以用相應(yīng)的鈣化合物或者用氨水或適當(dāng)?shù)挠袡C胺處理該化合物、優(yōu)選使用化學(xué)量或者僅少量過剩的成鹽劑來制備具有酸性基團的式(I)化合物鹽。式(I)化合物的酸加成鹽以諸如用酸或適當(dāng)?shù)年庪x子交換試劑處理的常規(guī)方式獲得?？梢酝ㄟ^例如用弱堿或者用離子交換劑處理，從而將諸如酸加成鹽的鹽中和至等電點的方式形成包含酸性和堿性成鹽基團(例如游離的羧基基團和游離的氨基基團)的式(I)化合物內(nèi)鹽。
可以用常規(guī)方法將鹽轉(zhuǎn)變?yōu)橛坞x的化合物；例如，金屬鹽和銨鹽可以通過用適當(dāng)?shù)乃崽幚韥磉M(jìn)行轉(zhuǎn)變，而酸加成鹽可以通過例如用適當(dāng)?shù)膲A性試劑處理來進(jìn)行轉(zhuǎn)變。
根據(jù)本發(fā)明可以獲得異構(gòu)體的混合物，并能夠以本身已知的方式將其分離成為單獨的異構(gòu)體；例如能夠通過分離多相性溶劑混合物、重結(jié)晶和/或?qū)游龇蛛x(例如經(jīng)過硅膠或經(jīng)過反向柱進(jìn)行例如中壓液相層析)分離非對映異構(gòu)體；此外，外消旋物也能夠分離，例如通過用光學(xué)純的成鹽試劑形成鹽，然后通過諸如分步結(jié)晶或通過經(jīng)過旋光柱材料進(jìn)行層析，從而分離可如此獲得的非對映異構(gòu)體混合物。
可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法對中間體和最終產(chǎn)物進(jìn)行加工及/或純化，例如使用層析法、分配法、(重)結(jié)晶法等等。
一般的程序條件一般而言，下述條件應(yīng)用于上文和下文涉及的所有程序，但優(yōu)選上文或下文特別涉及的反應(yīng)條件所有上述程序步驟都可以在本身已知的反應(yīng)條件下執(zhí)行，優(yōu)選那些特別說明的條件，在缺乏或通常存在溶劑或稀釋劑，優(yōu)選對所用試劑呈惰性但溶解它們的溶劑或稀釋劑，可在缺乏或存在催化劑、縮合劑或中和劑，例如陽離子交換劑(例如以H+形式，這取決于反應(yīng)和/或試劑的性質(zhì))的離子交換劑，可以是低溫、常溫或高溫，例如在大約-100℃至大約190℃的溫度范圍，優(yōu)選大約-80℃至大約150℃(例如-80至-60℃、室溫、-20至40℃或者回流溫度)，在環(huán)境壓力或在封閉容器中(根據(jù)需要在壓力下)，和/或可以在惰性氣體中，例如氬氣或者氮氣。
在反應(yīng)的所有階段，都可以將形成的異構(gòu)體混合物分離為諸如非對映異構(gòu)體或?qū)τ钞悩?gòu)體的單獨異構(gòu)體，或者將其分離為任意希望的異構(gòu)體混合物，例如外消旋物或非對映異構(gòu)體的混合物，例如類似于“額外方法步驟”中所描述的方法。
除非在方法描述中特別說明，否則那些適合任何具體反應(yīng)的試劑選自的試劑包括那些特別說明的試劑，或者例如水、諸如低級烷基-低級鏈烷酸酯(例如乙酸乙酯)的酯類、諸如脂肪族醚類(例如二乙基醚)或環(huán)狀醚類(例如四氫呋喃或二烷)的醚類、諸如苯或甲苯的液體芳香族烴、諸如甲醇、乙醇或1-或2-丙醇的醇、諸如乙腈的腈、諸如二氯甲烷或氯仿的鹵代烴、諸如二甲基甲酰胺或二甲基乙酰胺的酰胺、諸如雜環(huán)氮堿基(例如吡啶或N-甲基吡咯烷-2-酮)的堿基、諸如低級鏈烷酸酐(例如醋酸酐)的羧酸酐、諸如環(huán)己烷、己烷或異戊烷的環(huán)狀烴、直鏈烴和支鏈烴，或者這些溶劑的混合物，例如含水溶液。此類溶劑混合物也可以用于例如進(jìn)行層析或分離。
化合物，包含它們的鹽，也可以以水合物的形式獲得，或者它們的晶體可以例如包含用于結(jié)晶化的溶劑?？梢源嬖诓煌木w形式。
本發(fā)明也涉及那些可從本方法任意階段中間體獲得的化合物用作原材料并執(zhí)行剩余步驟、或者其中原材料在反應(yīng)條件下形成或以衍生物的形式(例如以受保護形式或鹽的形式)加以利用、或者在反應(yīng)條件下生成根據(jù)本發(fā)明的方法可以獲得的化合物并將其在原位進(jìn)行進(jìn)一步加工等形式的方法。在本發(fā)明的方法中，優(yōu)選使用那些產(chǎn)生在前文描述為尤其有價值的式(I)新化合物的原材料。與實施例中所述反應(yīng)條件相同或類似的反應(yīng)條件是特別優(yōu)選的。
根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的實施方案在下列優(yōu)選實施方案中，用上文和下文提供的相應(yīng)更加具體的定義來代替一般的表達(dá)方式，從而產(chǎn)生本發(fā)明更加優(yōu)選的實施方案。
優(yōu)選式(I)化合物、其互變異構(gòu)體或其可藥用鹽的用途，其中待治療的酪氨酸蛋白激酶依賴性疾病是依賴于任意一種或多種下列酪氨酸蛋白激酶的增生性疾病尤其是c-Abl、Bcr-Abl、c-Kit、c-Raf、Flt-1、Flt-3、KDR、Her-1、PDGFR-激酶、c-Src、RET-受體激酶、FGF-R1、FGF-R2、FGF-R3、FGF-R4、肝配蛋白受體激酶(例如EphB2激酶、EphB4激酶及相關(guān)的Eph激酶)、酪蛋白激酶(CK-1、CK-2、G-CK)、Pak、ALK、ZAP70、Jak1、Jak2、Axl、Cdk1、cdk4、cdk5、Met、FAK、Pyk2、Syk、胰島素受體激酶、Tie-2或諸如Bcr-Abl、c-Kit、cdk1、c-Raf、Flt-3、FGF-R3、PDGF-受體、RET和Met的激酶組成型激活突變體(激活性激酶)。
更優(yōu)選地，式(I)化合物可以用于治療依賴于下列激酶的增生性疾病c-abl、Flt-3、KDR、c-Src、RET、EphB4、c-kit、cdk1、FGFR-1、c-raf、Her-1、Ins-R和Tek。
本發(fā)明尤其涉及式(I)化合物或其可藥用鹽， 其中R2為H；取代的或未取代的芳基；取代的或未取代的雜芳基；取代的或未取代的脂肪族殘基；官能團；或者通過一個連接基團或原子與吡唑并[1，5a]嘧啶基環(huán)連接的取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的雜芳基或取代的或未取代的脂肪族殘基；R3可為H、取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的雜芳基、取代的或未取代的脂肪族殘基、官能團、或者可通過連接基團或原子與吡唑并[1，5a]嘧啶基環(huán)連接的脂肪族殘基，R2或R3中至少之一為取代的或未取代的芳基；取代的或未取代的雜芳基；或者通過一個連接基團或原子與吡唑并[1，5a]嘧啶基環(huán)連接的取代的或未取代的雜芳基或者取代的或未取代的芳基殘基；A為H、鹵素(如溴)、脂族部分、官能團、取代的或未取代的芳基或取代的或未取代的雜芳基，
且R1為H、鹵素或低級烷基，以及式(I)化合物在治療激酶依賴性疾病或在制備治療激酶依賴性疾病的藥物制劑中的用途。
本發(fā)明還涉及式(I)的化合物或其可藥用鹽， 其中R2為H；取代的或未取代的芳基；取代的或未取代的雜芳基；取代的或未取代的脂肪族殘基；官能團；或者通過一個連接基團或原子與吡唑并[1，5a]嘧啶基環(huán)連接的取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的雜芳基或取代的或未取代的脂肪族殘基；R3可為H、取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的雜芳基、取代的或未取代的脂肪族殘基、官能團、或者可通過連接基團或原子與吡唑并[1，5a]嘧啶基環(huán)連接的取代的或未取代的脂肪族殘基，R2或R3中至少之一為取代的或未取代的芳基；取代的或未取代的雜芳基；或者通過一個連接基團或原子與吡唑并[1，5a]嘧啶基環(huán)連接的取代的或未取代的雜芳基或者取代的或未取代的芳基殘基；并且條件是R2和A不可都為未取代的苯基；A為H、鹵素(如溴)、脂族部分、官能團、取代的或未取代的芳基或雜芳基，且R1為H、鹵素或低級烷基，以及式(I)化合物在治療激酶依賴性疾病或在制備治療激酶依賴性疾病的藥物制劑中的用途。
更加優(yōu)選的是這樣的式(I)化合物或其可藥用鹽，其中連接原子或基團選自烷基(如-CH2-)、氧基-O-、酮類-CO-、硫基-S-、磺?；?SO2-、亞砜-SO-、胺-NH-或-NR-、羧酸、醇、酯(-COO-)、酰胺(--CONR-，-CONHR′-)、磺酰胺基(-SO2NH-、-SO2NR′-)、(-SO3-)、亞砜(-SO-)、氨基、尿素(-NH-CO-NH-、-NR-CO-NH-、-NH-CO-NR-、-NR-CO-NR-)、醚(-O-)、氨基甲酸酯(-NH-CO-O-、-NR-CO-O-)或倒轉(zhuǎn)的酰胺、磺酰胺和酯(-NH-CO-、-NR-CO-、-NH-SO2-、-NR-SO2-、-OOC-)；尤其優(yōu)選烷基(如-CH2-)、氧基-O-、酮類-CO-、磺?；?SO2-、磺酰胺基(-SO2NH-、-SO2NR′-)、(-SO3-)、和尿素(-NH-CO-NH-、-NR-CO-NH-、-NH-CO-NR-、-NR-CO-NR-)，并且官能團選自羧酸、羥基、鹵素、氰基(-CN)、醚(-OR)、酮(-CO-R)、酯(-COOR)、酰胺(-CONH2、-CONHR、-CONRR′)、硫醚(-SR)、磺酰胺(-SO2NH2、-SO2NHR、-SO2NRR′)、砜(-SO2-R)、亞砜(-SO-R)、胺(-NHR、NR′R)、尿素(-NH-CO-NH2、-NH-CO-NHR)、醚(-O-R)、鹵素、氨基甲酸酯(-NH-CO-OR)、醛官能團(-CHO)，然后也可為倒轉(zhuǎn)的酰胺、磺酰胺和酯(-NH-CO-R、-NH-SO2-R、-OOC-R)；尤其優(yōu)選鹵素、羥基、醚(-OR)、酰胺(-CONH2、-CONHR、-CONRR′)、磺酰胺(-SO2NH2、-SO2NHR、-SO2NRR′)、胺(-NHR、NR′R)、和尿素(-NH-CO-NH2、-NH-CO-NHR)，或者它們尤其用于制備藥物組合物的用途，或者用于診斷或治療溫血動物、尤其是人的用途。
特別優(yōu)選這樣的式(I)化合物或其可藥用鹽，其中A是H、鹵素(例如Br)、或者芳基(例如苯基或芐基)或雜環(huán)基(例如吡啶基、吲哚基或苯并噻吩基)，其中所述芳基或雜環(huán)基可為用不超過4個優(yōu)選地不超過2個的取代基取代或未取代，其中所述取代基可以相同或不同，并且獨立地選自鹵素(例如Cl或Br)、羥基、氨基、氨基低級烷基(例如二甲基氨基)、氨基低級烷氧基(例如乙氧基胺)、低級烷基(例如甲基)、低級烷氧基(例如甲氧基)、取代或未取代的磺酰胺基(例如苯并磺酰胺基、氯苯磺酰胺基或二氯苯磺酰胺基)、氨基甲酸酯；R4R5，其中R4和R5可以相同也可以不同，并且為獨立的H、低級烷基(例如甲基、乙基或丙基)；或者R4和R5以及N原子共同形成包含1-4個氮、氧或硫原子的3-至8-元雜環(huán)(例如哌嗪基或低級烷基哌嗪基)，其中當(dāng)R4和R5以及N形成雜環(huán)時，該雜環(huán)可以被1個、2個或更多個文中描述的任意取代基取代，其中優(yōu)選哌嗪基、吡咯烷基、烷基(例如甲基)或羥烷基(例如ethanyl)。由R4和R5以及N形成的雜環(huán)的實例包括嗎啉基(可以不被取代或用甲基或二甲基進(jìn)行取代)、哌嗪基(可以不被取代或用1、2或3個取代基進(jìn)行取代，其中所述取代基優(yōu)選甲基、氧基或乙醇)或者piperadinyl(可以不被取代或用1、2或3個取代基進(jìn)行取代，其中所述取代基優(yōu)選吡咯烷基、胺、烷基胺、甲基胺、二烷基胺、二甲基胺或二乙基胺)；R2是H、C1-C3低級烷基(例如甲基)或芳基(例如苯基或芐基)或雜環(huán)基(例如吡啶基、吲哚基、噻吩基、噻唑基或苯并噻吩基)，其中所述芳基或雜環(huán)基可為用不超過4個優(yōu)選地不超過2個的取代基取代或未取代，其中所述取代基可以相同或不同，并且獨立地選自鹵素(例如Cl、F或Br)、羥基、氨基、氨基低級烷基、C1-C3低級烷基、烷氧基(例如甲氧基和芐氧基，其中所述芐基環(huán)可被取代或未被取代，例如3，4-二氯芐氧基)、磺酰胺基、取代或未取代的苯并磺酰胺基(例如2，3-二氯苯磺酰胺基)、取代或未取代的磺酸鹽(例如氯苯基磺酸鹽)、取代或未取代的尿素(例如3-三氟-甲基-苯基尿素或4-嗎啉-4-基-3-三氟甲基-苯基-尿素)或氨基甲酸酯(例如乙基-N-苯基氨基甲酸酯)；R3是H、C1-C3烷基、甲基、苯基、吡啶基或oxaz-5-基；或者它們尤其用于制備藥物組合物的用途，或者用于診斷或治療溫血動物、尤其是人的用途。
尤其優(yōu)選式(I)化合物或其可藥用鹽在制備治療激酶依賴性疾病的藥物制劑中的用途。
同樣優(yōu)選式(I)化合物或其可藥用鹽如上文所述在治療激酶依賴性疾病、尤其是依賴于所述激酶的疾病和(尤其異常高表達(dá)或組成型激活的)所述激酶依賴性疾病或者依賴于激活所述激酶途徑的疾病或者依賴于任意兩種或多種所述激酶的疾病的用途。
在對本發(fā)明更廣義的理解中，激酶依賴性疾病可以是增生性疾病，包括過度增生性疾病，例如白血病、過度增生、纖維化(尤其是肺的纖維化，但也有其它類型的纖維化，如腎纖維化)、血管發(fā)生、銀屑病、動脈粥樣硬化以及血管中的平滑肌增殖(例如血管形成術(shù)之后的變窄或者再狹窄化)。
非常優(yōu)選包括施用式(I)化合物來治療激酶依賴性疾病的方法，其中所述待治療疾病為增生性疾病，優(yōu)選良性或尤其是惡性腫瘤，更優(yōu)選腦癌、腎癌、肝癌、腎上腺癌、膀胱癌、乳腺癌、胃癌(尤其是胃癌)、卵巢癌、結(jié)腸癌、直腸癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌(尤其是SCLC)、陰道癌、甲狀腺癌、肉瘤、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、多發(fā)性骨髓瘤或胃腸癌，尤其是結(jié)腸癌或結(jié)腸直腸的腺瘤或者頸部和頭部的腫瘤，或者表皮的過度增生尤其是銀屑病、前列腺過度增生，瘤形成，尤其是上皮細(xì)胞性質(zhì)的瘤形成，優(yōu)選乳房癌或白血病。同樣優(yōu)選施用式(I)化合物治療動脈粥樣硬化、血栓形成、銀屑病、硬皮病和纖維變性的方法。
式(I)的化合物能夠引起腫瘤消退，并阻止腫瘤轉(zhuǎn)移的形成以及腫瘤轉(zhuǎn)移(包括微小轉(zhuǎn)移)的生長。此外，也可以將它們用于治療表皮的過度增生(例如銀屑病)、前列腺過度增生以及瘤形成、尤其是上皮性質(zhì)的瘤形成(例如乳腺癌)。式(I)的化合物還能用于治療涉及幾種酪氨酸蛋白激酶、或者尤其是涉及分別的酪氨酸蛋白激酶范圍的免疫系統(tǒng)疾??；此外，式(I)的化合物也可以用于治療信號傳輸至少涉及一個酪氨酸蛋白激酶、或者尤其是涉及那些選自特別提到的酪氨酸蛋白激酶的酪氨酸蛋白激酶的中樞或者周圍神經(jīng)系統(tǒng)的疾病。
因此，KDR抑制劑特別適合治療涉及VEGF受體酪氨酸激酶過量表達(dá)的疾病。在這些疾病中，尤其是視網(wǎng)膜病、老年性黃斑變性、銀屑病、成血管細(xì)胞瘤、血管瘤、動脈硬化、諸如類風(fēng)濕性或風(fēng)濕性炎性疾病、尤其是關(guān)節(jié)炎(例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)或其它慢性炎性疾病(例如久喘)的炎性疾病、動脈或移植后動脈粥樣硬化、子宮內(nèi)膜異位以及尤其是瘤形成性疾病、例如所謂的實體瘤(尤其是胃腸道、胰腺、乳房、胃、宮頸、膀胱、腎、前列腺、卵巢、子宮內(nèi)膜、肺、腦的癌癥，黑素瘤，卡波濟肉瘤、頭部和頸部的鱗狀細(xì)胞癌、惡性胸膜間皮瘤、淋巴瘤或者多發(fā)性骨髓瘤)和液體瘤(例如白血病)是尤其重要的。
Flt3(FMD樣酪氨酸激酶)在造血祖細(xì)胞中以及淋巴細(xì)胞和髓細(xì)胞系的祖細(xì)胞中特異表達(dá)。已經(jīng)證實FIt3基因在患有包括AML(急性骨髓性白血病)、伴隨三系脊髓發(fā)育不良的AML(AML/TMDS)、ALL(急性成淋巴細(xì)胞性白血病)、CML(慢性髓細(xì)胞性白血病)和骨髓增生異常綜合征在內(nèi)的白血病的成人以及兒童中都有表達(dá)，因此，優(yōu)選用式(I)的化合物治療這些疾病。已經(jīng)在大約25％-30％的AML病人中發(fā)現(xiàn)了FIt3的激活性突變體。因此，F(xiàn)lt3在人白血病中作用的證據(jù)正在不斷累積，并且根據(jù)本發(fā)明有用的吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基-胺衍生物、尤其是式(I)的化合物作為Flt3抑制劑在治療該類型疾病中尤其有用(見Tse等人，Leukemia15(7)，1001-1010(2001)、Tomoki等人，Cancer Chemother.Pharmacol.48(Suppl.1)，S27-S30(2001)、Birkenkamp等人，Leukemia15(12)，1923-1921(2001)、Kelly等人，Neoplasia99(1)，310-318(2002))。
在慢性髓細(xì)胞性白血病(CML)中，由于造血干細(xì)胞(HSC)中相互平衡的染色體易位從而產(chǎn)生了BCR-ABL融合基因。后者編碼致癌的Bcr-Abl融合蛋白質(zhì)。ABL編碼受嚴(yán)格調(diào)控的蛋白質(zhì)酪氨酸激酶，其在調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、粘附和凋亡中起主要作用，而BCR-ABL融合基因編碼組成型激活的激酶，該組成型激活的激酶作用HSC，從而產(chǎn)生表現(xiàn)為不受調(diào)節(jié)的克隆樣增生、對骨髓基質(zhì)的粘附能力下降以及對誘變刺激的凋亡反應(yīng)減少的表型，這些表型使其逐漸向惡性轉(zhuǎn)化。最終使得粒細(xì)胞不能發(fā)育成為成熟淋巴細(xì)胞，并釋放進(jìn)入循環(huán)，進(jìn)而導(dǎo)致成熟細(xì)胞不足，并導(dǎo)致對感染的敏感性增加。已有描述表明Bcr-Abl的ATP競爭性抑制劑阻止該激酶激活促有絲分裂和抗細(xì)胞凋亡的通路(例如P-3激酶和STAT5)，從而導(dǎo)致BCR-ABL表型細(xì)胞死亡，并因此提供了抗CML的有效療法。因此，根據(jù)本發(fā)明有用的吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基-胺衍生物，尤其是式(I)化合物，作為Bcr-Abl抑制劑尤其適合治療涉及其過量表達(dá)的疾病，尤其是諸如CML或ALL的白血病。
因此，抑制EGF-R的酪氨酸激酶或者其它提及的蛋白質(zhì)酪氨酸激酶活性的式(I)化合物在例如治療良性或惡性腫瘤中是有用的。例如式(I)化合物除了能夠抑制由VEGF觸發(fā)的實體瘤的血管化作用以外，還能夠同時抑制具有不受調(diào)節(jié)的EGF-R和/或ErbB-2活性的腫瘤生長。這種聯(lián)合活性導(dǎo)致了改善的抗腫瘤效果(見WO02/41882)。此外，該雙重抑制劑的使用減少了藥物-藥物相互作用的風(fēng)險，并且與聯(lián)合療法相比進(jìn)一步減少了藥物的總施用量。式(I)化合物能夠減慢腫瘤生長或者實現(xiàn)腫瘤退化，并能夠抑制腫瘤轉(zhuǎn)移形成以及微轉(zhuǎn)移生長。它們尤其可以用于表皮過度增生的病例(銀屑病)中，用于治療像諸如非小細(xì)胞肺癌、鱗狀細(xì)胞癌(頭部和頸部)、乳腺癌、胃癌、卵巢癌、結(jié)腸癌和前列腺癌以及神經(jīng)膠質(zhì)瘤的實體瘤，以及用于治療尤其是例如急性髓細(xì)胞樣白血病(AML)和慢性髓細(xì)胞樣白血病(CML)的白血病中。此外，式(I)的化合物能夠用于治療那些涉及幾種蛋白質(zhì)酪氨酸激酶和/或(此外)絲氨酸/蘇氨酸蛋白質(zhì)激酶、或者尤其是涉及單獨的蛋白質(zhì)酪氨酸激酶和/或(此外)絲氨酸/蘇氨酸蛋白質(zhì)激酶的免疫系統(tǒng)疾病；式(I)的化合物也能夠用于治療那些信號傳遞涉及幾個蛋白質(zhì)酪氨酸激酶和/或(此外)絲氨酸/蘇氨酸蛋白質(zhì)激酶的、或者涉及尤其是單一蛋白質(zhì)酪氨酸激酶和/或(此外)絲氨酸/蘇氨酸蛋白質(zhì)激酶的中樞神經(jīng)系統(tǒng)或周圍神經(jīng)系統(tǒng)的疾病。
認(rèn)為血管發(fā)生是那些生長超過大約1-2mm最大直徑的腫瘤絕對的必要條件；到達(dá)該限度時，氧和營養(yǎng)素可以通過擴散提供至腫瘤細(xì)胞。因此，每個腫瘤，不考慮其起源及其原因，在到達(dá)一定大小之后它的生長就依賴于血管發(fā)生。
有三種主要機制在血管生成抑制劑的抗腫瘤活性中起重要作用1)抑制血管尤其是毛細(xì)血管生長進(jìn)入血管靜止的腫瘤，這樣由于細(xì)胞凋亡和增殖達(dá)到平衡就使得腫瘤沒有凈生長；2)由于沒有血流量進(jìn)出腫瘤從而阻止腫瘤細(xì)胞的遷移；以及3)抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖，從而避免了通過內(nèi)皮細(xì)胞(通常排列在血管上)施加在外圍組織上的旁分泌生長刺激效應(yīng)。
本發(fā)明也可以用于預(yù)防或者治療由持續(xù)性血管發(fā)生引發(fā)的疾病，如牛皮癬；卡波濟肉瘤；再狹窄，例如支架誘導(dǎo)的再狹窄；子宮內(nèi)膜異位癥；節(jié)段性回腸炎；霍奇金病；白血?。魂P(guān)節(jié)炎，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；血管瘤；血管纖維瘤；眼疾病，如糖尿病性視網(wǎng)膜病和新血管青光眼；腎臟疾病，如腎小球腎炎；糖尿病性腎病；惡性腎硬化；血栓性微血管病綜合征；移植排斥和腎小球病；纖維化疾病，如肝臟的硬化；腎小球系膜細(xì)胞增生性疾??；動脈硬化；神經(jīng)組織損傷。本發(fā)明也可用于抑制氣囊導(dǎo)管治療后的血管再閉塞，用于血管修復(fù)或用于插入保持血管開放的機械裝置如支架后，用作免疫抑制劑，用作無疤創(chuàng)傷愈合的輔助，用于治療老年斑和接觸性皮炎。
根據(jù)本發(fā)明，最優(yōu)選的是式(I)化合物或其可藥用鹽在下文“實施例”中例證的用途。
藥物組合物本發(fā)明也涉及包含式(I)化合物的藥物組合物，涉及它們的治療性(在本發(fā)明更廣義的方面也涉及預(yù)防性)治療的用途或者治療激酶依賴性疾病、尤其是上文敘述的優(yōu)選疾病中的方法，涉及所述用途的化合物，并且涉及藥物制劑、尤其是所述用途藥物制劑的制備。本發(fā)明還涉及體內(nèi)轉(zhuǎn)化為所述式(I)化合物的式(I)化合物前體藥物。因此，任何談及的式(I)化合物根據(jù)需要和有利地也理解為式(I)化合物對應(yīng)的前體藥物。
本發(fā)明的可藥用化合物也可以用于例如制備包含有效量式(I)化合物或其可藥用鹽的藥物組合物，所述式(I)化合物或其可藥用鹽作為活性成分與一種或多種顯著量的無機或有機的固體或液體的可藥用載體一起或混合。
本發(fā)明還涉及適合給溫血動物尤其是人(或者來自溫血動物尤其是人的細(xì)胞或細(xì)胞系，如淋巴細(xì)胞)施用的、用于治療或者預(yù)防(在本發(fā)明更廣義的方面)對激酶活性的抑制起反應(yīng)的疾病的、包含一定量式(I)化合物或其可藥用鹽的藥物組合物，所述一定量式(I)化合物或其可藥用鹽對所述抑制是有效的，尤其當(dāng)其與至少一種可藥用載體一起時。
根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物為那些經(jīng)腸內(nèi)(例如鼻的、直腸的或口腔的)或腸胃外(例如肌內(nèi)的或靜脈內(nèi)的)施用于溫血動物(尤其是人)的、單獨或者與顯著量的可藥用載體一起的包含有效劑量藥學(xué)活性成分的藥物組合物。有效成分的劑量取決于溫血動物的物種、體重、年齡以及個體條件、個體藥物代謝動力學(xué)數(shù)據(jù)、待治療的疾病和給藥模式。
本發(fā)明也涉及治療對激酶的抑制起反應(yīng)的疾病的治療方法，所述方法包括向尤其是溫血動物(例如由于一種上述疾病需要該治療的人)施用(抗所述疾病)的預(yù)防或治療有效量的根據(jù)本發(fā)明的式(I)化合物。
式(I)化合物或其可藥用鹽向溫血動物例如大約70kg體重的人施用的劑量優(yōu)選從大約3毫克/人/天至大約10克/人/天、更加優(yōu)選從大約10毫克/人/天至大約1.5克/人/天、最優(yōu)選從大約100毫克/人/天至大約1000毫克/人/天，優(yōu)選分成1-3個例如相同大小的單劑量。一般而言，兒童接受成年人劑量的一半。
該藥物組合物包含從大約1％至大約95％、優(yōu)選從大約20％至大約90％的活性成分。根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物可以是例如單位劑量的形式，例如安瓿劑、小瓶、栓劑、錠劑、片劑或者膠囊劑形式。
本發(fā)明的藥物組合物通過本身已知的方式，例如通過常規(guī)的溶解、凍干、混合、?；虺尚瓦^程進(jìn)行制備。
優(yōu)選使用活性成分的溶液、還有懸液、特別是等滲水溶液或懸液，例如在為僅包含活性成分或包含活性成分和載體(例如甘露醇)的凍干組合物時，所述溶液或懸液可在使用之前制備。該藥物組合物可以進(jìn)行滅菌，和/或包含諸如防腐劑、穩(wěn)定劑、濕潤劑和/或乳化劑、增溶劑、調(diào)節(jié)滲透壓的鹽和/或緩沖劑的賦形劑，并且通過本身已知的方式、例如通過常規(guī)的溶解或凍干過程的方式進(jìn)行制備。所述溶液或懸液可以包含增加粘度的物質(zhì)，例如羧甲基纖維素納、羧甲基纖維素、葡聚糖、聚乙烯吡咯酮或者明膠。
油中懸液包含作為油成分的、通常用于注射目的的植物的、合成的或者半合成油。尤其可以提及的是這樣的液體脂肪酸酯，其包含作為酸性成分的、具有8-22個、尤其是12-22個碳原子的長鏈脂肪酸，諸如月桂酸、十三烷酸、十四烷酸、十五烷酸、軟脂酸、十七烷酸、硬脂酸、花生酸、山崳酸或相應(yīng)未飽和酸、例如油酸、反油酸、芥酸、巴西勒酸或亞油酸，如果希望的話，所述液體脂肪酸酯中加入抗氧化劑諸如維生素E、β-胡蘿卜素或3，5-二-叔丁基-4-羥基甲苯。那些脂肪酸酯的醇成分最大具有6個碳原子，并且是諸如單、雙或三羥基的單羥基或多羥基醇，諸如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇或戊醇或其異構(gòu)體，但優(yōu)選乙二醇和丙三醇。因此，提及下列脂肪酸酯的實例油酸乙酯、十四烷酸異丙酯、棕櫚酸異丙酯、“LabrafilM 2375”(聚氧乙烯甘油三油酸酯，Gattefosse，巴黎)、“Miglyol 812”(具C8至C12鏈長的飽和脂肪酸的甘油三酸酯，Huis AG，德國)、但尤其是諸如棉子油、杏仁油、橄欖油、蓖麻油、芝麻油、大豆油并特別優(yōu)選花生油的植物油。
注射組合物用常規(guī)方法在無菌條件下制備；同樣應(yīng)用于將所述組合物裝入安瓿或小瓶以及封口該容器。
可以通過組合活性成分和固體載體、?；没旌衔?如果期望的話)、并在加入適當(dāng)賦形劑后將該混合物加工為片劑、錠劑或膠囊劑(如果期望或需要的話)，從而獲得口服的藥物組合物。也可能將它們整合進(jìn)入塑料載體，以便活性成分能夠以數(shù)量可測的方式進(jìn)行擴散或釋放。
特別合適的載體有填充劑，例如乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨糖醇的糖、纖維素制劑和/或諸如磷酸三鈣或磷酸氫鈣的磷酸鈣，以及粘合劑，例如使用諸如玉米、小麥、水稻或馬鈴薯淀粉的淀粉糊、明膠、西黃耆膠、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素納和/或聚乙烯吡咯烷酮，和/或崩解劑(如果期望的話)，例如上述淀粉、和/或羧甲基淀粉、交聯(lián)的聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂、海藻酸或其諸如海藻酸鈉的鹽。賦形劑尤其是流動調(diào)節(jié)劑和潤滑劑，例如硅酸、滑石、硬脂酸或其諸如硬脂酸鎂或硬脂酸鈣的鹽、和/或聚乙二醇。錠劑片心以適當(dāng)?shù)摹⑷芜x地腸道的包衣提供，包含阿拉伯膠、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化鈦，或者由溶于適當(dāng)有機溶劑的包衣溶液用于制備包衣，或者為了制備腸溶包衣，由適當(dāng)?shù)睦w維素制劑溶液例如乙基纖維素鄰苯二甲酸鹽或羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸鹽制備。膠囊是用明膠制備的干填充膠囊和用明膠及諸如丙三醇或山梨糖醇的增塑劑制備的密封軟膠囊。所述干填充膠囊可以包含顆粒形式的活性成分，例如具有諸如乳糖的填充劑、諸如淀粉的粘合劑和/或諸如滑石或硬脂酸鎂的助流劑，并且如果希望的話還具有穩(wěn)定劑。在軟膠囊中，優(yōu)選將活性成分溶解或懸浮于諸如脂肪油、石蠟油或液體聚乙二醇的適當(dāng)油性賦形劑中，也可加入穩(wěn)定劑和/或抗菌劑。例如為了分辨目的或者為了指示活性成分的不同劑量，可以向片劑或錠劑包衣或膠囊外殼中加入染料或色素。
組合式(I)化合物也可以用于與其它抗增殖劑組合。所述抗增殖劑包括但不局限于芳化酶抑制劑、抗雌激素藥、拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制劑、微管活性劑、烷化劑、組蛋白脫乙?；敢种苿⒄T導(dǎo)細(xì)胞分化過程的化合物、環(huán)加氧酶抑制劑、MMP抑制劑、mTOR抑制劑、抗腫瘤的抗代謝物、鉑化合物、靶向/降低蛋白激酶或脂質(zhì)激酶活性的化合物和進(jìn)一步抗血管生成的化合物、靶向、降低或抑制蛋白質(zhì)磷酸酶或脂質(zhì)磷酸酶活性的化合物、促性腺激素釋放因子激動劑、抗雄激素藥、甲硫氨酸氨肽酶抑制劑、二膦酸鹽、生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑、抗增殖性抗體、類肝素酶抑制劑、Ras致癌同種型抑制劑、端粒末端轉(zhuǎn)移酶抑制劑、蛋白酶體抑制劑、用于治療血液性惡性腫瘤的試劑、靶向、降低或抑制Flt-3活性的化合物、Hsp90抑制劑、替莫唑胺(TEMODAL)和甲酰四氫葉酸。
本文所用的術(shù)語“芳化酶抑制劑”涉及抑制雌激素生成即抑制底物雄烯二酮和睪酮分別轉(zhuǎn)化為雌酮和雌二醇的化合物。該術(shù)語包括但不局限于類固醇、尤其是阿他美坦、依西美坦和福美坦，以及特別地非類固醇的、尤其是氨魯米特、洛太米特、吡魯米特、曲洛司坦、睪內(nèi)脂、膚康王、伏氯唑、法倔唑、阿那曲唑和來曲唑。依西美坦可以以例如其諸如商標(biāo)AROMASIN的商品化形式進(jìn)行施用。福美坦可以以例如其諸如商標(biāo)LENTARON的商品化形式進(jìn)行施用。法倔唑可以以例如其諸如商標(biāo)AFEMA的商品化形式進(jìn)行施用。阿那曲唑可以以例如其諸如商標(biāo)ARIMIDEX的商品化形式進(jìn)行施用。來曲唑可以以例如其諸如商標(biāo)FEMARA或FEMAR的商品化形式進(jìn)行施用。氨魯米特可以以例如其諸如商標(biāo)ORIMETEN的商品化形式進(jìn)行施用。包含的化學(xué)治療劑為芳化酶抑制劑的本發(fā)明組合對于治療諸如乳腺腫瘤的激素受體陽性腫瘤尤其有用。
文中所用的術(shù)語“抗雌激素藥”涉及在雌激素受體水平對抗雌激素效應(yīng)的化合物。該術(shù)語包括但不局限于他莫西芬、氟維司群、雷咯昔芬和鹽酸雷咯昔芬。他莫西芬可以以例如其諸如商標(biāo)NOLVADEX的商品化形式進(jìn)行施用。鹽酸雷咯昔芬可以以例如其諸如商標(biāo)EVISTA的商品化形式進(jìn)行施用。氟維司群可以按照US 4,659,516公布的配方進(jìn)行制造或者其可以以例如其諸如商標(biāo)FASLODEX的商品化形式進(jìn)行施用。包含的化學(xué)治療劑為抗雌激素藥的本發(fā)明組合對于治療諸如乳腺腫瘤的雌激素受體陽性腫瘤尤其有用。
文中所用術(shù)語“抗雄激素”涉及任何能夠抑制雄激素生物效應(yīng)的物質(zhì)，并且包括但不局限于能夠按照US 4,636,505公布的配方制造的比卡魯胺(CASODEX)。
文中所用術(shù)語“促性腺激素釋放因子激動劑”包括但不局限于阿巴瑞克、戈舍瑞林和醋酸戈舍瑞林。戈舍瑞林在US 4,100,274中得到公布，并且能夠以例如其諸如商標(biāo)ZOLADEX的商品化形式進(jìn)行施用。阿巴瑞克可以按照US 5,843,901中公布的配方進(jìn)行制造。
文中所用術(shù)語“拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑”包括但不局限于托泊替康、gimatecan、依立替康、喜樹堿及其類似物、9-硝基喜樹堿和大分子的喜樹堿結(jié)合物PNU-166148(WO 99/17804中的化合物A1)。依立替康可以以例如其諸如商標(biāo)CAMPTOSAR的商品化形式進(jìn)行施用。托泊替康可以以例如其諸如商標(biāo)HYCAMTIN的商品化形式進(jìn)行施用。
文中所用術(shù)語“拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制劑”包括但不局限于諸如多柔比星(包含脂質(zhì)體制劑，如CAELYX)、柔紅霉素、表柔比星、伊達(dá)比星和奈莫柔比星、米托蒽醌和洛索蒽醌(蒽醌)、以及依托泊苷和替尼泊苷(鬼臼毒素)。依托泊苷可以以例如其諸如商標(biāo)ETOPOPHOS的商品化形式進(jìn)行施用。替尼泊苷可以以例如其諸如商標(biāo)VM 26-BRISTOL的商品化形式進(jìn)行施用。多柔比星可以以例如其諸如商標(biāo)ADRIBLASTIN或ADRIAMYCIN的商品化形式進(jìn)行施用。表柔比星可以以例如其諸如商標(biāo)FARMORUBICIN的商品化形式進(jìn)行施用。伊達(dá)比星可以以例如其諸如商標(biāo)ZAVEDOS的商品化形式進(jìn)行施用。米托蒽醌可以以例如其諸如商標(biāo)NOVANTRON的商品化形式進(jìn)行施用。
術(shù)語“微管活性劑”涉及微管穩(wěn)定劑、微管去穩(wěn)定劑和微管聚合抑制劑，其包括但不局限于諸如紫杉醇和多西紫杉的紫杉烷、諸如長春堿、尤其是硫酸長春堿鹽的長春花生物堿、尤其是硫酸長春新堿的長春新堿、長春瑞濱、discodermolide、秋水仙堿和諸如epothilone B或D或其衍生物的epothilone及其衍生物。紫杉醇可以以例如其諸如商標(biāo)TAXOL的商品化形式進(jìn)行施用。多西紫杉可以以例如其諸如商標(biāo)TAXOTERE的商品化形式進(jìn)行施用。硫酸長春堿可以以例如其諸如商標(biāo)VINBLASTIN R.P的商品化形式進(jìn)行施用。硫酸長春新堿可以以例如其諸如商標(biāo)FARMISTIN的商品化形式進(jìn)行施用。Discodermolide可以按照例如US 5,010,099公布的配方進(jìn)行制造。還包含WO 98/10121、US 6,194,181、WO 98/25929、WO98/08849、WO99/43653、WO 98/22461和WO 00/31247中公布的Epothilone衍生物。特別優(yōu)選Epothilone A和/或B。
文中所用術(shù)語“烷化劑”包括但不局限于環(huán)磷酰胺、異磷酰胺、美法侖或亞硝基脲(BCNU或Gliadel)。環(huán)磷酰胺可以以例如其諸如商標(biāo)CYCLOSTIN的商品化形式進(jìn)行施用。異磷酰胺可以以例如其諸如商標(biāo)HOLOXAN的商品化形式進(jìn)行施用。
術(shù)語“組蛋白脫乙?；敢种苿被颉癏DAC抑制劑”涉及抑制組蛋白脫乙?；覆⑶揖哂锌乖鲋郴钚缘幕衔铩＿@包括WO 02/22577中公布的化合物，尤其是N-羥基-3-[4-[[(2-羥乙基)[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基[苯基]-2E-2-丙烯酰胺、N-羥基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺及其可藥用鹽。其還特別包含辛二酰苯胺異羥肟酸(SAHA)。
術(shù)語“抗腫瘤的抗代謝物”包括但不局限于5-氟尿嘧啶或5-FU、卡培他濱、吉西他濱、DNA脫甲基化劑、例如5-阿扎胞苷和地西他濱、氨甲喋呤和依達(dá)曲沙、以及諸如培美曲塞的葉酸拮抗劑?？ㄅ嗨麨I可以以例如其諸如商標(biāo)XELODA的商品化形式進(jìn)行施用。吉西他濱可以以例如其諸如商標(biāo)GEMZAR的商品化形式進(jìn)行施用。還包括單克隆抗體曲妥單抗，其可以以例如其諸如商標(biāo)HERCEPTIN的商品化形式進(jìn)行施用文中所用術(shù)語“鉑化合物”包括但不局限于卡鉑、順鉑、順氯氨鉑和奧沙利鉑。卡鉑可以以例如其諸如商標(biāo)CARBOPLAT的商品化形式進(jìn)行施用。奧沙利鉑可以以例如其諸如商標(biāo)ELOXATIN的商品化形式進(jìn)行施用。
本文所用術(shù)語“靶向/降低蛋白質(zhì)或脂質(zhì)激酶活性、或者蛋白質(zhì)或脂質(zhì)磷酸酶活性的化合物或者進(jìn)一步的抗血管生成的化合物”包括但不局限于蛋白質(zhì)酪氨酸激酶抑制劑和/或絲氨酸和/或蘇氨酸激酶抑制劑、或者脂質(zhì)激酶抑制劑，例如a)靶向、降低或抑制血小板衍生的生長因子受體(PDGFR)活性的化合物，例如靶向、降低或抑制PDGFR活性的化合物，尤其是抑制PDGF受體的化合物，例如N-苯基-2-嘧啶-胺衍生物，如imatinib、SU101、SU6668和GFB-111；b)靶向、降低或抑制成纖維細(xì)胞生長因子受體(FGFR)活性的化合物；c)靶向、降低或抑制胰島素樣生長因子受體I(IGF-IR)活性的化合物，例如靶向、降低或抑制IGF-IR活性的化合物，尤其是抑制IGF-IR受體的化合物，如WO 02/092599中公布的那些化合物；d)靶向、降低或抑制Trk受體酪氨酸激酶家族活性的化合物；e)靶向、降低或抑制Axl受體酪氨酸激酶家族活性的化合物；f)靶向、降低或抑制c-Met受體活性的化合物；
g)靶向、降低或抑制Kit/SCFR受體酪氨酸激酶活性的化合物；h)靶向、降低或抑制C-kit受體酪氨酸激酶(PDGFR家族的一部分)活性的化合物，例如靶向、降低或抑制c-Kit受體酪氨酸激酶家族活性的化合物，尤其是抑制c-Kit受體的化合物，例如imatinib；i)靶向、降低或抑制c-Abl家族成員及其基因融合產(chǎn)物(例如BCR-Abl激酶)活性的化合物，例如靶向、降低或抑制c-Abl家族成員及其基因融合產(chǎn)物的化合物，例如N-苯基-2-嘧啶-胺衍生物，例如imatinib、PD180970、AG957、NSC 680410或來自ParkeDavis的PD173955；j)靶向、降低或抑制蛋白激酶C(PKC)和絲氨酸/蘇氨酸激酶的Raf家族成員、MEK、SRC、JAK、FAK、PDK和Ras/MAPK家族成員或者PI(3)激酶家族或PI(3)激酶相關(guān)激酶家族成員、和/或細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶家庭(CDK)成員活性的、并且尤其是那些US 5,093,330中公布的諸如米哚妥林的星形孢菌素衍生物的化合物；其它化合物的實例還包括例如UCN-01、沙芬戈、BAY 43-9006、苔蘚抑素I、哌立福辛、llmofosine、RO 318220和RO 320432；諸如WO 00/09495中公布的那些異喹啉化合物、FTI、PD184352或QAN697(P13K抑制劑)；k)靶向、降低或抑制蛋白質(zhì)酪氨酸激酶抑制劑活性的化合物，例如靶向、降低或抑制蛋白質(zhì)酪氨酸激酶抑制劑活性的、包括甲磺酸伊馬替尼(GLEEVEC)或酪氨酸磷酸化抑制劑的化合物。酪氨酸磷酸化抑制劑優(yōu)選低分子量(Mr＜1500)的化合物或其可藥用鹽，尤其是選自芐叉丙二腈類或者S-芳基苯丙二腈或雙底物喹啉類(bisubstrate quinoline class)的化合物，更尤其是選自酪氨酸磷酸化抑制劑A23/RG-50810、AG 99、酪氨酸磷酸化抑制劑AG 213、酪氨酸磷酸化抑制劑AG 1748、酪氨酸磷酸化抑制劑AG 490、酪氨酸磷酸化抑制劑B44、酪氨酸磷酸化抑制劑B44(+)對映異構(gòu)體、酪氨酸磷酸化抑制劑AG 555、AG 494、酪氨酸磷酸化抑制劑AG 556、AG957和adaphostin(4-{[(2，5-二羥基苯基)甲基]氨基}-苯甲酸金剛烷酯、NSC 680410、adaphostin)的化合物；以及I)靶向、降低或抑制受體酪氨酸激酶的表皮生長因子家族(同二聚體或異二聚體的EGFR、ErbB2、ErbB3、ErbB4)活性的化合物，例如靶向、降低或抑制表皮生長因子受體家族活性的化合物尤其是抑制諸如EGF受體、ErbB2、ErbB3和ErbB4的EGF受體酪氨酸激酶家族成員或者結(jié)合EGF或EGF相關(guān)配體的化合物、蛋白質(zhì)或抗體，并且特別是那些WO97/02266中一般性和特別地公布的化合物、蛋白質(zhì)或單克隆抗體，例如實施例39的化合物或EP 0 564 409、WO 99/03854、EP 0520722、EP 0 566226、EP 0 787 722、EP 0 837 063、US 5,747,498、WO98/10767、WO97/30034、WO 97/49688、WO 97/38983、并且尤其是WO 96/30347(例如命名為CP 358774的化合物)、WO 96/33980(例如化合物ZD 1839)和WO 95/03283(例如化合物ZM105180)中的化合物，例如司徒曼布(HERCEPTIN)、西妥昔單抗、Iressa、Tarceva、OSI-774、CI-1033、EKB-569、GW-2016、E1.1、E2.4、E2.5、E6.2、E6.4、E2.11、E6.3或E7.6.3、以及WO 03/013541中公布的7H-吡咯并-[2，3-d]嘧啶衍生物。
進(jìn)一步的抗血管生成的化合物包括它們的活性具有另一機制、例如與蛋白質(zhì)或脂質(zhì)激酶抑制無關(guān)的化合物，例如沙利度胺(THALOMID)和TNP-470。
靶向、降低或抑制蛋白質(zhì)或脂質(zhì)磷酸酶活性的化合物是諸如磷酸酶1、磷酸酶2A、PTEN或CDC25的抑制劑，例如岡田酸或其衍生物。
誘導(dǎo)細(xì)胞分化過程的化合物例如視黃酸、α-γ-或β-生育酚或α-γ-或δ-生育三烯酚。
文中所用術(shù)語環(huán)加氧酶抑制劑包括但不局限于例如Cox-2抑制劑、5-烷基取代的2-芳基氨基苯乙酸及衍生物，例如塞來考昔(CELEBREX)、羅非考昔(VIOXX)、艾托考昔、伐地考昔或5-烷基-2-芳基氨基苯乙酸，例如5-甲基-2-(2′-氯-6′-氟苯胺基)苯乙酸、lumiracoxib。
本文所用術(shù)語“二膦酸鹽”包括但不局限于etridonic acid、clodronicacid、替魯磷酸、帕米磷酸、阿侖磷酸、伊班磷酸、利塞磷酸和唑來磷酸?！癊tridonic acid”可以以例如其諸如商標(biāo)DIDRONEL的商品化形式進(jìn)行施用?！癈lodronic acid”可以以例如其諸如商標(biāo)BONEFOS的商品化形式進(jìn)行施用?！疤骠斄姿帷笨梢砸岳缙渲T如商標(biāo)SKELID的商品化形式進(jìn)行施用?！芭撩琢姿帷笨梢砸岳缙渲T如商標(biāo)AREDIATM的商品化形式進(jìn)行施用?！鞍隽姿帷笨梢砸岳缙渲T如商標(biāo)FOSAMAX的商品化形式進(jìn)行施用?！耙涟嗔姿帷笨梢砸岳缙渲T如商標(biāo)BONDRANAT的商品化形式進(jìn)行施用。“利塞磷酸”可以以例如其諸如商標(biāo)ACTONEL的商品化形式進(jìn)行施用。“唑來磷酸”可以以例如其諸如商標(biāo)ZOMETA的商品化形式進(jìn)行施用術(shù)語“mTOR抑制劑”涉及抑制雷帕霉素的哺乳動物靶點(mTOR)、并且具有抗增殖活性的化合物，例如西羅莫司(Rapamune)、依維莫司(CerticanTM)、CCI-779和ABT578。
本文所用術(shù)語“類肝素酶抑制劑”是指靶向、降低或抑制硫酸肝素降解的化合物。該術(shù)語包括但不局限于PI-88。
本文所用術(shù)語“生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑”是指淋巴因子或干擾素，例如干擾素γ。
本文所用的諸如H-Ras、K-Ras或N-Ras的術(shù)語“Ras致癌同種型抑制劑”是指靶向、降低或抑制Ras致癌活性的化合物，例如“法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑”，例如L-744832、DK8G557或P115777(Zarnestra)。
本文所用術(shù)語“端粒末端轉(zhuǎn)移酶抑制劑”是指靶向、降低或抑制端粒末端轉(zhuǎn)移酶活性的化合物。靶向、降低或抑制端粒末端轉(zhuǎn)移酶活性的化合物尤其是抑制端粒末端轉(zhuǎn)移酶受體的化合物，例如telomestatin。
本文所用術(shù)語“甲硫氨酸氨肽酶抑制劑”是指靶向、降低或抑制甲硫氨酸氨肽酶活性的化合物。靶向、降低或抑制甲硫氨酸氨肽酶活性的化合物例如bengamide或其衍生物。
本文所用術(shù)語“蛋白酶體抑制劑”是指靶向、降低或抑制蛋白酶體活性的化合物。靶向、降低或抑制蛋白酶體活性的化合物包括例如PS-341和MLN 341。
本文所用術(shù)語“基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑”或“MMP”抑制劑包括但不局限于膠原肽模擬抑制劑和非肽模擬抑制劑、四環(huán)素衍生物，例如異羥肟酸肽模擬抑制劑巴馬司他及其口服的生物有效性類似物馬立馬司他(BB-2516)、普啉司他(AG3340)、metastat(NSC 683551)、BMS-279251、BAY 12-9566、TAA211、MM1270B或AAJ996。
本文所用術(shù)語“用于治療血液性惡性腫瘤的試劑”包括但不局限于FMS樣酪氨酸激酶抑制劑(例如靶向、降低或抑制FMS樣酪氨酸激酶受體(Flt-3R)活性的化合物)、干擾素、1-b-D-阿糖呋喃胞嘧啶(ara-c)和重硫酸鹽(bisulfan)、以及諸如靶向、降低或抑制復(fù)原性淋巴瘤激酶的化合物的ALK抑制劑。
靶向、降低或抑制FMS樣酪氨酸激酶受體(Flt-3R)活性的化合物尤其是抑制Flt-3R受體激酶家族元化合物、蛋白質(zhì)或抗體，例如PKC412、米哚妥林、星形孢菌素衍生物、SU11248和MLN518。
本文所用術(shù)語“HSP90抑制劑”包括但不局限于靶向、降低或抑制HSP90的內(nèi)源腺苷三磷酸酶活性的化合物；通過泛素蛋白酶體途徑降解、靶向、降低或抑制HSP90服務(wù)蛋白(HSP90 client protein)的化合物。靶向、降低或抑制HSP90內(nèi)源的腺苷三磷酸酶活性的化合物尤其是抑制HSP90的腺苷三磷酸酶活性的化合物、蛋白質(zhì)和抗體，例如一種格爾德霉素衍生物17-烯丙氨基，17-去甲氧基格爾德霉素(17AAG)、格爾德霉素相關(guān)的其它化合物、根赤殼菌素抑制劑和HDAC抑制劑。
本文所用術(shù)語“抗增殖性抗體”包括但不局限于曲妥單抗(HerceptinTM)、曲妥單抗-DM1、erlotinib(TarcevaTM)、貝伐單抗(AvastinTM)、美羅華(Rituxan)、PR064553(抗CD40)和抗體2C4?？贵w是指例如完整的單克隆抗體、多克隆抗體、由至少兩種完整抗體組成的多特異性抗體、以及抗體片段，只要它們呈現(xiàn)目的生物學(xué)活性。
為了治療急性髓細(xì)胞樣白血病(AML)，可以將式(I)化合物與標(biāo)準(zhǔn)的非白血性白血病療法聯(lián)合，尤其是與用于治療AML的療法聯(lián)合。具體而言，例如可以聯(lián)合服用式(I)化合物和法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑和/或其它諸如柔紅霉素、多柔比星、Ara-C、VP-16、替尼泊苷、米托蒽醌、伊達(dá)比星、碳鉑和PKC412的對治療AML有用的藥物。
術(shù)語“抗白血病的化合物”包括例如Ara-C、嘧啶類似物，所述嘧啶類似物為脫氧胞苷的2′-α-羥基核糖(阿糖胞苷)衍生物。還包括次黃嘌呤、6-巰基嘌呤(6-MP)和磷酸氟達(dá)拉濱的嘌呤類似物。
靶向、降低或抑制組蛋白脫乙?；?HDAC)抑制劑活性的化合物，例如丁酸鈉和辛二酰苯胺異羥肟酸(SAHA)，抑制稱為組氨酸脫乙酰基酶的酶活性。特定的HDAC抑制劑包含MS275、SAHA、FK228(以前的FR901228)、曲古抑菌素A(Trichostatin A)和US 6,552,065中公布的化合物，尤其是，N-羥基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其可藥用鹽，以及N-羥基-3-[4-[(2-羥乙基){2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其可藥用鹽，尤其是乳酸鹽。
靶向、降低或抑制絲氨酸/蘇氨酸mTOR激酶活性的化合物尤其是抑制mTOR激酶家族元化合物、蛋白質(zhì)或抗體，例如RAD、RAD001、CCI-779、ABT578、SAR543、雷帕霉素及其衍生物、來自Ariad的AP23573、伊維莫司(CERTICAN)和西羅莫司。
本文所用的生長激素釋放抑制因子受體的拮抗劑是指靶向、治療或抑制生長激素釋放抑制因子受體的試劑，例如奧曲肽和SOM230。
腫瘤細(xì)胞損傷方式指代諸如電離輻射的方式。上文和下文所述術(shù)語“電離輻射”表示以電磁射線(例如X-射線和γ-射線)或粒子(例如α-粒子和β-粒子)發(fā)生的電離輻射。電離輻射用于(但不局限于)輻射療法，并在本領(lǐng)域是已知的。見Hellman，Principles of Radiation Therapy，Cancer，in Principles and Practice of Oncology，Devita等人編輯，第四版，Vol.1，pp.248-275(1993)。
本文所用術(shù)語EDG結(jié)合劑指代一類調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞再循環(huán)的免疫抑制劑，例如FTY720。
CERTICAN(依莫維司，RAD)是新研究的增殖信號抑制劑，其阻止T細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞增殖。
術(shù)語核苷酸還原酶抑制劑指代包括但不局限于氟達(dá)拉濱和/或阿糖胞苷(ara-C)、6-硫代鳥嘌呤、5-氟尿嘧啶、克拉曲濱、6-巰基嘌呤(尤其是與ara-C連用治療ALL)和/或噴司他丁的嘧啶或嘌呤核苷類似物。核苷酸還原酶抑制劑尤其是羥基脲或2-羥基-1H-異吲哚-1，3-二酮衍生物，例如Nandy等人在Acta Oncologica，Vol.33，No.8，pp.953-961(1994)中提及的PL-1、PL-2、PL-3、PL-4、PL-5、PL-6、PL-7或PL-8。
本文所用術(shù)語“S-腺苷蛋氨酸脫羧酶抑制劑”包括但不局限于US 5,461,076中公布的化合物。
還特別包含WO 98/35958中公布的諸如1-(4-氯苯胺基)-4-(4-吡啶基甲基)-2，3-二氮雜萘或其可藥用鹽(例如琥珀酸鹽)的、WO 00/09495、WO00/27820、WO 00/59509、WO 98/11223、WO00/27819和EP 0 769 947中公布的化合物、蛋白質(zhì)或VEGF的單克隆抗體，包括那些在Prewett等人，Cancer Res，Vol.59，pp.5209-5218(1999)、Yuan等人，Proc Natl Acad SciUSA，Vol.93，pp.14765-14770(1996)、Zhu等人，Cancer Res，Vol.58，pp.3209-3214(1998)和Mordenti等人，Toxicol Pathol，Vol.27，No.1，pp.14-21(1999)、WO 00/37502和WO 94/10202中描述的化合物、蛋白質(zhì)或單克隆抗體，包括O′Reilly等人Cell，Vol.79，pp.315-328(1994)中描述的血管他丁(ANGIOSTATIN)、O′Reilly等人，Cell，Vol.88，pp.277-285(1997)中描述的內(nèi)皮他丁(ENDOSTATIN)、鄰氨基苯甲酸酰胺、ZD4190、ZD6474、SU5416、SU6668、貝伐單抗或者抗VEGF抗體或抗VEGF受體的抗體(例如rhuMAb和RHUFab)、VEGF適體(例如Macugon)、FLT-4抑制劑、FLT-3抑制劑、VEGFR-2IgG1抗體、Angiozyme(RPI 4610)和Avastan。
本文所用光動力學(xué)療法指代使用某些已知為光增敏劑的化學(xué)藥物來治療或預(yù)防癌癥的療法。光動力學(xué)療法的實例包括使用諸如VISUDYNE和卟吩姆鈉的試劑的療法。
本文所用血管穩(wěn)定(Angiostatic)類固醇指代阻止或抑制血管發(fā)生的試劑，例如阿奈可他、曲安西龍、氫化可的松、11-α-表氫化可的松、11-脫氧皮(甾)醇、17α-羥孕酮、皮質(zhì)酮、去氧皮質(zhì)酮、睪酮、雌酮和地塞米松。
包含皮質(zhì)類固醇的植入物指代諸如氟輕松、地塞米松的試劑。
其它的化療劑包括但不局限于植物生物堿、激素試劑和拮抗劑、生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑、優(yōu)選淋巴因子或干擾素、反義寡核苷酸或寡核苷酸衍生物、或者混雜的試劑或具其它或未知作用機理的試劑。
通過代碼編號、通用名稱或商業(yè)名稱鑒定的活性劑結(jié)構(gòu)可以從實際版次的標(biāo)準(zhǔn)提綱“默克索引”或諸如“國際專利(Patents International)(IMS世界出版物)”的數(shù)據(jù)庫中獲得。
上述能與式(I)化合物聯(lián)合使用的化合物可以按照該領(lǐng)域(例如上文引用的文獻(xiàn)中)描述的方法進(jìn)行制備和施用。
進(jìn)一步地，式(I)化合物也可以用于與諸如施用激素、尤其是輻射的已知治療方法聯(lián)用。
尤其是，式(I)化合物可以用作放射增敏劑，尤其是對于對放射療法表現(xiàn)為弱敏感性的腫瘤的治療。
“聯(lián)合”表示以一個劑量單位形式的固定聯(lián)合、或者多組分的用于聯(lián)合施用的試劑盒、或者其任意聯(lián)合，在所述多組分試劑盒中式(I)化合物與聯(lián)合的配偶體可以同時單獨施用或者在允許聯(lián)合的配偶體表現(xiàn)合作效應(yīng)(例如協(xié)同效應(yīng))的時間間隔內(nèi)各自施用。
實施例下列實施例幫助描述本發(fā)明而不限制其范圍縮寫DMSO 二甲基亞砜ES-MS 電噴質(zhì)譜EtOAc 乙酸乙酯HPLC 高壓液相層析mL 毫升NMR核磁共振
RT 室溫AtRET分鐘為單位的HPLC保留時間(方法A)BtRET分鐘為單位的HPLC保留時間(方法B)CtRET分鐘為單位的HPLC保留時間(方法C)DtRET分鐘為單位的HPLC保留時間(方法D)TFA 三氟乙酸THF 四氫呋喃TMSCI 氯化三甲基甲硅烷當(dāng)未給出溫度時，反應(yīng)在室溫進(jìn)行。
溶劑的比例，例如洗脫液或溶劑混合物中的溶劑的比例以體積比體積(v/v)給出。
合成通過使用硅膠(Merck；40-63μm)進(jìn)行快速層析。使用預(yù)先包被硅膠(Merck 60 F254)的平板進(jìn)行薄層層析。通過紫外線(254nm)完成成分的檢測。使用Nucleosil 100-3 C18HD 125×4.0mm柱(1mL/min；7分鐘內(nèi)20-100％NeCN/0.1％TFA)(方法A)、SpectraSystem SP8800/UV2000使用Nucleosil 100-5 C18AB 250×4.6mm柱(2mL/min；10分鐘內(nèi)2-100％MeCN/0.1％TFA)(方法B)、使用Chromalith Speed ROD RP18 50-4.6mm柱(Merck)(2mL/min；2分鐘內(nèi)2-100％MeCN/0.1％TFA)(方法C)或C82.1-50mm 3μm柱(水)(2mL/min；2分鐘內(nèi)5-95％MeCN/0.1％TFA)(方法D)在Agilent HP 1100上進(jìn)行HPLC。用四乙基硅烷作為內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)在Varian Gemini 400或Bruker DRX 500分光計上進(jìn)行1H-NMR測量。化學(xué)位移表達(dá)為來源于四乙基硅烷以的ppm磁場并以赫茲(Hz)表達(dá)偶聯(lián)常數(shù)(J)。用Fisons Instruments VG Platform II獲得電噴質(zhì)譜。用Büchi 510熔點裝置測量熔點。用商業(yè)可得的溶劑和化合物進(jìn)行合成。
分析的HPLC條件
系統(tǒng)17分鐘線性梯度20-100％的CH3CN(0.1％TFA)和H2O(0.1％TFA)加上2分鐘100％CH3CN(0.1％TFA)；在215nm檢測，30℃流速1mL/min。柱子Nucleosil 100-3C18HD(125×4mm)。
系統(tǒng)27分鐘線性梯度2-100％的CH3CN(0.1％TFA)和H2O(0.1％TFA)加上2分鐘100％CH3CN(0.1％TFA)；在215nm檢測，30℃流速1mL/min。柱子Nucleosil 100-3C18HD(125×4mm)。
實施例13-{7-氨基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-酚溶于THF(6mL)的6-(3-芐氧基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺(階段1.1)(25mg，0.051mmol)在存在Pd/C(10％Engelhard 4505，6mg)條件下氫化13小時。減壓條件下過濾和蒸發(fā)溶劑之后快速層析殘余物(硅膠，CH2Cl2/MeOH/NH3＝95∶5∶0.1)以得到實施例1的白色固體化合物(14mg，0.035mmol；70％)ES-MSM+H＝401.1，Rf(CH2Cl2/MeOH/NH3＝90∶10∶0.1)＝0.33，HPLCAtRet＝2.77分鐘。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)9.59(s，1H，OH)，8.58/8.18(s/s，1H/1H，吡唑并嘧啶基)，8.01(d，9.0Hz，2H，苯基)，7.48(s，2H，NH2)，7.32(t，8.5Hz，1H，苯基-OH)，6.99(d，9.0Hz，2H，苯基)，6.96(d，8.5Hz，1H，苯基-OH)，6.93(s，1H，苯基-OH)，6.80(d，8.5Hz，1H，苯基-OH)，3.17/2.48(m/m，4H/4H，哌嗪基)，2.24(s，3H，CH3)。
階段1.1 6-(3-芐氧基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺室溫攪拌溶于乙醇(1ml)的4-(4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基)-2H-吡唑-3-基胺(階段1.2)(100mg，0.388mmol)、2-(3-芐氧基-苯基)-3-氧代-丙腈(階段1.3)(98mg，0.388mmol)、HCl(溶于乙醇，2.5mM；1，55mmol，0.9mL)17小時。加入H2O(4mL)和K2CO3(250mg)后用CH2Cl2(20mL，2x)萃取反應(yīng)混合物。用H2O(10mL)洗滌合并的有機相，干燥(Na2SO4)，在減壓條件下濃縮并快速層析(硅膠，2.5×15cm，CH2Cl2/MeOH＝9∶1)以得到階段1.1的白色固體化合物(60mg，0.122mmol；32％)；ES-MSM+H＝491.0，Rf(CH2Cl2/MeOH/NH3＝90∶10∶0.1)＝0.42；HPLCAtRet＝4.69分鐘。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)8.79/8.21(s/s，1H/1H，吡唑并嘧啶基)，8.03(d，9.0Hz，2H，苯基)，7.53(s，2H，NH2)，7.44(m，5H，芐基)，7.32(t，8.5Hz，1H，苯基-OH)，7.29(s，1H，苯基-OH)，7.13(d，8.5Hz，1H，苯基-OH)，7.06(d，8.5Hz，1H，苯基-OH)，6.97(d，9.0Hz，2H，苯基)，5.19(s，2H，芐基)，3.17/2.48(m/m，4H/4H，哌嗪基)，2.24(s，3H，CH3)。
階段1.2 4-(4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基)-2H-吡唑-3-基胺在98℃攪拌溶于AcOH的2-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-3-氧代-丙腈(階段1.4)(370mg，1.52mmol)、一水合肼(0.185mL，3.8mmol)3小時。冷卻到室溫后加入H2O(8mL)和濃HCl(0.8mL)并在回流條件下攪拌反應(yīng)混合物20分鐘。冷卻到室溫后通過緩慢加入NH3(25％)調(diào)整反應(yīng)化合物到堿性pH。過濾出沉淀物質(zhì)并保存用于進(jìn)一步的純化。用CH2Cl2(50mL，3x)萃取反應(yīng)溶液，干燥(Na2SO4)并在減壓條件下濃縮。合并沉淀的和萃取的物質(zhì)并快速層析(硅膠，3.0×18cm，CH2Cl2/MeOH/NH3＝9∶1∶01)以得到階段1.2的白色固體化合物(277mg，1.08mmol；71％)；ES-MSM+H＝258.1，Rf(CH2Cl2/MeOH/NH3＝90∶10∶0.1)＝0.28；HPLCAtRet＝4.33分鐘。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)11.55(s/broad，1H，NH)，7.55(s，1H，pyrolyl)，7.35(d，9.0Hz，2H，苯基)，6.91(d，9.0Hz，2H，苯基)，4.55(s/broad，2H，NH2)，3.10/2.46(m/m，4H/4H，哌嗪基)，2.23(s，3H，CH3).
階段1.3 2-(3-芐氧基-苯基)-3-氧代-丙腈在氬環(huán)境下于20分鐘內(nèi)將Na(260mg，11.3mmol)溶解于無水乙醇中(11mL)。加入(3-芐氧基-苯基)-乙腈(1.9g，8.68mmol)和甲酸乙酯(1.05mL，13.0mmol)后在回流條件下攪拌反應(yīng)混合物2小時。在減壓條件下蒸發(fā)溶劑，加入H2O(20mL)并通過加入AcOH調(diào)整到pH＝4.0之后用CH2Cl2(30mL，2x)萃取反應(yīng)懸浮液。用H2O(10mL)洗滌合并的有機相，干燥(Na2SO4)，在減壓條件下濃縮并快速層析(硅膠，4.5×25cm，CH2Cl2/MeOH＝98∶2)以得到階段1.3的白色固體化合物(780mg，3.11mmol；36％)；ES-MSM-H＝250.0，Rf(CH2Cl2/MeOH＝95∶5)＝0.49；HPLCAtRet＝6.07分鐘。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)7.45-7.25/6.98-6.88(m/m，8H，芳基)，5.09(s，2H，CH2)，3.98(s，2H，CH2)。
階段1.4 2-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-3-氧代-丙腈在氬環(huán)境下于10分鐘內(nèi)將160mg Na(7.0mmol)溶于無水乙醇中(6mL)。加入[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-乙腈(階段1.5)(1g，4.64mmol)和甲酸乙酯(0.56mL，7.0mmol)后在回流下攪拌反應(yīng)混合物1小時。用醚(50mL，3x)洗滌反應(yīng)漿狀物之后將固體殘余物溶解于H2O(60mL)中并通過加入AcOH調(diào)整到pH＝3.9。用CH2Cl2(50mL，3x)萃取水溶液。用H2O(50mL)洗滌合并的有機相。混合兩個水相并凍干。從MeOH/CH2Cl2中結(jié)晶得到的殘余物給出階段1.4的白色晶體化合物(721mg，3.0mmol；64％)；ES-MSM+H＝244.1；HPLCAtRet＝2.43分鐘。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)化合物在溶液中形成互變異構(gòu)平衡7.87/7.77(s/s，1H，CH＝/CH-OH)，7.53/7.17(d/d，9.0Hz，2H，苯基)，7.84/7.82(d/d，9.0Hz，2H，苯基)，3.10(m，4H，哌嗪基)，2.57/2.51(m/m，4H，哌嗪基)，2.29/2.26(s，3H，CH3)。
階段1.5 [4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-乙腈在氬環(huán)境下于85℃攪拌溶于1，2-二甲氧基乙烷(70mL)的(4-溴-苯基)-乙腈(5g，25.5mmol)、1-甲基-哌嗪(3.4mL，30.6mmol)、K2CO3(7.68g，35.7mmol)、Pd(AcO)2(280mg，1.275mmol)、2-(二-叔丁基膦基)-二苯基(1.14g，3.825mmol)20小時。加入H2O(100mL)之后用CH2Cl2(100mL，3x)萃取反應(yīng)混合物。用水洗滌合并的有機相，干燥(Na2SO4)，在減壓條件下濃縮并快速層析(硅膠，4.5×34cm，CH2Cl2/MeOH＝95∶5)以得到階段1.5的白色固體化合物(2.8g，13mmol；51％)；ES-MSM+H＝216.1；Rf(CH2Cl2/MeOH＝9∶1)＝0.47；HPLCAtRet＝2.24分鐘。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)7.14/6.91(d/d，9.5Hz，2H/2H，苯基)，7.53(s，2H，NH2)，7.44(m，5H，芐基)，7.32(t，8.5Hz，1H，苯基-OH)，7.29(s，1H，苯基-OH)，3.84(s，2H，芐基)，3.09/2.42(t/t，5.0Hz，4H/4H，哌嗪基)，2.18(s，3H，CH3)。
實施例26-(3-甲氧基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺與實施例1的化合物的制備類似地通過縮合階段1.2的化合物和2-(3-甲氧基-苯基)-3-氧代-丙腈(階段2.1)合成6-(3-甲氧基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺。產(chǎn)率48％，固體粉末；ES-MSM+H＝415.1；HPLCAtRet＝3.45分鐘。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)8.59/8.23(s/s，1H/1H，吡唑并嘧啶基)，8.06(d，9.0Hz，2H，苯基)，7.55(s，2H，NH2)，7.43(t，8.5Hz，1H，苯基-OMe)，7.10(d，8.5Hz，1H，苯基-OMe)，7.08(s，1H，苯基-OMe)，6.80(d，8.5Hz，1H，苯基-OMe)，6.98(d，9.0Hz，2H，苯基)，3.83(s，3H，CH3-O)，3.16/2.47(m/m，4H/4H，哌嗪基)，2.25(s，3H，CH3)。
階段2.1 2-(3-甲氧基-苯基)-3-氧代-丙腈與階段1.3的化合物的制備類似地合成2-(3-甲氧基-苯基)-3-氧代-丙腈產(chǎn)率76％；白色粉末；ES-MSM-H＝174.0；HPLCAtRet＝4.75分鐘。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)化合物在溶液中形成互變異構(gòu)平衡8.09/7.67(s/s，1H，CH＝/CH-OH)，7.38-7.23(m，2H，苯基)，7.01-6.97(m，1H，苯基)，6.88-6.79(m，1H，苯基)，3.74(s/broad，3H，CH3-O)。
實施例36-(3，5-二甲氧基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺與實施例1的化合物的制備類似地通過縮合階段1.2的化合物和2-(3，5-二甲氧基-苯基)-3-氧代-丙腈(階段3.1)合成6-(3，5-二甲氧基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺。產(chǎn)率44％，固體粉末；ES-MSM+H＝445.0；HPLCAtRet＝3.77分鐘。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)8.59/8.23(s/s，1H/1H，吡唑并嘧啶基)，8.06(d，9.0Hz，2H，苯基)，7.55(s，2H，NH2)，7.43(t，8.5Hz，1H，苯基-OMe)，7.10(d，8.4Hz，1H，苯基-OMe)，7.57(s，2H，NH2)，7.01(d，9.0Hz，2H，苯基)，6.89(s，2H，苯基-OMe)，6.54(s，1H，苯基-OMe)，3.83(s，6H，CH3-O)，3.16/2.47(m/m，4H/4H，哌嗪基)，2.24(s，3H，N-CH3)。
階段3.1 2-(3，5-二甲氧基-苯基)-3-氧代-丙腈與階段1.3的化合物類似地合成2-(3，5-二甲氧基-苯基)-3-氧代-丙腈。產(chǎn)率48％；白色粉末；ES-MSM+H＝206.0；HPLCAtRet＝4.79分鐘。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)化合物在溶液中形成互變異構(gòu)平衡8.11/7.68(s/s，1H，CH＝/CH-OH)，6.85/6.54(s/s，2H，苯基)，6.44/6.38(s/s，1H，苯基)，3.74(s/broad，6H，CH3-O)。
實施例46-(3-芐氧基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺通過階段1.1公開的步驟制備。
實施例5-69與實施例1的制備類似地合成列于表1的下列實施例。表1下面的正文中描述了用于制備實施例5-69化合物的中間體的合成，其中所述的實施例5-69化合物為商業(yè)不可得。在標(biāo)題化合物攜帶游離氨基的情況中(實施例52-54)，最終產(chǎn)物在數(shù)小時內(nèi)通過在存在THF/MeOH中的Pd/C(10％)條件下的氫化作用從其相應(yīng)的帶有硝基的前體產(chǎn)生。
表1.







階段5.12-(4-氯-苯基)-3-氧代-丙腈與階段1.3的化合物的制備類似地制備2-(4-氯-苯基)-3-氧代-丙腈89％；ES-MS[M-1]-＝177.9/179.9；HPLCAtRet＝5.67分鐘。
階段6.12-(3-氯-苯基)-3-氧代-丙腈與階段1.3的化合物的制備類似地制備2-(3-氯-苯基)-3-氧代-丙腈89％；ES-MS[M-1]-＝177.9/179.9；HPLCAtRet＝5.60分鐘。
階段8.1 3-氧代-2-苯基-丁腈與階段1.3的化合物的制備類似地制備3-氧代-2-苯基-丁腈62％，白色晶體，m.p.＞215℃；ES-ES-MS M-H＝157.9，Rf(己烷/AcOEt＝1∶1)＝0.57。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)7.84(d，9.0Hz，2H)，7.04(t，9.0Hz，2H)，6.68(t，9.0Hz，1H)，3.21(s/broad，1H，CH)，2.03(s，3H，CH3)。
階段9.1 2-甲基-3-氧代-3-苯基-丙腈與Yoo等人，Tetrahedron Lett.，第43卷，No.27，4813-4815頁(2002)的方法類似地制備2-甲基-3-氧代-3-苯基-丙腈。在氬環(huán)境下于THF中(15mL)攪拌2-溴-丙腈(0.965mL，11.05mmol)和銦粉末(In-powder)(975mg，8.5mmol)1小時。2分鐘內(nèi)加入苯甲酰腈(735mg，5.6mmol)后，在微波爐中(Emrys optimizer，personal chemistry，Sweden)于60℃攪拌反應(yīng)混合物30分鐘。通過Hyflo過濾并用THF(5mL)洗滌之后在減壓條件下濃縮反應(yīng)溶液并在醚(150mL)和磷酸鹽緩沖液(pH＝7，150mL)間分開。分離有機相之后用醚(150mL)萃取水相。用鹽水(30mL)洗滌合并的有機相，干燥(Na2SO4)，在減壓條件下濃縮并快速層析(硅膠，2×18cm，己烷/AcOEt＝3∶1)得到階段9.1的淡黃色油狀化合物(300mg，1.9mmol；34％)；ES-MSM-H＝157.9；Rf(己烷/AcOEt＝1∶1)＝0.60。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)8.06(d，8.5Hz，2H)，7.74(t，8.5Hz，1H)，7.62(t，8.5Hz，2H)，5.17(q，8.5Hz，1H，CH)，1.52(s，3H，CH3)。
與階段1.1的化合物的制備類似地通過縮合2，3-二氯-N-[4-(氰基-甲酰-甲基)-苯基]-苯磺酰胺(階段10.1)和4-(4-二甲基氨基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺(階段10.3)合成實施例10的化合物。
階段10.1 2，3-二氯-N-[4-氰基-甲酰-甲基]-苯基]-苯磺酰胺在N2環(huán)境下于15分鐘內(nèi)分批加入新切下的小塊鈉(共2.3g，100mmol)到無水EtOH中(230mL)，其會輕微放熱(達(dá)43℃)。所有的鈉溶解后(大約1小時)于室溫向無色溶液中加入2，3-二氯-N-(4-氰基甲基-苯基)-苯磺酰胺(階段10.2)(26.27g，77mmol)和甲酸乙酯(11.2mL，139mmol)。將混合物加熱回流2小時。冷卻到室溫后在減壓條件下除去溶劑并將殘余物溶于H2O中(20mL)，然后加入AcOH(200mL；pH 4)。用CH2Cl2(2x，500mL)萃取水層，用H2O洗滌合并的有機物并通過Na2SO4干燥。通過反復(fù)層析完成純化(硅膠，EtOAc和CH2Cl2/MeOH＝98∶2)以獲得米黃色晶體的2，3-二氯-N-[4-(氰基-甲酰-甲基)-苯基]-苯磺酰胺(233mg，產(chǎn)率1％)m.p.88-102℃；(CH2Cl2/MeOH＝95∶5)0.22；ES-MS[M+1]+＝368；HPLCBtRet＝5.61分鐘。
階段10.2 2，3-二氯-N-(4-氰基甲基-苯基)-苯磺酰胺在20分鐘內(nèi)加入室溫溶于吡啶(11mL)的4-氨基芐基氰化物(12g，90.8mmol)溶液和溶于THF(80mL)的2，3-二氯苯-磺酰氯化物(22.29g，90.8mmol)溶液?；亓鲾嚢璺磻?yīng)2小時。冷卻后在減壓條件下除去溶劑并將剩下的固體懸于10％HCl中(200mL)。過濾出晶體粗產(chǎn)物，用H2O洗滌并在60℃干燥。通過將粗制的化合物懸于MeOH中(250mL)，加熱回流，過濾并干燥完成最終的純化。以橙色晶體獲得2，3-二氯-N-(4-氰基甲基-苯基)-苯磺酰胺(26.54g，86％)m.p202-206℃；(CH2Cl2/MeOH 98∶2)0.54；ES-MS[M-1]-＝338.8；HPLCBtRet＝5.85分鐘。
階段10.3 4-(4-二甲基氨基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺如美國專利號2,989,539(20.6.61；Anderson和Reiff；實施例18)中所述從2-(4-二甲基氨基-苯基)-3-氧代-丙腈(階段10.4)和水合肼制備4-(4-二甲基氨基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺。4-(4-二甲基氨基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺m.p.173-176℃；(CH2Cl2/MeOH/NH3＝90∶10∶1)0.37；ES-MS[M+1]+＝203；HPLCBtRet＝1.40分鐘。
階段10.4 2-(4-二甲基氨基-苯基)-3-氧代-丙腈如美國專利號2,989,539(實施例18)中所述從(4-二甲基氨基-苯基)-乙腈、甲酸乙酯和鈉制備2-(4-二甲基氨基-苯基)-3-氧代-丙腈。
2-(4-二甲基氨基-苯基)-3-氧代-丙腈m.p.175-178℃；ES-MS[M+1]+＝189；HPLCBtRet＝2.00分鐘。
與實施例10的化合物的合成類似地用4-(4-二甲基氨基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺(階段10.3)和4-氯-苯磺酸4-(氰基-甲酰-甲基)-苯基酯(階段11.1)制備實施例11的化合物。
階段11.1 4-氯-苯磺酸4-(氰基-甲酰-甲基)-苯基酯如實施例10(階段10.1)所述制備4-氯-苯磺酸4-(氰基-甲酰-甲基)-苯基酯，但使用的是商業(yè)可得的4-(氰基甲基)苯基-4-氯苯-1-磺酸鹽。
4-氯-苯磺酸4-(氰基-甲酰-甲基)-苯基酯(162mg)；淡黃色固體；(CH2Cl2/MeOH＝95∶2)0.32；ES-MS[M+1]+＝335；HPLCBtRet＝6.23分鐘。
階段12.1 2-(4-甲氧基-苯基)-3-氧代-丁腈如Smith，Breen，Hajek和Awang，J.Org.Chem.，第35卷，No.7，2215-2221頁(1970)所述制備2-(4-甲氧基-苯基)-3-氧代-丁腈。
階段14.1 2-(4-溴-苯基)-3-氧代-丁腈根據(jù)Rau，Ger.Offen.，DE 3001266(1980)的方法合成2-(4-溴-苯基)-3-氧代-丁腈。
階段16.1 1，2-(2，6-二氯-苯基)-3-氧代-丙腈如Menzer，Lankau和Unverferth，Ger.Offen.，DE 19521822(1996)所述制備1，2-(2，6-二氯-苯基)-3-氧代-丙腈。
階段17.1 4-(3-甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺如Bruni等人，Heterocyclic.Chem.，第32卷，No.1，291-298頁(1995)所述制備4-(3-甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺和階段22.2。
階段19.1 2-苯并[b]噻吩-3-基-3-氧代-丙腈與階段1.3的化合物的制備類似地合成2-苯并[b]噻吩-3-基-3-氧代-丙腈產(chǎn)率56％；白色粉末；ES-MSM-H＝123.9；HPLCAtRet＝2.20分鐘。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)12.0(s/broad，1H)，8.00-7.70(m，3H)，7.45-7.35(m，2H)。
階段21.1 3-氧代-2-噻吩-3-基-丙腈與階段1.3的化合物的制備類似地合成3-氧代-2-噻吩-3-基-丙腈產(chǎn)率51％；白色粉末，ES-MSM-H＝112.9；HPLCAtRet＝2.03分鐘。
化合物在溶液中形成互變異構(gòu)平衡1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)7.95/7.55(s/s，1H，CH＝/CH-OH)，7.55-7.50(m，2H)，7.30-7.20(m，1H)。
階段22.1 4-苯并[b]噻吩-3-基-1H-吡唑-3-基胺與階段1.2的化合物的制備類似地合成4-苯并[b]噻吩-3-基-1H-吡唑-3-基胺產(chǎn)率80％；白色粉末；ES-MSM+H＝216.0。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)12.0(s/broad，1H)，8.00-7.80(m，2H)，7.75(s/broad，1H)，7.60(s/broad，1H)，7.40-7.30(m，2H)。
階段22.2 (2-(3-甲氧基-苯基)-3-氧代-丙腈)如Bruni等人，Heterocyclic.Chem.，第32卷，No.1，291-298頁(1995)所述制備(2-(3-甲氧基-苯基)-3-氧代-丙腈)。
階段23.1 2-甲酰-3-苯基-丙腈與階段1.3的化合物的制備類似地合成2-甲酰-3-苯基-丙腈產(chǎn)率77％；油狀；ES-MSM-H＝158.0。
化合物在溶液中形成互變異構(gòu)平衡1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)7.40-7.15(m，5H)，2.85-2.75(m，2H)。
階段24.1 4[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-乙腈與階段1.5的化合物的制備類似地合成4[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-乙腈產(chǎn)率55％；褐色固體；ES-MSM+H＝216.7；HPLCCtRet＝1.65分鐘。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)7.30-7.25(m，1H)，6.90-6.82(m，2H)，6.80-6.75(m，1H)，3.70(s，2H)，3.25-3.15(m，4H)，2.60-2.50(m，4H)，2.35(s，3H)。
階段24.2 2-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-3-氧代-丙腈與階段1.3的化合物的制備類似地合成2-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-3-氧代-丙腈產(chǎn)率100％；褐色固體；ES-MSM+H＝244.1；HPLCCtRet＝1.67分鐘。
階段24.3 4-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-1H-吡唑-3-基胺與階段1.2的化合物的制備類似地合成4-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-1H-吡唑-3-基胺產(chǎn)率36％；黃色泡沫；ES-MSM+H＝258.2；HPLCCtRet＝1.46分鐘。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)7.45(s，1H)，7.30-7.25(m，1H)，7.05-7.00(m，1H)，6.95-6.90(m，1H)，6.85-6.80(m，1H)，4.00(s/broad，2H)，3.30-3.20(m，4H)，2.65-2.58(m，4H)，2.35(s，3H)。
階段25.1 2-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-3-氧代-丙腈與階段1.3的化合物的制備類似地合成2-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-3-氧代-丙腈產(chǎn)率59％；油狀；ES-MSM+H＝199.1。
化合物在溶液中形成互變異構(gòu)平衡1H-NMR(300MHz，CDCl3)8.00/7.95(s/s，1H)，7.60-7.20(m，5H)，3.75(s，3H)。
階段26.1 2-(4-甲氧基-苯基)-3-氧代-丙腈與階段1.3的化合物的制備類似地合成2-(4-甲氧基-苯基)-3-氧代-丙腈產(chǎn)率80％；白色固體；ES-MSM-H＝174.3。
化合物在溶液中形成互變異構(gòu)平衡1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)7.80/7.58(s/s，1H)，7.55-7.50(m，1H)，7.30-7.20(m，1H)，6.90-6.80(m，2H)，3.73/3.70(s/s，3H)。
階段27.1 2-(2-甲氧基-苯基)-3-氧代-丙腈與階段1.3的化合物的制備類似地合成2-(2-甲氧基-苯基)-3-氧代-丙腈產(chǎn)率40％；褐色油狀；ES-MSM-H＝174.3；HPLCCtRet＝2.01分鐘。
階段28.1 3-氧代-2-吡啶-3-基-丙腈與階段1.3的化合物的制備類似地合成3-氧代-2-吡啶-3-基-丙腈產(chǎn)率71％；褐色固體；ES-MSM+H＝147.2；HPLCCtRet＝1.31分鐘。
階段28.2 4-吡啶-3-基-1H-吡唑-3-基胺與階段1.2的化合物的制備類似地合成4-吡啶-3-基-1H-吡唑-3-基胺產(chǎn)率68％；褐色固體；ES-MSM+H＝161.2；HPLCCtRet＝0.50分鐘。
階段30.1 [2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-乙腈與階段1.5的化合物的制備類似地合成[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-乙腈產(chǎn)率51％；褐色固體；ES-MSM+H＝246.6；HPLCCtRet＝1.72分鐘。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)7.00-6.95(m，1H)，6.85-6.75(m，2H)，3.80(s，3H)，3.65(s，2H)，3.15-3.05(m，4H)，2.60-2.55(m，4H)，2.35(s，3H)。
階段30.2 2-[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-3-氧代-丙腈與階段1.4的化合物的制備類似地合成2-[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-3-氧代-丙腈產(chǎn)率100％；褐色固體；ES-MSM+H＝274.1；HPLCCtRet＝1.62分鐘。
階段30.3 4-[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-2H-吡唑-3-基胺與階段1.2的化合物的制備類似地合成4-[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-2H-吡唑-3-基胺產(chǎn)率32％；褐色固體；ES-MSM+H＝288.2；HPLCCtRet＝1.46分鐘。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)7.50(s，1H)，7.00-6.95(m，1H)，6.90-6.80(m，2H)，3.80(s，3H)，3.20-3.10(m，4H)，2.65-2.55(m，4H)，2.35(s，3H)。
階段32.1 2-(2-芐氧基-苯基)-3-氧代-丙腈與階段1.3的化合物的制備類似地合成2-(2-芐氧基-苯基)-3-氧代-丙腈產(chǎn)率85％；白色固體；ES-MSM+H＝252.6；HPLCCtRet＝2.35分鐘。
化合物在溶液中形成互變異構(gòu)平衡1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)11.6/7.78(s，1H)，7.55-7.45(m，2H)，7.40-7.20(m，5H)，7.15-7.05(m，1H)，7.00-6.90(m，1H)，5.15(s，2H)。
階段34.1 2-(4-芐氧基-苯基)-3-氧代-丙腈與階段1.3的化合物的制備類似地合成2-(4-芐氧基-苯基)-3-氧代-丙腈產(chǎn)率95％；白色固體；ES-MSM-H＝250.3；HPLCCtRet＝2.41分鐘。
化合物在溶液中形成互變異構(gòu)平衡1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)12.0/11.7(s，1H)，7.90-7.80和7.60-7.50(m，1H)，7.40-7.25(m，6H)，7.05-6.95(m，2H)，5.10(s，2H)。
階段44.1 4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2H-吡唑-3-基胺與階段1.2的化合物的制備類似地合成4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2H-吡唑-3-基胺產(chǎn)率10％；褐色泡沫；ES-MSM+H＝213.2；HPLCCtRet＝1.66分鐘。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)7.70(d，1H)，7.60(s，1H)，7.35(d，1H)，7.30-7.25(m，1H)，7.20-7.10(m，2H)，3.80(s，3H)。
階段47.1 2-(2-甲氧基-苯基)-3-氧代-丙腈與階段1.3的化合物的制備類似地合成2-(2-甲氧基-苯基)-3-氧代-丙腈產(chǎn)率59％；白色固體；ES-MSM+H＝175.3；HPLCCtRet＝2.01分鐘。
階段47.2 4-(2-甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺與階段1.2的化合物的制備類似地合成4-(2-甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺產(chǎn)率35％；白色固體；ES-MSM+H＝190.1；HPLCCtRet＝1.40分鐘。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)11.5(bs，1H)，7.50(bs，1H)，7.30(bs，1H)，7.20-7.05(m，1H)，7.00-6.85(m，2H)，4.30(bs，2H)，3.75(s，3H)。
階段51.1 3-氧代-2-吡啶-4-基-丙腈與階段1.3的化合物的制備類似地合成3-氧代-2-吡啶-4-基-丙腈產(chǎn)率59％；橙色固體；ES-MSM+H＝147.2；HPLCCtRet＝1.00分鐘。
化合物在溶液中形成互變異構(gòu)平衡1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)13.1/9.60(bs，1H)，9.10(bs，1H)，8.20-8.00(m，2H)，7.95-7.80(m，1H)。
階段52.1 (Z)-3-二甲基氨基-2-(3-硝基-苯基)-丙烯腈將溶于二甲苯(30mL)的(3-硝基-苯基)-乙腈(1.51g，9.31mmol)、二甲氧基甲基-二甲基-胺(6.2mL，46.5mmol)回流攪拌1小時。加入己烷(20mL)之后在0℃冷卻反應(yīng)混合物。濾出沉淀物質(zhì)以得到階段52.1的褐色固體化合物(1.76g，8.19mmol；88％)；ES-MSM+H＝218.1；HPLCCtRet＝2.24分鐘。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)8.10-8.05(m，1H)，7.90-7.85(m，1H)，7.75-7.72(m，1H)，7.70(s，1H)，7.65-7.60(m，1H)，3.30(s，6H)。
階段52.2 3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-6-(3-硝基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺將溶于AcOH(10mL)和BuOH(10mL)的4-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-1H-吡唑-3-基胺(階段24.3)(305mg，1.18mmol)、(Z)-3-二甲基氨基-2-(3-硝基-苯基)-丙烯腈(階段52.1)(335mg，1.54mmol)回流攪拌16小時。加入飽和的NaHCO3水溶液之后用EtOAc(50mL，2x)萃取反應(yīng)混合物。用H2O(10mL)洗滌合并的有機相，干燥(Na2SO4)，在減壓條件下濃縮并快速層析(硅膠，2.5×15cm，CH2Cl2/MeOH＝9∶1)以得到階段52.2的橙色固體化合物(224mg，0.52mmol；44％)；ES-MSM+H＝430.1；HPLCCtRet＝1.91分鐘。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)8.70(s，1H)，8.35-8.30(m，1H)，8.25(s，1H)，8.22-8.18(m，1H)，7.98-7.95(m，1H)，7.90(bs，2H)，7.80-7.70(m，2H)，7.65-7.60(m，1H)，7.25-7.18(m，1H)，6.80-6.75(m，1H)，3.20-3.10(m，4H)，2.50-2.40(m，4H)，2.20(s，3H)。
階段53.1 3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-6-(3-硝基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺與階段52.2的化合物的制備類似地合成3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-6-(3-硝基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺產(chǎn)率30％；紅色固體；ES-MSM+H＝430.0。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)8.60(s，1H)，8.35-8.30(m，1H)，8.22(s，1H)，8.20-8.10(m，1H)，8.00(d，2H，J＝7.9Hz)，7.95-7.90(m，1H)，7.85(bs，2H)，7.80-7.75(m，1H)，6.95(d，1H，J＝7.9Hz)，3.20-3.10(m，4H)，2.50-2.40(m，4H)，2.20(s，3H)。
階段54.1 (Z)-3-二甲基氨基-2-(2-硝基-苯基)-丙烯腈與階段52.1的化合物的制備類似地合成(Z)-3-二甲基氨基-2-(2-硝基-苯基)-丙烯腈產(chǎn)率97％；褐色固體。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)7.82-7.78(m，1H)，7.62-7.55(m，1H)，7.45-7.35(m，2H)，7.20(s，1H)，3.15(s，6H)。
階段54.2 3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-6-(2-硝基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺與階段55.2的化合物的制備類似地合成3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-6-(2-硝基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺褐色固體；ES-MSM+H＝430.0；HPLCDtRet＝1.61分鐘。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)8.55(s，1H)，8.20-8.15(m，1H)，8.05-7.95(m，3H)，7.82-7.60(m，5H)，7.00-6.95(m，2H)，3.15-3.05(m，4H)，2.45-2.40(m，4H)，2.20(s，3H)。
階段55.1 (E)-3-二甲基氨基-2-(4-甲基-噻唑-2-基)-丙烯腈與階段52.1的化合物的制備類似地合成(E)-3-二甲基氨基-2-(4-甲基-噻唑-2-基)-丙烯腈產(chǎn)率74％；黑色固體；ES-MSM+H＝194.2；HPLCCtRet＝1.57分鐘。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)7.76(s，1H)，6.60(s，1H)，3.25(bs，6H)，2.35(s，3H)。
實施例613-{7-氨基-2-甲基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-酚在形成吡唑環(huán)時通過使用甲肼而不使用肼，與實施例1的化合物的制備類似地合成3-{7-氨基-2-甲基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-酚ES-MSM+H＝415.2；HPLCDtRet＝1.45分鐘。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)9.53(s，1H，OH)，2.56(s，3H CH3)，2.24(s，3H CH3)。
實施例62(4-{7-氨基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-苯基)-氨基甲酸乙酯在氬環(huán)境下將溶于EtOH(4mL)和乙醇HCl(1.6mL，2.5N)的4-(4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基)-2H-吡唑-3-基胺(階段1.2)(200mg，0.81mmol)和[4-(2-氰基-1-甲酰基-乙基)-苯基]-氨基甲酸乙酯(階段62.1)(275mg，0.04mmol)在回流下攪拌17小時。加入H2O(4mL)和K2CO3(250mg)之后用CH2Cl2(20mL，2x)萃取反應(yīng)混合物。用H2O(10mL)洗滌合并的有機相，干燥(Na2SO4)，在減壓條件下濃縮并快速層析(硅膠，2.5×15cm，CH2Cl2/MeOH/NH3＝95∶5∶0.5)以得到實施例62的白色固體化合物(58mg，0.123mmol；15％)；ES-MSM+H＝472.0；Rf(CH2Cl2/MeOH/NH3＝90∶10∶0.1)＝0.42；HPLCAtRet＝4.26分鐘。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)8.75/8.58(s/s，1H/1H，吡唑并嘧啶基)，8.03(d，9.0Hz，2H，苯基)，7.61(d，9Hz，2H，苯基)，7.53(s，2H，NH2)，7.46(d，9Hz，2H，苯基)，7.00(d，9Hz，2H，苯基)，4.17(q，7.5Hz，2H，CH2-乙基)，3.17/2.48(m/m，4H/4H，哌嗪基)，2.24(t，7.5Hz，3H，CH3)。
階段62a.1 [4-(氰基-1-甲?；?甲基)-苯基]-氨基甲酸乙酯與階段1.3的制備類似地甲酰化[4-(氰基-甲基)-苯基]-氨基甲酸芐基酯(階段62a.2)(1g，3.76mmol)以得到相應(yīng)的氨基甲酸乙酯(也因此將芐基酯官能團轉(zhuǎn)變成乙酯官能團)無色晶體(654mg，2.66mmol，70％)。ES-MSM+H＝233.0。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)4.12(q/broad，7.5Hz，2H，CH2-乙基)，1.23(t/broad，7.5Hz，3H，CH3-乙基)。
階段62.2 [4-(氰基-甲基)-苯基]-氨基甲酸芐基酯室溫攪拌溶解于二烷(16mL)的(4-氨基-苯基)-乙腈(2g，15.1mmol)和重碳酸二芐基酯(4.33g，15.1mmol)1小時。蒸發(fā)溶劑后通過快速層析分離產(chǎn)物(硅膠，4.5×25cm，CH2Cl2/MeOH＝99∶1)白色固體(3.82g，14.4mmol；95％)；ES-MSM-H＝265.0；Rf(CH2Cl2/MeOH＝95∶5)＝0.49；HPLCAtRet＝6.32分鐘。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)9.82(s，1H，NH)，7.51-7.35(m，7H，芳基)，7.26(d，8.5Hz，2H，芳基)，5.15(s，2H，CH2)，3.95(s，2H，CH2)。
(Z-)3-二甲基氨基-2-噻唑-4-基-丙烯腈與階段52.1的化合物類似地合成(Z-)3-二甲基氨基-2-噻唑-4-基-丙烯腈ES-MS[M+1]+＝180.1；HPLCCtRet＝1.91分鐘。
在存在吡啶的條件下通過使氨基前體與相應(yīng)的磺酰氯或乙酸酐反應(yīng)制備帶有氨磺酰官能團的化合物61、62、64、67和68和帶有乙酰胺官能團的化合物(化合物63、65和69)。
實施例70和71根據(jù)實施例1制備表2和表3中的化合物。
表2-實施例70


表3-實施例71
實施例726-(3-氯-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺室溫下將4-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-1H-吡唑-3-基胺(階段72.2)(1.29g，5mmol)溶解于EtOH(25mL)中，然后加入2-(3-氯-苯基)-3-氧代-丁腈(階段72.3)(0.97g，5mmol)和HCl(1.25M，溶于EtOH；20mmol，16mL)。攪拌條件下將黃色的溶液回流20小時。冷卻到室溫后加入H2O(80mL)以及K2CO3(2.5g)使混合物為堿性。用CH2Cl2(200mL，2x)萃取水層。用H2O(50mL，2x)洗滌合并的有機相，干燥(Na2SO4)，在減壓條件下濃縮并層析(硅膠，120g RediSep，ISCO Sg-100CH2Cl2/MeOH/NH3＝95∶5∶0.1)以獲得白色晶體的標(biāo)題化合物72(1.03g，2.38mmol；48％)；mp.110-115℃；MS(ESI+)m/z＝433(M+H)+；HPLCAtRet＝3.72分鐘(系統(tǒng)1)。
階段72.12-(3-氯-苯基)-3-氧代-丁腈在N2環(huán)境下將355ml乙醇加熱到55℃。于30分鐘內(nèi)向此溶液中加入鈉(3.91g；0.17mol)并攪拌1.5h直到所有金屬溶解。在無色溶液中加入3-氯芐基氰(15.31g；0.1mol)和乙酸乙酯(28.53mL；0.29mol)，然后在回流下攪拌5h。反應(yīng)完成后將黃色混合物冷卻到室溫并在減壓條件下蒸發(fā)。將粗制物質(zhì)置于水中(200mL)并通過加入25g檸檬酸中和。用CH2Cl2(2×250mL)萃取水層。用H2O(2×150mL)洗滌合并的有機相，干燥(Na2SO4)，在減壓條件下濃縮并層析(硅膠，1kg，Merck 60(0.040-0.063)，用EtOAc/己烷1∶1洗脫)以獲得淡黃色晶體的標(biāo)題化合物72.1(9.7g，0.05mol；50％)；mp.92-97℃；MS(ESI+)m/z＝302.9(M+H)+；HPLCAtRet＝5.67分鐘(系統(tǒng)1)。
階段72.24-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-1H-吡唑-3-基胺如實施例24；階段24.1-24.3所述制備標(biāo)題化合物。
實施例736-(3-氯-苯基)-5-甲基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺如實施例72所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是4-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-2H-吡唑-3-基胺(實施例1；階段1.2)和2-(3-氯-苯基)-3-氧代-丁腈(實施例73，階段73.1)。米黃色晶體；mp.113-115℃；MS(ESI+)m/z＝433(M+H)+；HPLCAtRet＝3.56分鐘(系統(tǒng)1)。
實施例746-(3-氯-苯基)-3-[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺如實施例72所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是4-[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-2H-吡唑-3-基胺和2-(3-氯-苯基)-3-氧代-丁腈(實施例72，階段72.1)。米黃色晶體；mp.116-121℃；MS(ESI+)m/z＝463(M+H)+；HPLCAtRet＝3.68分鐘(系統(tǒng)1)。
階段74.14-[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-2H-吡唑-3-基胺如實施例1(階段1.2；階段1.4和1.5)所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是5-溴-2-甲氧基-苯基乙腈和N-甲基哌嗪。淡黃色泡沫；MS(ESI+)m/z＝288.2(M+H)+；HPLCAtRet＝3.53分鐘(系統(tǒng)2)。
實施例756-(3-氯-苯基)-3-[2-甲氧基-4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺如實施例72所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是4-[2-甲氧基-4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-2H-吡唑-3-基胺和2-(3-氯-苯基)-3-氧代-丁腈(實施例72，階段72.1)。米黃色晶體；mp.215-217℃；MS(ESI+)m/z＝463(M+H)+；HPLCAtRet＝3.63分鐘(系統(tǒng)1)。
階段75.14-[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-2H-吡唑-3-基胺如實施例1(階段1.2；階段1.4和1.5)所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是4-溴-2-甲氧基-苯基乙腈和N-甲基哌嗪。綠褐色晶體；mp.173.7-178.1℃；MS(ESI+)m/z＝288.1(M+H)+；HPLCAtRet＝3.40分鐘(系統(tǒng)2)。
實施例763-{7-氨基-3-[2-甲氧基-4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-酚如實施例1所述通過將6-(3-芐氧基-苯基)-3-[2-甲氧基-4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺溶解于甲醇中并在存在Pd/C條件下進(jìn)行催化加氫制備標(biāo)題化合物。米黃色晶體；mp.217-220℃；MS(ESI+)m/z＝431.0(M+H)+；HPLCAtRet＝2.65分鐘(系統(tǒng)1)。
階段76.16-(3-芐氧基-苯基)-3-[2-甲氧基-4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺如實施例1(階段1.2；階段1.4和1.5)所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是4-溴-2-甲氧基-苯基乙腈和N-甲基哌嗪。淡黃色固體；MS(ESI+)m/z＝521(M+H)+；HPLCAtRet＝4.38分鐘(系統(tǒng)1)。
實施例77
6-(2-氯-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺如實施例72所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是4-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-2H-吡唑-3-基胺和(Z)-2-(2-氯-苯基)-3-二甲基氨基-丙烯腈。黃色固體；mp.197-200℃；MS(ESI+)m/z＝419(M+H)+；HPLCAtRet＝3.33分鐘(系統(tǒng)1)。
階段77.1(Z)-2-(2-氯-苯基)-3-二甲基氨基-丙烯腈在氬環(huán)境中于攪拌條件下將N，N-二甲基甲酰胺-二甲基乙縮醛(9.06mL；64.3mMol)和2-氯芐基氰(1.95g；12.86mMol)加熱到100℃。冷卻到室溫后在減壓條件下濃縮混合物并通過層析純化(硅膠，120g RediSep，ISCO Sg-100，用EtOAc/己烷1∶1洗脫)以獲得黃色粘稠油狀的標(biāo)題化合物(2.44g，11.8mmol；92％)；MS(ESI+)m/z＝207(M+H)+；TLC(EtOAc/己烷1∶1)Rf＝0.38。
實施例786-(2-氯-苯基)-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺如實施例72所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是(Z)-2-(2-氯-苯基)-3-二甲基氨基-丙烯腈(實施例77，階段77.1)。淡黃色晶體；mp.200-203℃；MS(ESI+)m/z＝419.0(M+H)+；HPLCAtRet＝3.65分鐘(系統(tǒng)1)。
實施例796-(4-氟-苯基)-5-甲基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺如實施例72所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是4-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-2H-吡唑-3-基胺和2-(4-氟-苯基)-3-氧代-丁腈。白色晶體；mp.289-291℃；MS(ESI+)m/z＝417.1(M+H)+；HPLCAtRet＝3.21分鐘(系統(tǒng)1)。
階段79.12-(4-氟-苯基)-3-氧代-丁腈如實施例72，階段72.1所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是(4-氟-苯基)-乙腈。米黃色晶體；mp.77-83℃；MS(ESI+)m/z＝176.9(M+H)+；HPLCAtRet＝5.15分鐘(系統(tǒng)1)。
實施例806-(4-氟-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺如實施例72所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是2-(4-氟-苯基)-3-氧代-丁腈(實施例79，階段79.1)。白色晶體；mp.204-206℃；MS(ESI+)m/z＝417.1(M+H)+；HPLCAtRet＝3.34分鐘(系統(tǒng)1)。
實施例816-(3-氯-苯基)-5-甲基-3-{3-[4-(1-甲基-哌啶-4-基)-哌嗪-1-基]-苯基}-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺如實施例72所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是4-{3-[4-(1-甲基-哌啶-4-基)-哌嗪-1-基]-苯基}-2H-吡唑-3-基胺。米黃色晶體；mp.180-185℃；MS(ESI+)m/z＝516.0(M+H)+；HPLCAtRet＝4.96分鐘(系統(tǒng)1)。
階段81.14-{3-[4-(1-甲基-哌啶-4-基)-哌嗪-1-基]-苯基}-2H-吡唑-3-基胺如實施例1(階段1.2和1.4和1.5)所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是(3-溴-苯基)-乙腈和1-(1-甲基-哌啶-4-基)-哌嗪。淡黃色晶體；mp.213-220℃；MS(ESI+)m/z＝341.18(M+H)+；HPLCAtRet＝3.57分鐘(系統(tǒng)1)。
實施例826-(3-氯-4-氟-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺如實施例72所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是2-(3-氯-4-氟-苯基)-3-氧代-丁腈。白色晶體；mp.224-226℃；MS(ESI+)m/z＝451(M+H)+；HPLCAtRet＝3.86分鐘(系統(tǒng)1)。
階段82.12-(3-氯-4-氟-苯基)-3-氧代-丁腈如實施例72，階段72.1所述制備標(biāo)題化合物，其中使用(3-氯-4-氟-苯基)-乙腈。白色晶體；mp.133-134℃；MS(ESI-)m/z＝209.9(M-H)-；HPLCAtRet＝5.79分鐘(系統(tǒng)1)。
實施例836-(3-氯-4-氟-苯基)-5-甲基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺如實施例72所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是4-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-2H-吡唑-3-基胺和2-(3-氯-4-氟-苯基)-3-氧代-丁腈(實施例82；階段82.1)。白色晶體。mp.264-265℃；MS(ESI+)m/z＝451(M+H)+；HPLCAtRet＝3.72分鐘(系統(tǒng)1)。
實施例846-(3-溴-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺如實施例72，階段72.1所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是2-(3-溴-苯基)-3-氧代-丁腈。白色晶體；mp.107-113℃；MS(ESI+)m/z＝477(M+H)+；HPLCAtRet＝4.90分鐘(系統(tǒng)1)。
階段84.12-(3-溴-苯基)-3-氧代-丁腈如實施例72，階段72.1所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是(3-溴-苯基)-乙腈。白色晶體；mp.96-100℃；MS(ESI-)m/z＝235.9(M-H)-；HPLCAtRet＝5.76分鐘(系統(tǒng)1)。
實施例85
6-(3-溴-芐基)-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺如實施例72所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是3-(3-溴-苯基)-2-甲?；?丙腈。白色晶體；mp.170-171℃；MS(ESI+)m/z＝477.0(M+H)+；HPLCAtRet＝3.84分鐘(系統(tǒng)1)。
階段85.13-(3-溴-苯基)-2-甲酰基-丙腈室溫下將3-(3-溴苯基)丙腈(0.703mL；4.66mMol)和甲酸乙酯(1.499mL；18.64mMol)溶解于無水THF中(12.5mL)，然后加入NaH(60％，于礦物油中；670mg)。室溫17h后，加入額外的NaH(448mg)和甲酸乙酯(0.765mL)。因為這引起強烈的放熱反應(yīng)，所以加入額外的溶劑(15mL的THF)。完成之后(3天)，將反應(yīng)混合物冷卻到0℃，用少量小冰塊處理，然后加入6N HCl(3mL)使混合物變酸。加入水(50mL)之后用EtOAc(3×100mL)萃取混合物。用水(50mL，2x)、鹽水洗滌合并的有機相，干燥(Na2SO4)，在減壓條件下濃縮并層析(硅膠，40g RediSep，ISCO Sg-100，用EtOAc/己烷1∶1洗脫)以獲得褐色油狀的標(biāo)題化合物(220mg；20％)；MS(ESI-)m/z＝235.9(M-H)-；TLC EtOAc/己烷1∶1)Rf＝0.28。
實施例866-(3-溴-苯基)-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺如實施例72所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是(Z)-2-(3-溴-苯基)-3-二甲基氨基-丙烯腈。白色晶體；mp.195.3-197.2℃；MS(ESI+)m/z＝463.0(M+H)+；HPLCAtRet＝4.05分鐘(系統(tǒng)1)。
階段86.1如實施例77，階段77.1所述制備(Z)-2-(3-溴-苯基)-3-二甲基氨基-丙烯腈。金褐色晶體；mp.102-105℃；MS(ESI+)m/z＝251.0(M+H)+；HPLCAtRet＝6.45分鐘(系統(tǒng)1)。
實施例87
6-(3-氯-苯基)-5-甲基-3-(3-嗎啉-4-基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺如實施例72所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是4-(3-嗎啉-4-基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺?；野咨w；mp.165-167℃；MS(ESI+)m/z＝420(M+H)+；HPLCAtRet＝4.49分鐘(系統(tǒng)1)。
階段87.14-(3-嗎啉-4-基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺如實施例1，(階段1.2，階段1.4和1.5)所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是(3-溴-苯基)-乙腈和嗎啉?；野咨w；mp.166-168℃；MS(ESI+)m/z＝245.1(M+H)+；HPLCAtRet＝1.79分鐘(系統(tǒng)1)。
實施例886-(3-氯-苯基)-3-(4-甲氧基-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺如實施例72所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是4-(4-甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺。白色晶體；mp.171-172℃；MS(ESI+)m/z＝365(M+H)+；HPLCAtRet＝4.96分鐘(系統(tǒng)1)。
階段88.14-(4-甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺如實施例1，(階段1.4和1.2)所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是(4-甲氧基-苯基)-乙腈。白色晶體；mp.198-201℃；MS(ESI+)m/z＝190(M+H)+；HPLCAtRet＝2.85分鐘(系統(tǒng)1)。
實施例896-(3-氯-苯基)-3-[3-((2R，6S)-2，6-二甲基-嗎啉-4-基)-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺如實施例72所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是4-[3-((2R，6S)-2，6-二甲基-嗎啉-4-基)-苯基]-2H-吡唑-3-基胺。白色晶體；mp.165-167℃；MS(ESI+)m/z＝448(M+H)+；HPLCAtRet＝5.14分鐘(系統(tǒng)1)。
階段89.14-[3-((2R，6S)-2，6-二甲基-嗎啉-4-基)-苯基]-2H-吡唑-3-基胺如實施例1，(階段1.2、1.4和1.5)所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是(3-溴-苯基)-乙腈和(2R，6S)-2，6-二甲基-嗎啉。白色晶體；mp.158-160℃；MS(ESI+)m/z＝273.1(M+H)+；HPLCAtRet＝3.02分鐘(系統(tǒng)1)。
實施例902-(4-{3-[7-氨基-6-(3-氯-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-苯基}-哌嗪-1-基)-乙醇如實施例72所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是2-{4-[3-(5-氨基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-哌嗪-1-基}-乙醇。灰白色晶體；mp.108-116℃；MS(ESI+)m/z＝463(M+H)+；HPLCAtRet＝3.62分鐘(系統(tǒng)1)。
階段90.12-{4-[3-(5-氨基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-哌嗪-1-基}-乙醇如實施例1，(階段1.2、1.4和1.5)所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是(3-溴-苯基)-乙腈和2-哌嗪-1-基-乙醇。淡黃色泡沫；mp.40-48℃；MS(ESI+)m/z＝288.1(M+H)+；HPLCAtRet＝3.45分鐘(系統(tǒng)1)。
實施例916-芐基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺如實施例72所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是2-甲酰基-3-苯基-丙腈(實施例23；階段23.1)。淡黃色晶體；mp.72-75℃；MS(ESI+)m/z＝399.1(M+H)+；HPLCAtRet＝3.30分鐘(系統(tǒng)1)。
實施例926-(3-氯-苯基)-3-(3，4-二甲氧基-苯基)-5-氟甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺如實施例72所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是4-(3，4-二甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺(實施例93；階段93.1)和2-(3-氯-苯基)-4-氟-3-氧代-丁腈。黃色晶體；mp.228-230℃；MS(ESI+)m/z＝413(M+H)+；HPLCAtRet＝6.65分鐘(系統(tǒng)1)。
階段92.12-(3-氯-苯基)-4-氟-3-氧代-丁腈如實施例72，階段72.1所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是氟-乙酸乙酯。米黃色晶體；mp.90-96℃；MS(ESI-)m/z＝209.9(M-H)-；HPLCAtRet＝5.66分鐘(系統(tǒng)1)。
實施例936-(3-氯-苯基)-3-(3，4-二甲氧基-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺如實施例72所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是4-(3，4-二甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺?；野咨腆w；mp.223-226℃；MS(ESI+)m/z＝395.0(M+H)+；HPLCAtRet＝4.69分鐘(系統(tǒng)1)。
階段93.14-(3，4-二甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺如實施例1，(階段1.4和1.2)所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是(3，4-二甲氧基-苯基)-乙腈。白色晶體；mp.143-146℃；MS(ESI+)m/z＝220.1(M+H)+；HPLCAtRet＝2.28分鐘(系統(tǒng)1)。
實施例946-(3-氯-4-氟-苯基)-3-(3，4-二甲氧基-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺如實施例72所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是4-(3，4-二甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺(實施例93；階段93.1)和2-(3-氯-4-氟-苯基)-3-氧代-丁腈(實施例82；階段82.1)?；野咨腆w；mp.235-238℃；MS(ESI+)m/z＝413.0(M+H)+；HPLCAtRet＝4.83分鐘(系統(tǒng)1)。
實施例956-(3-氯-4-氟-苯基)-3-(4-甲氧基-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺如實施例72所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是4-(4-甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺(實施例88；階段88.1)和2-(3-氯-4-氟-苯基)-3-氧代-丁腈(實施例82；階段82.1)。白色晶體；mp.224-227℃；MS(ESI+)m/z＝383(M+H)+；HPLCAtRet＝5.08分鐘(系統(tǒng)1)。
實施例966-(4-氟-苯基)-3-(4-甲氧基-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺如實施例72所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是4-(4-甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺(實施例88，階段88.1)和2-(4-氟-苯基)-3-氧代-丁腈(實施例79；階段79.1)。白色晶體；mp.243-244℃；MS(ESI+)m/z＝349，1(M+H)+；HPLCAtRet＝4.56分鐘(系統(tǒng)1)。
實施例972-(4-{3-[7-氨基-6-(4-氟-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-苯基}-哌嗪-1-基)-乙醇如實施例72所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是2-{4-[3-(5-氨基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-哌嗪-1-基}-乙醇(實施例90，階段90.1)和2-(4-氟-苯基)-3-氧代-丁腈(實施例79；階段79.1)。灰白色晶體；mp.209-212℃；MS(ESI+)m/z＝447.1(M+H)+；HPLCAtRet＝3.24分鐘(系統(tǒng)1)。
實施例986-(3，4-二氟-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺如實施例72所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是2-(3，4-二氟-苯基)-3-氧代-丁腈。白色固體；mp.216-219℃；MS(ESI+)m/z＝435(M+H)+；HPLCAtRet＝3.30分鐘(系統(tǒng)1)。
階段98.12-(3，4-二氟-苯基)-3-氧代-丁腈如實施例1，(階段1.4和1.2)所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是(3，4-二氟-苯基)-乙腈。白色晶體；mp.147-152℃；MS(ESI+)m/z＝195(M+H)+；HPLCAtRet＝5.39分鐘(系統(tǒng)1)。
實施例996-(3，4-二氟-苯基)-3-(3，4-二甲氧基-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺如實施例72所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是4-(3，4-二甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺(實施例93；階段93.1)和2-(3，4-二氟-苯基)-3-氧代-丁腈(實施例98；階段98.1)?；野咨腆w；mp.230-235℃；MS(ESI+)m/z＝397.0(M+H)+；HPLCAtRet＝4.53分鐘(系統(tǒng)1)。
實施例1002-(4-{3-[7-氨基-6-(3-氯-4-氟-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-苯基}-哌嗪-1-基)-乙醇如實施例72所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是2-{4-[3-(5-氨基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-哌嗪-1-基}-乙醇(實施例90，階段90.1)和2-(3-氯-4-氟-苯基)-3-氧代-丁腈(實施例82；階段82.1)?；野咨w；mp.104-107℃；MS(ESI+)m/z＝481(M+H)+；HPLCAtRet＝4.00分鐘(系統(tǒng)1)。
實施例1012-(4-{3-[7-氨基-6-(3，4-二氟-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-苯基}-哌嗪-1-基)-乙醇如實施例72所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是2-{4-[3-(5-氨基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-哌嗪-1-基}-乙醇(實施例90，階段90.1)和2-(3，4-二氟-苯基)-3-氧代-丁腈(實施例98；階段98.1)?；野咨w；mp.172-174℃；MS(ESI+)m/z＝465(M+H)+；HPLCAtRet＝3.71分鐘(系統(tǒng)1)。
實施例1026-(3-氯-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-吡咯烷-1-基-哌啶-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺如實施例72所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是4-[3-(4-吡咯烷-1-基-哌啶-1-基)-苯基]-1H-吡唑-3-基胺。黃色晶體；mp.188-193℃；MS(ESI+)m/z＝487.0(M+H)+；HPLCAtRet＝4.21分鐘(系統(tǒng)1)。
階段102.14-[3-(4-吡咯烷-1-基-哌啶-1-基)-苯基]-1H-吡唑-3-基胺如實施例1，(階段1.2、1.4和1.5)所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是(3-溴-苯基)-乙腈和4-吡咯烷-1-基-哌啶。黃色晶體；mp.214-216℃；MS(ESI+)m/z＝312.1(M+H)+；HPLCAtRet＝3.71分鐘(系統(tǒng)1)。
實施例1036-(4-氟-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-吡咯烷-1-基-哌啶-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺如實施例72所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是4-[3-(4-吡咯烷-1-基-哌啶-1-基)-苯基]-1H-吡唑-3-基胺(實施例102；階段102.1)和2-(4-氟-苯基)-3-氧代-丁腈(實施例79；階段79.1)。白色晶體；mp.244-249℃；MS(ESI+)m/z＝471.0(M+H)+；HPLCAtRet＝3.82分鐘(系統(tǒng)1)。
實施例1046-(3-氯-苯基)-3-[3-(4-二乙氨基-哌啶-1-基)-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺如實施例72所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是{1-[3-(3-氨基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-哌啶-4-基}-二乙基-胺。白色晶體；mp.163-168℃；MS(ESI+)m/z＝489.0(M+H)+；HPLCAtRet＝4.02分鐘(系統(tǒng)1)。
階段104.1{1-[3-(3-氨基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-哌啶-4-基}-二乙基-胺如實施例1，(階段1.2、1.4和1.5)所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是(3-溴-苯基)-乙腈和二乙基-哌啶-4-基-胺。米黃色固體，無定形；MS(ESI+)m/z＝314.2(M+H)+；HPLCAtRet＝3.75分鐘(系統(tǒng)1)。
實施例1053-[3-(4-二乙氨基-哌啶-1-基)-苯基]-6-(4-氟-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺如實施例72所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是{1-[3-(3-氨基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-哌啶-4-基}-二乙基-胺(實施例104，階段104.1)和2-(4-氟-苯基)-3-氧代-丁腈(實施例79；階段79.1)。白色晶體；mp.208-210℃；MS(ESI+)m/z＝473.1(M+H)+；HPLCAtRet＝3.63分鐘(系統(tǒng)1)。
實施例1066-(4-氟-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-甲基-4-氧基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺將6-(4-氟-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺(實施例80)(50mg；0.12mMol)溶解于CH2Cl2(10mL)中并在0℃用3-氯過苯甲酸(31.1mg；0.126mMol)處理1h，然后室溫攪拌2h。減壓條件下去除溶劑之后通過層析純化粗制混合物(硅膠，12g RediSep，ISCOSg-100 CH2Cl2/MeOH/NH3＝80∶20∶1)以獲得米黃色晶體的標(biāo)題化合物(44mg)；mp.210-223℃；MS(ESI+)m/z＝449(M+H)+；HPLCAtRet＝3.31分鐘(系統(tǒng)1)。
實施例1076-(4-氟-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-甲基-1，4-二氧基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺從實施例106所述的同一反應(yīng)分離標(biāo)題化合物米黃色晶體(20mg)；mp.161-169℃；MS(ESI+)m/z＝433(M+H)+；HPLCAtRet＝3.89分鐘(系統(tǒng)1)。
實施例1086-(3-氯-苯基)-3-[3-(4-二甲基氨基-哌啶-1-基)-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺如實施例72所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是{1-[3-(5-氨基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-哌啶-4-基}-二甲基-胺。
階段108.1 {1-[3-(5-氨基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-哌啶-4-基}-二甲基-胺如實施例1，(階段1.2、1.4和1.5)所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是(3-溴-苯基)-乙腈和二甲基-哌啶-4-基-胺。
實施例1096-(3，4-二氟-苯基)-3-[3-(4-二甲基氨基-哌啶-1-基)-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺如實施例72所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是{1-[3-(5-氨基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-哌啶-4-基}-二甲基-胺(實施例108；階段108.1)和2-(3，4-二氟-苯基)-3-氧代-丁腈(實施例98；階段98.1)。
實施例1106-(3-氯-苯基)-5-甲基-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺如實施例72所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是4-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺。
階段110.14-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺如實施例1，(階段1.4和1.2)所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是(3，4，5-三甲氧基-苯基)-乙腈。
實施例1116-(3，4-二氟-苯基)-5-甲基-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺如實施例72所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是4-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺(實施例110；階段110.1)和2-(3，4-二氟-苯基)-3-氧代-丁腈(實施例98；階段98.1)。
實施例1126-(3-氯-苯基)-3-(3-甲氧基-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺如實施例72所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是4-(3-甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺。
階段112.14-(3-甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺如實施例1，(階段1.4和1.2)所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是(3-甲氧基-苯基)-乙腈。
實施例1136-[7-氨基-3-(3，4-二甲氧基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基]-吡啶-2-醇如實施例1所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是2-(6-羥基-吡啶-2-基)-3-氧代-丙腈和4-(3，4-二甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺(實施例93；階段96.1)。
實施例1146-芐基-3-(3，4-二甲氧基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺如實施例93所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是4-(3，4-二甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺(實施例93；階段93.1)。
實施例1153-(3，4-二甲氧基-苯基)-6-(3-氟-芐基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺如實施例114所述制備標(biāo)題化合物，但使用的是2-(3-氟-芐基)-3-氧代-丙腈。
實施例116包含式(I)化合物的片劑1
用常規(guī)方法制備下列組分的片劑，其中片劑包含50mg前面實施例1-115中提到的任一式(I)化合物作為活性成分
制備將活性成分與部分小麥淀粉、乳糖和膠態(tài)二氧化硅混合，并將混合物壓過篩子。另一部分小麥淀粉與5倍量的水在水浴上混合以形成糊，并且揉捏最初制備的混合物和此糊直到形成軟的可塑物質(zhì)。
將干顆粒壓過網(wǎng)眼大小為3mm的篩子，與剩余的玉米淀粉、硬脂酸鎂和滑石的預(yù)過篩(1mm篩子)混合物混合，并壓制形成稍微兩面凸起的片劑。
實施例117包含式(I)化合物的片劑2用下列組分按照標(biāo)準(zhǔn)方法制備片劑，其中片劑包含100mg任一實施例1-115的式(I)化合物作為活性成分
制造將活性成分與載體材料混合并通過壓片機(Korsch EKO，Stempeldurchmesser 10mm)壓制。
實施例118膠囊根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法制備下列組分的膠囊，其中膠囊包含100mg任一實施例1-115中給出的式(I)化合物作為活性成分
通過混合組分并將它們裝入大小為1的硬明膠膠囊制備。
實施例119通過本發(fā)明化合物的激酶抑制前述實施例的化合物使用上文所述測試方法進(jìn)行活性測定，其中式(I)的下列受試化合物顯示對表4所示的下列激酶的活性(“x”表示對那種激酶有活性)。在此使用的“活性”定義為對激酶抑制的IC50值為10μM或小于10μM表權(quán)利要求
1.式(I)化合物或其可藥用鹽的用途，用于治療蛋白激酶依賴性疾病 其中R2為H；取代的或未取代的芳基；取代的或未取代的雜芳基；取代的或未取代的脂肪族殘基；官能團；或通過一個連接基團或原子與吡唑并[1，5a]嘧啶基環(huán)連接的取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的雜芳基或取代的或未取代的脂肪族殘基；R3可為H，取代的或未取代的芳基，取代的或未取代的雜芳基，取代的或未取代的脂肪族殘基，官能團，或通過連接基團或原子與吡唑并[1，5a]嘧啶基環(huán)連接的取代的或未取代的脂肪族殘基，R2或R3中至少之一為取代的或未取代的芳基；取代的或未取代的雜芳基；或通過一個連接基團或原子與吡唑并[1，5a]嘧啶基環(huán)連接的取代的或未取代的雜芳基或取代的或未取代的芳基；A為H、鹵素(如溴)、脂族部分、官能團、取代的或未取代的芳基或取代的或未取代的雜芳基；且R1為H、鹵素或低級烷基。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的式(I)化合物或其可藥用鹽的用途，用于治療蛋白激酶依賴性疾病其中在式(I)化合物中R2為H；低級烷基；環(huán)烷基；芐基；低級烷基取代的苯并噻吩基、吲哚基；任選地由低級烷基取代的吡啶基或噻唑基；未取代的苯基或由一個或兩個取代基取代的苯基，其中所述取代基選自鹵素、羥基、烷氧基、芐氧基、環(huán)烷基、氨基、乙酰氨基、由一個或兩個鹵素取代的低級烷基磺酰胺基和苯磺酰胺基；R3為H；任選地由鹵素取代的低級烷基；苯基；吡啶基或唑基；A為(a)H、鹵素、苯并噻吩基、吡啶基、甲基哌嗪基苯氧基、低級烷基取代的吲哚基，(b)未取代的或者一個或多個取代基取代的苯基，其中所述的取代基選自單、二或三低級烷氧基；二低級烷基胺基；任選地由烷基二取代的嗎啉基；由一個或多個取代基取代的哌嗪基，其中所述的取代基選自低級烷基、低級烷氧基、低級烷基哌嗪基、吡咯烷基、二烷基氨基和低級鏈烷醇；且R1為H。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的用途，其中蛋白激酶依賴性疾病為一種依賴于c-Abl、Bcr-Abl、c-Kit、c-Raf、Flt-1、Flt-3、Her-1、KDR、PDGFR激酶、c-Src、RET受體激酶、FGF-R1、FGF-R2、FGF-R3、FGF-R4、肝配蛋白受體激酶(例如EphB2激酶、EphB4激酶和相關(guān)的Eph激酶)、酪蛋白激酶(CK-1、CK-2、G-CK)、Pak、ALK、ZAP70、Jak1、Jak2、Axl、Cdk1、cdk4、cdk5、Met、FAK、Pyk2、Syk、胰島素受體激酶、Tie-2或激酶如Bcr-Abl、c-Kit、c-Raf、Flt-3、FGF-R3、PDGF受體、RET和Met的組成型激活突變(激活的激酶)的疾病以及(尤其是異常高度表達(dá)或激活的)激酶依賴性疾病或者依賴于激酶途徑活化的疾病，或者依賴于剛剛提到的激酶中任意兩種或多種激酶的疾病。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任意一項所述的用途，其中激酶依賴性疾病為一種依賴于c-abl、Flt-3、KDR、c-Src、RET、EphB4、c-kit、cdk1、FGFR-1、c-raf、Her-1、Ins-R或Tek的疾病。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任意一項所述的用途，其中待治療的疾病為增生性疾病，優(yōu)選地為良性或尤其是惡性腫瘤，更優(yōu)選地為腦、腎臟、肝臟、腎上腺、膀胱、乳房、胃(尤其是胃腫瘤)、卵巢、結(jié)腸、直腸、前列腺、胰、肺、陰道、甲狀腺的癌、肉瘤、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、多發(fā)性骨髓瘤或胃腸癌，尤其為結(jié)腸癌或結(jié)腸直腸腺瘤，或者頸部和頭部腫瘤、表皮過度增殖尤其是牛皮癬、前列腺增生、瘤形成，尤其是上皮特征的瘤形成，優(yōu)選地為乳房癌或白血病。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任意一項所述的用途，其中待治療的疾病為持續(xù)的血管發(fā)生引起的疾病，如牛皮癬；卡波濟肉瘤；再狹窄，例如支架誘導(dǎo)的再狹窄；子宮內(nèi)膜異位癥；節(jié)段性回腸炎；霍奇金?。话籽。魂P(guān)節(jié)炎，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；血管瘤；血管纖維瘤；眼疾病，如糖尿病性視網(wǎng)膜病和新血管青光眼；腎臟疾病，如腎小球腎炎；糖尿病性腎??；惡性腎硬化；血栓性微血管病綜合征；移植排斥和腎小球??；纖維化疾病，如肝臟的硬化；腎小球系膜細(xì)胞增生性疾??；動脈硬化；神經(jīng)組織損傷；以及用于抑制氣囊導(dǎo)管治療后的血管再閉塞，用于血管修復(fù)或用于插入保持血管開放的機械裝置如支架后，用作免疫抑制劑，用作無疤創(chuàng)傷愈合的輔助，用于治療老年斑和接觸性皮炎。
7.式(I)的化合物或其可藥用鹽 其中R2為H；取代的或未取代的芳基；取代的或未取代的雜芳基；脂肪族殘基；官能團；或通過一個連接基團或原子與吡唑并[1，5a]嘧啶基環(huán)連接的取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的雜芳基或脂肪族殘基；R3可為H、取代的或未取代的芳基、雜芳基、脂肪族殘基、官能團、或通過連接基團或原子與吡唑并[1，5a]嘧啶基環(huán)連接的脂肪族殘基，R2或R3中至少之一為取代的或未取代的芳基；取代的或未取代的雜芳基；或通過一個連接基團或原子與吡唑并[1，5a]嘧啶基環(huán)連接的取代的或未取代的雜芳基或取代的或未取代的芳基，條件是R2和A不全為未取代的苯基；A為H、鹵素(如溴)、脂族部分、官能團、取代的或未取代的芳基或雜芳基；且R1為H、鹵素或低級烷基。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的化合物，其中R2為H；低級烷基；環(huán)烷基；芐基；低級烷基取代的苯并噻吩基、吲哚基；任選地由低級烷基取代的吡啶基或噻唑基；未取代的苯基或由一個或兩個取代基取代的苯基，其中所述取代基選自鹵素、羥基、烷氧基、芐氧基、環(huán)烷基、氨基、乙酰氨基、由一個或兩個鹵素取代的低級烷基磺酰胺基和苯磺酰胺基；R3為H；任選地由鹵素取代的低級烷基；苯基；吡啶基或唑基；A為(a)H、鹵素、苯并噻吩基、吡啶基、甲基哌嗪基苯氧基、低級烷基取代的吲哚基，(b)未取代的或者一個或多個取代基取代的苯基，其中所述的取代基選自單、二或三低級烷氧基；二低級烷基胺基；任選地由烷基二取代的嗎啉基；由一個或多個取代基取代的哌嗪基，其中所述的取代基選自低級烷基、低級烷氧基、低級烷基哌嗪基、吡咯烷基、二烷基氨基和低級鏈烷醇；R1為H；并且條件是R2和A不可都為未取代的苯基。
9.化合物，其選自3-{7-氨基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-酚、6-(3-芐氧基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基}-酚、6-(3-甲氧基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3，5-二甲氧基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-芐氧基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(4-氯-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-氯-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-6-苯基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、5-甲基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-6-苯基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-甲基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-5-苯基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、N-{4-[7-氨基-3-(4-二甲基氨基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基]-苯基}-2，3-二氯-苯磺酰胺、4-氯-苯磺酸4-[7-氨基-3-(4-二甲基氨基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基]-苯基酯、6-(4-甲氧基-苯基)-5-甲基-3-苯基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、3-(4-甲氧基-苯基)-5-甲基-6-苯基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(4-溴-苯基)-3-(4-甲氧基-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(4-溴-苯基)-5-甲基-3-苯基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(2，6-二氯-苯基)-3-苯基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、3-(3-甲氧基-苯基)-6-苯基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、3-溴-5-苯基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-苯并[b]噻吩-3-基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、3-(4-溴-苯基)-5-苯基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-6-噻吩-3-基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、3-苯并[b]噻吩-3-基-6-(3-甲氧基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-苯并-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-甲氧基-苯基)-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(4-甲氧基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(2-甲氧基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-甲氧基-苯基)-3-吡啶-3-基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、3-{7-氨基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-酚、6-(3-芐氧基-苯基)-3-[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、3-{7-氨基-3-[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-酚、6-(2-芐氧基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、2-{7-氨基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]}嘧啶-6-基}-酚、6-(4-芐氧基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、4-{7-氨基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-酚、6-(2-芐氧基-苯基)-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、2-{7-氨基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-酚、6-(4-芐氧基-苯基)-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、4-{7-氨基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-酚、6-(2-芐氧基-苯基)-3-[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、2-{7-氨基-3-[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-酚、6-(4-芐氧基-苯基)-3-[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、4-{7-氨基-3-[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-酚、6-(3-芐氧基-苯基)-3-[1-甲基-1H-吲哚-3-基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、3-[7-氨基-3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基]-酚、3-[7-氨基-3-吡啶-3-基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基]-酚、6-(3-芐氧基-苯基)-3-(2-甲氧基-苯基)-吡唑[1，5-a]嘧啶-7-基胺、3-[7-氨基-3-(2-甲氧基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基]-酚、3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-6-噻吩-3-基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、3-(2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基)-6-噻吩-3-基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-6-吡啶-4-基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-氨基-苯基)-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-氨基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(2-氨基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-6-(4-甲基-噻唑-2-基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-苯并[b]噻吩-3-基-3-[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-苯并[b]噻吩-3-基-3-[4-甲氧基-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、3-(3-甲氧基-苯基)-6-噻吩-3-基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-芐氧基-苯基)-3-(3-甲氧基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、3-[7-氨基-3-(3-甲氧基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基]-酚、(4-{7-氨基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-苯基)-氨基甲酸乙酯、6-(3-氯-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-氯-苯基)-5-甲基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-氯-苯基)-3-[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-氯-苯基)-3-[2-甲氧基-4-(4-甲基-哌嗪-l-基)-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、3-{7-氨基-3-[2-甲氧基-4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-酚、6-(2-氯-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(2-氯-苯基)-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(4-氟-苯基)-5-甲基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺、6-(4-氟-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-氯-苯基)-5-甲基-3-{3-[4-(1-甲基-哌啶-4-基)-哌嗪-1-基]-苯基}-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-氯-4-氟-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-氯-4-氟-苯基)-5-甲基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-溴-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-溴-芐基)-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-溴-苯基)-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-氯-苯基)-5-甲基-3-(3-嗎啉-4-基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-氯-苯基)-3-(4-甲氧基-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-氯-苯基)-3-[3-((2R，6S)-2，6-二甲基-嗎啉-4-基)-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、2-(4-{3-[7-氨基-6-(3-氯-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-苯基}-哌嗪-1-基)-乙醇、6-芐基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-氯-苯基)-3-(3，4-二甲氧基-苯基)-5-氟甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-氯-苯基)-3-(3，4-二甲氧基-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-氯-4-氟-苯基)-3-(3，4-二甲氧基-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-氯-4-氟-苯基)-3-(4-甲氧基-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(4-氟-苯基)-3-(4-甲氧基-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、2-(4-{3-[7-氨基-6-(4-氟-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-苯基}-哌嗪-1-基)-乙醇、6-(3，4-二氟-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3，4-二氟-苯基)-3-(3，4-二甲氧基-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、2-(4-{3-[7-氨基-6-(3-氯-4-氟-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-苯基}-哌嗪-1-基)-乙醇、2-(4-{3-[7-氨基-6-(3，4-二氟-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-苯基}-哌嗪-1-基)-乙醇、6-(3-氯-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-吡咯烷-1-基-哌啶-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(4-氟-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-吡咯烷-1-基-哌啶-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-氯-苯基)-3-[3-(4-二乙基氨基-哌啶-1-基)-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、3-[3-(4-二乙基氨基-哌啶-1-基)-苯基]-6-(4-氟-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(4-氟-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-甲基-4-氧基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(4-氟-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-甲基-1，4-二氧基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-氯-苯基)-3-[3-(4-二甲基氨基-哌啶-1-基)-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3，4-二氟-苯基)-3-[3-(4-二甲基氨基-哌啶-1-基)-苯基]-5-甲基-吡唑[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-氯-苯基)-5-甲基-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3，4-二氟-苯基)-5-甲基-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-(3-氯-苯基)-3-(3-甲氧基-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺、6-[7-氨基-3-(3，4-二甲氧基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基]-吡啶-2-醇、6-芐基-3-(3，4-二甲氧基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺和3-(3，4-二甲氧基-苯基)-6-(3-氟-芐基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺。
10.根據(jù)權(quán)利要求7、8或9的化合物的用途，用于制備藥物組合物。
11.藥物組合物，其包含根據(jù)權(quán)利要求7、8或9的化合物。
12.藥物組合物，其包含根據(jù)權(quán)利要求7、8或9的化合物和可藥用載體。
13.根據(jù)權(quán)利要求1或2的化合物的用途，用于制備治療激酶依賴性疾病的藥物組合物。
14.制備根據(jù)權(quán)利要求7、8或9的化合物的方法，其包括(a)使腈A-CH2-C≡N與甲酸乙酯在存在有機溶劑條件下反應(yīng)以形成取代的3-氧代-丙腈，(b)在有機溶劑中縮合步驟(a)的取代的3-氧代-丙腈與一水合肼以形成式(III)的2H-吡唑-3-基胺 (d)在存在乙醇鹽和甲酸乙酯的條件下甲酰化取代的腈以制備式(II)的3-氧代-丙腈 (c)在存在有機溶劑的條件下縮合式(II)的3-氧代-丙腈和式(III)的2H-吡唑-3-基胺以形成式(I)的化合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及吡唑并[1，5a]嘧啶－7－基胺化合物和其鹽在治療激酶依賴性疾病中的用途和用于制備治療所述疾病的藥物制品的用途，涉及新的吡唑并[1，5a]嘧啶－7－基胺化合物，并涉及制備新的吡唑并[1，5a]嘧啶－7－基胺化合物的方法。
文檔編號C07D487/04GK1909908SQ200580003037
公開日2007年2月7日 申請日期2005年1月21日 優(yōu)先權(quán)日2004年1月22日
發(fā)明者G·博爾德, A·弗勒爾斯海默, P·菲雷, P·因巴赫, 升谷敬一, J·舍普費爾, G·馬蒂尼-巴倫 申請人:諾瓦提斯公司