專(zhuān)利名稱(chēng)：含細(xì)胞周期蛋白-依賴(lài)性激酶抑制化合物的制劑及使用其治療腫瘤的方法
含細(xì)胞周期蛋白-依賴(lài)性激酶抑制化合物的制劑及使用其
治療腫瘤的方法 本申請(qǐng)依據(jù)35USC 119(e)要求2007年9月17日提交的臨時(shí)專(zhuān)利申請(qǐng)U. S. S. N. 60/994，185,2007 年 10 月 17 日提交的 U. S. S. N. :60/999，469 和 2008 年 5 月 16 日提交的 U.S.S.N. =61/053, 784的優(yōu)先權(quán)，這些公開(kāi)通過(guò)全文引用結(jié)合于本文中。發(fā)明領(lǐng)域
本申請(qǐng)公開(kāi)含有具有細(xì)胞周期蛋白_依賴(lài)性激酶抑制性質(zhì)的3-氨基-4-取代的 吡唑衍生物的新制劑，以及采用新制劑治療腫瘤的方法。
背景技術(shù)：
本申請(qǐng)的本章節(jié)或任何章節(jié)的任何公開(kāi)的認(rèn)同并非承認(rèn)這樣的公開(kāi)是本發(fā)明的 在先技術(shù)。哺乳動(dòng)物細(xì)胞周期是非冗余過(guò)程，它整合細(xì)胞外信號(hào)傳導(dǎo)、DNA合成和有絲分裂。 細(xì)胞周期控制的失調(diào)是所有人類(lèi)癌癥的標(biāo)志，并常常與細(xì)胞周期蛋白-依賴(lài)性激酶(為方 便起見(jiàn)本文也稱(chēng)為CDKs)的異常激活/調(diào)節(jié)有關(guān)。與正常組織相比，認(rèn)為腫瘤細(xì)胞中的細(xì) 胞周期調(diào)節(jié)的缺乏增加了腫瘤細(xì)胞中的細(xì)胞凋亡的傾向。因此，當(dāng)只在正常增殖隔室內(nèi)介 導(dǎo)可逆性細(xì)胞周期停滯時(shí)，特異性CDK抑制劑可優(yōu)先殺死腫瘤細(xì)胞?？蓪?duì)正常組織無(wú)誘變 效應(yīng)而實(shí)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞凋亡。因此，鑒別抑制⑶K2和⑶K1的基本的、限速活性的化合物表現(xiàn) 為治療和控制腫瘤學(xué)適應(yīng)癥的有吸引力的治療策略。具有細(xì)胞周期蛋白-依賴(lài)性激酶抑制性質(zhì)的化合物(CDK抑制劑)和含有3-氨 基-4-取代的吡唑衍生物結(jié)構(gòu)的化合物被描述于Guzi等的2006年10月10日授權(quán)的美國(guó) 專(zhuān)利號(hào)7，119，200 (本文簡(jiǎn)稱(chēng)為“，200專(zhuān)利”，并通過(guò)全文引用結(jié)合于本文)。這些⑶K-抑 制化合物，例如，式I化合物的有效合成描述于已公開(kāi)的美國(guó)申請(qǐng)?zhí)?006/0281756 (’ 756公 布號(hào)，通過(guò)全文引用結(jié)合于本文)， 其中，Ri、R2、R3和R4如，756公布號(hào)中所定義，其通過(guò)全文引用結(jié)合于本文。式I化合物用于治療增殖疾病，例如，癌性腫瘤。如通過(guò)全文引用結(jié)合于本文的’ 200專(zhuān)利中所述，式I的2_(喹啉-5-基)-4，5雙 取代的_吡咯衍生物已顯示具有CDK抑制活性，采用體外CDK2抑制試驗(yàn)和曲線(xiàn)擬合計(jì)算出 理想的IC5(I值。例如，式la化合物，其中，參照式I，R1是吡啶-3-基-甲胺，R2是氫，R3是 1-甲基-哌嗪和R4是氧，對(duì)⑶K受體位點(diǎn)，已顯示具有5. 6微摩爾的IC5(I計(jì)算值(參見(jiàn)’ 200 專(zhuān)利的表87的706列，實(shí)施例1)。
具有式I結(jié)構(gòu)的其它化合物，例如，化合物式II，其中，參照式1，爐是3-甲基-吡 啶N-氧化物，R2是乙基，R3是2-哌啶-2-基-乙醇和R4是氫(參見(jiàn)’ 200專(zhuān)利中的實(shí)施例 1000，667列中的開(kāi)始處)，也具有有用的⑶K抑制活性。在抑制腫瘤，包括但不限于增殖、 血管生成和/或轉(zhuǎn)移方面，化合物式II是有用的。 作為實(shí)例，化合物式II可用于治療多種癌癥，包括(但不限于)以下癌癥癌包括 膀胱癌、乳癌例如乳房癌、結(jié)腸癌例如結(jié)腸直腸癌、腎癌、膽管癌、肝癌、肺癌例如小細(xì)胞肺 癌和非小細(xì)胞肺癌、食道癌、膽囊癌、胰腺癌、胃癌、子宮頸癌、甲狀腺癌、前列腺癌、卵巢癌、 外陰癌、腹膜癌、腹膜假粘液瘤和皮膚癌，例如，黑素瘤和鱗狀細(xì)胞癌；淋巴譜系的血紫質(zhì)腫 脹，包括白血病、急性淋巴細(xì)胞性白血病、急性成淋巴細(xì)胞白血病、慢性淋巴細(xì)胞性白血病 (CLL)、B-細(xì)胞淋巴瘤、T-細(xì)胞淋巴瘤、何杰金氏淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤[例如，套細(xì)胞 淋巴瘤(MCL)]、毛細(xì)胞淋巴瘤和伯基特氏淋巴瘤；骨髓譜系的血紫質(zhì)腫脹，包括急性和慢 性髓性白血病、骨髓增生異常綜合征和早幼粒細(xì)胞白血病間葉細(xì)胞來(lái)源的腫瘤，包括纖維 肉瘤和橫紋肌肉瘤；中樞和周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)的腫瘤，包括星形細(xì)胞瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、神經(jīng)膠 質(zhì)瘤和神經(jīng)鞘瘤；和其它腫瘤，包括精原細(xì)胞瘤、畸胎瘤、骨肉瘤、著色性干皮病、角化棘皮 瘤、甲狀腺濾泡狀癌和卡波濟(jì)氏肉瘤。發(fā)明目的和概述所需要的是藥物制劑，借助該制劑，具有有用的CDK抑制活性的式I化合物借以給 予需要治療處理的患者，其中給予這樣的化合物將有利于控制或治療疾病狀態(tài)，例如，控制 或治療腫瘤。本發(fā)明提供這些和其它目的和/或益處。本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選方面是提供含有式II化合物的濃縮藥物制劑，
,式 II，
其可適于給予需要治療的患有響應(yīng)式II化合物的腫瘤的哺乳動(dòng)物，該制劑包含 式II化合物、檸檬酸、檸檬酸鈉和具有約PH 2.5-約？11 7.0的pH的水。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí) 施方案中，緩沖溶液的PH為約3. 4-約5。在某些實(shí)施方案中，優(yōu)選采用式II化合物檸檬 酸鈉檸檬酸的摩爾比為1摩爾式II化合物3. 66摩爾檸檬酸鈉8. 8摩爾檸檬酸。在某 些實(shí)施方案中，制劑優(yōu)選包含含有基于重量/體積的以下成分的含水溶液(a)5mg/ml式 II化合物；(b) 21. 4mg/ml檸檬酸；和(c)任選與足以調(diào)節(jié)濃縮物的pH至約pH 2. 5-約pH 7. 0的pH的鹽酸和/或氫氧化鈉混合的11. 4mg/ml檸檬酸鈉脫水物，優(yōu)選pH被調(diào)節(jié)至約 pH 3. 0-約pH 4. 0的pH，更優(yōu)選pH被調(diào)節(jié)至約pH 3. 5。本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選方面是IV-可注入的制劑，其含有在pH為約pH 2. 5-約pH 7. 0的緩沖溶液中的式II化合物，根據(jù)圖2A和/或2B和/或表V中所顯示的那些，當(dāng)以指 定的劑量水平注入人體時(shí)，制劑在指定的劑量下提供至少一種PK行為。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施 方案中，緩沖溶液的PH為約3. 4-約5。優(yōu)選地，當(dāng)在2小時(shí)輸注中以各曲線(xiàn)所示劑量水平 輸注時(shí)，制劑提供至少一條圖2A和/或3中所示的AUC/劑量曲線(xiàn)。本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選方面是IV-可注入的制劑，其含有在pH為約pH 2. 5-約pH 7. 0的緩沖溶液中的式II化合物，根據(jù)圖2C和/或表VI中所顯示的那些，當(dāng)以指定的劑量 水平注入人體時(shí)，制劑在指定的劑量下提供至少一種PK行為。優(yōu)選地，當(dāng)在2小時(shí)輸注中 以各曲線(xiàn)所示劑量水平輸注時(shí)，制劑提供至少一條圖2C中所示的AUC/劑量曲線(xiàn)。在一個(gè) 優(yōu)選的實(shí)施方案中，緩沖溶液的PH為約3. 4-約5。本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選方面是提供包含含水有機(jī)酸、其共軛鹽(conjugate salt)和 式II化合物的制劑，該制劑在IV輸注入人體后即提供圖2A、2B和/或2C中所示的PK分 布圖。該制劑優(yōu)選包含的式II化合物有機(jī)酸共軛鹽的摩爾比為1摩爾化合物8.8摩爾 有機(jī)酸3. 7摩爾共軛鹽。優(yōu)選地，所述制劑在經(jīng)2小時(shí)輸注包含1. 85mg/M2的劑量時(shí)，提供 具有約2. 15小時(shí)的t1/2、約77ng/ml的Cmax和/或約181nghr/mL的AUC的PK。優(yōu)選地，所 述制劑在經(jīng)2小時(shí)輸注包含3. 7mg/M2的劑量時(shí)，提供具有約2. 75小時(shí)的t1/2、約136ng/ml 的Cmax和/或約336ng hr/mL的AUC的PK。優(yōu)選地，所述制劑在經(jīng)2小時(shí)輸注包含7. 4mg/ M2的劑量時(shí)，提供具有約2. 86小時(shí)的t1/2、約353ng/ml的Cmax和/或約994ng hr/mL的AUC 的PK。優(yōu)選地，所述制劑在經(jīng)2小時(shí)輸注包含14. 8mg/M2的劑量時(shí)，提供具有約2. 78小時(shí) 的t1/2、約396ng/ml的Cmax和/或約1053ng hr/mL的AUC的PK。優(yōu)選地，所述制劑在經(jīng)2 小時(shí)輸注包含29. 6mg/M2的劑量時(shí)，提供具有約2. 79小時(shí)的t1/2、約1020ng/ml的Cmax和/ 或約2531ng hr/mL的AUC的PK。優(yōu)選地，所述制劑在經(jīng)2小時(shí)輸注包含41. 4mg/M2的劑量 時(shí)，提供具有約2. 8小時(shí)的t1/2、約1343ng/ml的Cmax和/或約3041ng hr/mL的AUC的PK。 更優(yōu)選地，所述制劑在經(jīng)2小時(shí)輸注包含50mg/M2的劑量時(shí)，提供具有約2. 9小時(shí)的t1/2、約 1820ng/ml的Cmax和/或約4050ng hr/mL的AUC的PK。優(yōu)選地，所述制劑在經(jīng)2小時(shí)輸注包 含58mg/M2的劑量時(shí)，提供具有約3. 2小時(shí)的t1/2、約1460ng/ml的Cmax和/或約3290nghr/ mL 的 AUC 的 PK。在如表VIII中所示的某些劑量下隨著患者數(shù)量的擴(kuò)大，表VIII是表V、VI和VII 中的數(shù)據(jù)的累積表示。另一個(gè)實(shí)施方案是提供包含含水有機(jī)酸、其共軛鹽和式II化合物的 制劑，其在經(jīng)IV輸注入人體后即提供圖2A、2B和/或2C中所示的PK分布圖。所述制劑優(yōu) 選包含的式II化合物有機(jī)酸共軛鹽的摩爾比為1摩爾所述化合物8. 8摩爾有機(jī)酸3. 7
7摩爾共軛鹽。優(yōu)選地，所述制劑在經(jīng)2小時(shí)輸注包含1. 85mg/M2的劑量時(shí)，提供具有約2. 29 小時(shí)的t1/2、約91ng/ml的Cmax和/或約2ling hr/mL的AUC的PK。優(yōu)選地，所述制劑在經(jīng)2 小時(shí)輸注包含3. 7mg/M2的劑量時(shí)，提供具有約2. 75小時(shí)的t1/2、約136ng/ml的Cmax和/或 約336ng hr/mL的AUC的PK。優(yōu)選地，所述制劑在經(jīng)2小時(shí)輸注包含7. 4mg/M2的劑量時(shí)， 提供具有約2. 86小時(shí)的t1/2、約353ng/ml的Cmax和/或約972ng hr/mL的AUC的PK。優(yōu) 選地，所述制劑在經(jīng)2小時(shí)輸注包含14. 8mg/M2的劑量時(shí)，提供具有約2. 78小時(shí)的t1/2、約 396ng/ml的Cmax和/或約1050ng hr/mL的AUC的PK。優(yōu)選地，所述制劑在經(jīng)2小時(shí)輸注包 含29. 6mg/M2的劑量時(shí)，提供具有約2. 98小時(shí)的t1/2、約890ng/ml的Cmax和/或約2430ng hr/mL的AUC的PK。優(yōu)選地，所述制劑在經(jīng)2小時(shí)輸注包含41. 4mg/M2的劑量時(shí)，提供具有 約2. 8小時(shí)的t1/2、約1300ng/ml的Cmax和/或約2890ng hr/mL的AUC的PK。更優(yōu)選地，所 述制劑在經(jīng)2小時(shí)輸注包含50mg/M2的劑量時(shí)，提供具有約2. 9小時(shí)的t1/2、約1820ng/ml的 Cmax和/或約4090ng hr/mL的AUC的PK。優(yōu)選地，所述制劑在經(jīng)2小時(shí)輸注包含58mg/M2 的劑量時(shí)，提供具有約3. 2小時(shí)的t1/2、約1460ng/ml的Cmax和/或約3300ng hr/mL的AUC 的PK。在某些實(shí)施方案中，優(yōu)選通過(guò)提供含有有機(jī)酸及其共軛鹽的溶液，將需要量的式 II化合物溶解于其中，用含水酸和含水堿滴定所生成的溶液直至含有式II化合物的溶液 達(dá)到所需的PH和任選用水或含水溶液，例如，鹽水溶液稀釋緩沖溶液，獲得所需濃度的式 II化合物，制備濃縮物。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，緩沖溶液的PH為約3-約5。在某些實(shí) 施方案中，優(yōu)選由選自檸檬酸/檸檬酸鈉和乳酸/乳酸鈉的有機(jī)酸和共軛鹽制備用來(lái)制備 濃縮物的溶液。在一個(gè)方面，本發(fā)明包括通過(guò)給予有需要的哺乳動(dòng)物濃縮物或濃縮物的稀釋形 式，優(yōu)選通過(guò)使?jié)饪s物與生理鹽水USP IV袋，優(yōu)選標(biāo)準(zhǔn)250ml鹽水IV袋的內(nèi)容物混合，提供 適于靜脈輸液的藥劑，治療或控制疾病狀態(tài)。在某些實(shí)施方案中，優(yōu)選混合足量的濃縮物， 以提供約0. 92微克的式II化合物/ml鹽水溶液-約372微克式II化合物/ml鹽水溶液。在某些實(shí)施方案中，給予需要治療的哺乳動(dòng)物經(jīng)稀釋的濃縮物的量等于約 0. 33mg/m2-約58mg/m2式II化合物，優(yōu)選約0. 33mg/m2-約58mg/m2式II化合物，更優(yōu)選約 50mg/m2-約58mg/m2式II化合物。在某些實(shí)施方案中，優(yōu)選給予約50mg/m2式II化合物。 在某些實(shí)施方案中，優(yōu)選經(jīng)IV輸注給予經(jīng)稀釋的濃縮物。在某些實(shí)施方案中，優(yōu)選經(jīng)約1小時(shí)至約24小時(shí)的時(shí)段經(jīng)IV輸注給予提供所需 量的式II化合物所必需的經(jīng)稀釋濃縮物的量。在某些給予包含約0. 33mg/m2式II化合 物-約58mg/m2式II化合物的劑量的IV輸液的實(shí)施方案中，優(yōu)選經(jīng)約2小時(shí)的時(shí)段給予 輸注液。在某些實(shí)施方案中，優(yōu)選以產(chǎn)生約58ng/ml的穩(wěn)態(tài)血藥濃度的輸注速度，優(yōu)選以經(jīng) 24小時(shí)時(shí)段傳遞經(jīng)稀釋的濃縮物的速度，給予需要治療的哺乳動(dòng)物產(chǎn)生14. 8mg/m2式II化 合物的劑量所必需的經(jīng)稀釋的濃縮物的量。在某些優(yōu)選實(shí)施方案中，以所需的劑量密度，以一個(gè)或多個(gè)周期，給予式II化合 物。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，以28天周期，給予式II化合物，包括每周給予一次式II化 合物共三周，停藥一周。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，以21天的周期給予式II化合物，包 括第1天給予，隨后停藥20天。圖的簡(jiǎn)述
Ml表示對(duì)24小時(shí)輸注含有14. 8mg/m2的式II化合物的溶液估算的濃度(ng/ml) 相對(duì)于時(shí)間(小時(shí))的曲線(xiàn)圖。a^A表示在接受本制劑的9種不同的2-小時(shí)IV輸液-給予劑量(范圍介于 0. 33mg/m2-41. 4. 6mg/m2式II化合物的量)之一的自愿者病人中經(jīng)12小時(shí)時(shí)間段所顯示 的C_和平均濃度/時(shí)間分布的曲線(xiàn)圖。表示在接受本制劑的9種不同的2-小時(shí)IV輸液_給予劑量(范圍介于
0.33mg/m2-41. 4mg/m2式II化合物的量)之一的自愿者病人中經(jīng)24小時(shí)時(shí)間段所顯示的 平均濃度/時(shí)間分布的曲線(xiàn)圖表示在接受本制劑的8種不同的2-小時(shí)IV輸液_給予劑量(范圍介于
1.85mg/m2-58mg/m2式II化合物的量)之一的自愿者病人中經(jīng)12小時(shí)時(shí)間段所顯示的平 均濃度/時(shí)間分布的曲線(xiàn)圖。Ml表示顯示健康自愿者暴露于經(jīng)2小時(shí)IV輸液給予的一系列含有介于0. 33mg/ m2-41. 4mg/m2范圍的量的式II化合物的本制劑劑量的曲線(xiàn)圖。Mi表示顯示在A549NSCLC小鼠異種移植模型中，式II化合物的各種劑量給藥方 案對(duì)腫瘤體積抑制的作用的曲線(xiàn)圖。_表示顯示式II化合物對(duì)細(xì)胞周期蛋白A/CDK2復(fù)合物的結(jié)合親合力的曲線(xiàn) 圖。圖6表示顯示在A2780小鼠異種移植卵巢癌模型中式II化合物的抑制作用的曲 線(xiàn)圖。S1表示自暴露于各種劑量的式II化合物的裸鼠獲取的典型毛囊的顯微照片，證 實(shí)在基底上皮和毛囊的增殖上皮細(xì)胞中的磷酸銣(phospho-Rb)的抑制作用。圖8表示表示如28天用藥周期中第1和15天所觀察到的，經(jīng)式II化合物的2小 時(shí)IV輸注劑量(以1. 85mg/m2的量)給藥的患者的濃度/時(shí)間分布的曲線(xiàn)圖。圖9A和9B分別表示個(gè)體患者以29. 8mg/m2和41. 4mg/m2的量接受IV輸注劑量的 式II化合物后經(jīng)24小時(shí)的PK曲線(xiàn)圖。

圖10表示顯示在離體血樣中各種劑量水平的式II化合物對(duì)BrdU結(jié)合的影響的 數(shù)據(jù)。圖11表示顯示接警6個(gè)周期的IV輸注劑量的式II化合物后，在診斷出患有腹膜 假粘液瘤的患者的生物標(biāo)記水平下降的圖。圖12A和12B表示顯示在離體血樣中各種劑量水平的式II化合物對(duì)BrdU結(jié)合的 影響的數(shù)據(jù)。SI3表示在離體血樣中暴露于各種劑量水平的式II化合物之后，顯示在8小時(shí) 時(shí)間點(diǎn)的BrdU結(jié)合抑制百分率的數(shù)據(jù)。發(fā)明詳述如上所述，式II化合物(本文定義的)具有作為具有細(xì)胞周期蛋白-依賴(lài)性激 酶抑制性質(zhì)的有用藥用化合物的活性。尤其是，發(fā)明人已經(jīng)驚訝地發(fā)現(xiàn)，當(dāng)作為IV制劑給 予時(shí)，所提供的式II化合物具有治療水平。體外計(jì)算表明，式II化合物抑制細(xì)胞周期蛋 白_依賴(lài)性激酶⑶K1，經(jīng)計(jì)算的藥物親合力(IC5Q)為4nM，對(duì)⑶K2的經(jīng)計(jì)算的藥物親合力 (IC50)為InM，對(duì)⑶K5經(jīng)估算的藥物親合力(IC5Q)為InM和對(duì)⑶K9的經(jīng)計(jì)算的藥物親合
9力(IC5Q)為4nM。此外，發(fā)明人已經(jīng)驚訝地發(fā)現(xiàn)，在超過(guò)100種腫瘤細(xì)胞系包括標(biāo)準(zhǔn)NCI的 一組實(shí)驗(yàn)對(duì)象中，腫瘤細(xì)胞中的CDK2/CDK1的抑制導(dǎo)致細(xì)胞周期停滯和細(xì)胞凋亡。另外，本 發(fā)明人已經(jīng)驚訝地發(fā)現(xiàn)，異種移植模型暴露于低于25nM的式II化合物的谷血藥濃度少于 2小時(shí)導(dǎo)致腫瘤生長(zhǎng)抑制或衰退。發(fā)明人已經(jīng)驚訝地發(fā)現(xiàn)，為治療或控制增殖性疾病，可制 備適于IV給予人以得到有益血藥濃度的含式II化合物的制劑，該制劑包含式II化合物的 緩沖水溶液。接下來(lái)更詳細(xì)地描述包含式II化合物的制劑、采用含有式II化合物的本發(fā) 明制劑治療良性和增殖疾病狀態(tài)的方法和實(shí)施例。包含式II化合物的IV制劑的制備本發(fā)明的一個(gè)方面是適于靜脈(IV)給藥的包含式II化合物的制劑。式II化合 物可溶解于酸性介質(zhì)，但極少量溶解于中性和堿性介質(zhì)中。發(fā)明人已經(jīng)驚訝地發(fā)現(xiàn)，合適的 制劑可通過(guò)使式II化合物溶解于酸性溶液中制備，這樣的酸性溶液通過(guò)使適于結(jié)合進(jìn)緩 沖系統(tǒng)的有機(jī)酸溶解于水而制得，然后在需要調(diào)節(jié)PH時(shí)，用合適的堿和合適的酸滴定式II 化合物和經(jīng)溶解的有機(jī)酸的溶液至所需的最終PH。適用的酸是任何有機(jī)酸，它能提供比約pH 7. 0更酸性的pH的水溶液，優(yōu)選pH至 少如pH 3. 5的酸性一樣，且當(dāng)用適用的堿滴定時(shí)，可提供包括在約pH 7-約pH 2. 5范圍內(nèi) 的pH的緩沖溶液，且優(yōu)選可提供pH為約pH 3. 5的緩沖溶液。優(yōu)選地，所選擇的有機(jī)酸為 自由地溶于水的，例如乳酸或檸檬酸，更優(yōu)選地，所選擇的有機(jī)酸具有不止一個(gè)酸性質(zhì)子， 例如檸檬酸。少量溶解于中性水的式II化合物易于溶解于酸水溶液。因此，在某些實(shí)施方案 中，在本發(fā)明制劑的制備中，優(yōu)選最初制備酸水溶液，酸溶液優(yōu)選包含至少約0. 111M的所 選擇的酸，溶解于其中的共軛鹽，例如，檸檬酸鈉和乳酸鈉，以及再溶解于所生成的緩沖溶 液中的等份式II化合物。在完成溶解后，采用酸如鹽酸和堿如氫氧化鈉，按使溶液呈所需 pH或在所需pH范圍內(nèi)所需要的量，滴定所生成的溶液，達(dá)到所需的pH。溶液優(yōu)選比約pH 2. 5更具堿性，更優(yōu)選的是具有約pH3-約pH 5的pH的溶液。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，溶 液的pH為約pH 3.0-約pH 4. 2，更優(yōu)選約pH 3. 4-約pH 3.6。一旦達(dá)到所需的pH，就用一 或多個(gè)等份的水調(diào)節(jié)含有API的緩沖酸溶液的體積，使溶液達(dá)到產(chǎn)生提供約5mg/ml API的 溶液的體積。應(yīng)理解，可在無(wú)菌生產(chǎn)條件下制備適用的溶液，或者在生產(chǎn)后滅菌。應(yīng)理解，可不脫離本發(fā)明的簡(jiǎn)潔陳述，采用產(chǎn)生具有所需濃度的API和約pH 2. 5-約pH 7. 0，優(yōu)選約pH 3-約pH 5，更優(yōu)選約pH 3. 0-約pH 4. 2的pH的緩沖酸性水溶 液的其它方法，制備本發(fā)明的制劑。使用方法在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的制劑是意欲在需要時(shí)，通過(guò)以提供實(shí)現(xiàn)治療的所需 毫克數(shù)的API的量而將濃縮物加入含有250ml 0. 9%鹽水溶液的標(biāo)準(zhǔn)IV袋中稀釋的濃縮制 劑。根據(jù)需要調(diào)節(jié)制劑濃度，提供在API中充分濃縮的制劑，以在250mL鹽水袋的無(wú)效空間 (deadspace)容納提供所需毫克數(shù)的API的一定量的濃縮物，屬于本發(fā)明的范圍。然而，濃 縮物優(yōu)選含有約5mg/ml，且當(dāng)需要超出250ml鹽水袋的無(wú)效空間內(nèi)所能容納的量時(shí)，所需 要的濃縮物的量被分成幾等份，其被加至給予患者的多個(gè)鹽水袋中。應(yīng)理解，當(dāng)更大或更少 量的的濃縮液被引入鹽水袋時(shí)，pH將會(huì)改變。優(yōu)選地，可注入溶液的pH介于pH 3.4和pH 7之間，更優(yōu)選介于約pH 3.4和約pH 5之間。應(yīng)理解，由于隨著漸增的稀釋?zhuān)瑵饪s物的緩沖能力變低，高稀釋水平下的濃縮物可得到略微更酸性的溶液。應(yīng)理解，只要調(diào)節(jié)輸注時(shí)間， 預(yù)防或使對(duì)組合物輸注于其中的靜脈的損害最小化，可采用與患者的生理學(xué)相容的任何PH值。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的制劑是以一定量的鹽水溶液稀釋的一等份足量上 述濃縮物，以提供含有足量式II化合物的IV可注入溶液，當(dāng)輸注進(jìn)患者時(shí)，為患者提供治 療水平的式II化合物。不希望受理論的束縛，認(rèn)為應(yīng)典型地給予需要治療的患者至多約58mg/m2式II化 合物，盡管在需要時(shí)可給予更大量和更少量。優(yōu)選給予需要治療的患者約50mg/m2-約58mg/ m2式II化合物。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，給予需要治療的患者約50mg/m2。經(jīng)過(guò)一段時(shí)間，典型地約2小時(shí)-約24小時(shí)的時(shí)間，將全部量的稀釋于鹽水溶液 中的濃縮物輸注給患者。在某些實(shí)施方案中，優(yōu)選經(jīng)2小時(shí)時(shí)段，輸注給患者全部量的制 劑。在其它實(shí)施方案中，優(yōu)選經(jīng)8小時(shí)時(shí)段，輸注給患者全部量的制劑。在另外的其它實(shí)施 方案中，為得到比較久的穩(wěn)定態(tài)的血藥水平的API，優(yōu)選經(jīng)24小時(shí)時(shí)段輸注給患者全部量 的制劑。在某些實(shí)施方案中，優(yōu)選給予約50mg/m2/3周的劑量密度。在某些實(shí)施方案中，優(yōu) 選在28天周期中給予該劑量密度，S卩，以16. 7mg/m2劑量每周一次連續(xù)3周，隨后停藥一周。 在某些實(shí)施方案中，優(yōu)選在21-天周期給予該劑量密度，即，每3周作為單一的50mg/m2劑量 (即，第1天給藥，隨后20天停藥)。在其它實(shí)施方案中，優(yōu)選給予約58mg/m2/3周的劑量密 度。在某些實(shí)施方案中，優(yōu)選在28-天周期中給予該劑量密度，即，作為每周一次19. 3mg/m2 劑量，連續(xù)3周，隨后停藥一周。在某些實(shí)施方案中，優(yōu)選在21-天周期中給予該劑量密度， 即，每3周作為單一的58mg/m2劑量(即，第1天給藥，隨后20天停藥)。可用更大或更少 的量。提供規(guī)則劑量的給藥周期，例如，包括每周一次給藥，連續(xù)3周，一周停藥的28-天周 期，或包括第1天給藥，隨后20天停藥的21-天周期，可用來(lái)提供想要的劑量密度?！阏f(shuō)來(lái)，由于CDKs在調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖中的關(guān)鍵作用，認(rèn)為含有式II的CDK抑制劑 的新制劑起到可逆細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑的作用，其可用于治療以異常細(xì)胞增殖為特征的任何疾 病過(guò)程，例如，腫瘤生長(zhǎng)，例如，用于治療癌癥，包括實(shí)體瘤例如皮膚癌，例如黑素瘤，乳癌， 例如乳腺癌，腦癌，結(jié)腸和結(jié)腸直腸癌，前列腺癌，例如，前列腺癌、膽囊癌，甲狀腺癌，子宮 頸癌，睪丸癌，外陰癌，腹膜假粘液瘤，腹膜癌，卵巢癌，非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)等。更特別 地，可用本發(fā)明的化合物、組合物和方法治療的癌癥包括，但不限于皿肉瘤(血管肉 瘤、纖維肉瘤、橫紋肌肉瘤、脂肪肉瘤)、粘液瘤、橫紋肌瘤、纖維瘤、脂肪瘤和畸胎瘤；腿支 氣管癌(鱗狀細(xì)胞癌、未分化小細(xì)胞癌、未分化大細(xì)胞癌、腺癌)、肺泡癌(細(xì)支氣管)癌、支 氣管腺瘤、肉瘤、淋巴瘤、軟骨錯(cuò)構(gòu)瘤、間皮瘤胃腸道食道(鱗狀細(xì)胞癌、腺癌、平滑肌肉 瘤、淋巴瘤)、胃(癌、淋巴瘤、平滑肌肉瘤)、胰腺(導(dǎo)管腺癌、胰島瘤、胰升糖素瘤、胃泌素 瘤、類(lèi)癌瘤、血管活性腸多肽瘤(vipoma))、小腸(腺癌、淋巴瘤、類(lèi)癌瘤、卡波濟(jì)氏肉瘤、平 滑肌肉瘤、血管瘤、脂肪瘤、神經(jīng)纖維瘤、纖維瘤)、大腸(腺癌、管狀腺瘤、絨毛狀腺瘤、錯(cuò)構(gòu) 瘤、平滑肌肉瘤)泌尿生殖道腎(腺癌、Wilm’ s瘤(腎胚細(xì)胞瘤)、淋巴瘤、白血病)、膀 胱和尿道(鱗狀細(xì)胞癌、移行細(xì)胞癌、腺癌)、前列腺(腺癌、肉瘤)、睪丸(精原細(xì)胞瘤、畸 胎瘤、胚胎癌、畸胎癌、絨毛膜癌、肉瘤、間質(zhì)細(xì)胞癌、纖維瘤、纖維腺瘤、腺瘤樣瘤、脂肪瘤)； 近肝癌(肝細(xì)胞癌)、膽管癌、肝母細(xì)胞瘤、血管肉瘤、肝細(xì)胞腺瘤、血管瘤；置骨源性肉 瘤(骨肉瘤)、纖維肉瘤、惡性纖維組織細(xì)胞瘤、軟骨肉瘤、尤因肉瘤、惡性淋巴瘤(網(wǎng)狀細(xì)
11胞肉瘤)、多發(fā)性骨髓瘤、惡性巨細(xì)胞瘤、脊索瘤、骨軟骨瘤(骨軟骨外生骨疣)、良性軟骨 瘤、軟骨母細(xì)胞瘤、軟骨粘液纖維瘤、骨樣骨瘤和巨細(xì)胞瘤神經(jīng)系統(tǒng)顱骨(骨瘤、血管瘤、 肉芽瘤，黃瘤，畸形性骨炎)、腦膜(腦膜瘤、腦膜肉瘤、膠質(zhì)細(xì)胞瘤)、腦(星形細(xì)胞瘤、成 神經(jīng)管細(xì)胞瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、室管膜瘤、生殖細(xì)胞瘤(松果體瘤)、多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、少 突神經(jīng)膠質(zhì)瘤、神經(jīng)鞘瘤、成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤、先天性腫瘤)、脊髓神經(jīng)纖維瘤、腦膜瘤、神經(jīng)膠 質(zhì)瘤、肉瘤)；Sit:子宮(子宮內(nèi)膜癌)、子宮頸(子宮頸癌、腫瘤前宮頸發(fā)育異常)、卵巢 (卵巢癌(漿液性囊腺癌、粘液性囊腺癌、未分類(lèi)癌)、粒膜_泡膜細(xì)胞腫瘤、支持間質(zhì)細(xì)胞 瘤(Sertoli-Leydig cell tumors)、無(wú)性細(xì)胞瘤、惡性畸胎瘤)、外陰(鱗狀細(xì)胞癌、上皮內(nèi) 癌、腺癌、纖維肉瘤、黑素瘤)、陰道(透明細(xì)胞癌、鱗狀細(xì)胞癌、葡萄狀肉瘤(胚胎橫紋肌肉 瘤)、輸卵管(癌)血液學(xué)血液(髓細(xì)胞性白血病(急性和慢性)、急性淋巴細(xì)胞白血病、 急性和慢性淋巴細(xì)胞白血病、骨髓增生性疾病、多發(fā)性骨髓瘤、骨髓發(fā)育異常綜合征)、何杰 金氏病、非何杰金氏淋巴瘤(套細(xì)胞淋巴瘤)、B-細(xì)胞淋巴瘤、T-細(xì)胞淋巴瘤、毛細(xì)胞淋巴 瘤、伯基特氏淋巴瘤、早幼粒細(xì)胞白血??；惡性黑素瘤、基底細(xì)胞癌、鱗狀細(xì)胞癌、卡 波濟(jì)氏肉瘤、胎塊發(fā)育不良痣、脂肪瘤、血管瘤、皮膚纖維瘤、瘢痕瘤、銀屑病腎卜.腺成神 經(jīng)細(xì)胞瘤和其它腫瘤，例如著色性干皮病、角化棘皮瘤和甲狀腺毛囊癌。在某些實(shí)施方案中，包含式II的CDK抑制劑的本發(fā)明制劑用來(lái)治療非小細(xì)胞肺癌 (NSCLC)、乳癌、卵巢癌、急性白血病[例如，急性髓性白血病(AML)或急性淋巴細(xì)胞白血病 (ALL)]、慢性白血病(例如，CLL)、非何杰金氏淋巴瘤(例如，MCL)、黑素瘤和多發(fā)性骨髓瘤。在一個(gè)實(shí)施方案中，經(jīng)8小時(shí)時(shí)間給予患者包含式II的⑶K抑制劑的本發(fā)明制 劑。作為8小時(shí)輸注時(shí)段的實(shí)例而并非限制，含有式II的CDK抑制劑的本發(fā)明制劑的劑量 范圍可為約1. 85mg/m2-約70mg/m2和約15mg/m2-約30mg/m2。在某些實(shí)施方案中，按照21 天周期(第1天給藥，隨后20天停藥)給予該劑量。在另一個(gè)實(shí)施方案中，經(jīng)24小時(shí)時(shí)段給予包含式II的CDK抑制劑的本發(fā)明制 劑。作為實(shí)例而并非限制，用于24小時(shí)時(shí)段的劑量范圍可為約1.85mg/m2-約100mg/m2、約 50mg/m2-約80mg/m2和約30mg/m2-約70. Omg/m2。在某些實(shí)施方案中，按照21天周期(第 1天給藥，隨后20天停藥)給予該劑量。在另一個(gè)實(shí)施方案中，用本文所述方法治療實(shí)體瘤(例如，乳癌、黑素瘤、卵巢 癌)。作為實(shí)例而并非限制，在該實(shí)施方案中，以21天周期(即，第1天給藥，隨后20天停 藥)給予含有約 1. 85mg/m2-約 58mg/m2 (例如，20mg/m2、30mg/m2、40mg/m2、50mg/m2)的式 II 的CDK抑制劑的制劑的劑量?？山?jīng)2小時(shí)、8小時(shí)或24小時(shí)時(shí)間段，輸注該劑量。在一個(gè)供選擇的實(shí)施方案中，用本文所述的方法與生長(zhǎng)因子(例如，GCSF和 GMCSF)聯(lián)合治療實(shí)體瘤(例如，乳癌、黑素瘤、卵巢癌)。作為實(shí)例而并非限制，在21天的 給藥方案(第1天給藥，隨后20天停藥)中，包含式II的CDK抑制劑的本發(fā)明制劑的劑量 范圍可為約0. 33mg/m2和約100mg/m2?？山?jīng)2小時(shí)、8小時(shí)或24小時(shí)時(shí)間段輸注該劑量。在另一個(gè)實(shí)施方案中，按21天周期(即，第1天給藥，隨后20天停藥)給予包含 約1. 85mg/m2-約100mg/m2和約40mg/m2-約70mg/m2劑量的式II的CDK抑制劑的本發(fā)明制 劑?？山?jīng)2小時(shí)、8小時(shí)或24小時(shí)時(shí)間段輸注該劑量。在又一個(gè)實(shí)施方案中，按28天周期(即，每周用藥一次，連續(xù)三周，隨后停藥一周) 給予包含約 0. 33mg/m2-約 30mg/m2、約 0. 33mg/m2-約 14mg/m2 或約 7mg/m2-約 12mg/m2 劑量的式II的CDK抑制劑的本發(fā)明制劑?？山?jīng)2小時(shí)、8小時(shí)或24小時(shí)時(shí)間段輸注該劑量。在
某些實(shí)施方案中，治療血癌。在其它實(shí)施方案中，治療實(shí)體瘤。如本文所用的那樣，癌的治療包括治療癌細(xì)胞，包括受累于任一種上述疾病的細(xì) 胞。本發(fā)明的制劑也可用于化學(xué)預(yù)防癌癥。化學(xué)預(yù)防被定義為通過(guò)或者阻斷啟動(dòng)誘變 事件，或者通過(guò)阻斷已經(jīng)受到侵犯的前惡性細(xì)胞的發(fā)展或抑制腫瘤復(fù)發(fā)，抑制侵入性癌癥 的發(fā)展。本發(fā)明的制劑也可用于抑制腫瘤血管生成和轉(zhuǎn)移。
實(shí)施例接著描述用于舉例說(shuō)明本發(fā)明制劑和治療方法的各個(gè)實(shí)施例。按照制藥工業(yè)的標(biāo) 準(zhǔn)，根據(jù)藥物非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范(goodlaboratory practices)，進(jìn)行所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。 用于制備制劑的所有試劑都是USP或食品級(jí)的。實(shí)施例1 含有式II化合物的制劑的制備于環(huán)境溫度(20-30°C)下，在裝有攪拌漿的500L不銹鋼容器中放入400kg水。邊 攪拌邊溶解檸檬酸(10，682g)于其中。攪拌容器10分鐘，維持環(huán)境溫度，用要加入溶液中 的0. 2kg額外的水漂洗加入設(shè)備。當(dāng)檸檬酸溶解完成時(shí)，持續(xù)攪拌，邊攪拌邊將5，710g檸檬 酸鈉加至溶液中，直到它溶解，維持環(huán)境溫度。用要加至檸檬酸/檸檬酸鈉溶液中的0. 2kg 額外的水漂洗加入設(shè)備。調(diào)節(jié)溶液溫度，并保持溫度在20°C-3(TC間。攪拌下向溶液加入 2，585g式II化合物(96. 7%活性的API，根據(jù)在上述’756公開(kāi)中所描述的方法制備的式II 化合物)。持續(xù)攪拌，直到所有加入的API都溶解于檸檬酸/檸檬酸鈉溶液。用1. 2kg額外 的水漂洗加入設(shè)備進(jìn)入溶液。當(dāng)完成溶解時(shí)，通過(guò)加入水調(diào)節(jié)所生成的溶液的量至490kg， 通過(guò)用1M氫氧化鈉溶液和0. 1M HC1溶液滴定，調(diào)節(jié)pH，產(chǎn)生pH 3. 5的最終pH。通過(guò)加入 水調(diào)節(jié)緩沖溶液的量至507kg。用A2780異種移植卵巢癌模型檢驗(yàn)含有實(shí)施例1中制備的式II化合物的制劑的 功效。對(duì)于全部實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停罡吣褪軇┝勘欢x為在給定分案的整個(gè)持續(xù)時(shí)間導(dǎo)致試驗(yàn)小 鼠減輕20%體重的劑量。在進(jìn)行該研究中，將A2780細(xì)胞皮下接種入裸鼠中，并允許腫瘤生長(zhǎng)直至其體積 為約100mm3(約7天)。對(duì)10組這些試驗(yàn)動(dòng)物每日腹膜內(nèi)注射實(shí)施例1中制備的制劑10天， 劑量水平為:8mg/kg(13%最高耐受劑量(MTD)) ； 16mg/kg(27% MTD) ；32mg/kg(53% MTD)； 和48mg/kg(80% MTD)。除向各對(duì)照組注射不含API制劑外，還以20mg/kg的劑量水平向一 對(duì)照組腹膜內(nèi)注射紫杉醇溶液，每周兩次(50% MTD)。抑制腫瘤生長(zhǎng)的結(jié)果示于圖6。圖6 表明經(jīng)10天時(shí)間，對(duì)照組的腫瘤生長(zhǎng)到體積約800mm3，而以紫杉醇給藥的動(dòng)物的腫瘤生長(zhǎng) 的63%受到抑制。接受含有式II化合物的制劑的各組小鼠表現(xiàn)出70% (8mg/kg和16mg/ kg劑量水平)、90% (32mg/kg劑量水平)和96% (48mg/kg劑量水平)的腫瘤生長(zhǎng)抑制。 這些數(shù)據(jù)表明，50%抑制水平(在該模型中，其被定義為最低有效劑量)明顯少于8mg/kg。 此外發(fā)現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，暴露于最高劑量水平的式II化合物的動(dòng)物顯示出約5%的體重減 輕，表明制劑完全可耐受。以40mg/kg的劑量水平每天一次給予BALB/c鼠制劑5天。得到最近一次用藥后第1天和第7天的血樣，在PBS中經(jīng)1 5稀釋后立即用Advia 120血液分析儀分析。進(jìn) 行全分類(lèi)血球計(jì)數(shù)，包括紅血球分析(包括網(wǎng)狀細(xì)胞、變體計(jì)數(shù)和血色素分析)、白血球分 析(包括譜系分類(lèi)計(jì)數(shù)和過(guò)氧化物酶染色)和血小板生成分析。未觀察到對(duì)血小板或紅血 球的影響。 在相關(guān)的研究中，對(duì)于7天的劑量方案，每日一次給予攜帶A2780卵巢癌異種移植 物的裸鼠逐漸增加劑量的實(shí)施例1中制備的制劑和含有式III化合物(黃酮類(lèi)抗腫瘤藥) 的制劑。針對(duì)該研究，認(rèn)為最高耐受劑量是在實(shí)驗(yàn)期間介導(dǎo)體重減輕20 %的劑量水平，而 最低有效劑量(MED)被定義為介導(dǎo)腫瘤生長(zhǎng)抑制至少50%的劑量水平。結(jié)果示于表I中， 該表報(bào)道各化合物的各種治療指數(shù)。表I中的數(shù)據(jù)表明，式III化合物的耐受性差，產(chǎn)生的 名義治療指數(shù)(nominal therapeutic index) (MTD/MED)小于1，而式II化合物的耐受性 好，在比MTD顯著更低劑量的劑量下有效，式II化合物產(chǎn)生的名義治療指數(shù)大于10。表I
*基于每日一次的給藥方案的劑量，腹膜內(nèi)(IP)。關(guān)于圖4，采用實(shí)施例1中制備的制劑，經(jīng)下文所示的5種不同的方案，對(duì)攜帶以 大于100mm3的體積建立的A549 NSCLC異種移植物的裸鼠注入相當(dāng)于260mg/kg劑量的式 II化合物(a) 20mg/kg,每日一次，持續(xù)13天；(b) 29mg/kg,持續(xù)3天，隨后2天停藥，3個(gè)周 期；(c)第 1、4、7、10 和 13 天 52mg/kg ； (d)在第 1、4、7、10 和 13 天，每日三次，17mg/kg (相 當(dāng)于24小時(shí)內(nèi)52mg/kg)；和(e)在第1、7和13天給予87mg/kg。如圖4中所示，根據(jù)全部 劑量方案，觀察到腫瘤體積和質(zhì)量的減少。針對(duì)腫瘤類(lèi)型模型RPMI 8226、A549NSCLC、NCI H460、PC3 (前列腺)、H82 (SCLC)、SW527 (乳房)和MDA MB231 (乳房)，采用攜帶異種移植 物的小鼠，進(jìn)行類(lèi)似研究。與已注明的基準(zhǔn)細(xì)胞毒劑的比較結(jié)果呈現(xiàn)于下表II中。表 II腹膜內(nèi)給予裸鼠相當(dāng)于40mg/kg單劑量的實(shí)施例1中制備的制劑。在給藥后的各 個(gè)時(shí)間間隔采集皮膚試樣，并與給藥前(TO)采集的活組織檢查相比較。在10%福爾馬林中 固定活檢試樣過(guò)夜。然后在被包埋入蠟塊、被切片和用磷酸銣Ser 807/811-特異性抗血清 染色前，將試樣放入70 %醇中貯存。如舉例說(shuō)明經(jīng)數(shù)小時(shí)(T2給藥后)和(T4給藥后)時(shí)間間隔所取的典型試樣的圖 7中所示，給予制劑后所取試樣表明，在基底上皮和毛囊的增殖上皮細(xì)胞內(nèi)制劑介導(dǎo)磷酸銣 的快速和持續(xù)抑制。關(guān)于圖4，還以每6天一次，87mg/kg的速度對(duì)攜帶異種移植物的裸鼠給藥，劑量方 案分為單一日劑量(20mg/kg)、單一日劑量3天，隨后2天停藥期(29mg/kg單一劑量)、每3 天單一劑量(52mg/kg，單一劑量)、一天內(nèi)三次17mg/kg劑量、每3天重復(fù)和規(guī)定每6天一 次87mg/kg劑量。與對(duì)照組比較，觀察到在用式II化合物處理的動(dòng)物中腫瘤消退。對(duì)檢驗(yàn) 的全部劑量方案，腫瘤消退的程度類(lèi)似。t施例3 在短暫暴iS干式II仆,合物后，各種人腫瘤細(xì)胞』系的胸苷結(jié)合或Alamar 藍(lán)活力抑制和細(xì)胞凋亡的確認(rèn)關(guān)于表4，將各種人腫瘤細(xì)胞系暴露于漸增濃度的式II化合物24小時(shí)，然后通過(guò) 胸苷結(jié)合(粘附細(xì)胞)的抑制或alamar藍(lán)活力試驗(yàn)(懸浮細(xì)胞系)評(píng)估。還通過(guò)確定各 細(xì)胞系中激活胱天蛋白酶水平，評(píng)估細(xì)胞凋亡的活化水平。在各實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)制備含有不同 量的式II化合物的多批培養(yǎng)基，并使不同批的細(xì)胞暴露于含有各特定濃度的式II化合物 的培養(yǎng)基，使細(xì)胞暴露于細(xì)胞培養(yǎng)基中漸增濃度的式II化合物2小時(shí)。除去培養(yǎng)基，用不 含式II化合物的完全培養(yǎng)基再培養(yǎng)(re-fed)細(xì)胞。洗出后6小時(shí)，用熒光計(jì)評(píng)價(jià)細(xì)胞的 激活胱天蛋白酶的水平。各細(xì)胞系的試樣也接受SDS-PAGE，隨后對(duì)p85 PARP胱天蛋白酶裂 解產(chǎn)物進(jìn)行免疫印跡。如果在細(xì)胞系暴露于低于0. 1微摩爾濃度的式II化合物2小時(shí)后， 觀察到胱天蛋白酶的可檢測(cè)的活化和p85 PARP的積聚，就認(rèn)為是確定的細(xì)胞凋亡結(jié)果。這些數(shù)據(jù)呈現(xiàn)于表III中。采用上述’ 200專(zhuān)利(其中的表87)中所述的程序，估 算IC5(I值。表III中的數(shù)據(jù)表明，在至少一部分經(jīng)測(cè)試的不同細(xì)胞系中，所有腫瘤類(lèi)型經(jīng)歷過(guò)細(xì)胞周期停滯。此外，測(cè)試的腫瘤類(lèi)型未表現(xiàn)出對(duì)式II化合物特別敏感或抗性。另外， 這些數(shù)據(jù)表明，在單次暴露于式II化合物后，在超過(guò)85 %的測(cè)試細(xì)胞系中，檢測(cè)到胱天蛋 白酶活化和細(xì)胞凋亡。應(yīng)該提及，約50%的NCI-60篩選結(jié)果對(duì)MDR1 (多藥物抗性基因1) 基因表達(dá)是陽(yáng)性的。表III-在多種細(xì)胞系中的抑制 通過(guò)使A2780卵巢癌細(xì)胞培養(yǎng)物暴露于逐漸增加濃度的、溶解于生長(zhǎng)培養(yǎng)基的式 II化合物兩小時(shí)時(shí)間，然后移出細(xì)胞，再于不存在式II化合物的完全培養(yǎng)基再培養(yǎng)6小時(shí) (洗出時(shí)間)，確定A2780細(xì)胞短時(shí)間暴露于式II化合物之后的細(xì)胞凋亡的活化。在6小 時(shí)洗出時(shí)間后，制備細(xì)胞提取物，并用熒光測(cè)定評(píng)價(jià)活化的胱天蛋白酶(RFLU)。在該研究中 觀察到，在暴露于小到0. 05微摩爾濃度存在的式II化合物2小時(shí)之后，可再現(xiàn)地檢測(cè)到胱 天蛋白酶活性。當(dāng)與用更高濃度的式II化合物(至多5.0微摩爾)處理的細(xì)胞相比，發(fā)現(xiàn) 胱天蛋白酶活性沒(méi)有增加。這些數(shù)據(jù)表明，在0. 05微摩爾的暴露水平下，胱天蛋白酶活性 是最高的。
為確認(rèn)2小時(shí)暴露的分布(profile)足以介導(dǎo)對(duì)細(xì)胞周期分布的持久作用，將異 步生長(zhǎng)的A2780細(xì)胞分成16批暴露于介于0. 001微摩爾-30微摩爾的各濃度的溶解于生 長(zhǎng)培養(yǎng)基中的式II化合物2小時(shí)，每個(gè)式II化合物濃度為前批濃度的約兩倍。在每個(gè)實(shí) 驗(yàn)中，暴露后，洗出細(xì)胞，于不存在式II化合物的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中再培養(yǎng)24小時(shí)，然后再用 BrdU脈沖30分鐘，以確定經(jīng)歷活性DNA復(fù)制的細(xì)胞的百分比。再固定細(xì)胞，用FITC-共軛 的、抗-BrdU單克隆抗體和二碘化丙錠染色。用2-色流式細(xì)胞計(jì)以雙重鑒別分析這樣制備 的細(xì)胞。該研究表明，在大于0. 5微摩爾的暴露下，在暴露后24小時(shí)，式II化合物完全抑制 DNA合成。暴露于大于0. 5微摩爾濃度的試樣也表現(xiàn)出subGl的積聚(與凋亡細(xì)胞有關(guān))。 擴(kuò)大暴露超過(guò)0. 5微摩爾，至多30微摩爾濃度，不增加凋亡表型。通過(guò)使異步生長(zhǎng)A2780細(xì)胞暴露于含有0. ImM式II化合物的生長(zhǎng)培養(yǎng)基2小時(shí)， 洗出細(xì)胞并用不包含式II化合物的培養(yǎng)基再培養(yǎng)細(xì)胞，評(píng)價(jià)式II化合物短期暴露的機(jī)械 作用。洗出后，自細(xì)胞制備溶胞產(chǎn)物，以評(píng)價(jià)暴露作用的持續(xù)時(shí)間。在SDS-PAGE上分離試 樣，用對(duì)次磷酸化成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤蛋白和P85 PARP特異性的抗血清免疫印跡，評(píng)價(jià)CDK的 抑制作用和細(xì)胞凋亡的激活。發(fā)現(xiàn)細(xì)胞暴露于0. ImM式II化合物2小時(shí)足以介導(dǎo)RB磷酸 化的抑制和胱天蛋白酶活化超過(guò)洗出時(shí)段后的6小時(shí)時(shí)期。使異步生長(zhǎng)A2780細(xì)胞暴露于逐漸增加濃度的式II化合物或式III化合物16小 時(shí)。在SDS-Page上分離細(xì)胞溶解產(chǎn)物，用對(duì)成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤腫瘤抑制劑蛋白(RB，已知的 ⑶K底物)上的⑶K磷酸化位點(diǎn)(Ser 07/811)特異性的兔多克隆抗血清免疫印跡。還監(jiān)測(cè) p85 PARP產(chǎn)物的積聚，以隨著細(xì)胞凋亡的開(kāi)始，評(píng)價(jià)胱天蛋白酶的活化和CDKs的相關(guān)抑制 作用。與用細(xì)胞數(shù)據(jù)評(píng)價(jià)胸苷結(jié)合(4nM的IC5(I)的抑制作用的上述研究一致，暴露后，含有 式II化合物的制劑抑制磷酸-Ser807/811。在暴露于高于6. 25nM式II化合物的各濃度的 溶胞產(chǎn)物中，未檢測(cè)到磷酸_Ser 807/811，觀察到由可檢測(cè)的p85 PARP表明的，為開(kāi)始細(xì) 胞凋亡需要完全抑制可檢測(cè)的RB磷酸化。相比之下，暴露于式III化合物(黃酮類(lèi)抗腫瘤 藥)不介導(dǎo)RB磷酸化的顯著抑制，需要約1微摩爾濃度介導(dǎo)對(duì)磷酸Ser 807/811水平的可 檢測(cè)的作用。在低于觀察RB磷酸化的抑制的這些濃度水平下，觀察到細(xì)胞凋亡的活化。還 觀察到，對(duì)于式in化合物，在胸苷結(jié)合的各種細(xì)胞內(nèi)試驗(yàn)中的IC-5(I/EC5(i和基于生物標(biāo)志 物例如，磷酸-RB的機(jī)理之間的相關(guān)性差。表IV表明，如Upstate激酶仿形儀計(jì)數(shù)-篩選(Upstate kinaseProfiler counter-screening)所確定的，式II化合物對(duì)Ser/Thr激酶的CDK家族具選擇性，但式III 化合物具有更普遍的活性，包括抑制c-Src酪氨酸激酶。表 IV *殘余活性百分比圖5也表明，式II化合物以高親合力結(jié)合于細(xì)胞周期蛋白A/CDK2復(fù)合物。實(shí)施例4 志愿者研究在250ml標(biāo)準(zhǔn)0. 9%鹽水IV袋中稀釋后，將實(shí)施例1中制備的制劑輸注入志愿者 癌癥病人中。經(jīng)2小時(shí)時(shí)間輸注IV袋中的內(nèi)容物。針對(duì)所輸注的患者，采用提供0. 33mg/m2、 0. 66mg/m2、1. 32mg/m2、1. 85mg/m2、2. 59mg/m2、3. 63mg/m2、5. 08mg/m2、7. llmg/m2、10. OOmg/ m2、12. 00mg/m2和14. 00mg/m2式II化合物的劑量的制劑量準(zhǔn)備用量。按28天周期向各患者 給藥，包括周期的前三周，每周輸注一次，即在每周期的第1、8、15天輸注，第三次用藥后的 那周停藥。在開(kāi)始輸注前和在開(kāi)始輸注后的1、2 (結(jié)束輸注)、2. 25,2. 5,3. 0,3. 5,4. 0,5. 4、 6. 0、8. 0和24小時(shí)收集血樣。志愿者癌癥病人也以1. 85mg/m2、3. 7mg/m2、7. 4mg/m2、14. 8mg/ m2、29. 6mg/m2、41. 4mg/m2、50mg/m2 和 58mg/m2 經(jīng) 2 小時(shí) IV 輸注，每三周給藥一次(S卩，按 21-天周期)。在21天給藥方案和可比較的上述28天給藥方案之間所得到的PK和AUC結(jié) 果類(lèi)似。關(guān)于圖2A、2B和2C，它們表示以所示各種劑量水平開(kāi)始2小時(shí)輸注后的式II化合物用ng/ml表示的血藥濃度，對(duì)于各輸注，開(kāi)始輸注后的1-2小時(shí)之間達(dá)到C_。當(dāng)完成 輸注時(shí)，可發(fā)現(xiàn)，各種情況下，式II化合物快速?gòu)难獫{排出，取決于劑量，T1/2介于約1. 4-約 3. 3小時(shí)范圍內(nèi)。關(guān)于圖3，其表示對(duì)于28天給藥周期的第1天(菱形)和第15天(正方形)給 予的各種劑量的AUC(ng hr/mL)/劑量(mg/m2)，所觀察到的暴露劑量似乎成比例地增加， 從0. 33mg/m2到41. 4mg/m2，且清除率是劑量獨(dú)立的。圖2B也表明，在大于1. 32mg/m2的劑 量下，從2小時(shí)輸注可得到25nM血漿水平(達(dá)到lOng/mL血藥濃度)。關(guān)于圖8，它表明28天給藥方案的第1和15天以1. 85mg/m2給藥的患者的平均 AUC數(shù)據(jù)，周期中各劑量的AUC數(shù)據(jù)是相似的。表示為AUC-第15天/AUC-第1天的AUC比 為1.09。還發(fā)現(xiàn)，在第一周期的第1、8和15天和第二周期的第1天的各次輸注結(jié)束時(shí)的血 藥濃度是相似的，表明劑量方案的一致暴露。這也表明采用該方案，藥物積聚是不明顯的。關(guān)于圖1，它表示14. 8mg/m2劑量的式II化合物的24小時(shí)輸注的濃度/時(shí)間分布 圖的估計(jì)，預(yù)示通過(guò)延長(zhǎng)輸注時(shí)間至不超過(guò)24小時(shí)，可在開(kāi)始輸注的2小時(shí)內(nèi)確立穩(wěn)態(tài)血 藥濃度，并延續(xù)到超過(guò)輸注的持續(xù)時(shí)間。因此，通過(guò)改變IV輸注時(shí)間，可改變本制劑中的式 II化合物的PK分布。在這種情況下，維持治療有效的血漿水平至延長(zhǎng)的時(shí)間段。這些研究中觀察到的PK參數(shù)概述于表V、表VI和表VII中。尤其是，圖示于圖2A 和2B的數(shù)據(jù)對(duì)應(yīng)于表V，而圖示于圖2C的數(shù)據(jù)對(duì)應(yīng)于表VI和VII。這些數(shù)據(jù)表明，在約 0. 33mg/m2-約58mg/m2劑量下，PK表現(xiàn)出適中的患者之間的可變性(Cmax和AUC)和相對(duì)低 至中度的患者內(nèi)的可變性(約30% )。觀察到的t1/2在約1. 4小時(shí)-約3. 3小時(shí)之間。表VIII是如表VI11中所示的某些劑量下，隨著患者數(shù)量的擴(kuò)大，在表V、VI和VII 中的數(shù)據(jù)的累積表示。表V 表 VI NA:不適用表VII NA:不適用；a:對(duì)t/l/2，n = 4，因?yàn)?名患者的值未確定表VIII基于累積數(shù)據(jù)，2小時(shí)IV輸液后的第1天的平均(CV% )初步藥動(dòng)學(xué)參數(shù) 縮寫(xiě)詞AUC(I)=時(shí)間從0至無(wú)窮大，血藥濃度-時(shí)間曲線(xiàn)下的面積；CL =清除 率；Cmax =最大觀察血藥濃度；CV%=用百分比表示的變異系數(shù)J1/；=末段半衰期；Tmax =達(dá)到最大觀察血藥濃度的時(shí)間；NA =不適用a :N = 4 :AUC(I)，tV2 和 CL ；患者的 tV2 未確定
b :N = 2 :AUC(I)，tV2 和 CL ；患者的 tV2 未確定c :N = 6 :AUC(I)，tV2 和 CL ；患者的 tV2 未確定d:來(lái)自患者的數(shù)據(jù)不包括在描述性統(tǒng)計(jì)內(nèi)，患者接受的a < lhr輸注和 < 3. 63mg/m2 劑量e :N = 5 :AUC(I)，tV2 和 CL ；患者的 tV2 未確定在開(kāi)始輸注后的2、3、4、6和8小時(shí)，從用等于0. 33mg/m2 ；0. 66mg/m2 ；和1. 85mg/m2 的量的式II化合物的劑量水平輸注(2hrs)的患者收集血樣。用含有肝素的試管收集試樣， 并運(yùn)送至中心實(shí)驗(yàn)室用于評(píng)價(jià)。來(lái)自各試樣的全血在完全RPMI培養(yǎng)基中按1 5稀釋?zhuān)瑢?200微升各等份加至96孔培養(yǎng)皿的各孔中。各時(shí)間點(diǎn)的試樣用或不用PHA(0.01mg/ml最終 濃度)刺激。于37°C、5% C02下，溫育試樣孔培養(yǎng)皿48小時(shí)，并向各孔加入BrdU(10微摩 爾)。再溫育各培養(yǎng)皿另外24小時(shí)。試樣經(jīng)FITC共軛的抗-⑶45抗體染色。RBC's被溶 解，而其余細(xì)胞被固定、滲透(permeabilized)和用DNA酶(DNase)處理。然后用抗BrdU 抗體孵化試樣。再懸浮經(jīng)洗滌的細(xì)胞，并用FACS檢測(cè)⑶45和BrdU-陽(yáng)性和陰性群體。圖 10、12A和12B表示各種劑量下所采試樣的BrdU結(jié)合的百分率。關(guān)于圖10，在0. 33mg/m2劑量未觀察到BrdU結(jié)合的抑制，但在0. 66mg/m2劑量時(shí)， 輸注后不超過(guò)8小時(shí)觀察到BrdU結(jié)合的抑制。在1. 85mg/m2劑量輸注后2小時(shí)，觀察到 BrdU結(jié)合的抑制。這些數(shù)據(jù)表明，式II化合物與細(xì)胞機(jī)械通道以某種可能破壞腫瘤細(xì)胞的 方式相互作用。關(guān)于圖12A，以1. 85mg/m2劑量輸注后2小時(shí)，觀察到BrdU結(jié)合的輕度抑制。相 比之下，如圖12A和12B中所示，以3. 7mg/m2和7. 4mg/m2的劑量輸注后不超過(guò)3小時(shí)和以 29. 6mg/m2、41. 4mg/m2、50mg/m2和58mg/m2的劑量輸注后不超過(guò)8小時(shí)，觀察到BrdU結(jié)合的 抑制。與圖10中所見(jiàn)的相比較，在1. 85mg/m2劑量(參見(jiàn)圖12A)下觀察到的式II化合物 對(duì)BrdU結(jié)合的抑制的作用可能歸因于患者之間的可變性。關(guān)于圖13和表1X1，在1.85-58mg/m2范圍內(nèi)，輸注后8小時(shí)的BrdU結(jié)合的百分抑 制率通常增加。事實(shí)上，在7. 4mg/m2劑量下，BrdU結(jié)合的百分抑制率已經(jīng)上升到大于75%。 這些數(shù)據(jù)反映，如經(jīng)BrdU結(jié)合所測(cè)定的那樣，淋巴細(xì)胞增殖的抑制與血樣所暴露的式II化 合物的劑量水平相關(guān)。表 IX
*輸注后4小時(shí)的值已經(jīng)按28天給藥周期，經(jīng)2小時(shí)IV輸液，給予診斷為非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)、結(jié)腸 直腸癌、前列腺癌、卵巢癌、乳癌、黑素瘤、外陰癌、腹膜假粘液瘤、腹膜癌、膽管癌、胰腺癌、 軟組織肉瘤、胃癌、胃腸基質(zhì)瘤(GIST)、食道癌、腺樣囊腫癌、神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤或肝細(xì)胞癌的 患者各種劑量的式II化合物。各個(gè)28天給藥周期包括每周給藥一次，連續(xù)3周，一周停 藥。在人群中，按RECIST標(biāo)準(zhǔn)，已經(jīng)觀察到不完全或部分響應(yīng)(參見(jiàn)，例如，Therasse等， J Natl Cancerlnst，92 (3) :205_216 (2000))。但是，一位診斷患有 NSCLC 的患者在 6 個(gè) 28 天的周期以0. 66mg/m2治療后，病情穩(wěn)定，而一位診斷為腹膜假粘液瘤的患者，如圖11中所 示，在6個(gè)28天的周期以2. 59mg/m2治療后，腫瘤標(biāo)記物下降，并繼續(xù)治療全部的9個(gè)周期。 為清楚起見(jiàn)，標(biāo)示為“CA”的腫瘤標(biāo)記是CA125。另外，一位前列腺癌患者接受4個(gè)28天周 期的劑量方案，以3. 63mg/m2給予該患者。一位黑素瘤患者以3. 63mg/m2治療9個(gè)周期，直 到疾病進(jìn)展。一位軟組織肉瘤患者接受7. llmg/m2的6個(gè)周期，持續(xù)到病情穩(wěn)定，如同接受 7. llmg/m2的5個(gè)周期的一位GIST患者一樣。一位食道癌患者接受7. llmg/m2的5個(gè)周期， 病情穩(wěn)定。一位腺樣囊腫癌患者接受7. llmg/m2的5個(gè)周期，直到疾病進(jìn)展。同樣地，按21天給藥周期，經(jīng)2小時(shí)IV輸液，給予診斷為類(lèi)癌、胸腺癌、平滑肌肉 瘤、NSCLC、結(jié)腸直腸癌、頭和頸的鱗狀細(xì)胞癌(HNSCC)、未知的原發(fā)性腺癌、黑素瘤、卵巢癌、 非何杰金氏淋巴瘤、神經(jīng)內(nèi)分泌瘤、睪丸癌、乳癌、前列腺癌、食道癌、胰腺癌、甲狀腺癌、脂 肪肉瘤、膽管癌、腹膜假粘液瘤、脊索瘤或肉瘤樣癌的患者各種劑量的式II化合物。按21 天給藥周期，經(jīng)8小時(shí)IV輸液，給予診斷為脂肪肉瘤、結(jié)腸直腸癌、神經(jīng)內(nèi)分泌瘤、NSCLC和 食道癌的患者各種劑量的式II化合物。各個(gè)21天給藥周期包括21天時(shí)段的第1天給予 劑量。盡管在人群中按RECIST標(biāo)準(zhǔn)觀察到不完全或部分的響應(yīng)，但在4個(gè)或更多個(gè)21天 給藥周期后，上述某些腫瘤類(lèi)型已經(jīng)達(dá)到病情穩(wěn)定。尤其是，經(jīng)29. 6mg/m2和41. 4mg/m2劑 量的4個(gè)周期，兩位類(lèi)癌患者的病情得到穩(wěn)定。類(lèi)似地，對(duì)于50mg/m2劑量的4個(gè)周期的胸 腺癌患者，病情得到穩(wěn)定。經(jīng)50mg/m2劑量的6個(gè)周期，肛門(mén)癌患者的病情得到穩(wěn)定。另外， 經(jīng)41. 4mg/m2劑量8個(gè)周期的平滑肌肉瘤患者的病情得到穩(wěn)定。經(jīng)50mg/m2劑量的12個(gè)周 期的NSCLC患者的病情得到穩(wěn)定。經(jīng)58mg/m2劑量的8個(gè)周期的脊索瘤患者的病情得到穩(wěn) 定，以及經(jīng)50mg/m2劑量的7個(gè)周期的前列腺癌患者病情得到穩(wěn)定。本發(fā)明的以上描述意欲舉例說(shuō)明而并非限制。對(duì)本領(lǐng)域那些技術(shù)人員而言，本文 所述各實(shí)施方案中的各種改變或修飾可以出現(xiàn)?？稍诓幻撾x本發(fā)明的范圍或精神的情況下 進(jìn)行這些修改。表X
表 XI 本發(fā)明的以上描述意欲舉例說(shuō)明而并非限制。對(duì)本領(lǐng)域那些技術(shù)人員而言，本文 所述各實(shí)施方案中的各種改變或修飾可以出現(xiàn)。可在不背離本發(fā)明的范圍或精神的情況下 進(jìn)行這些修改。
權(quán)利要求
一種IV-可注入的制劑，其包含在具有約pH 3.4-約pH 5的pH的緩沖溶液中的式II化合物，所述制劑在以至少一個(gè)標(biāo)示的劑量水平注入人體時(shí)，提供根據(jù)圖2A、2B或2C中所示的至少一種PK表現(xiàn)和/或AUC。
2.權(quán)利要求1的制劑，其在2小時(shí)輸液中以提供至少一個(gè)所示劑量水平的量輸注時(shí)，提 供圖3中所示的AUC/劑量曲線(xiàn)。
3.權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的制劑，其中的緩沖溶液是包含酸及其共軛鈉鹽的含水緩 沖溶液，其中的酸是檸檬酸或乳酸。
4.權(quán)利要求1的制劑，其中的緩沖溶液包含檸檬酸和檸檬酸鈉。
5.權(quán)利要求4的制劑，其中緩沖溶液中的檸檬酸檸檬酸鈉的比例為約1摩爾檸檬酸 鈉對(duì)約2. 4摩爾檸檬酸。
6.權(quán)利要求5的制劑，其中的溶液還包含氯化鈉溶液稀釋液。
7.一種治療通過(guò)給予式II化合物可治療的腫瘤疾病的方法，其包括在28天周期的第 1、第8和第15天的每一天，以有效治療腫瘤疾病的量，經(jīng)1小時(shí)至約24小時(shí)的時(shí)間，將含 有式II化合物的溶液注入需要治療的患者中。
8.權(quán)利要求7的方法，其中所述周期重復(fù)進(jìn)行，直至觀察到腫瘤抑制或完全消退。
9.權(quán)利要求7或8的方法，其中輸液的量提供至少約lOng/mL的血漿水平。
10.權(quán)利要求7-9中任一項(xiàng)的方法，其中所給予的溶液包括權(quán)利要求5的溶液。
11.一種制備濃縮液的方法，其包括制備有機(jī)酸及其共軛鹽的緩沖溶液、溶解式II化 合物至緩沖溶液中，并調(diào)節(jié)所生成溶液的PH至約pH 3-約pH 5. 1的pH。
12.權(quán)利要求11的方法，它還包括使?jié)饪s液與標(biāo)準(zhǔn)鹽水IV袋中的內(nèi)容物混合的步驟， 由此提供可注入的制劑。
13.權(quán)利要求11或12的方法，其中的有機(jī)酸是檸檬酸，而共軛鹽是檸檬酸鈉。
14.權(quán)利要求11-13中任一項(xiàng)的方法，其中的有機(jī)酸、共軛鹽與式II化合物的比例為1 摩爾式II化合物3. 66摩爾共軛鹽8. 8摩爾有機(jī)酸。
15.權(quán)利要求11的方法，其中式II化合物以5mg/mL水平存在于濃縮液中。
16.一種包含含水有機(jī)酸、其共軛鹽和式II化合物的制劑，其在經(jīng)IV注入人體后提供 圖2A中所示的PK分布圖。
17.一種包含含水有機(jī)酸、其共軛鹽和式II化合物的制劑，其在以提供至少一個(gè)標(biāo)示 劑量的量經(jīng)IV注入人體后提供表V中所示的至少一個(gè)PK分布圖。
18.權(quán)利要求17的制劑，其包含的式II化合物有機(jī)酸共軛鹽的摩爾比為1摩 爾8. 8摩爾3. 7摩爾。
19.一種包含II化合物有機(jī)酸共軛鹽的摩爾比為約1摩爾式II化合物約8. 8 摩爾有機(jī)酸約3. 7摩爾共軛鹽的制劑，其中包含1. 85mg/M2的兩小時(shí)輸注劑量的制劑提 供具有約2. 15小時(shí)的t1/2，約77ng/ml的Cmax和/或約181ng hr/mL的AUC的PK。
20.一種包含II化合物有機(jī)酸共軛鹽的摩爾比為約1摩爾式II化合物約8. 8 摩爾有機(jī)酸約3. 7摩爾共軛鹽的制劑，其中包含3. 7mg/M2的兩小時(shí)輸注劑量的制劑提供 具有約2. 75小時(shí)的t1/2，約136ng/ml的Cmax和/或約336ng hr/mL的AUC的PK。
21.一種包含II化合物有機(jī)酸共軛鹽的摩爾比為約1摩爾式II化合物約8. 8 摩爾有機(jī)酸約3. 7摩爾共軛鹽的制劑，其中包含7. 4mg/M2的兩小時(shí)輸注劑量的制劑提供具有約2. 86小時(shí)的t1/2，約353ng/ml的Cmax和/或約994ng hr/mL的AUC的PK。
22.一種包含II化合物有機(jī)酸共軛鹽的摩爾比為約1摩爾式II化合物約8. 8 摩爾有機(jī)酸約3. 7摩爾共軛鹽的制劑，其中包含14. 8mg/M2的兩小時(shí)輸注劑量的制劑提 供具有約2. 78小時(shí)的t1/2，約396ng/ml的Cmax和/或約1053ng hr/mL的AUC的PK。
23.一種包含II化合物有機(jī)酸共軛鹽的摩爾比為約1摩爾式II化合物約8. 8 摩爾有機(jī)酸約3. 7摩爾共軛鹽的制劑，其中包含29. 6mg/M2的兩小時(shí)輸注劑量的制劑提 供具有約2. 79小時(shí)的t1/2，約1020ng/ml的Cmax和/或約2531ng hr/mL的AUC的PK。
24.一種包含II化合物有機(jī)酸共軛鹽的摩爾比為約1摩爾式II化合物約8. 8摩 爾有機(jī)酸約3. 7摩爾共軛鹽的制劑，其中包含41. 4mg/M2的兩小時(shí)輸注劑量的制劑提供 具有介于約2-約2. 8小時(shí)的t1/2，介于約1020ng/ml-1343ng/ml的Cmax和/或介于約2531ng hr/mL-約 304Ing hr/mL 的 AUC 的 PK。
25.一種包含II化合物有機(jī)酸共軛鹽的摩爾比為約1摩爾式II化合物約8. 8 摩爾有機(jī)酸約3. 7摩爾共軛鹽的制劑，其中包含50mg/M2的兩小時(shí)輸注劑量的制劑提供 具有約1. 5小時(shí)的t1/2，約1820ng/ml的Cmax和/或約3290ng hr/mL的AUC的PK。
26.一種包含II化合物有機(jī)酸共軛鹽的摩爾比為約1摩爾式II化合物約8. 8 摩爾有機(jī)酸約3. 7摩爾共軛鹽的制劑，其中包含58mg/M2的兩小時(shí)輸注劑量的制劑提供 具有約1小時(shí)的t1/2，約1460ng/ml的Cmax和/或約3290ng hr/mL的AUC的PK。
27.一種含有式II化合物的制劑，當(dāng)以提供表V中所示的相應(yīng)劑量的量經(jīng)IV輸注給藥 時(shí)，其表現(xiàn)出表V中所示的PK值和Cmax值。
28.一種含有式II化合物的制劑，當(dāng)以提供表VI中所示的相應(yīng)劑量的量經(jīng)IV輸注給 藥時(shí)，其表現(xiàn)出表VI中所示的PK值和Cmax值。
29.一種治療通過(guò)給予式II化合物可治療的腫瘤疾病的方法，其包括以有效治療腫瘤 疾病的量，經(jīng)1小時(shí)至約24小時(shí)的時(shí)期，將含有式II化合物的溶液注入需要治療的患者， 其中第1天給予所述化合物，隨后停用20天(21天周期)。
30.權(quán)利要求29的方法，其中所述周期重復(fù)進(jìn)行，直到觀察到腫瘤抑制或完全消退。
31.權(quán)利要求29或30的方法，其中所輸注的溶液的量提供至少約lOng/mL的血漿水平。
32.權(quán)利要求29-31中任一項(xiàng)的方法，其中所給予的溶液包括權(quán)利要求5的溶液。
33.權(quán)利要求7-10和29-32中任一項(xiàng)的方法，其中所輸注的溶液的量提供至多約 58mg/m2的式II化合物。
34.權(quán)利要求7-10和29-32中任一項(xiàng)的方法，其中所輸注的溶液的量提供約50mg/m2 的式II化合物。
35.權(quán)利要求29的方法，其中的腫瘤選自非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)，乳癌、卵巢癌、急性 白血病[例如，急性髓性白血病(AML)或急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)]、慢性白血病(例如， CLL)、非何杰金氏淋巴瘤(例如，MCL)、黑素瘤和多發(fā)性骨髓瘤。
36.權(quán)利要求29的方法，其中輸注的時(shí)間段選自2小時(shí)、8小時(shí)和24小時(shí)。
37.權(quán)利要求29的方法，其中所給予的式II化合物的量為約0.33mg/m2-約20mg/m2、 約 0. 33mg/m2-約 14mg/m2 或約 7mg/m2-約 12mg/m2。
38.一種治療通過(guò)給予式II化合物可治療的腫瘤疾病的方法，其包括以有效治療腫瘤疾病的量，經(jīng)1小時(shí)至約24小時(shí)的時(shí)間段，將含有式II化合物的溶液注入需要治療的患者 中，其中在28天周期的第1、8和15天中的每一天給予所述化合物。
39.權(quán)利要求29的方法，其中腫瘤選自非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)、乳癌、卵巢癌、急性白血 病[例如，急性髓性白血病(AML)或急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)]、慢性白血病(例如，CLL)、 非何杰金氏淋巴瘤(例如，MCL)、黑素瘤和多發(fā)性骨髓瘤。
40.權(quán)利要求38的方法，其中輸注的時(shí)間段選自2小時(shí)、8小時(shí)和24小時(shí)。
41.權(quán)利要求40的方法，其中輸注的時(shí)間段為8小時(shí)。
42.權(quán)利要求41的方法，其中所給予的式II化合物的量為約1.85mg/m2-約70mg/m2或 約 15mg/m2-約 30mg/m2。
43.權(quán)利要求40的方法，其中輸注的時(shí)間段為24小時(shí)。
44.權(quán)利要求43的方法，其中所給予的式II化合物的量為約1.85mg/m2-約100mg/m2、 約 50mg/m2-約 80mg/m2 或約 30mg/m2-約 70. Omg/m2。
45.權(quán)利要求38的方法，其中所治療的腫瘤為實(shí)體瘤。
46.權(quán)利要求45的方法，其中的實(shí)體瘤選自乳癌、黑素瘤和卵巢癌。
47.權(quán)利要求45的方法，其中所輸注溶液的量提供約1.8mg/m2-5約8mg/m2。
48.權(quán)利要求45或權(quán)利要求46的方法，其還包括給予生長(zhǎng)因子。
49.權(quán)利要求48的方法，其中的生長(zhǎng)因子選自GCSF和GMCSF。
50.權(quán)利要求48或權(quán)利要求49的方法，其中在21天的給藥方案中所輸注的溶液的量 提供約 0. 33mg/m2 至約 100mg/m2。
51.一種包含含水有機(jī)酸、其共軛鹽和式II化合物的制劑，其在經(jīng)IV注入人體后提供 示于圖2B中的PK分布圖。
52.一種包含含水有機(jī)酸、其共軛鹽和式II化合物的制劑，其在經(jīng)IV注入人體后提供 示于圖2C中的PK分布圖。
全文摘要
本申請(qǐng)公開(kāi)含有3-氨基-4-取代的吡唑衍生物的新制劑，其具有細(xì)胞周期蛋白-依賴(lài)性激酶抑制性質(zhì)，和使用新制劑治療腫瘤的方法。
文檔編號(hào)A61K47/12GK101854915SQ200880116604
公開(kāi)日2010年10月6日 申請(qǐng)日期2008年9月16日 優(yōu)先權(quán)日2007年9月17日
發(fā)明者A·達(dá)巴拉, D·A·帕里, M·沙米姆, P·斯塔特克維奇, P·柯希梅爾, R·班納吉, S·-L·姚, V·安托奇舒克 申請(qǐng)人:先靈公司