專利名稱：使用選擇性細胞周期蛋白依賴性激酶4/6抑制劑對抗化療化合物的造血防護的制作方法
技術領域：
本發(fā)明公開的主題涉及保護健康細胞免受因細胞毒性化合物如DNA損傷性化合物導致的損傷的方法。具體地，本發(fā)明公開的主題涉及向已暴露于、正在或?qū)⒈┞队凇⒒蛘哂酗L險暴露于細胞毒性化合物的對象給藥的細胞周期蛋白依賴性激酶4(CDK4)和/或細胞周期蛋白依賴性激酶6(CDK6)抑制劑的保護作用?？s寫
權利要求
1.減輕或預防細胞毒性化合物對已暴露于、將暴露于或有風險遭受暴露于細胞毒性化合物的對象中的健康細胞的效應的方法，其中所述健康細胞是造血干細胞或造血祖細胞， 所述方法包括向所述對象給藥有效量的抑制劑化合物或其藥學可接受的形式，其中所述抑制劑化合物選擇性地抑制細胞周期蛋白依賴性激酶4(CDK4)和/或細胞周期蛋白依賴性激酶 6(CDK6)。
2.權利要求1的方法，其中所述抑制劑化合物選擇性地抑制細胞周期蛋白依賴性激酶 4(CDK4)和細胞周期蛋白依賴性激酶6 (CDK6)。
3.權利要求1的方法，其中所述抑制劑化合物是非天然的化合物。
4.權利要求1的方法，其中所述抑制劑化合物基本上沒有脫靶效應。
5.權利要求4的方法，其中所述脫靶效應是長期毒性、抗氧化效應、雌激素效應、酪氨酸激酶抑制、抑制除細胞周期蛋白依賴性激酶4/6(CDK4/6)之外的細胞周期蛋白依賴性激酶(CDK)、和非CDK4/6依賴性細胞中的細胞周期停滯中的一種或多種。
6.權利要求1的方法，其中所述抑制劑化合物選擇性地誘導細胞周期蛋白依賴性激酶 4(CDK4)依賴性細胞和/或細胞周期蛋白依賴性激酶6 (CDK6)依賴性細胞中的Gl停滯。
7.權利要求6的方法，其中所述抑制劑化合物在細胞周期蛋白依賴性激酶4(CDK4)依賴性細胞和/或細胞周期蛋白依賴性激酶6 (CDK6)依賴性細胞中誘導基本上純粹的Gl停滯。
8.權利要求1的方法，其中所述抑制劑化合物選自吡啶并[2，3-d]嘧啶、三氨基嘧啶、 芳基[a]吡咯并[3，4-c]咔唑、含氮的雜芳基取代的脲、5-嘧啶基-2-氨基噻唑、苯并噻二嗪和吖啶硫酮。
9.權利要求8的方法，其中所述吡啶并[2，3-d]嘧啶是吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮或 2-氨基-6-氰基吡啶并[2，3-d]嘧啶-4-酮。
10.權利要求9的方法，其中所述吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮是2- ’-吡啶基)氨基吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮。
11.權利要求10的方法，其中所述吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮是6-乙酰基-8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶_7_酮。
12.權利要求8的方法，其中所述芳基[a]吡咯并[3，4_c]咔唑選自萘基[a]吡咯并 [3,4-c]咔唑、吲哚并[a]吡咯并[3，4_c]咔唑、喹啉基[a]吡咯并[3，4_c]咔唑和異喹啉基[a]吡咯并[3,4-c]咔唑。
13.權利要求12的方法，其中所述芳基[a]吡咯并[3，4-c]咔唑是2-溴-12，13-二氫-5H-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4]咔唑-5，6-二酮。
14.權利要求1的方法，其中所述對象是哺乳動物。
15.權利要求1的方法，其中所述抑制劑化合物通過口服給藥、局部給藥、鼻內(nèi)給藥、吸入和靜脈內(nèi)給藥之一向所述對象給藥。
16.權利要求1的方法，其中在暴露于所述細胞毒性化合物之前、在暴露于所述細胞毒性化合物期間、在暴露于所述細胞毒性化合物之后或其任何組合向所述對象給藥所述抑制劑化合物。
17.權利要求16的方法，其中在暴露于所述細胞毒性化合物之前M小時或更短時間向所述對象給藥所述抑制劑化合物。
18.權利要求16的方法，其中在暴露于所述細胞毒性化合物之后M小時或更長時間向所述對象給藥所述抑制劑化合物。
19.權利要求1的方法，其中所述細胞毒性化合物是DNA損傷性化合物。
20.權利要求1的方法，其中所述健康細胞選自長期造血干細胞(LT-HSC)、短期造血干細胞(ST-HSC)、多能祖細胞(MPP)、髓共同祖細胞(CMP)、淋巴共同祖細胞(CLP)、粒細胞-單核細胞系祖細胞(GMP)和巨核細胞-紅細胞系祖細胞(MEP)。
21.權利要求1的方法，其中給藥所述抑制劑化合物產(chǎn)生造血干細胞和造血祖細胞的短暫藥理性靜止。
22.權利要求1的方法，其中所述對象已接受、正在接受或預定要接受用細胞毒性化合物的醫(yī)學治療以治療疾病。
23.權利要求22的方法，其中給藥所述抑制劑化合物不影響患病細胞的生長。
24.權利要求22的方法，其中所述疾病是癌癥。
25.權利要求對的方法，其中所述癌癥的特征在于以下一個或多個方面細胞周期蛋白依賴性激酶I(CDKl)活性增高、細胞周期蛋白依賴性激酶2 (CDD)活性增高、喪失或缺乏視網(wǎng)膜母細胞瘤抑癌蛋白(RB)、高水平的MYC表達、細胞周期蛋白E增多和細胞周期蛋白AJ·日夕O
26.權利要求22的方法，其中與在不給藥所述抑制劑化合物的情況下會使用的劑量相比，給藥所述抑制劑化合物允許使用更高劑量的所述細胞毒性化合物來治療所述疾病。
27.權利要求1的方法，其中所述對象已意外地暴露于所述細胞毒性化合物或者過量的所述細胞毒性化合物。
28.權利要求1的方法，其中所述方法沒有長期的血液毒性。
29.權利要求1的方法，其中與在不給藥所述抑制劑化合物的情況下暴露于所述細胞毒性化合物后預期的狀況相比，給藥所述抑制劑化合物致使貧血減輕、淋巴細胞減少減輕、 血小板減少減輕或中性白細胞減少癥減輕。
30.篩選用于預防細胞毒性劑在健康細胞中的效應的化合物的方法，所述方法包括 使細胞周期蛋白依賴性激酶4(CDK4)依賴性細胞群和/或細胞周期蛋白依賴性激酶6(CDK6)依賴性細胞群與測試化合物接觸一段時間； 進行所述細胞群的細胞周期分析；和選擇選擇性地誘導所述細胞群中的Gl停滯的測試化合物。
31.權利要求30的方法，其中所述細胞周期蛋白依賴性激酶4(CDK4)依賴性細胞群和 /或細胞周期蛋白依賴性激酶6 (CDK6)依賴性細胞群包括調(diào)聚的人類二倍體成纖維細胞或缺少INMa/ARF的黑素瘤細胞。
32.權利要求30的方法，其中使用選自流式細胞術、熒光測定法、細胞成像和熒光光譜法的一種或多種技術進行所述細胞周期分析。
33.權利要求30的方法，其中所述細胞周期分析包括用選自5-溴-2-脫氧尿苷(BrdU) 和碘化丙錠的一種或多種標記劑標記所述細胞群。
34.權利要求30的方法，其中所述方法還包括使另一種細胞群與選擇性地誘導細胞周期蛋白依賴性激酶4 (CDK4)依賴性細胞和/或細胞周期蛋白依賴性激酶6(CDK6)依賴性細胞中的Gl停滯的測試化合物接觸一段時間，其中所述另一種細胞群包括非⑶K4和/或⑶K6依賴性細胞； 進行所述另一種細胞群的細胞周期分析；和選擇沒有選擇性地誘導所述另一種細胞群中的Gl停滯的測試化合物。
35.權利要求34的方法，其中所述另一種細胞群是癌細胞系。
36.權利要求34的方法，其中所述另一種細胞群是視網(wǎng)膜母細胞瘤抑癌蛋白(RB)無效的。
37.權利要求30的方法，其中所述方法還包括通過評價所述測試化合物在與細胞毒性劑接觸的離體細胞群中減輕DNA損傷的能力、維持細胞活力的能力或此二者來證實所述化合物的預防能力。
38.權利要求37的方法，其中通過進行Y-H2AX測定評價所述細胞群中的DNA損傷。
39.權利要求37的方法，其中通過進行細胞增殖測定評價細胞活力。
40.權利要求37的方法，其中所述細胞毒性劑是DNA損傷性化合物。
41.權利要求40的方法，其中所述DNA損傷性化合物選自多柔比星、依托泊苷和卡鉬。
全文摘要
提供減輕或預防細胞毒性化合物對健康細胞的效應的方法。所述方法涉及使用選擇性細胞周期蛋白依賴性激酶(CDK)4/6抑制劑來誘導CDK4/6依賴性細胞例如造血干細胞和/或造血祖細胞中的暫時靜止。還描述選擇用于減輕或預防細胞毒性劑化合物在健康細胞中的效應的化合物的方法。
文檔編號A61P35/00GK102231984SQ200980148408
公開日2011年11月2日 申請日期2009年10月1日 優(yōu)先權日2008年10月1日
發(fā)明者J·C·斯特魯姆, J·E·比希, M·R·拉姆齊, N·E·沙普爾斯, P·J·羅伯茨 申請人:北卡羅來納大學查珀爾希爾分校