專(zhuān)利名稱(chēng)：鄰氨基苯甲酸類(lèi)似物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一系列新的具有藥物活性的由鄰氨基苯甲酸衍生的酰胺(I)，它們的制備方法，含有它們的藥物組合物，以及它們?cè)谕ㄟ^(guò)鉀通道和氯化物通道調(diào)節(jié)來(lái)治療與平滑肌收縮有關(guān)的病癥方面的用途。這些病癥包括但不限于尿失禁、哮喘、早產(chǎn)、過(guò)敏性腸道綜合癥、充血性心力衰竭、心絞痛和外周血管病。
鉀通道調(diào)節(jié)一直處于對(duì)控制休止細(xì)胞膜潛能和影響細(xì)胞應(yīng)激性的最新研究的最前沿。在幾種最新的綜述中存在各種不同的離散鉀通道，并且根據(jù)其結(jié)構(gòu)、功能、藥理學(xué)性能和選通機(jī)理已經(jīng)將它們完全歸類(lèi)[Rudy，B.Neuroscience 1988，25，729-749；Atwal，K.，《醫(yī)藥研究綜述》(Medicinal Research Review)1992，12，569-591；Gopalakrischnan，M.等《藥物發(fā)展研究》(Drug DevelopmentResearch)1995，I，391-406；Edwards，G.等Exp.Opin.Invest.Drugs 1996，5(11)，1453-1464]。正在極力開(kāi)發(fā)鉀通道調(diào)節(jié)在心血管病癥、代謝紊亂、中樞神經(jīng)系統(tǒng)紊亂、支氣管性氣喘和膀胱過(guò)敏中的治療潛能。
對(duì)氯化物通道的研究興趣正在快步增長(zhǎng)[Strange，K.等KidneyInternational 1995，48，994-1003；Franciolini，F(xiàn).等Biochimica et Biophysica Acta 1990，247]?？赡苓m合于氯化物通道調(diào)節(jié)的各種疾病狀況包括支氣管性氣喘、心臟心率失常、胰囊性纖維變性和腎病。
Harita等在日本專(zhuān)利申請(qǐng)49-102692中公開(kāi)了制備間取代的芳族酰胺羧酸衍生物的方法，并且同樣是基于日本專(zhuān)利申請(qǐng)49-42465中的生產(chǎn)芳族肉桂酸(cinammic)衍生物的方法上。幾個(gè)專(zhuān)利和專(zhuān)利申請(qǐng)主要集中到具有請(qǐng)求保護(hù)的抗變應(yīng)性/止喘/抗組胺活性的試劑上Sato等在日本專(zhuān)利申請(qǐng)57-179976中報(bào)道了一組鄰氨基苯甲酸衍生物(強(qiáng)調(diào)Tranilast作為抗變應(yīng)性劑)。Aoyanagi等在日本專(zhuān)利申請(qǐng)58-79436中要求保護(hù)這些鄰氨基苯甲酸酯，該專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)了制備鄰氨基苯甲酸衍生物的制備方法；同樣相關(guān)的是匈牙利專(zhuān)利HU200 996B，其強(qiáng)調(diào)制備幾個(gè)Tranilast類(lèi)似物的方法；Yukihiko在日本專(zhuān)利J 6 0019 754也提出制備鄰氨基苯甲酸衍生物的方法，其中苯乙烯基部分被嚴(yán)格局限于烷氧基、羥基或酰氧基。
此外，Tsumoro等的日本專(zhuān)利J0 2218-654-A公開(kāi)了一組用作反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑的氨基苯甲酸衍生物。同樣Tsumoro等的專(zhuān)利J6 0097-946-A公開(kāi)了一系列取代的羧酰胺衍生物，其表現(xiàn)出作為白細(xì)胞三烯拮抗劑和磷脂酶抑制劑的活性。
發(fā)明描述根據(jù)本發(fā)明，這里提供下式表示的化合物
其中R1、R2和R3相互獨(dú)立地是氫、硝基、氰基、C1-10鹵代烷氧基、氨基、C1-10烷基氨基、磺基、氨磺酰基、C1-10烷基亞磺酰氨基、C2-10烷基甲酰氨基、C2-10鏈烷?；?alkanoyl)、C1-10烷基磺?；1-10鹵代烷基磺?；?、C1-10羧基、C1-10鹵代烷基和C6-12芳基；前提條件是(1)R1、R2和R3不同時(shí)全是氫，和(2)當(dāng)R1和R2是氫時(shí)，R3不可以是間-CF3；R4、R5和R6相互獨(dú)立地是氫、鹵素、硝基、氰基、C1-10烷氧甲?；?carboalkoxy)、C1-10鹵代烷氧基、氨基C1-10烷基氨基、磺基、氨磺?；?、C1-10烷基亞磺酰氨基、C2-10烷基甲酰氨基、C2-10鏈烷?；?、C1-10烷基磺?；1-10鹵代烷基磺?；?、C1-10羧基、C1-10鹵代烷基、C1-10烷基和C6-12芳基；R7是氫、金屬陽(yáng)離子、乙酰氨基、烷氧基乙?；?acetoyl)或在體內(nèi)產(chǎn)生羧酸鹽的相關(guān)部分；X、Y和Z可以形成鍵合在碳骨架上的C3-13碳環(huán)、噁唑、異噁唑、噻唑、異噻唑、呋喃、噻吩、2H-吡咯、吡咯、2-吡咯啉、3-吡咯啉、咪唑、吡唑、1，2，3-噁二唑或1，2，3-三唑。
在本發(fā)明更優(yōu)選的方面包括式(I)，其中R1、R2和R3相互獨(dú)立地是氫、硝基、氰基、全鹵代烷氧基、氨基、C1-10烷基氨基、C1-10二烷基氨基、C6-12芳基氨基、C1-10芳烷基氨基、磺基、氨磺酰基、C1-10烷基亞磺酰氨基、C6-12芳基亞磺酰氨基、C2-10烷基甲酰氨基、C6-12芳基甲酰氨基、C2-10鏈烷?；?、C6-12芳?；?、C2-22芳烷酰基、C1-10烷基磺?；1-10全鹵代磺?；?、C6-12芳基磺酰基、C2-22芳烷基磺酰基、C1-10羧基、C1-10鹵代烷基；C1-10全鹵代烷 基，芳基，鹵代芳基，全鹵代芳基，C1-10芳烷基部分，前體條件是(1)R1、R2和R3不同時(shí)全是氫，和(2)當(dāng)R1和R2是氫時(shí)，R3不可以是間-CF3；R4、R5和R6相互獨(dú)立地是氫、鹵素、硝基、氰基、烷氧甲?；?、全鹵烷氧基、氨基、C1-10烷基氨基、C1-10二烷基氨基、芳基氨基、C1-10芳烷基氨基、磺基、氨磺酰基、C1-10烷基亞磺酰氨基、C6-12芳基亞磺酰氨基、C2-10烷基甲酰氨基、C6-12芳基甲酰氨基、C2-10鏈烷?；?、C6-12芳?；?、C2-22芳烷酰基、C1-10烷基磺酰基、C1-10全鹵磺酰基、C6-12芳基磺?；2-22芳烷基磺?；?、C1-10羧基、C1-10直鏈烷基、C1-10支鏈烷基、C3-10環(huán)烷基或雙環(huán)烷基、C1-10鹵代烷基、C1-10全鹵烷基、C2-12鏈烯基(單烯屬的或多烯屬)、芳基、鹵代芳基、全鹵芳基、C1-10芳烷基；R7是氫、堿金屬陽(yáng)離子、堿土金屬陽(yáng)離子、乙酰氨基、烷氧基乙?；蛟隗w內(nèi)產(chǎn)生羧酸鹽的相關(guān)部分；X、Y和Z可以形成鍵合在碳骨架上的C3-13碳環(huán)、噁唑、異噁唑、噻唑或異噻唑。
本發(fā)明更優(yōu)選的方面包括式(1)化合物，其中R1、R2、R3、R4、R5和R6具有上述含義；R7選自氫、金屬陽(yáng)離子、選自下列結(jié)構(gòu)的部分
其中R9、R10、R11和R12相互獨(dú)立地是氫、C1-10直鏈烷基、C1-10支鏈烷基、C3-10環(huán)基或二環(huán)基、芳基或C1-10芳烷基；和X、Y和Z可以形成鍵合在碳骨架上的C3-13碳環(huán)、噁唑、異噁唑、噻唑或異噻唑。
本發(fā)明最優(yōu)選的方面是包括式(I)的化合物，其中R7可以是氫、或上述金屬陽(yáng)離子。
應(yīng)當(dāng)理解，當(dāng)R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7或通過(guò)X、Y和Z形成的環(huán)體系包括不對(duì)稱(chēng)碳原子時(shí)，式(I)化合物的定義包括具有下述活性的所有可能的立體異構(gòu)體及其混合物。特別地，它包括具有標(biāo)明活性的外消旋體及任何光學(xué)異構(gòu)體。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)分離技術(shù)或?qū)τ丑w特定合成，可以制得純凈形態(tài)的光學(xué)異構(gòu)體。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明包括式(I)化合物所有晶型。本發(fā)明的堿性化合物的藥物學(xué)上可接受鹽是那些由下列有機(jī)和無(wú)機(jī)酸衍生的乳酸、檸檬酸、乙酸、酒石酸、富馬酸、琥珀酸、馬來(lái)酸、丙二酸、氫氯酸、氫溴酸、磷酸、硝酸、硫酸、甲磺酸和類(lèi)似的可接受的已知酸。這里，如果R1、R2、R3、R4、R5、R6或通過(guò)X、Y和Z形成的環(huán)體系包括羧基，那么本發(fā)明中可以與堿例如堿金屬(Na、K、Li)或堿土金屬(Ca或Mg)形成該化合物的鹽。
本發(fā)明也提供制備式(I)化合物的方法。制備方法示于反應(yīng)式1至4中。
式(I)的異噁唑可以通過(guò)式(II)的化合物與適當(dāng)?shù)难趸?III)的氧化腈環(huán)加成反應(yīng)以獲得雜環(huán)化合物(IV)來(lái)制備的(反應(yīng)式1)。如上所示，皂化反應(yīng)獲得中間產(chǎn)物羧酸(V)反應(yīng)式1
其中R1、R2和R3與上述R1、R2和R3相同，并且A任選地選自基團(tuán)R1、R2、R3、R4、R5、R6或R7。
式(I)的噁唑可以經(jīng)適合的苯甲酰氯(VI)與異氰基乙酸甲酯(VII)進(jìn)行縮合反應(yīng)以獲得雜環(huán)化合物(VIII)來(lái)制備的(反應(yīng)式2)。如上所述，通過(guò)皂化反應(yīng)獲得中間產(chǎn)物羧酸(IV)反應(yīng)式2
這里R1、R2和R3與上述R1、R2和R3相同。
在更一般的意義上，式(I)化合物也可以通過(guò)適合的活化雜或碳環(huán)烯(IX)與合適的偶合伙伴(X)反應(yīng)獲得一系列式(XI)化合物，其中活化中間產(chǎn)物的典型實(shí)例是M為鄰三氟甲磺酸鹽和M’是三烷基錫烷，或者M(jìn)是溴化物或碘化物，而M是硼酸。
反應(yīng)式3
其中X、Y、X、R1、R2和R3與上述X、Y、Z、R1、R2和R3相同。如上所述，通過(guò)皂化反應(yīng)將獲得中間產(chǎn)物羧酸(XII)。
隨后使用一種下面規(guī)定的偶合步驟(方法A(COCl)2、cat.DMF、CH2Cl2，然后在鄰氨基苯甲酸于氫氧化鈉的溶液中加入該純的酰氯；方法B二異丙基碳化二亞胺、DMAP、CH2Cl2，然后加入鄰氨基苯甲酸甲酯；或方法C(COCl)2、cat.DMF、CH2Cl2，或SOCl2，隨后用三乙胺和鄰氨基苯甲酸甲酯處理該純的?；?使羧酸中間產(chǎn)物(V)、VI和(XII)偶合(反應(yīng)式4)于式(XIII)的適當(dāng)衍生的鄰氨基苯甲酸的胺，獲得式(I)的酰胺，如果使用酯(XIII)，那么最終皂化獲得游離酸(R7＝H)。
反應(yīng)式4
除CH2Cl2外，上述反應(yīng)可以在低于環(huán)境溫度下在非質(zhì)子傳遞溶劑例如二乙醚、二氯乙烷、二噁烷或THF中進(jìn)行。如果使用氫氧化鈉作為堿，那么其它也有能力的無(wú)機(jī)堿是氫氧化鋰或氫氧化鉀等。同樣三乙胺可以任選地被任何三烷基胺代替。
如上所述，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)式(1)化合物及其藥物學(xué)上可接受的鹽可以松弛平滑肌。因此，它們可以用于治療與平滑肌收縮有關(guān)的紊亂，紊亂包括尿道平滑肌過(guò)度收縮(如尿失禁)，或胃腸道平滑肌過(guò)度收縮(如過(guò)敏性大腸綜合癥)，哮喘和脫發(fā)。另外，式(1)化合物為鉀通道活化劑，用于治療外周血管病、充血性心衰竭、中風(fēng)、焦慮癥、腦缺氧癥及其它神經(jīng)變性性紊亂。此外，式(1)和(II)化合物為氯化物通道封阻劑，用于治療上述紊亂。
本發(fā)明化合物的特征在于它們?cè)隗w內(nèi)有效松弛平滑肌的性能。本發(fā)明化合物通過(guò)鉀通道活化和/或氯化物通道封阻表現(xiàn)出它們松弛平滑肌的活性(表1)。對(duì)比化合物Tranilast未表現(xiàn)出有效或膀胱選擇性平滑肌松弛性。
因此本發(fā)明提供藥用組合物，其包括本發(fā)明化合物與藥物學(xué)上可接受的載體組合或聯(lián)合。更確切地說(shuō)，本發(fā)明提供了包括有效劑量的本發(fā)明化合物以及藥物學(xué)上可接受載體的藥用組合物。
該組合物優(yōu)選適于口服給藥，但其也可采用其它方式給藥，如對(duì)心衰患者非腸道給藥。
為了獲得給藥的連貫性，本發(fā)明組合物優(yōu)選為單位劑量形式。適當(dāng)?shù)膯挝粍┝啃问桨ㄆ瑒?、膠囊以及裝于小囊或玻璃瓶中的粉劑。這些單位劑量形式可含有0.1至100毫克的本發(fā)明化合物，優(yōu)選2至50毫克。更優(yōu)選的單位劑量含有5至25毫克的本發(fā)明化合物。本發(fā)明化合物可以0.01至100毫克/千克的劑量范圍口服給藥，或優(yōu)選0.1至10毫克/千克的劑量范圍。這些組合物每日可給藥1至6次，更常見(jiàn)為每日1至4次。
本發(fā)明組合物可用常用的賦形劑如填充劑、崩解劑、粘合劑、潤(rùn)滑劑、香味劑等來(lái)制成制劑。它們用常規(guī)的方式，如以類(lèi)似于用于已知抗高血壓劑、利尿劑及β-阻斷劑的方式來(lái)制備。
本發(fā)明還提供了用作活性治療物質(zhì)的本發(fā)明化合物。式(I)化合物特別地用于誘導(dǎo)平滑肌松弛。
本發(fā)明還提供用作治療哺乳動(dòng)物包括人的平滑肌紊亂方法，其包括給患病的哺乳動(dòng)物有效劑量的本發(fā)明化合物或藥用組合物。
用下列實(shí)施例來(lái)說(shuō)明而不是限制本發(fā)明代表性化合物的制備方法。
實(shí)施例實(shí)施例12-{[2-(4-三氟甲基-苯基)-環(huán)戊-1-烯羰基]-氨基}-苯甲酸步驟1)制備(鄰-三氟甲基磺?；?-環(huán)戊烯-2-酸甲酯在0℃下，在2-甲酯基環(huán)戊酮(4.00mL，32.2毫摩爾)于1，2-二氯乙烷(50mL)的均勻溶液中加入三乙胺(5.84mL，41.9毫摩爾)。使獲得的混合物保持在0℃下，通過(guò)注射泵在0.5小時(shí)向其中加入三氟甲烷磺酰酐(6.50mL，38.7毫摩爾)。完全完成加入之后，再保持該溫度2小時(shí)，隨后用EtOAc(50mL)稀釋?zhuān)?jīng)短的二氧化硅墊過(guò)濾，用30％EtOAc-己烷洗脫，濃縮并進(jìn)行快速色譜純化(使用10％EtOAc-己烷洗脫)，獲得6.14克(69％)淺黃色油1H NMR(CDCl3)δ3.79(s，3H)，2.68-2.78(m，4H)，1.88-2.08(m，2H).
步驟2)制備2-[4-(三氟甲基-苯基)]-環(huán)戊烯酸甲酯在上述烯醇triflate(1.77克，6.44毫摩爾)、4-(三氟甲基)-苯基三甲基錫烷[Morlein，S.M.J.Organomet.Chem.1987，319，29-39](1.81克，5.86毫摩爾)和無(wú)水氯化鋰(745毫克，17.6毫摩爾)在無(wú)水二噁烷的混合物中加入四-(三苯基膦)鈀(0)(203毫克，0.176毫摩爾)。將獲得的混合物加熱至110℃，然后攪拌12小時(shí)。在冷卻至室溫之后，將反應(yīng)混合物濃縮為淤漿，溶解在乙醚(100mL)中，經(jīng)短的二氧化硅墊過(guò)濾，進(jìn)一步濃縮，然后進(jìn)行快速色譜純化(使用5％乙醚-石油醚)，獲得1.155克(73％)透明的無(wú)色油1H NMR(CDCl3)δ7.50(ABq，4H)，3.63(s，3H)，2.85(m，4H)，2.02(m，2H).
步驟3)制備2-[4-(三氟甲基-苯基)]-環(huán)戊烯酸在室溫下，在上述甲酯于THF(20毫升)的均勻溶液中加入1.00NLiOH(17.8mL，17.8毫摩爾)。將所獲得的二相混合物劇烈攪拌16小時(shí)，隨后通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去使用的揮發(fā)物。將剩余的含水溶液用乙醚洗滌(3×100mL)，使用濃HCl(1.73mL)酸化至pH2，用乙醚(300mL)分配。然后含水相用固體NH4Cl飽和并再次萃取(2×150mL)。合并的有機(jī)萃取物經(jīng)硫酸鎂干燥，用Norite處理，經(jīng)硅藻土過(guò)濾，并濃縮至固體。用乙醚-己烷研磨，隨后過(guò)濾和真空干燥，獲得1.38克(91％)純白色固體。
1H NMR(DMSO-d6)δ12.37(s，1H)，7.65(ABq，4H)，2.75-2.91(m，4H)，1.92-2.02(m，2H).
步驟4)制備2-{[2-(4-三氟甲基-苯基)-環(huán)戊-1-烯羰基]-氨基}-苯甲酸在0℃下，在上述羧酸(500毫克，1.95毫摩爾)和無(wú)水DMF(4滴)于無(wú)水CH2Cl2(3mL)的不均勻混合物中滴加草酰氯(340μL，3.90毫摩爾)。將獲得的混合物加熱至室溫，并攪拌2.5小時(shí)，隨后濃縮為淺棕色油，并在真空中清除過(guò)剩的草酰氯。然后，在5℃下，在鄰氨基苯甲酸(535毫克，3.90毫摩爾)于2.5N含水NaOH(3.12mL，7.80毫摩爾)的均勻溶液中加入純的?；龋Y(jié)果立即形成白色沉淀。然后將反應(yīng)混合物加熱至室溫，隨后用最低量的水稀釋以便于攪拌，該攪拌持續(xù)進(jìn)行1.5小時(shí)。通過(guò)加入濃鹽酸(0.75mL)將混合物酸化至pH2，用2.0N鹽酸稀釋?zhuān)嚢?.5小時(shí)。過(guò)濾懸浮液，隨后用水洗滌，空氣干燥，隨后用MeOH重結(jié)晶，獲得118毫克(16％)的純白色晶體狀固體mp 225.1-225.9℃；1H NMR(DMSO-d6)d 13.51(br s，1H)，11.28(s，1H)，8.56(dd，1H)，7.92(dd，1H)，7.60(ABq，4H)，7.12(ddd，1H)，2.91(m，4H)，2.03(m，2H)；IR(KBr)3121，2966，1700，1662，1636，1586，1528，1450，1381，1321，1205，1163，1131，1066，1017，837，755，694cm-1；MS(m/z)375[M+].
元素分析C20H16F3NO3計(jì)算值C 64.00；H 4.30；N 3.73.
實(shí)測(cè)值C 63.79；H 4.08；N 3.57.
實(shí)施例22-{[5-(4-三氟甲基-苯基)-噁唑-4-羰基]-氨基}-苯甲酸步驟1)制備5-(4-三氟甲基-苯基)-噁唑-4-羧酸甲酯在4-三氟甲基苯甲酰氯(8.42克，40.4毫摩爾)和三乙胺(12.3克，122毫摩爾)于無(wú)水THF中的混合物中加入異氰基乙酸甲酯(3.60克，36.3毫摩爾)。將獲得的混合物在室溫下攪拌72小時(shí)，隨后通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去所有揮發(fā)物，將獲得的殘?jiān)峙湓贓tOAc(300mL)和水(100mL)中。使用飽和NaHCO3(100mL)萃取有機(jī)相，用鹽水(100mL)洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，用Norite處理，經(jīng)硅藻土過(guò)濾，然后濃縮，獲得9.27克(94.2％)棕色固體，該固體無(wú)需進(jìn)一步純化便可用于下一步反應(yīng)。
步驟2)制備5-(4-三氟甲基-苯基)-噁唑-4-羧酸以類(lèi)似于實(shí)施例1步驟3的方式，由商業(yè)上可獲得的5-(4-三氟甲基-苯基)-噁唑-4-羧酸甲酯制備標(biāo)題中間產(chǎn)物(83％)。
步驟3)2-{[5-(4-三氟甲基-苯基)-噁唑-4-羰基]-氨基}-苯甲酸甲酯以類(lèi)似于實(shí)施例1步驟4的方式，由上述羧酸制備5-(4-三氟甲基-苯基)-噁唑-4-碳酰氯。以類(lèi)似于實(shí)施例1步驟1的方式，由上述?；群袜彴被郊姿峒柞ブ苽錁?biāo)題中間產(chǎn)物。進(jìn)行快速色譜純化(用17％乙醚-己烷洗脫)，獲得白色固體(92％)。
步驟4)制備2-{[5-(4-三氟甲基-苯基)-噁唑-4-羰基]-氨基}-苯甲酸以類(lèi)似于實(shí)施例1步驟3的方式，由上述甲酯制備標(biāo)題化合物(45％)熔點(diǎn)231至232℃；1H NMR(DMSO-d6)δ13.53(brs，1H)，12.51(s，1H)，8.74-8.78(m，2H)，8.16(ABq，4H)，8.02(dd，1H)，7.62(ddd，1H)，7.21(ddd，1H)；IR(KBr)3449，3245，3080，3022，2647，2559，1669，1607，1585，1519，1466，1451，1410，1327，1261，1151，1126，1060，1017，993，880，848792，761，662cm-1；MS(m/z)376[M+].
元素分析C18H11F3N2O4計(jì)算值C 57.46；H 2.95；N 7.45實(shí)測(cè)值C 57.62；H 3.19；N 7.01實(shí)施例32-{[5-(4-三氟甲基-苯基)-噁唑-4-羰基]-氨基}-苯甲酸鋰鹽在氮?dú)夥障?，在室溫下，?-{[5-(4-三氟甲基-苯基)-噁唑-4-羰基]-氨基}-苯甲酸(500毫克，1.33毫摩爾)和氫化鋰粉的固體混合物中加入THF(15mL，從二苯甲酮羰游基鈉中蒸餾出)。在回流下將不均勻的混合物加熱40小時(shí)，獲得大量白色沉淀，隨后冷卻至室溫，用THF(85毫升)稀釋?zhuān)?jīng)硅藻土過(guò)濾，并濃縮至白色固體。然后該固體與乙醚(40mL，從二苯甲酮羰游基鈉中蒸餾出)一起研磨72小時(shí)，獲得細(xì)的白色懸浮液，在氮?dú)夥罩羞^(guò)濾，用乙醚(40mL)洗滌，最后在80℃下。在高真空下干燥，獲得311毫克(61％)白色粉末熔點(diǎn)356.3至357.3℃1H NMR(DMSO-d6)δ15.13(s，1H)，8.69(s，1H)，8.63(dd，1H)，8.42(d，1H)，8.01(dd，1H)，7.89(d，1H)，7.30(ddd，1H)，7.00(ddd，1H)；IR(KBr)3412，3140，3091，3062，2920，1651，1590，1527，1449，1375，1324，1160，1126，1073，1062901，883，780，759，680cm-1；MS(m/z)389[(M+Li)+].
元素分析C18H10F3N2O4Li計(jì)算值 C 56.51；H 2.62；N 7.33實(shí)測(cè)值 C 56.02；H 2.44；N 7.28實(shí)施例42-{[3-甲基-5-(4-三氟甲基-苯基)-異噁唑-4-羰基]-氨基}-苯甲酸步驟1)制備3-[4-(三氟甲基-苯基)]-丙-2-酸甲酯在三苯基膦(75.32克，287.1亳摩爾)和α，α，α-對(duì)-甲苯甲醛(10.00克，57.43毫摩爾)于CH2Cl2(250mL)中的均勻溶液中加入四溴化碳(47.62克，143.6毫摩爾)于CH2Cl2(50mL)中溶液。將反應(yīng)混合物在0℃下攪拌5分鐘，然后加熱至室溫，并再攪拌4.5小時(shí)，隨后傾倒入劇烈攪拌的硅藻土(100克)于石油醚(1500mL)的淤漿中。然后，將獲得的反應(yīng)混合物攪拌0.5小時(shí)，經(jīng)二氧化硅墊過(guò)濾，并濃縮至棕色油狀物。將該油狀物溶解在石油醚(150mL)中，用Norite處理，經(jīng)硅藻土過(guò)濾，并濃縮以獲得13.82克(73％)中間產(chǎn)物二溴鏈烯，其是透明的、無(wú)色油狀物。
無(wú)需進(jìn)一步純化，將二溴鏈烯溶解在無(wú)色THF(115mL)中，冷卻至-78℃。在1小時(shí)內(nèi)，在該溶液中經(jīng)注射器泵滴加2.5M丁基鋰(18.4mL，46.0毫摩爾)。然后在-78℃下攪拌獲得的混合物0.5小時(shí)，然后用氯甲酸甲酯(5.00mL，64.7毫摩爾)，隨后緩慢加熱至室溫，之后濃縮為油狀殘?jiān)⑵浞峙湓谝颐?500mL)和水(250mL)中。用鹽水(100mL)洗滌有機(jī)相，經(jīng)硫酸鎂干燥，用Norite處理，過(guò)濾、濃縮并進(jìn)行快速色譜純化(用2％乙醚-石油醚洗脫)，獲得3.13克(66％)白色固體1H NMR(DMSO-d6)δ7.86(ABq，4H)，3.79(s，3H)。
步驟2)制備3-甲基-5-(4-三氟甲基-苯基)-異噁唑-4-羧酸甲酯在室溫下，在3-[4-(三氟甲基-苯基)]-丙-2-酸甲酯(1.00克，4.38毫摩爾)和異氰酸苯酯(857μL，7.89毫摩爾)于無(wú)色苯(2.5mL)的均勻溶液中滴加硝基乙烷(315μL，4.38毫摩爾)和餾過(guò)的三乙胺(5滴)于苯(1.5mL)中的均勻溶液。將獲得的混合物攪拌10分鐘，這時(shí)產(chǎn)生沉淀。將反應(yīng)混合物加熱至回流12小時(shí)，隨后冷卻至室溫，用乙醚稀釋(100mL)，過(guò)濾以除去所有固體。然后將濾液連續(xù)用1.0NNaOH(50mL)、水(50mL)和鹽水(50mL)分配。經(jīng)Na2SO4干燥有機(jī)相，用Norite處理，濃縮，然后進(jìn)行快速色譜純化(梯度洗脫10∶15∶20％乙醚-石油醚)，獲得900毫克(72％)白色固體1H NMR(DMSO-d6)δ8.00(Abq，4H)，3.77(s，3H)，2.44(s，3H)。
步驟3)制備3-甲基-5-(4-三氟甲基-苯基)-異噁唑-4-羧酸在室溫下，在上述甲酯(865毫克，3.19毫摩爾)于THF(10mL)的均勻溶液中加入1.00N LiOH(9.57mL，9.57毫摩爾)。將獲得的二相混合物劇烈攪拌16小時(shí)，隨后，通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去所有揮發(fā)物。剩余的水溶液用乙醚(3×50mL)洗滌，用濃HCl(0.93mL)酸化至pH2，并用乙醚(300mL)分配。然后用固體NH4Cl使含水相飽和，并再次萃取(2×150mL)。合并的有機(jī)萃取物經(jīng)硫酸鎂干燥，用Norite處理，經(jīng)硅藻土過(guò)濾，濃縮至固體。與乙醚-己烷一起研制，隨后過(guò)濾并在真空中干燥，獲得735毫克(89％)白色結(jié)晶固體。
步驟4)制備2-{[3-甲基-5-(4-三氟甲基-苯基)-異噁唑-4-羰基]-氨基}-苯甲酸在0℃下，在上述羧酸(1.00克，4.34毫摩爾)和無(wú)水DMF(2滴)于無(wú)水CH2Cl2(5mL)的不均勻混合物中滴加草酰氯(760μL，8.69毫摩爾)。將獲得的混合物加熱至室溫，并攪拌2.5小時(shí)，隨后濃縮為不均勻的黃色混合物，并在真空中清除過(guò)剩的草酰氯。然后，在5℃下，在鄰氨基苯甲酸(1.19克，8.69毫摩爾)于2.5N含水NaOH(6.95mL，17.4毫摩爾)的均勻溶液中加入?；?，結(jié)果立即形成白色沉淀。然后將反應(yīng)混合物加熱至室溫，隨后用最低量的水稀釋以便于攪拌，該攪拌持續(xù)進(jìn)行1.5小時(shí)。通過(guò)加入濃鹽酸(1.63mL)將混合物酸化至pH2，用2.0N鹽酸稀釋?zhuān)嚢?.5小時(shí)。過(guò)濾懸浮液，隨后用水洗滌，空氣干燥，之后用MeOH重結(jié)晶。通過(guò)酸基團(tuán)和(三甲基甲硅烷基)重氮甲烷的完全甲基化反應(yīng)從未反應(yīng)的原材料中分離出標(biāo)題化合物。以類(lèi)似于該實(shí)施例步驟2的方式，使分離的2-{[3-甲基-5-(4-三氟甲基-苯基)-異噁唑-4-羰基]-氨基}-苯甲酸甲酯皂化，獲得標(biāo)題化合物(60％)熔點(diǎn)204.6至205.5℃1H NMR(DMSO-d6)δ13.52(br s，1H)，11.47(s，1H)，8.42(d，1H)，7.97(ABq，4H)，7.93(dd，1H)，7.64(ddd，1H)，7.23(ddd，1H)2.47(s，3H)；IR(KBr)3374，3118，2987，2656，1681，1659，1604，1585，1532，1441，1263，1166，1075，1014，905，847，762，719，701cm-1；MS(m/z)380[M+].
元素分析C19H13F3N2O4計(jì)算值C 58.47；H 3.36；N 7.18.
實(shí)測(cè)值C 58.22；H 3.24；N 7.02.
按照標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)上可接受的測(cè)試方法用代表性化合物來(lái)測(cè)定本發(fā)明化合物的平滑肌舒張活性如下。
通過(guò)CO2窒息使Sprague-Dawley鼠(150-200克)昏迷，然后通過(guò)頸脫位對(duì)大鼠實(shí)施安死術(shù)。取出膀胱浸入包含下述組分(mM)的溫(37℃)生理鹽水水溶液(PSS)內(nèi)NaCl，118.4；4.7；KCl，4.7；CaCl2，2.5；MgSO4，4.7；H2O，1.2；NaHCO3，24.9；KH2PO4，1.2；葡萄糖，11.1；EDTA，0.023，用95％O2；2/5％CO2脫氣；PH7.4。打開(kāi)膀胱，然后切成寬1-2毫米，長(zhǎng)7-10毫米肌條。隨后將膀胱肌條于1.5克初靜息張力下懸浮于10mL組織浴中。膀胱肌條用兩個(gè)外科夾子固定，其中一個(gè)連在固定鉤上，而另一連于等長(zhǎng)肌力換能器上。用0.1μM卡巴膽堿激發(fā)之前，使通常顯示出小的自發(fā)收縮的標(biāo)本恢復(fù)1小時(shí)。然后洗去卡巴膽堿并使組織松弛至其靜息作用張度。在1.5小時(shí)恢復(fù)期后，再向組織浴槽內(nèi)加入15mM KCl。KCl濃度的增加導(dǎo)致疊加在基張力的小量增加之上的自發(fā)收縮的幅度有較大增加(收縮發(fā)生于預(yù)靜息肌條上)。在該增強(qiáng)的收縮作用程度穩(wěn)定之后，向組織浴內(nèi)加入濃度遞增的試驗(yàn)化合物或賦形劑。在30分鐘激發(fā)時(shí)間的最后分鐘測(cè)定化合物或賦形劑在各濃度下的收縮活性。
采用誘發(fā)抑制50％前藥收縮活性所需要的濃度(IC50濃度)測(cè)定膀胱肌條所產(chǎn)生的等長(zhǎng)肌力，IC50濃度根據(jù)濃度響應(yīng)曲線(xiàn)計(jì)算得到。還測(cè)定了濃度小于或等于30μM的試驗(yàn)化合物的收縮活性的最大百分抑制率。
該研究結(jié)果示于表1中表1對(duì)分離的鼠膀胱肌條收縮的抑制和選擇性的指示IC50/μM IC50/μM IC50(A)/實(shí)施例# n 膀胱(B) n Aorta(A) IC50(B)15 11.04±4.04 -- -- --22 17.9±5.8 -- -- --34 17.5±12.4 2 7.35±0.25 0.4242 11.9±3.95 -- -- --Tranilast§2 14.4±4.5 5 15.59±8.961.08§Tranilast是(E)-2-[3-(3，4-二甲氧基-苯基)-丙烯酰氨基]-苯甲酸。
*在30μM的百分抑制率另外，按照Malmgrem描述的下列方法(A.Malmgrem，K.E.Andersson，C.Sjogren，P.O.Andersson，Effect ofPinacidil and Cromakalim(BRL 34915)on Bladder Function inRats with Detrusor Instability，J.Urol.1421134，1989)，測(cè)定了化合物抑制帶有肥大膀胱的清醒雌鼠的肥大膀胱(迫肌)平滑肌的活性過(guò)度的能力，因此減輕了尿失禁。
使用Sprague-Dawley雌鼠，體重范圍190至210克。每次準(zhǔn)備25只動(dòng)物。使膀胱肥大之后，每次實(shí)驗(yàn)用4至8只動(dòng)物。
將化合物溶于PEG-200中，以5毫升/千克的體積胃插管或靜脈內(nèi)給藥。初篩時(shí)，所有藥物以10毫克/千克的任意劑量經(jīng)口服施用給4只鼠為一組的各組別。
將動(dòng)物用鹵烷麻醉。中線(xiàn)切開(kāi)，暴露膀胱和尿道，在有一不銹鋼條(1毫米直徑)存在下，在尿道近端周?chē)?-0絲帶以產(chǎn)生部分閉塞。然后除去不銹鋼條。將腹部區(qū)域用手術(shù)U型針?lè)忾]，給每只鼠施用150000單位的芐星青霉素C-R。讓動(dòng)物過(guò)6周以產(chǎn)生足夠的膀胱肥大。6周之后，在鹵烷麻醉下除去絲帶，將帶有環(huán)扣的導(dǎo)管(PE60)置于膀胱頂部?jī)?nèi)，用一囊?guī)Эp線(xiàn)系牢。將導(dǎo)管在皮膚下穿過(guò)，通過(guò)在頸背部開(kāi)口取出。將切開(kāi)的腹部縫合，使導(dǎo)管露出的一端封閉。為防止感染，給鼠注射芐星青霉素C-R(150000單位/鼠)。2天之后，將動(dòng)物進(jìn)行膀胱容積應(yīng)力測(cè)試。將動(dòng)物置于代謝箱(metabolic cages)中，將導(dǎo)管(用“T”形連接器)連接到Stathan應(yīng)力傳導(dǎo)器(P23Db型)和Harrard灌尿泵上。將連有一個(gè)力轉(zhuǎn)換傳導(dǎo)器(Grass FTO3)的塑料燒杯置于鼠箱下面以收集和記錄尿量。讓動(dòng)物休息15至30分鐘，然后在第一次膀胱容積壓力檢定期開(kāi)始灌注鹽水(以20毫升/小時(shí)連續(xù)灌注20分鐘)。首次膀胱容積檢定期后2小時(shí)，給鼠服用媒介物或試驗(yàn)化合物，1小時(shí)后進(jìn)行第二次膀胱容積檢定。
記錄下列尿動(dòng)力變量基礎(chǔ)膀胱壓力＝膀胱容積壓力檢定期最低的膀胱壓力閥值壓力＝臨排尿前的膀胱壓力排尿體積＝排出的體積排尿壓力＝排泄期間的峰壓力自發(fā)活性＝充尿期間膀胱壓力波動(dòng)的平均幅度結(jié)果的表達(dá)在化合物給藥前后計(jì)算每個(gè)變量的平均值。對(duì)每個(gè)化合物，將其測(cè)得的變量的變化與治療前的值相比較，以百分抑制率表示，也將數(shù)據(jù)進(jìn)行兩方向方差分析來(lái)確定在測(cè)定變量中的顯著(p＜0.05)變化。
活性的判斷標(biāo)準(zhǔn)在鼠模型中發(fā)現(xiàn)的大多數(shù)特征是在充盈期間表現(xiàn)出的自發(fā)收縮。在口服或靜脈注射10毫克/千克時(shí)抑制自發(fā)收縮至少50％的化合物被認(rèn)為是有效的。
因此，本發(fā)明化合物對(duì)平滑肌收縮具有顯著作用，并可用于治療尿失緊，過(guò)敏性膀胱和腸疾病，哮喘，高血壓、中風(fēng)以及如上所述的類(lèi)似病癥，通過(guò)對(duì)需要這種治療的病人口服，非胃腸道，或吸入給予鉀通道激活和/或氯化物通道封阻本發(fā)明化合物而進(jìn)行治療。
權(quán)利要求
1.式(I)表示的化合物
其中R1、R2和R3相互獨(dú)立地是氫、硝基、氰基、C1-10鹵代烷氧基、氨基、C1-10烷基氨基、磺基、氨磺?；?、C1-10烷基亞磺酰氨基、C2-10烷基甲酰氨基、C2-10鏈烷?；1-10烷基磺?；?、C1-10鹵代烷基磺?；1-10羧基、C1-10鹵代烷基和C6-12芳基；前體條件是(1)R1、R2和R3不同時(shí)全是氫，和(2)當(dāng)R1和R2是氫時(shí)，R3不可以是間-CF3；R4、R5和R6相互獨(dú)立地是氫、鹵素、硝基、氰基、C1-10烷氧甲?；?、C1-10鹵代烷氧基、氨基C1-10烷基氨基、磺基、氨磺?；1-10烷基亞磺酰氨基、C2-10烷基甲酰氨基、C2-10鏈烷?；?、C1-10烷基磺酰基、C1-10鹵代烷基磺?；?、C1-10羧基、C1-10鹵代烷基、C1-10烷基和C6-12芳基；R7是氫、金屬陽(yáng)離子、乙酰氨基、烷氧基乙酰基或在體內(nèi)產(chǎn)生羧酸鹽的相關(guān)部分；X、Y和Z可以形成鍵合在碳骨架上的C3-13碳環(huán)、噁唑、異噁唑、噻唑、異噻唑、呋喃、噻吩、2H-吡咯、吡咯、2-吡咯啉、3-吡咯啉、咪唑、吡唑、1，2，3-噁二唑或1，2，3-三唑。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中R1、R2和R3相互獨(dú)立地是氫、硝基、氰基、全鹵代烷氧基、氨基、C1-10烷基氨基、C1-10二烷基氨基、C6-12芳基氨基、C1-10芳烷基氨基、磺基、氨磺?；?、C1-10烷基亞磺酰氨基、C6-12芳基亞磺酰氨基、C2-10烷基甲酰氨基、C6-12芳基甲酰氨基、C2-10鏈烷?；?、C6-12芳酰基、C2-22芳烷?；?、C1-10烷基磺?；?、C1-10全鹵磺?；6-12芳基磺?；2-22芳烷基磺?；?、C1-10羧基、C1-10鹵代烷基、C1-C10全鹵代烷基、芳基，鹵代芳基，全鹵代芳基，C1-10芳烷基部分；前體條件是(1)R1、R2和R3不同時(shí)全是氫，和(2)當(dāng)R1和R2是氫時(shí)，R3不可以是間-CF3；R4、R5和R6相互獨(dú)立地是氫、鹵素、硝基、氰基、烷氧甲?；?、全鹵烷氧基、氨基、C1-10烷基氨基、C1-10二烷基氨基、芳基氨基、C1-10芳烷基氨基、磺基、氨磺?；?、C1-10烷基亞磺酰氨基、C6-12芳基亞磺酰氨基、C2-10烷基甲酰氨基、C6-12芳基甲酰氨基、C2-10鏈烷?；6-12芳?；2-22芳烷?；?、C1-10烷基磺?；?、C1-10全鹵磺?；?、C6-12芳基磺?；?、C2-22芳烷基磺?；?、C1-10羧基、C1-10直鏈烷基、C1-10支鏈烷基、C3-10環(huán)烷基或雙環(huán)烷基、C1-10鹵代烷基、C1-10全鹵代烷基、C2-12鏈烯基(單烯屬的或多烯屬)、芳基、鹵代芳基、全鹵芳基、C1-10芳烷基；R7是氫、堿金屬陽(yáng)離子、堿土金屬陽(yáng)離子、乙酰氨基、烷氧基乙酰基或在體內(nèi)產(chǎn)生羧酸鹽的相關(guān)部分；X、Y和Z可以形成鍵合在碳骨架上的C3-13碳環(huán)、噁唑、異噁唑、噻唑或異噻唑。
3.權(quán)利要求1的化合物，其中R7選自氫、金屬陽(yáng)離子、選自下列結(jié)構(gòu)的部分
其中R9、R10、R11和R12相互獨(dú)立地是氫、C1-10直鏈烷基、C1-10支鏈烷基、C3-10環(huán)基或二環(huán)基、芳基或C1-10芳烷基；和X、Y和Z可以形成鍵合在碳骨架上的C3-13碳環(huán)、噁唑、異噁唑、噻唑或異噻唑。
4.權(quán)利要求1的化合物，其中R7可以是氫或金屬陽(yáng)離子。
5.權(quán)利要求1的化合物，其是2-{[2-(4-三氟甲基-苯基)-環(huán)戊-1-烯羰基]-氨基}-苯甲酸。
6.權(quán)利要求1的化合物，其是2-{[5-(4-三氟甲基-苯基)-噁唑-4-羰基]-氨基}-苯甲酸。
7.權(quán)利要求1的化合物，其是2-{[5-(4-三氟甲基-苯基)-噁唑-4-羰基]-氨基}-苯甲酸鋰鹽。
8.權(quán)利要求1的化合物，其是2-{[3-甲基-5-(4-三氟甲基-苯基)-噁唑-4-羰基]-氨基}-苯甲酸。
9.藥用組合物，其包括式(I)的化合物或其藥物學(xué)上可接受的鹽以及藥物學(xué)上可接受的載體，
其中R1、R2和R3相互獨(dú)立地是氫、硝基、氰基、C1-10鹵代烷氧基、氨基、C1-10烷基氨基、磺基、氨磺?；?、C1-10烷基亞磺酰氨基、C2-10烷基甲酰氨基、C2-10鏈烷酰基、C1-10烷基磺?；?、C1-10鹵代烷基磺酰基、C1-10羧基、C1-10鹵代烷基和C6-12芳基；前體條件是(1)R1、R2和R3不同時(shí)全是氫，和(2)當(dāng)R1和R2是氫時(shí)，R3不可以是間-CF3；R4、R5和R6相互獨(dú)立地是氫、鹵素、硝基、氰基、C1-10烷氧甲酰基、C1-10鹵代烷氧基、氨基C1-10烷基氨基、磺基、氨磺?；1-10烷基亞磺酰氨基、C2-10烷基甲酰氨基、C2-10鏈烷?；1-10烷基磺?；1-10鹵代烷基磺?；1-10羧基、C1-10鹵代烷基、C1-10烷基和C6-12芳基；R7是氫、金屬陽(yáng)離子、乙酰氨基、烷氧基乙?；蛟隗w內(nèi)產(chǎn)生羧酸鹽的相關(guān)部分；X、Y和Z可以形成鍵合在碳骨架上的C3-13碳環(huán)、噁唑、異噁唑、噻唑、異噻唑、呋喃、噻吩、2H-吡咯、吡咯、2-吡咯啉、3-吡咯啉、咪唑、吡唑、1，2，3-噁二唑或1，2，3-三唑。
10.降低平滑肌不利影響的方法，其包括對(duì)需要此治療的患者口服或非胃腸道施用式(I)化合物或其藥物學(xué)上可接受的鹽，
其中R1、R2和R3相互獨(dú)立地是氫、硝基、氰基、C1-10鹵代烷基、氨基、C1-10烷基氨基、磺基、氨磺酰基、C1-10烷基亞磺酰氨基、C2-10烷基甲酰氨基、C2-10鏈烷?；?、C1-10烷基磺?；?、C1-10鹵代烷基磺酰基、C1-10羧基、C1-10鹵代烷基和C6-12芳基；前體條件是(1)R1、R2和R3不同時(shí)全是氫，和(2)當(dāng)R1和R2是氫時(shí)，R3不可以是間-CF3；R4、R5和R6相互獨(dú)立地是氫、鹵素、硝基、氰基、C1-10烷氧甲酰基、C1-10鹵代烷氧基、氨基C1-10烷基氨基、磺基、氨磺?；?、C1-10烷基亞磺酰氨基、C2-10烷基甲酰氨基、C2-10鏈烷?；1-10烷基磺?；?、C1-10鹵代烷基磺?；?、C1-10羧基、C1-10鹵代烷基、C1-10烷基和C6-12芳基；R7是氫、金屬陽(yáng)離子、乙酰氨基、烷氧基乙?；蛟隗w內(nèi)產(chǎn)生羧酸鹽的相關(guān)部分；X、Y和Z可以形成鍵合在碳骨架上的C3-13碳環(huán)、噁唑、異噁唑、噻唑、異噻唑、呋喃、噻吩、2H-吡咯、吡咯、2-吡咯啉、3-吡咯啉、咪唑、吡唑、1，2，3-噁二唑或1，2，3-三唑。
11.權(quán)利要求10的方法，其中平滑肌不利的收縮引起尿失禁。
12.權(quán)利要求10的方法，其中平滑肌不利的收縮引起過(guò)敏性腸道綜合癥。
全文摘要
本發(fā)明涉及式(Ⅰ)化合物或其藥物學(xué)上可接受的鹽,其中R
文檔編號(hào)A61P13/00GK1265643SQ98807943
公開(kāi)日2000年9月6日 申請(qǐng)日期1998年8月3日 優(yōu)先權(quán)日1997年8月5日
發(fā)明者J·R·倫諾克斯, S·A·安塔尼, J·A·布特拉 申請(qǐng)人:美國(guó)家用產(chǎn)品公司