專利名稱：中藥材gDNA種質(zhì)特異性微陣列芯片制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中制備中藥鑒定微陣列芯片的方法。
背景技術(shù)：
中藥鑒定作為中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的主要內(nèi)容，不僅是在國內(nèi)市場，更重要的是進(jìn)入國際市場、實(shí)現(xiàn)中藥現(xiàn)代化迫切需要解決的關(guān)鍵問題之一。我國藥材資源豐富，動、植物中藥約1萬余種，但目前使用的商品藥材來源、種類復(fù)雜，加之各地藥材種使用習(xí)慣不盡相同，同名異藥、同藥異名，互混、互代以假充真混亂現(xiàn)象嚴(yán)重，藥材偽、混品種充斥市場，且數(shù)量有增無減，長期困擾中藥材市場，嚴(yán)重影響我國中藥材的進(jìn)出口和制藥企業(yè)的中藥產(chǎn)品質(zhì)量，阻礙著中藥的發(fā)展。為確保中藥使用安全有效，控制中藥質(zhì)量，對各種中藥材進(jìn)行準(zhǔn)確鑒定成為當(dāng)務(wù)之急，同時準(zhǔn)確鑒定中藥品種是保證中醫(yī)臨床用藥安全有效的前提。
中藥傳統(tǒng)上是用經(jīng)典的形態(tài)分類學(xué)和解剖學(xué)特征，從基原、性狀、顯微、理化及DNA分子遺傳標(biāo)記技術(shù)進(jìn)行藥材品種及真?zhèn)蔚蔫b別。性狀鑒別是利用感官對完整藥材進(jìn)行鑒別；顯微鑒別是利用顯微鏡來觀察藥材的組織構(gòu)造、細(xì)胞性狀以及內(nèi)含物的特性。理化鑒別是利用物理或化學(xué)的方法，對藥材及其制劑所含的主要化學(xué)成分進(jìn)鑒定，目前有薄層層析法、熒光法、紫外、紅外光譜法等。這些方法對于動、植物藥材以整體入藥而保持其分類學(xué)性狀特征的藥材的鑒定確實(shí)是行之有效的。但是，這些方法要真正應(yīng)用于中藥材的鑒別還存在一些問題，一是因中藥材的性狀、組織結(jié)構(gòu)、化學(xué)成分除了受中藥材本身的遺傳物質(zhì)控制外，還受生長環(huán)境、氣候、緯度等因素的影響而不同；二是因許多動、植物藥材親緣關(guān)系較近，外形與偽品類似或經(jīng)過多道工序加工后已難辨別其原貌(如石斛加工成楓斗后)，導(dǎo)致上述鑒別方法結(jié)果的不穩(wěn)定，不能滿足中藥鑒別的需要。DNA分子遺傳標(biāo)記技術(shù)是根據(jù)不同生物個體遺傳物質(zhì)DNA的差異來鑒別生物物種的方法。DNA作為遺傳信息的直接載體，不受生長環(huán)境生理狀態(tài)等因素的影響，因此，DNA分子遺傳標(biāo)記技術(shù)鑒別藥材的方法雖然比上述方法都具有較高的準(zhǔn)確性和可靠性，但都存在一定的局限性，很難推廣應(yīng)用，已報道的方法可歸納為三類(1)AP-PCR標(biāo)記鑒別該方法在擴(kuò)增反應(yīng)時要求的復(fù)性溫度低(通常為36℃)，特異性不高，結(jié)果容易受到多種因素的影響，在不同的實(shí)驗(yàn)室之間難以重復(fù)，即使在同一實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，每次檢測樣品時，都必須用已知的正品藥材作為對照，同時進(jìn)行DNA提取、RAPD擴(kuò)增和電泳檢測，比較正品藥材與待檢樣品擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖譜的異同才能進(jìn)行鑒定，檢驗(yàn)成本高，因此很難推廣。(2)RFLD標(biāo)記鑒別該方法要求DNA無顯著的降解，只適于新鮮動、植物材料的研究，它對于模板的純度和完整性要求高，操作較煩瑣，所需DNA模板的量大。中藥材大多為干品，在加工、炮制、貯藏的過程中DNA的降解使得中藥材RFLP結(jié)果非常不穩(wěn)定，其PCR產(chǎn)物的片段長度有限，一般在1.5kb以下，能夠找到的合適的限制性酶切位點(diǎn)數(shù)有限，重復(fù)性較差，目前推廣應(yīng)用仍有難度。(3)DNA測序法它利用某段已知的相對保守的基因片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增，再進(jìn)行序列測定加以鑒別。這種方法雖然準(zhǔn)確性高，但所含信息量較少，測序成本高，目前一個約400bp的DNA片段費(fèi)用為100元/反應(yīng)，這尚不包括DNA提取和PCR擴(kuò)增的費(fèi)用，而且實(shí)驗(yàn)操作復(fù)雜，DNA易污染，出現(xiàn)鑒定錯誤，對大量樣品的鑒別很不現(xiàn)實(shí)。
由于上述各種用于中藥鑒定技術(shù)存在的種種缺陷與不足，迄今尚未成為任何一種中藥材鑒定的常規(guī)檢測手段，而生物芯片技術(shù)為中藥的鑒定展現(xiàn)了良好的發(fā)展前景。
生物芯片是指通過平面微細(xì)加工技術(shù)在固體芯片表面構(gòu)建的流體分析單元和系統(tǒng)，以實(shí)現(xiàn)對細(xì)胞、蛋白質(zhì)、核酸及其他生物組分的準(zhǔn)確、快捷、大信息量的檢測。包括基因芯片、蛋白(多肽)芯片、多糖芯片和神經(jīng)元芯片、細(xì)胞芯片、組織原位芯片等種類。其中，基因芯片是最重要的一種生物芯片，也是目前研究最多的一種生物芯片。基因芯片技術(shù)是基于堿基互補(bǔ)原理，在固體表面按一定的陣列集成大量的基因探針，通過與待測基因進(jìn)行雜交反應(yīng)，進(jìn)而對大量基因進(jìn)行平行瞬時分析檢測的技術(shù)。
目前生物芯片的研究和開發(fā)種類逐漸趨于多樣化，其應(yīng)用生物芯片可實(shí)現(xiàn)對待檢樣品中目標(biāo)核酸分子、蛋白質(zhì)分子、細(xì)胞、微小組織等物質(zhì)的有無及多少進(jìn)行準(zhǔn)確、快速、大信息量檢測，具有微型化、高通量和自動化的檢測特征。生物芯片在生物檢測、醫(yī)學(xué)檢測及疾病診斷、藥物篩選和基因序列分析上有著極其重要的應(yīng)用價值意義，因此受到廣泛關(guān)注和投資，使其已經(jīng)成為一個全球性的新型產(chǎn)業(yè)，即生物芯片產(chǎn)業(yè)。
本發(fā)明創(chuàng)立的獨(dú)特的中藥材gDNA序列特異性微陣列芯片制備方法獲取的種質(zhì)特異性探針能有效地固定在固相支持物如玻片上建立一種低成本、準(zhǔn)確性高、重現(xiàn)性好、高通量的中藥材種質(zhì)鑒定DNA芯片技術(shù)平臺。

發(fā)明內(nèi)容
(1)發(fā)明目的本發(fā)明目的是提供一種便于在普通設(shè)備條件下制備中藥鑒定微陣列芯片的方法。以中藥材gDNA為信息載體，通過限制性內(nèi)切酶酶切、差減雜交、熒光PCR標(biāo)記、種質(zhì)特異性探針芯片篩選等實(shí)驗(yàn)，制備一種低成本、準(zhǔn)確性高、重現(xiàn)性好、高通量的中藥材種質(zhì)鑒定芯片。
(2)技術(shù)方案本發(fā)明是中藥材gDNA種質(zhì)特異性微陣列芯片制備方法，其特征在于該制備方法包括如下步驟(1)差減克隆的制備提取各樣本的gDNA，用識別4個堿基的(如RsaI酶)酶切，酶切產(chǎn)物為平頭末端，理論上每44即256個堿基就有一個酶切位點(diǎn)，其酶切片段大小在150-500bp之間。設(shè)計合成一對用于套組PCR的接頭adaptor1(圖1(1))和adaptor2(圖1(2))，以試驗(yàn)者樣本作為Tester，以另一種樣本作對照為Driver。Tester分兩組分別連接不同的接頭后，與過量的Driver進(jìn)行兩次液相雜交，在進(jìn)行正向雜交的同時，也進(jìn)行反向雜交試驗(yàn)，分別以設(shè)計引物primer1(圖1(3))和一對套組PCR引物nested PCR primer1(圖1(4))和nested PCR primer2(圖1(5))進(jìn)行兩次PCR擴(kuò)增，對在Tester中存在而在Driver中不存在的gDNA片段進(jìn)行擴(kuò)增富集。PCR產(chǎn)物用T-vecter克隆轉(zhuǎn)化大腸桿菌，挑取白色重組子克隆，挑取的克隆轉(zhuǎn)入96孔培養(yǎng)板培養(yǎng)。取0.5μl培養(yǎng)菌液，用5′端修飾有氨基的nestedPCR primer1(-NH2基用于在修飾過的玻片上的連接固定反應(yīng))和nested PCR primer2在96微孔板中擴(kuò)增差異克隆。
(2)gDNA擴(kuò)增子的制備與標(biāo)記gDNA酶切后，連接接頭adaptor3(圖1(6))，用引物primer3(圖1(7))擴(kuò)增時摻入dCTP-Cy3或dCTP-Cy5進(jìn)行標(biāo)記，其PCR產(chǎn)物直接用于雜交篩選。
(3)種質(zhì)特異性探針的芯片篩選將所有差異克隆用點(diǎn)樣儀點(diǎn)樣于硅烷化處理的玻片上，在一定條件下分別用熒光標(biāo)記的不同樣本擴(kuò)增子雜交，用激光掃描儀進(jìn)行掃描檢測，篩選獲取種質(zhì)特異性探針。
(4)種質(zhì)特異性探針微陣列的制備將篩選到的所有樣本種質(zhì)特異性探針通過機(jī)器、手工或電泳等適當(dāng)方式轉(zhuǎn)移到固相支持物表面制備成微陣列。
(3)技術(shù)效果本發(fā)明中藥材gDNA序列特異性微陣列芯片制備方法在標(biāo)準(zhǔn)化、批量化生產(chǎn)及學(xué)術(shù)上有重要價值一是本發(fā)明以中藥材的gDNA作為鑒別的信息載體，gDNA的信息量大，且不受外界因素和生物發(fā)育階段及器官組織差異的影響，每一個體的任一體細(xì)胞均含相同的遺傳信息，為在基因組水平上尋找獲得種質(zhì)特異性探針提供技術(shù)支持。
二是本發(fā)明不同于以往傳統(tǒng)的中藥鑒定方法，而是將抑制性差減雜交(SSH)與DNA芯片篩選技術(shù)方法相結(jié)合，建立一種可在gDNA水平上的準(zhǔn)確、穩(wěn)定、重現(xiàn)性好、高通量DNA芯片中藥鑒定技術(shù)平臺。首先，采用抑制性差減雜交，對任意兩樣本(如石斛類)gDNA酶切產(chǎn)物進(jìn)行兩次連續(xù)差減雜交，一方面使差減得到差異克隆的幾率大大提高，另一方面使得到種質(zhì)特異性探針的準(zhǔn)確性更高。再次，以差減雜交得到的差異克隆用基因芯片點(diǎn)樣儀標(biāo)準(zhǔn)化點(diǎn)樣于玻片上制備成微陣列，以原樣本gDNA酶切標(biāo)記的擴(kuò)增子回復(fù)雜交，篩選出種質(zhì)特異性探針。
三是本發(fā)明篩選到的大量的、多種種質(zhì)特異性探針在大腸桿菌中進(jìn)行克隆繁殖，點(diǎn)樣于玻片上制備成低成本、高通量、可平行鑒別多種中藥材品種及真?zhèn)蔚纳虡I(yè)化中藥材種質(zhì)鑒定芯片，對中藥的安全用藥和質(zhì)量控制、促進(jìn)中藥現(xiàn)代化、走向國際市場、實(shí)現(xiàn)中藥與國際接軌具有十分重要的意義，同時，具有非常重要的商業(yè)推廣應(yīng)用價值。
四是本發(fā)明建立的技術(shù)平臺獲得的大量種質(zhì)特異性探針，可對中藥的基因組特征進(jìn)行全面研究，為探索中藥的遺傳進(jìn)化和生物學(xué)分類提供大量的信息資源。該研究對于建立中藥材種間、真?zhèn)舞b別系統(tǒng)基因庫標(biāo)準(zhǔn)基因圖譜具有非常重要的價值。
五是本發(fā)明建立的技術(shù)平臺和技術(shù)指標(biāo)，對由于遺傳上的差異性造成的道地藥材和非道地藥材質(zhì)量差異的研究，以及優(yōu)質(zhì)中藥材種質(zhì)的篩選和育種栽培研究方面具有十分重要的價值。
本發(fā)明篩選到的種質(zhì)特異性探針可精確、高效、經(jīng)濟(jì)地用基因芯片點(diǎn)樣儀在固相支持物如玻片上制備成含大量不同種質(zhì)特異性探針的微陣列芯片，不僅其制備基礎(chǔ)與國內(nèi)外基因芯片制備技術(shù)完全兼容，且在應(yīng)用中與通用基因表達(dá)芯片的反應(yīng)、檢測設(shè)備完全兼容，提高了本項(xiàng)目所研制產(chǎn)品的使用的簡便性，本發(fā)明篩選的種質(zhì)特異性探針以大腸桿菌為宿主菌進(jìn)行擴(kuò)增，大大降低了進(jìn)行商業(yè)化批量生產(chǎn)的成本，并不需與正品做對比實(shí)驗(yàn)，檢測結(jié)果直觀易于推廣應(yīng)用。
四

圖1是化學(xué)合成的接頭和引物。(1)是Adaptor 1；(2)是Adaptor 2；(3)是primer1；(4)是nested PCR primer1；(5)是nested PCR primer2；(6)是adaptor3；(7)是primer3。
圖2是5′修飾氨基的正、反雜交獲得的雙鏈差異克隆片段。
圖3是5′修飾氨基的雙鏈差異克隆點(diǎn)樣固定在固相支持物表面形成微陣列。
圖4是差異克隆變性形成單鏈微陣列。
圖5是用dCTP-Cy3(綠色)標(biāo)記的Tester及dCTP-Cy5(紅色)標(biāo)記的Driver的擴(kuò)增子與其雜交實(shí)驗(yàn)。
綠色●顯示該克隆為Tester的特異性探針紅色●顯示該克隆為Driver的特異性探針黃色 顯示該克隆為Tester和Driver均有的探針圖6是種屬的芯片鑒定圖示。
五具體實(shí)施例方式如以石斛類鐵皮石斛作為試驗(yàn)者(Tester)，以疊鞘石斛為對照驅(qū)趕者(Driver)，正向雜交篩選為例，反向雜交則Tester變?yōu)镈river，Driver變?yōu)門ester。
1、CTAB法提取中藥材基因組(gDNA)DNA將中藥材組織剪碎在液氮中研磨后，加入適量的60℃預(yù)熱的2×CTAB提取液(0.1MTris-Hcl，PH8.0，20mM EDTA，PH8.0，1.4 M Nacl，2％CTAB，0.2％β-巰基乙醇)。60℃水浴2小時。經(jīng)離心，酚/氯仿/異戊醇抽提后，再用RNAase A酶37℃進(jìn)行處理，乙醇沉淀，溶解于適量的TE中。
2、gDNA的酶切反應(yīng)提取的gDNA用識別4個堿基的平頭末端內(nèi)切酶(如Rsa I)在37℃酶切1.5小時，產(chǎn)生平頭端雙鏈gDNA片段，其大小在150-550bp之間。加入適量20×EDTA/Glycogen終止反應(yīng)，酶切產(chǎn)物經(jīng)酚∶氯仿∶異戊醇(25∶24∶1)抽提，乙醇沉淀后，溶解于適量的水中。
3、Tester連接接頭將適量的Tester分為兩份，用T4連接酶連接，一份連接adaptor 1(圖1(1))，另一份連接adaptor 2(圖1(2))，連接完成后，大約1/3的gDNA片段分子連接有兩個不同的接頭。
4、第一次差減雜交兩份連接有不同接頭的Tester，分別加入過量(1∶100)的不連接頭的Driver，98℃水浴變性1.5min，在68℃雜交12小時。
5、第二次差減雜交過量的Driver(1∶500)，在98℃變性1.5分鐘，利用槍頭氣泡間隔同時將其與兩份連接有不同接頭的不經(jīng)過變性的Tester混合在一起，在68℃雜交過夜。
6、差異片段的第一次PCR擴(kuò)增富集取5中的雜交液1.5ul做摸板，用引物primer 1(圖1(3))進(jìn)行PCR擴(kuò)增。
7、差異片段第二次PCR擴(kuò)增富集取6中的雜交液1.5ul做摸板，用引物nested PCR primer 1(圖1(4))和nested PCR primer2(圖1(5))進(jìn)行PCR擴(kuò)增。
8、差異片段的T-vector克隆用7中的PCR產(chǎn)物建立一個標(biāo)準(zhǔn)的10ul連接反應(yīng)體系即10×T4 ligation Buffer1ulT-vector 1ul純化的PCR產(chǎn)物 7ulT4 DNA ligase 1ul在16℃連接過夜。
9、T-vector克隆轉(zhuǎn)化大腸桿菌進(jìn)行擴(kuò)增繁殖取8中的2ul連接液加入新鮮制備的100ul的大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞中，經(jīng)過一定時間的冰浴和熱激后，在SOC培養(yǎng)基中37℃培養(yǎng)至菌液飽和。將細(xì)胞涂布在含有氨芐、IPTG和X-gal的平板培養(yǎng)皿上，37℃培養(yǎng)過夜。
10、挑取白色重組子克隆于96孔培養(yǎng)板中擴(kuò)增用滅菌牙簽挑取9中培養(yǎng)的白色重組子克隆，轉(zhuǎn)入含有LB培養(yǎng)基的96孔培養(yǎng)板中，在37℃和200～250rpm條件下振蕩培養(yǎng)過夜。
11、重組子克隆96微孔板中的擴(kuò)增取10中培養(yǎng)的菌液0.5ul用8通道排槍對應(yīng)加入96微孔擴(kuò)增板中，用5′端帶氨基的nestedPCRprimer 1和5′端不帶氨基的nested PCR primer 2進(jìn)行PCR擴(kuò)增，經(jīng)適量的PH5.2的3M乙酸鈉和無水乙醇沉淀，真空抽干后，溶解于15ul的微陣列點(diǎn)樣液中。
12、擴(kuò)增子的PCR熒光標(biāo)記在2中經(jīng)酶切的gDNA混合物，連接接頭Adaptor3(圖1(6))，PCR混合液中摻入dCTP-Cy3或dCTP-Cy5，用引物Primer3(圖1(7))進(jìn)行PCR熒光標(biāo)記。
13、固相支持物的準(zhǔn)備用于本發(fā)明制備種質(zhì)特異性探針組成的微陣列的固相支持物可以是LB膜，(聚)四氟乙烯膜，(聚)偏二氟乙烯膜，聚苯乙烯膜，聚碳酸酯等化學(xué)膜，凝膠體、表面化學(xué)修飾的玻璃、硅、金等固相化學(xué)所用材料。固相支持物表面含有活性基團(tuán)的羧基、醛基、氨基、羥基、硫醇基等類似基團(tuán)。本述以玻片為例。
14、差異克隆在固相支持物表面的固定步驟11中產(chǎn)生的來源于正、反雜交的差異克隆通過機(jī)器、手工或電泳等適當(dāng)方式轉(zhuǎn)移到固相支持物表面(如玻片)，在適當(dāng)條件下連接到固相支持物表面。如圖2和圖3。
15、種質(zhì)特異性探針的篩選將14中的玻片98℃變性5分鐘(圖4)與12中標(biāo)記的并變性的擴(kuò)增子，在適宜溫度和濃度條件下雜交一定時間后，依次用2×SSC，0.1％SDS；0.2×SSC，0.1％SDS各洗滌10分鐘，再用水洗凈，吹干。
16、種質(zhì)特異性探針的掃描檢測將15中吹干的玻片用芯片掃描儀獲得種質(zhì)特異性探針，圖5。
17、種質(zhì)特異性探針微陣列的制造將16中獲得的種質(zhì)特異性探針點(diǎn)樣于經(jīng)過修飾的玻片表面制備成微陣列并進(jìn)行種質(zhì)鑒定，圖6。
權(quán)利要求
1.中藥材gDNA種質(zhì)特異性微陣列芯片制備方法，其特征在于該制備方法包括如下步驟(a)提取各樣本的gDNA，用識別4個堿基的平頭末端酶酶切，酶切產(chǎn)物為平頭末端，理論上每44即256個堿基就有一個酶切位點(diǎn)，其酶切片段大小在150-500bp之間。(b)通過抑制性差減雜交(SSH)對在一個樣本(設(shè)其為Tester即試驗(yàn)者)中存在而在另一樣本(設(shè)其為Driver即軀趕者)中不存在的差異gDNA片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增富集。(c)PCR產(chǎn)物用T-vecter克隆轉(zhuǎn)化大腸桿菌，挑取白色重組子克隆，挑取的克隆轉(zhuǎn)入96孔培養(yǎng)板培養(yǎng)。取0.5μl培養(yǎng)菌液，用5′端修飾有氨基的nested PCR primer1(圖1(4))和nested PCR primer2(圖1(5))在96微孔板中擴(kuò)增差異克隆。(d)gDNA用識別4個堿基的平頭末端酶酶切后，連接接頭adaptor3，用引物primer3擴(kuò)增時摻入dCTP-Cy3或dCTP-Cy5進(jìn)行標(biāo)記的擴(kuò)增子其PCR產(chǎn)物直接用于雜交篩選。(e)將所有差異克隆用點(diǎn)樣儀點(diǎn)樣于硅烷化處理的玻片上，在一定條件下分別用熒光標(biāo)記的不同樣本擴(kuò)增子(amplicons)雜交，用激光掃描儀進(jìn)行掃描檢測，篩選獲取種質(zhì)特異性探針。(f)將獲得的所有種質(zhì)特異性探針制作成微陣列。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于種質(zhì)特異性探針的制備是以樣本的基因組(gDNA)雙鏈脫氧核糖核酸為基源，即信息載體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于差異克隆通過抑制性差減雜交制備。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于差異克隆用5′端修飾有氨基的引物擴(kuò)增后點(diǎn)樣于硅烷化處理的玻片上用熒光標(biāo)記的不同樣本擴(kuò)增子雜交，用激光掃描儀進(jìn)行掃描檢測，篩選獲取種質(zhì)特異性探針，這些種質(zhì)特異性探針對于某一樣本是特異性的。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于用5′端修飾有氨基的引物擴(kuò)增鏈用于固定在固相支持物包括擁有剛性和半剛性表面的材料。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于用于酶切g(shù)DNA的限制性內(nèi)切酶包括識別4個堿基的平頭末端酶。
全文摘要
中藥材gDNA種質(zhì)特異性微陣列芯片制備方法是以名貴中藥材(石斛)為材料，提取其不同品種gDNA，用識別4個堿基的(如RsaI酶)酶切，酶切產(chǎn)物為平頭末端，通過抑制性差減雜交(SSH)，獲取不同種間差異克隆片段并點(diǎn)樣于玻片，采用dCTP－Cy3和dCTP－Cy5標(biāo)記的gDNA擴(kuò)增子與其雜交篩選到種質(zhì)特異性探針，以這些大量的探針制備成可用于平行檢別多個品種及真、偽的中藥種質(zhì)鑒定芯片。本發(fā)明以gDNA為鑒別的信息載體，在基因組(gDNA)水平上尋找獲得種質(zhì)特異性探針制備低成本、高通量、平行鑒別多種及真?zhèn)蔚闹兴幏N質(zhì)鑒定芯片。獲得的大量種質(zhì)特異性探針，對中藥的基因組特征研究及探索中藥的遺傳進(jìn)化和生物學(xué)分類提供大量的信息，對于建立中藥材種間、真?zhèn)舞b別系統(tǒng)基因庫標(biāo)準(zhǔn)基因圖譜具有非常重要的價值，同時，為道地藥材和非道地藥材質(zhì)量差異的研究，以及優(yōu)質(zhì)中藥材種質(zhì)的篩選和育種栽培研究提供技術(shù)支撐，對中藥的高通量鑒定，實(shí)現(xiàn)中藥質(zhì)量控制，促進(jìn)中藥現(xiàn)代化有廣泛的應(yīng)用價值。
文檔編號C12Q1/68GK1609231SQ0313220
公開日2005年4月27日 申請日期2003年10月22日 優(yōu)先權(quán)日2003年10月22日
發(fā)明者李同祥, 王進(jìn)科, 陸祖宏 申請人:李同祥, 王進(jìn)科, 陸祖宏, 南京新益華集團(tuán)有限公司