本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，涉及一種利用特異性揮發(fā)物篩選昆蟲(chóng)相關(guān)嗅覺(jué)蛋白的方法。

背景技術(shù)：

昆蟲(chóng)對(duì)氣味分子的識(shí)別和鑒定主要依賴(lài)于高度敏感的嗅覺(jué)系統(tǒng)，其包括一系列的過(guò)程，首先脂溶性小分子化合物的氣味物質(zhì)借助氣味結(jié)合蛋白等小分子量觸角蛋白的攜帶，穿過(guò)氣－液相界面到達(dá)嗅覺(jué)受體，在觸角嗅覺(jué)受體內(nèi)完成對(duì)氣味的識(shí)別，然后刺激神經(jīng)元，將化學(xué)信號(hào)轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)，逐級(jí)上傳形成神經(jīng)沖動(dòng)，使昆蟲(chóng)產(chǎn)生特異的生理和行為反應(yīng)。其在對(duì)氣味識(shí)別過(guò)程中涉及到的嗅覺(jué)相關(guān)蛋白主要包括氣味結(jié)合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)、氣味受體(odorant receptors,IRs)、氣味降解酶(odorant degrading enzymes,ODEs)、離子型受體(ionotropic receptors,IRs)以及感覺(jué)神經(jīng)元膜蛋白(sensory neuron membrane proteins,SNMPs)。自從首個(gè)氣味結(jié)合蛋白于1981年在多音天蠶蛾中被發(fā)現(xiàn)以來(lái)，通過(guò)生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)、生物物理學(xué)、結(jié)構(gòu)生物學(xué)以及RNA干擾和電生理學(xué)等一系列的研究方法和手段，共計(jì)8個(gè)目50余種昆蟲(chóng)嗅覺(jué)蛋白的功能在逐步被揭示，昆蟲(chóng)嗅覺(jué)蛋白的研究越來(lái)越受到有關(guān)科學(xué)工作者的關(guān)注。

隨著多個(gè)昆蟲(chóng)基因組測(cè)序工作的陸續(xù)完成，已經(jīng)明確昆蟲(chóng)嗅覺(jué)蛋白多達(dá)上百種，但是如何能夠快速、準(zhǔn)確的明確這些蛋白的功能是目前急需解決的一個(gè)課題。目前對(duì)昆蟲(chóng)嗅覺(jué)蛋白的功能研究基本是在單個(gè)蛋白的基礎(chǔ)上進(jìn)行的，較為常用的方法是根據(jù)基因的同源性進(jìn)行引物設(shè)計(jì)，克隆相關(guān)基因，隨后開(kāi)展蛋白功能研究。但是，由于嗅覺(jué)蛋白種類(lèi)較多，未經(jīng)篩選的開(kāi)展所有嗅覺(jué)蛋白的功能研究是非常龐大的任務(wù)。同時(shí)，由于昆蟲(chóng)嗅覺(jué)蛋白與其所識(shí)別的化合物之間并非一一對(duì)應(yīng)的關(guān)系，昆蟲(chóng)識(shí)別某一種化合物可能是多個(gè)蛋白在共同作用，僅僅某一個(gè)蛋白的功能研究并不能完整、準(zhǔn)確的解析昆蟲(chóng)對(duì)某一種特異性揮發(fā)物的識(shí)別機(jī)理。因此，如果在開(kāi)展嗅覺(jué)蛋白功能研究之前，能夠首先快速、準(zhǔn)確和系統(tǒng)、完整的篩選出與識(shí)別特異性揮發(fā)物相關(guān)的嗅覺(jué)蛋白，不僅讓我們有針對(duì)性地開(kāi)展嗅覺(jué)蛋白的功能研究，節(jié)約了時(shí)間，對(duì)于我們系統(tǒng)而完整的開(kāi)展昆蟲(chóng)對(duì)信息化合物的嗅覺(jué)識(shí)別機(jī)理也具有重要意義。

華北大黑鰓金龜屬鞘翅目金龜科，是世界性的農(nóng)業(yè)害蟲(chóng)，為我國(guó)東北、華北、西北地區(qū)以及東南沿海省等地區(qū)地下害蟲(chóng)的優(yōu)勢(shì)類(lèi)群。金龜甲的幼蟲(chóng)通稱(chēng)“蠐螬”，其在土壤中發(fā)生為害，咬食植物的幼苗、根、莖、種子及塊根、塊莖等，對(duì)玉米、薯類(lèi)、豆類(lèi)、棉花、花生、甜菜及小麥等農(nóng)作物和蔬菜、果樹(shù)、林木幼苗等造成危害，降低產(chǎn)量，影響品質(zhì)，嚴(yán)重地塊可造成絕收，據(jù)調(diào)查統(tǒng)計(jì)，植物地下受害部分的86％是由蠐螬危害造成的。華北大黑鰓金龜成蟲(chóng)具有聚集取食習(xí)性，尤其對(duì)蓖麻具有偏嗜性。研究表明，蓖麻對(duì)華北大黑鰓金龜成蟲(chóng)誘集效果明顯。因此，利用寄主植物或其揮發(fā)物誘集成蟲(chóng)為華北大黑鰓金龜成蟲(chóng)防治提供了可能，而華北大黑鰓金龜對(duì)寄主植物的準(zhǔn)確識(shí)別和定位主要依賴(lài)于高度敏感的嗅覺(jué)系統(tǒng)，其中篩選識(shí)別特異化合物識(shí)別的相關(guān)嗅覺(jué)是其最重要的方面。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種利用特異性揮發(fā)物篩選昆蟲(chóng)相關(guān)嗅覺(jué)蛋白的方法。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明利用特異性揮發(fā)物篩選昆蟲(chóng)相關(guān)嗅覺(jué)蛋白的方法，從公共數(shù)據(jù)庫(kù)或通過(guò)測(cè)序技術(shù)獲取在昆蟲(chóng)觸角中表達(dá)的嗅覺(jué)基因信息，利用特異性揮發(fā)物處理昆蟲(chóng)24-48h，然后檢測(cè)昆蟲(chóng)觸角中不同嗅覺(jué)基因的表達(dá)量，與對(duì)照未經(jīng)過(guò)特異性揮發(fā)物處理的昆蟲(chóng)相比，將表達(dá)量增加的嗅覺(jué)基因，其所編碼的蛋白作為候選的昆蟲(chóng)相關(guān)嗅覺(jué)蛋白。

所述特異性揮發(fā)物主要是指可引起昆蟲(chóng)特異行為反應(yīng)的揮發(fā)性化合物，包括寄主植物揮發(fā)物、昆蟲(chóng)性信息素和聚集信息素等。

前述方法包括以下步驟：

1)提取昆蟲(chóng)觸角RNA，轉(zhuǎn)錄組測(cè)序獲得大量在昆蟲(chóng)觸角中表達(dá)的嗅覺(jué)基因；

2)將昆蟲(chóng)成蟲(chóng)置于設(shè)有透氣孔的養(yǎng)蟲(chóng)箱中，饑餓處理24-48h(優(yōu)選24h)；然后將可持續(xù)釋放特異性揮發(fā)物的容器放入養(yǎng)蟲(chóng)箱中，24-48h(優(yōu)選24h)后取昆蟲(chóng)觸角，提取RNA；同時(shí)設(shè)立對(duì)照組，即饑餓處理后的昆蟲(chóng)進(jìn)行正常飼喂，24-48h(優(yōu)選24h)后取昆蟲(chóng)觸角，提取RNA；

3)檢測(cè)昆蟲(chóng)觸角中不同嗅覺(jué)基因表達(dá)量的變化。

前述方法中，步驟2)所述昆蟲(chóng)成蟲(chóng)為羽化后2日齡成蟲(chóng)。其中，可持續(xù)釋放特異性揮發(fā)物處理組昆蟲(chóng)與對(duì)照組昆蟲(chóng)同日齡。

前述方法中，步驟2)所述養(yǎng)蟲(chóng)箱的材質(zhì)包括有機(jī)玻璃，養(yǎng)蟲(chóng)箱的頂端設(shè)有一個(gè)直徑為1cm小孔作為透氣孔，箱體為正方體或長(zhǎng)方體。養(yǎng)蟲(chóng)箱的容積不能小于0.3m³，否則影響成蟲(chóng)的正?；顒?dòng)，也不能大于1m³，否則揮發(fā)物的處理難以達(dá)到預(yù)期效果。每次提取RNA均需50頭成蟲(chóng)的觸角。

前述方法中，步驟2)將5個(gè)可持續(xù)釋放特異性揮發(fā)物的容器分別置于養(yǎng)蟲(chóng)箱的四個(gè)角落和中間。其中，所述可持續(xù)釋放特異性揮發(fā)物的容器為盛有特異性揮發(fā)物溶液的玻璃瓶，所述玻璃瓶用封口膜封口，封口膜上設(shè)有若干透氣孔。

前述方法中，步驟3)是將觸角RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA，并利用熒光定量PCR檢測(cè)昆蟲(chóng)觸角中不同嗅覺(jué)基因的表達(dá)量。

前述方法中，所述昆蟲(chóng)相關(guān)嗅覺(jué)蛋白包括但不限于氣味結(jié)合蛋白。所述昆蟲(chóng)包括但不限于華北大黑鰓金龜。

前述方法中，所述特異性揮發(fā)物包括芳樟醇，反-2-己烯醇等。

用于熒光定量PCR的引物序列見(jiàn)表1。

表1引物序列(5′-3′)

熒光定量PCR的反應(yīng)體系為：

每個(gè)反應(yīng)體系對(duì)應(yīng)于表1中一對(duì)引物組合。

反應(yīng)程序?yàn)椋?5℃60s；95℃5s，60℃15s，40個(gè)循環(huán)。

本發(fā)明利用特異性揮發(fā)物處理昆蟲(chóng)，建立一種有效、快速篩選昆蟲(chóng)相關(guān)嗅覺(jué)蛋白的方法。該方法高效、簡(jiǎn)單，可操作性強(qiáng)，能夠在大量的嗅覺(jué)基因中快速準(zhǔn)確且系統(tǒng)、完整篩選獲得靶標(biāo)基因，為研究昆蟲(chóng)對(duì)特異性揮發(fā)物的嗅覺(jué)識(shí)別機(jī)理提供技術(shù)支持。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明實(shí)施例1中利用熒光定量PCR檢測(cè)芳樟醇處理華北大黑鰓金龜雄蟲(chóng)觸角后不同OBPs基因的表達(dá)結(jié)果；其中，CK代表空白對(duì)照，芳樟醇為華北大黑鰓金龜性信息素成分，OBP1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、13、14、15、16、21、22、24、25、26、27、28為華北大黑鰓金龜雄蟲(chóng)觸角中表達(dá)的氣味結(jié)合蛋白。

圖2為本發(fā)明實(shí)施例2中利用熒光定量PCR檢測(cè)反-2-己烯醇處理華北大黑鰓金龜雌蟲(chóng)觸角后不同OBPs基因的表達(dá)結(jié)果；其中，CK代表空白對(duì)照，反-2-己烯醇為華北大黑鰓金龜寄主植物揮發(fā)物成分，OBP1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、13、14、15、16、17、18、23、27為華北大黑鰓金龜雌蟲(chóng)觸角中表達(dá)的氣味結(jié)合蛋白。

具體實(shí)施方式

以下實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明，但不用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。若未特別指明，實(shí)施例均按照常規(guī)實(shí)驗(yàn)條件，如Sambrook等分子克隆實(shí)驗(yàn)手冊(cè)(Sambrook J&Russell DW,Molecular Cloning:a Laboratory Manual,2001)，或按照制造廠(chǎng)商說(shuō)明書(shū)建議的條件。

實(shí)施例1華北大黑鰓金龜觸角中識(shí)別性信息素芳樟醇?xì)馕督Y(jié)合蛋白的篩選

1、提取華北大黑鰓金龜觸角RNA，轉(zhuǎn)錄組測(cè)序獲得大量在昆蟲(chóng)觸角中表達(dá)的嗅覺(jué)基因，含OBP、CSP、OR、IR和SNMP。結(jié)果如下：

>HoblOBP1

MRSNIKMFKNSALFILGIILPSVLCMSEEMEALAKQLHDDCVAQTGVDEAHISTVKDQKGFPDDEKFKCYLKCLMTEMAIVGDDGVVDVEAAVGVLPDEYKDKAEPIMRKCGVIPGANPCDNVYQTHKCYYDTDAKSYMIV

>HoblOBP2

MKYFVVFAALCAYVLADTLQEHSQKVMEEIINVGAECAEKLGATPEDIDKLMKEQIPDSRAGLCVVSCANKKFGLQNADGTVNRGSTLVNIEKVKDIDNDMYKKMSSVWSTCSENTPNDSDECNTGVHLVKCMKEEGAKLGLNKETMGF

>HoblOBP3

MMKVPLVLVLLAGLCLRISCTITDAQMKAARKLIRNTCRTKTKISDEQIESMHKGIWPDDDEVMKCYTHCCLATMKLQSKDGGFDKELAEKQYPKFPESIKESLIESLEKCADSGEGLTKKCDLSYAFFKCVYFYNPEGYIFP

>HoblOBP4

MTMFLYFLIVNIFLVETTQGAMTNAQIEATQRMVRRTCKSKMKITSDDELDGMLNGKWDNLSPATLCYLHCCVKMIKMVTGDGHVDYDSSLKQINNLPEPKRHPLIDSLNNCKDAGKSLTDKCEIAHEICKCFYFSNPGAYIIP

>HoblOBP5

MKFFVLLSFIAFANCMDQDFLTKATARMSQYVEECAKDAGATKDDLAELMEIRIPSRKEGKCLLACYNKKYGIQDKDGKLDKEASIEAMKDLKLADTELYDKAVKLFDTCIDQVPNQDCECNTAAIFMYCFNINGGLMGLQPGMVPM

>HoblOBP6

MLPVVILYFCLIGADSATQLHELFNTNAMKMGFQCLEEVGATEDTLQKIANREIPTSREGMCLITCIHQKFGMQNSDGTTNRAGTLLFLEALKDDPFYSQTKDHFMECLDTVSNDDEKCVIGAKFMECLSIGGMKKGIL

>HoblOBP7

MYYIVFLVFLTVDIALTQLIMPEYDKEQSQCVKELNLDADKIQKLSQAEGEITKDEKCVLRCVLQKIGVIDAQGVPIQDEIDKQFSKFKNIDMSKCIPPSSITDPCEQTYKLTTCFLSLLEAAA

>HoblOBP8

MMKLQLVLVLLLGLCLQVSSAINEAQMKAARKLIRNTCRTKTKISDEQIEDMHKGIWNDDDDVTKCYTHCCMGIMKMQNKHGGFDRELAAKQYPQIPESMRESLVSSLEGCADSGEGLTKKCDISYAFFKCVYFSNPEEYILP

>HoblOBP9

MKISLFCFALCVAIVNASIEKYIDQLTTEIATAKTECAKQVGASVDDVVEVSQGKTPTSKEGKCIISCVLKLFGGQDSNGKINKHAVIGKIEELKPIDTDVYEKFSSVWKSCSEKTSDDNDGCDSAAKLMICLAQEVDKHGISKKLIGL

>HoblOBP10

MKEIVLYFFILILMKANCLNQPNYAYECMAELGVSWSQMEEFEKSNPPHNIKCLSLCMGEKSGYITNKQINETAVLEELPSGVSIDFEQCKDITGIDDCDEFFKILECIREQFAKSMDDLKKT

>HoblOBP11

MPLLCIGADDPDKEKLREAAKTIMYDCKDKVSASDADVQSLLDKTLPTTKEGACLLECIFTTSKVMKDGTLDKDATLKTLESVLKKDKDKEAKMTQVLDACQKEIGKGTDDKCQTAKMIAECLQKQGKLAGLGPAS

>HoblOBP12

LNGKWDNLSSASLCYLHCCLKMIKMVTGDGHVDYDSTLKQINNLPEPKRHLLAEGLDNCKDEGKSLTDKCEIAYKICKCFYYNNPEAYIIP

>HoblOBP13

MKSIIVLFALIVISAGLTAKEEEKIKEFAKECRTSSGIEREKLEKLRNGDIEDDPKVKDFISCLFKKLSLQKSDGNIDQDIFKSKLSSKLTEAEKETIINDCINLKGSNDSETAFLLYKCYRSKTPSHNADLLV

>HoblOBP14

MKNIYINYFIVTLINVFLILEYAYAETATDLLRKKLCIRESNVNPSLVANADEGVFAGNRELKCYFRCYYLESGFINDSGEIQTEVIKSKIPQKIDKKIVQQAIDRCKKIKGSDSCETAYEVQKCLYNSKLQI

>HoblOBP15

MNKIFVVSAVLLGIASAYDFSDAYFNQLLTKEFDDLTLSESSFSHPRARRDDEAAQCHHRHKLCCGDDVLYGLHDKIKDKKKECLKEVTGKEFNGGPPFTCEELEQRKKEMICVAECIGKKNGVLDTDGNVKEEELRKHVKETITGLDWFQPQMDDVITKCIAEAKEAADKREADSCNPSELKLIHCFFKEMQLSCPADQITDQARCDALRESVKKHDFPPPH

>HoblOBP16

MKTIALVVLFAVLVSCQDSEEKRAERVRKYREECVQETKVDPALIDKADAGDFADTRELKCFAKCFYTKAGFFSEKGELLLDVVKTKIPPEHEREKALTIIELCKDLKGSDACETAYAIHKCYFQNAHAAQLHKN

>HoblOBP17

MKRMILLISLATFVISEKQDLIQYGEKCAEELGLGPSDLSEFKEKILSRAEMNHNSKCMARCTAEKAGLIVDGVLNEAAVSKCLPDGVDLEKCKALTGDDDCDKFYKIFRCLDKEKLEKSTM

>HoblOBP18

MKFLILLSALVTFITCTDQNFLDKANEKMTKYLQECAETTGATKDDMMELMEIKIPTRKEAKCLLACYHKKYGIQDKDGKLDKVASIEAMQDLKVADPELYDKAVKLFDTCIEQVPNQDCECETAAIFMYCFNIYGQMMGLKPGMVPM

>HoblOBP19

ILSLCLLNVVCVTKLQRMIKDAIAHLGTECLSETSDATMSDVQDLVDHVRPTTRKALCLITCIHTKAGMQDEHGKLKEEGGLNFVEPLKQEDMDYYEISKEHFINCINTVPDDAEACIVGGRFN

>HoblOBP20

QCLEEIGATEDTLKKIANREIPTSREGMCLITCIHEKFGMQYSDGKTNRAGTLIFLEPLKEDLAYYSRTKDHFMECLDTVSNEDEKCVIGTKLMECLSIG

>HoblOBP21

MKQFVIVVALCVIVSVQAITDEQKAKVKEYQTACVASTGVDPKLVEEGEKGNFITDAKLREFISCFLKKTGIQDEAGEIQASVIKQKLANDYTEAEIDAVLAKCKSSGGTPAEVAAAFYKCYWANASKHVPLV

>HoblOBP22

MKSFIVLFALIVISTALTDEQKEKIKTIGKQCKASSEVEREKLEKLRNGEIENDPKLKAFLRCTFEKLEFQKPDGTIDKEKVKSRLPSKLSETEKEEIVNECTNVTETDVTEIAYSVYKCYRSKTTAHNADLFL

>HoblOBP23

MTKVVLLFIVLIVAIQAKKKLSADEIKQINQDCLKSSGMDSSVIKNIVSYDTFPKASDKYTKYLECMYVNQGYLDKDGLISYETIEDFILDFYDLDTVKLAIEPCVVHQDGKSGGERAYNTAKCLIKNLEKLEKQHEKEHKDITGKLA

>HoblOBP24

MNMKYNIVLLLLCVICTYNEALLSQTDQIEAAKLCANQTGIAPKSIAKLTRKLSVPKKDPAVKFFLVCVYKYVGLQDQNGDMNFQKIREQLKNDFFKYDTDTIVDNCSSVKGNTHEDNAYLVTQCLLKQIRKLSKSNKNKD

>HoblOBP25

MEKIILLMCILSLEDVQAFSSDNQNQAITKCIQKTGVDESIVTRMGVTLDIPDNSVVKKFLACLNKKLGFQNEEGDMLFDNLRGNLVGMSSEEVNSTVSTCKQVKGTNSIENSYLVTKCIFRKIKSIIKLKKRK

>HoblOBP26

MKPDTSLVIVLMFAFVIIECESIPVLAKNVSQINEECSKQTGISNDVAKNLTSTQQMPKPSETYYKFLECLYKRQNYFDDDGNVSYRNIENFLSNYYEKSILRKAMAPCEDLQVGTSLGERAYNAGSCIIKNLVTIEAQEDGESINSSEESANDI

>HoblOBP27

MKFIVLVLSALTFINAYDYEDYYFDDIIMEQFELPHGRLQRNMENKSTNGDSCCNKFFKPRSPSTKKEECLKELGITKLPKLSKITEEQQQQVKCYYECRFRNHIDANGELFRAKQPQLRKIYKERMEWLAPKIDDIFDKCLTNLKPAEKVENECNDIGLRFTYCFWREAQLECPLDEQVNPEECQVLQEYLKKHNHILPTP

>HoblOBP28

MLVDGIEKLELDAWDNENNAKYDNGEANQESRYNKELFKTCCEEPSFLFLQYHFEGIGKECYKKLERHSHVHNSTKRPGNDTRTNTCIAECIAKKLDLINDGGFASKIKIHKLLTKAFSNVDWFLNEFNIHGWGCIDQKQGNQTDCNTVPIKAAYCLWRQIQLRCPMDRIKDQIKCRKIKRKISKIDALTEKEEKETEPRD

>HoblOBP29

KATCLRSCILKSMNMLKDSKINLDMINEFIKIVHNEEPEKIEPMKKNAVECLDKVKDMSDDCKMAYAFIQCYV

>HoblCSP1

MRLIFYSFLIYLAIADERYTTKYDNIDIDAVISTERLLQNYIKCLLDLVACTEEGSELKKNMPDAIQNDCSKCSDKQKEGSDKLILYLINNKPEYWQLLEEKYDPTGENTKKFIESKRMMTERTAMYTTVSK

>HoblCSP2

MYKVFIFVIIALVVAVISEKKNDNEEYTSQYDGIDIPKLLANRRLVLGYCKCLLSKGACSPDGAELKRVLPEALETDCRKCSKKHKHSARLVLHHLIDHEPKCWKELEGKFDPEGTYAKKYKHNSTLED

>HoblCSP3

MYKFVFAFFSLLIIAKILADDKYSSEFDSINYNEVLGNKRLVASYCNCLLDKGPCTAPAEYLKKILPEALETDCAKCTDKQRKSIPTLAKAIVGNDSDDCFKELAKRYDPTGEYRKRYKDVLEN

>HoblCSP4

MIKFFIILSVLVVLVLSKPEDGKYTTKYDNLDLDAILNNDRLRGAYNKCLKNAGPCTPDAEELKKVLPDAIENTCSKCNKKQKNGARKVIKFAMEKKPEEWQELKKIYDPEGKYEEKYKDWINKDD

>HoblCSP5

MKCYSLIFVLCVSVLVVNAQNKYTTKYDNIDIDSILANQRILTNYLKCLMEEGPCTNEGKELKRTLPDALANGCNKCNDRQRTTAEKVIRHLIKNRNNDWKRLTAKYDPTGDYRRKYEAQYNIKA

>HoblCSP6

MFLTIVLIILPVVSLAADAEPPGGYYVTRFDHFDIENILNHKRLVVYYAACLLDKGPCTPQGTEFKNILPDAIKTNCLRCTEKQRVVTTLSIRRLQKEYPDIWSQLRKKWDPSGENVKRLLSSANKPKPVVPFVPLILDKFGDGGDVEPSEITSTTETTVLTSSTLMNALLTTSLVQSTTATPTSTSTKQNTKQTVAVTSRPFNSIGPNLIVPNPRILIDKVIHTANLVLNSILKG

>HoblCSP7

MKNFVLLLIFISVPSILAEEKYTTKYDNVDLNEILRNKRLLKNYTNCLLSRGICSNDGAELKRLLPDVIETGCSKCSEKQRNGFAIILKHLIDKESKIWTELEQKYDPSGTYR

>HoblOrco

MMKFKPQGLVADLMPNIKLMKFAGHFMLNYYAENSGAVHTLRLGFCFGHLFLMLLQFGFTFGNLVQESDDVNDLAANTITVLFFTHCIVKFIYFGVRQKLFYRTLGIWNQSNSHPLFLESNNRYHQLALTKMRRLLIIVMVGTIGSWIAWTTITFFGDSVHNRKDPNNENETITEEIPRLLIRSWYPWDAMSGIPYYVSLIYQIYYVGFSMLHSNLLDSLFCSWLIFACEQLQHLKEIMKPLMELSATLDTYVPKSADLFRAHSASSQDKLTESDYNARNEDAHMRAMYSTHQEMGVTYRSGQLQEFSSGGIGPNALTKKQELMVRSAIKYWVERHKHVVRLVTAIGDAYGIALLLHMLTSTITLTLLAYQATKIDGVNKYALTVLGYLFYALAQVFHFCIFGNRLIEESSSVMEAAYSCHWYDGSEEAKTFVQIVCQQCQKAMSISGAKFFTISLDLFASVLGATVTYFMVLVQLK

>HoblOR1

MRRLSFEFTKAIYNDSVKKYMWFGKLLLEMLCAWPSKEGLFKRAIGWLFFCNLAVVEIFHAAYCAQNYSNIGDAVMVGATVTTTLEAMVRFYIMLSKREIINKILTKVWKKFWPVEVLDPVKRKKIQNKAKFRFWLNLIFFSSSLISSTNVNLAPYLSDNELIFKSSFPFDWNKPYVYEFLYVWQYFSNELVVFMINAFDFFFMSLVCICTIQYIIMQEVFANILSKDSRRHRQVIFGDRGKHMTDKEMLKKCLEQHEMLIEICNELDNSFNRAILIQFVVNTAANCAAFVTLKFDRSQFTKMLTYAVAHLSQLFYYCLAGQDLQYESQRLSDFIYDSDWQSSYNRDFRKSIVLMIQRSQKPQCLTALGLVNLDFLSFVQIMRLSFSFYTLLDGFLADE

>HoblOR2

MSAGNTTKPVIRKLSLEFSRDVYKDGVKMCILPGKVLLQGVCCWPDDEGLRMKIVGWFLFWNLFVIEIFHASYVFLNFNDIGDAVDAGATVTTTMEGLVRLHIMLTKKGVINSTLVKIWKQFWSLDVIEPVKRKKIKRQAQTAVMLTSIFLGSSIISNSQITGTPFIRNRGLVLKSVFPFDWRQYYFYEIIYIWQYYSDWFVLFMINAFDFFFIALVIICSVQYVIMQEIFKYILTDESKRHRKIIFGERGETMTDREMLFECLEQHKLLIGICNELESSFNIPILIQFFT STCGICAATLIMKVDYSQFSKMFTLVGAHISQLFCYCYVGQHLAFESDYLAYAIYDCGWHIDYDRSFRKALLLMMQRSQRTQRLTAAGITELDYASFLGILRLSFSFYTLLNNLFMKNVGQ

>HoblOR3

MNSKKSENYFKVHFFVLNLLGISMNSMKNPIKNLLYKTYSLLLFLFCFVFYPISELVFVLCSGNVEDSTFVFSFLLTQILGALKLVIVVIYKRKIISFCKSIETKPFLPDQNRSGQMEFMHIENAIRTSNNQAYFFHSFVVIVISQRYFYTSRAPGYYESTFDQTSNITIVKYVRMTPFYTILPFEQINSPGHEITVLYQVISAAVIGFMIGAVDAIIGGILCHIKAQLFILKDCLASYEQRAVYLMNKDGIYIDNREFAKHEMNKFNYSGNVRKLPSVLQKYVDVCVIQLIKHHQKIIELADGAEDTFSLLMLVQFLFSLLLICFQLFQLSICEIRSTKFVSMICYFFLMVLQLALYCWYGNEIMYHSSSLSDAIFESNWIVANAKTQKSLLIMMMRVYRPIKMTAGKFSVLSLESFMAIIRGSGSYFMVLKNTQSAV

>HoblOR4

MNNEYVMSFCLYHLHILGLNPFKQSIFSKLRAGFVALITCVLYGFNLAALFHDNNGIKSLQNTIDALPCGQQTSVRLLYLLICGNKMKQLYEMTNETWPNDICGSKLKERLQFDSERFKSFFKSYSTYLVTIVIIYLITPSFYTYRRLTTEWYLPCKLESDMCYLSARLAQVVYFMLIIYQIIIFDGMCWAFLFCLFLETEKVKYSFKYLNIEELNSKNEVNRKFCSIVKHHCYLLEFLKRFNAVYSLQMLNHFLTIAAALCFGMFLVSKDGFPPTTFENARFIPYVIGYNTQLYICCYSGEVIYSQLISIADAIYESMWYLNNHSNVSNGIRLGIQVSQIGNKVTIGGLWPLSLSTFVSVFKTSVSLNAILQTVYINAERSI

>HoblOR5

MSDNFFNVNFTMLKMSGIWIPDSKSSLIVKIMYWAYNFVWIGYSCLFFCPSELVYFATTLSNLEDLVKNVNMGMTHFLANIKVCLWFYYRKEIMGIIETLGAYGRRYESYGDFDNEKILKKAKKFKDIFSVLFLNFAMFTSISSCLICFYNTMELDLPKGGRIELKLPYFSYVPWDYRRSKILFSIAIWYQFFPVFNYAYIIVGFDTLYTAILGYVSAQLDIIQGAFSTIRPRCIVRLGLEVPEDVLRDPPELMNEMNKEMNKIVDHLQVLLDICTRLEEIYSYVILAQVMISLIVFCTCIFLVSLLPMFSLNFAAEMIYMVAIECQLLIYCVFGNKVTLSSSNIPNSIYIGDWYSSNISFKRSMLITMSRMQRPIYFTIGKFTPLTLSTFVTISRASYSFFAVLKNSEL

>HoblOR6

MVCPCEEILSSPRWILELLGCWPMKSPTKTYTIKMFVASVFTIAFPTMLCFEILFVYKNYNVLMQILNFLIPYVYVLCKYTIFTFQQKQLFILLNCTKSKLFNQSPSNDKILRPIADVIIMVTKVFRFTLVFALLMIALLPLSETKLYPVPISHDLGRYSILMYVFQITCLSIGGWLCMGFDCGFIALAAIGIGQIDILKLRLSSVIQDLVVNKNTFSKSVEQLKTQTKINKALRACILHHFAIEEYCKRLSNLFSTTIFIQYLMSILALAITMSRILTITELSVKILELVFILMFIFTQLITYSWSGHQIMIKSSEIGEACYMVKWYYYDASNRRILFLIMERAKRPLYIKASMFAKTTLTTCINILRCTYSIFTILSMSYREN

>HoblOR7

MKGHSENFFDINLIFLKYSGLLPPKNKSNISYTLYKILRFFAVIITVILGTTGAIIGVIENIYNFNVLIELLNVALTMFLSAIKSVFWLINSKSIEEIMQTLATNEFDYEQTEVFKPNILKEKARRIGRNYTLILWILTQLTLGFAYIPAISLSFWYYVNDLPITNITTFQTLPYYIHIPFAYNTAMKYCLACIVQAVPCYMYANILVGVDTLFMNILNLIGTHMLILQGAFKTMRKRCLKKIAGPSLAPDGLHNSNEMEYYMMLEMKKSINHLQMLFQCCYKLEEIFKYVSLFQALGSVIILCSSLLMLSTTSCVSKEFGNEIFYFIGINVQMGLYCSFGNQVTLKALDLPQAIWESEWLECRKSYKICILMTMMRLKKPVYLTAGKFAPLLLNTHISVLKGSYSYYTVLKSMDK

>HoblOR8

VCNMFAKTYRFFVGITIAFYAIFPFIEHTLPLPGWFPFDKKKHSYSLYVYHLVCLILNGYNHTSLDCINAAMISIASAQLEILKDNLHNLRRNEDDDLTIDQEDVVVRKRVKKCVLHHNVIVKFVADIEDMFSNVLLVQFLCSIIIMCVTGFQVFVIPPARMHYITLVLYFCCNLTQIAIYSWFGHDILAKSSDIGLACYMTEWNVLSPKSRKLIFIIMERSKVPIILTAGKFINLSLNTFMMIVRTSYSYLAVLQHMYKT

>HoblOR9

MGHINCLEPLIKPKWLLIKSGLWPMENISVLIAIKYFLNFALDVTILGIILQNIVNAISTNNMNLLNWSICVLLPLTNYYTKAVTLFVNKKHLRSILNDLDSDIFNYNSEKLNRHIRKIYAISNMMIRYFAFVISTFVFVFGVLPIITNIRPIVPASFKTGKFTRLYNVAHLFAVIFVGYNSTAFDVLFMSLMALCGAQLDILKERLSNVFVDASEIYEDASSNMKFTDINVVVGCILKDCVALHEAINRFVMKLDILLSFPLLTQYGIGCFIICNTILELTIMGHLDSANIIGLCGYSGVVFAQIAVYHWLGNEILYKSDEIIQSCYLSQWYKLDLKSQKCIMLLMERAKRSLVITLYKFVFISLESLGVIVRWSYSIFALIKARYK

>HoblOR10

MNTNQFKQINKDYFKIHFFVLKFFGISIKPVEDSLSGIAYKIYSVILFILCFVCYPTSLFFFLYLNADLENATLVLCFLLTYILGTFKLIIILIFKRKITTFSAHIENEPFLPDNRRSNDREFIYVENAIRTCNNQGYIFHTFVVLIVVQRLYYAAIDAGYYKNFWDFSTNTTIVKHVKSTPFYTVLPFEPIDFPYYEITVMYQAYCSATYGFVIGATDAIICGIMCHIKAQLLILKNCLKTYIQRGIYIMKEDKVHINIQELEKHQELNKDSVYAVPLVLQQYVEISITELIKHHQKILELAEGAEDTFSFLMLVQFVFSLALICFQLFQLSIYSIPSVKFFSMFSYLLLMLYQLFVYCYHGNEVMLYSLSIIDAIFESNWVMVNVKCQKSLLLSMLRASRPIKMTAGKFVYLSLDSFMSIVRGSGSYFMVLTNMNARKH

>HoblOR11

ILYSVASRMRKMFSVMLLFHYFVTVATTCSDLFILVKYVDITVIGIKFTVLVFIFGQFAYYTFPSDEVACQFSDIARALYMSKWYRTNIKVQKSLLFIMMKCQRTKYFTGAGLMDINADAFGSVVRKTFSFFTIMRNILNK

>HoblOR12

MLLNATITKSVSYLNFKGLNPFISRSKSAKFKAIIFLFTETMATISIALCIFVSSLGSDSFMDSVTGMICATQTICKQIILLLFQDDFIDVVHYIKEFWAANKFGKEPAKQIDVIHNTTERLLKMFKYLLSIAAIAFLVKPFLEEELVLPVSWLSVCSIHESMICYTINYISQCFYIGDLIFSLLIFDELFFKLLTYGYCELEQVKYALSFLKTKNTTSEKESKIMLEMVIIIKHHSRALEYIDKVDKLFSMVLLCQFSTSVCGGCMGLFVLTYEGLPPKLNTALKNVPYVLGVLSQIFIYCVAGQKIAEQSESVADMAYNMRWWIKHQPQVGRAICLIMQRAYKRKQMTAGGVWNLDMITFVAVRSVVMSNRN

>HoblOR13

MSTSRLSLRRLSLEFTKDIYKDGIKICLLPGKILLQGCCCWPDSGTLYSKIIGWFLFWNLIVMEIFHTAYVVKNFRNIGDAVSTGATVTTTMEGFVRVYVMVTKGHVINTILVKVWKQFWPLDAIEPKRRQKIQRKAQLSVLLTSILFFCSASSNSLITSTPYIRNHGMLLKSVFPFEWNQLYVYELIYIWQYYSDWFVLFMINAFDFFFVALVTVCFLQYVIMQDVIKFILSEKSRSQRIIIFGKRGQSISDKEMLYKCLEQHKLINGICNELEESFNIAILIQFFVSTTTLCAAALIMKVDYSQFSKMLTFAGAHLAQLFCYCYVGHQLSYESTSLAYAIYTCDWHINYDRNFRKALVLMIQRSQKVQNLTAAGVTELNFTSFVGIMRLSFSFYTLLNNLLMKNENE

>HoblOR14

MGKIMQIFSRFLRNLDILKRNSDILNDDGKCTLIVSEFVLCLVNFWPENHTIRTRITFFTLLAAYISMQISFFMFLVTSIEDIGSFTKIMSSLSVGMQVIAKMSILFFKYNELNAIIRIIRYEFWPATTMGKLIKNQIRSKLTFILIGCIAIYLLGMLFLLQIAAAPLMKGIRILPYNSWYPFDWSQSPTYEVLYILQSFMIIYVTENIVVGCDFLFFSICFNCTVQFNLLCEVFKEIGNGREMELLNYLFRLPGTFYRPTMNEVDVNERKLMVLCIQHHQKLLNICLQLNKLFNYGHLYQFVASVTGLCASCYLITNENSANGRSLVASYFVAHASQLFQYCAVSNEVTHASLELSTAAFQCGWHKKEYSDFRKCLSIVLQRSQKGVPVKAAGLFVLNYASFVTMMRSTFSLYTFLNNFTEQ

>HoblOR15

MSKRIIHYDSINFERRIMSVFGFYSGLGFEGNSLTKLVFKISITSGILFIYTMIIKIFLVTNDLEVVFEIFHILITETAFVLKAILFYQALPKLYSLEELLRGPTFNQHTEDQDRFISKAIFTYKLFARSFQFTSWGAMITYSLCPIIDGTILAIPIWTPFDEDKYKIYAQFFEIICFIVLSTIDVAIDCISTSMINLMAIQLDILNDNLRRIGQNRSTGSYLEQEKQIQNDLVRYVQHYIAIIRFVSDTQDIFSVGIFIQIFTSVVAICTTGIQIALRTSGTFISTLLYFQTMIIEIGMFCWFSQDIITKSSQIGESCYISEWYTCNTSTKRSIFIIMERAKKEIKFRAGGVFEMSLTTFVMILRNSYSYFAVLMRVYKN

>HoblOR16

IDAAQNGASIEKINAMIATLFLIVTCCLKIGVCTFQSRLFFSIVEDLHSIRFNSHDPKYNKPLEDAIQLINFFAKVFRVCVFMIVLFHIVFPLFGRTPLSIYPTFELENHPYISHGIQIITVGIAAWNLTCVDLFFGAMITIAITQIDILRLKLQHFTADAKQEFLKRRKRENCSYHTISNEILVDCVDLHIAVIRFLKKVEDMVTIILLVQYSAGVVIVCNNILQLTKSDSIFSPDFIQPFSFLCGVILDLVIYHWLGNEIIAKSDKIGEACYTSEWYICNAKTHKTLFMIMEKAKKPLNIKIYKFTDLSFQSFVAILHAAFSVYTLLDTVAEEN

>HoblOR17

NNIDNLSEILPVFLAVLLLIVKRINIASRSSEFLLTLLVLEKTEFNNHPEGLMGPIKRCVRISKTLTKIFKVVMICVIIFYVMLPFVEDKPLLLPLSFDLGRFEKATCIFQVISFSYCCMSVVCVDLFCALLLSLATAQLEVLELRLRNIVSEAKFSNGSSILNYKRDLDQRVYKILRKCIKHHLSIISLVRQIEKTYTVPLFLQYTLGIGIICFLLLQLSYTVQPGTLQFLLLCNCLVAILNELLLYHYFGNELIFQSLRIRDACYMSEWYECSPFIRKMLVIIMERTKIPLAITVYGYCLVSLESLSALFRWSYSIFALLSTVYWKVNQ

>HoblOR18

MLGIFGLYSRRDDENGVFFKIRRALIAVFSTVMLICLFIKMYENRNNLLDIFETCYYFMVQAAFVIKLYIYFYHLPDLHALEEMLSGKIFNSLSKEQEMYISDAMKSHKIFAGCYQFCCVCCAIIYSIFPAMDGQALAVPIYSPFNVEKYRMFLYCFEVCCFFMTACNNSSFDGMTVGLTTIMSAQLDVLKDNLKHAADRDMGGKFLEQEKKIKDRLRNCVRHHNAILEFTAKTQDIFSTGVFFQILASMLGICLTGLQSLMVPWGSVQFASVGLFLVTEIIQIGMFCWFGENIIIKSSEIELSCYMSEWRSCSTSNKRIFLIIMENAKTPIKFTAKGLFILSLGTFVMVLRSGYSYFAVLRQVSQK>HoblOR19

RISRASCKKRNELRICIKHHQLLLSIFGRMQLIYSWVLLLQYLMTLGMACVQLYILNTGELDIADTIELVIYLGTMYTEFGYYSIPVEEISSEFSGIVNAIYMSSWYEKDMATKRILLNVMTTAQVPKYLYAGGMIQVNMDTFGSVFRKSFSLYLVLKNLVK

>HoblOR20

MEEEYVMSFGLSFLRAVGFSPFNPGLLDHIKSSALILTTTFIYCLNILPMIIEYDGVQSLESSIDSIPAGEQVMVKLLTTWILRNKMKYLYEMVNQKWPDDIYGNEFEIKLNNNAKNFKRIFALCKAQFMFSSLIYTSKPLFVQARVLATQLYVPCDLLSNSCYITFLGIQNIYIVIVATGEVVFDFIFHAFLFFAYIELEKIKYGFRNLDIMGKKENNEKIVYSEFCKIIKHHNFILEFLHNLNNIYSLQLLNHFITLSANIVLAILFMNKDGFPPSYDEMARYIPYLITILSQLFLYCLAGEGIYSQLASVGDAIYESKWYNMKQSSSLTKGMILVIQISHINRINRKLTIGNIWPLNLATFMSVVKSSFSLQACLQTAYNTDDTM

>HoblOR21

NCTALIRFLITTIHLTYCKEDTIEKELCVTVKPLLIPTPGPLNTISGRWILGGFQCICLILYAWQIIAYDTLFACFLIYVDCNVHILRYFFETITERSINKLQLRCCSTPNLELTQQMNIQMRTGTINLQNLIITCEEIMDVFKYVILLQVLFALFILMTSLYVAASVPVFGASFTYQLEYYMTIVTQLSLYCWFGNEITLSFTKIPDAIYNNNWVVSNKSFKRSMLINTIRMNKPIYIKIGMVAPLNLNVLIYILRASYSYFAVIKNKY

>HoblOR22

MANIKCIKTITTPIWMLRKTSFWPEQTYTKTFILTSIFNNIFHFTIYTLLILDIINALKSNDIKLFNWVIGILIPITNYYAKAVTIIYNKKCLFSILDDFKSNIFNSHTEKHNLHIQLIRKVSHLIMRYLIITMGIFVLIFSVPSFFTNGLLFIPPPFEIENFDVLYKFVNLIAACYIGYNCGGLDVLFLTFLALCVAQLQILKERLKNILEDAKKINVESKYKMDLDIILADILRECVLLHKKINRFVEKLGVLLSLPLFVQYVSGCVMICFSIIQLTLGSKRSALDIIGLCGYSSATFGQMSAYHYLGNEIIYQSNEIVESCYLSRWYELNPKFQKRILLLMERATRPLILSAYKFVFISLASLGVIVQWSYSLYAVTKAKYG

>HoblOR23

SKMSSDEFNGGSEVCDSILPYYIVIPFDISTKISCCFALIFQILPFVVFAWQITAHDLLFAVFLIALKCHFIIVRGAFETLRSRCLKMLNLQPHYNILHDRDNIKLDNAMKTEMRKCTQYYQIIIKLAQEVENSFTHIILVQVLIVIFIMVSCLYMMSSLVITSGKFFAEVNFVIAILIQITFYCWFGNEMTLASADICSGIYDNNWLSASESFKRSMLIQMIRSSRITYITVGKFSAVTLLTLASILRGSYSYFALLSNLKE

>HoblOR24

LRNAATTEIYACVKHHELLLSVFSCMKKMYFWMLLFHYAVTLITGCSQLYVILVSSTDTADLIGTLIYVNGMLVQFAYYSFPAEEMVFELRSVSVAVYMSMWYEKDASVRKTLLMIMMKSQQQEYLSAGGIIDMNVNAFGSVIRKVFSFYTVLHNVLSN

>HoblOR25

MKLHCLVTKNGQIRKILKEISGDVFQPKSEYQEQLIITSLLTIRRCTKLLIYISLGS CVFFVVLPLVNRSDEKPLPGKLWFPFNTSNHPVYDILYIYETIAVILHPLTHICMDTIPLALMAFICGQFDVLHDTLTNLKIFATERLESNTKRTKDDLHEEMNKLLIECIIRHQETKRLANEVNDVYTSHFFAQLVNCVSVLSLIMYKLTMIPIASVGFFTLALYLTCLLGLLLLYCWYGNEIVSKSSAVYLAAYSSDWTGCPISFQKNLLFMMLHLQRPVTMYAGRFFPLSLDVYTAILRFTWSYFTLLLNIDE

>HoblOR26

AVLTVLFFGILDSILSRFKSNDYNDWSMPLAPFSLFKVTTNTQFILVCLYQSTCLLICASIISSIDLLMGSVLAHMKTQFTILKNTIRSMQSNDDLAEEVTERHSQKTSVDLLQNKLQYVVTYHQSLIDLAHQFEDVFSFLLLTLFIGNFVVLCFTMYHASLYPLSNTKALMDFAYVIAICVQLLLTCYWGNELTLESESVAFACYDVKFVGTSPNFQKELALMIQRSQRPIVLTAGKFVNLSLNSYVSILRMSYSYYMVL

>HoblOR27

MSMSFILTSFKVLVWFYYRKDLLKITKLLEENSSRFKDYNFDSEDIISKEKLFKDLWTKSFFLASSLVSVSAGFLSTTEALTSGEKYVEFKNGSQYFYNQKLPYYSLVPFDQTSSKLAYIKAVVYQCLALLSCGYITVGLDMMFVAIMSLTNAHFILLKNAFRRIGAVRIERLNITSTICIEQSTMLRRACENELNKCIKHLQMLIRICQSLENIYSPVVLMQVLISLVVLCTCLYQVSSIPFGAKLLGNDLAYLLAIEIQVVVYCYVGSKLTHSALDIPSAIYESSWLTASLTYKKTMIMTMMRMQKPIHITIGKFSPLTLNTFLSIGKMSYSIFTMLKSRN

>HoblOR28

VKTLQSLMHFTHIFLKYLFLMYYKVDIEKILVDILKYFWKTWMFKKQIAEEVEKIYKTVESIQKCTIFLAAIVLLVHTLRPLFDKSHIYLLETYTPSSYAIGALLLISQCYTLYFGFCVAIGFDLIYFSLCVHLILQTRLLKEKLREVFENSRDNSSFKLGYCIQHHQFLFSLFLRKKAIYSLMLLFHYFVSLITGCSVLFEILSSNTDLGNAIIELTVIVFFMGQFGFYTFLAEQIAFEFSDISDAIYLTQWYNSNIFLQKCMLHIMMKSQRIHYFSGGGLIDINVDAFGSVLRKTFSFCAIMQNLINK

>HoblOR29

MVPPPFDTGRFNIVYIFFHSLSVMYLCVNSTGYDVFYLTLMALCVAELNILEERITNVLEDVSEGHDSREKISLENIKPLLKRTLRECIILHDAIIAFVKKLSIVLSFPLFVQYTCGCFMLCNTVLQMTIVSDKVTESCYLSMWYATDTLSQKTLMLIMERAKRSLILQLYGFVNISLDSLGVIIR

>HoblOR30

FVSLVIYTLCITMELMTYCWFGNEIIMKSSEISTSAYKTEWLNSSISFQKDLQFFMLLTEKPVKITAGNFFTLSVETFTTIMRSTWSYFAVLRQKYVEDVLE

>HoblOR31

YCFMGGLIVQLGGIFTYETCMKNSVKTNKDMTCGYGYKVHYPYEYQSGISQIAHIAVGVYSLSFVAASASLFLCLFICCVEYITVRIDHLNDMLLKVFEVEDYEDQSFTMKLCLEYHILITGLAEQANSCLLILSTAALFNYSSTIGLSLFAMLKGNITKPLVSAIGFTCSIFILSAYGQQIINKYEAIGTAVYNSKWYHSSPLLRKHVLLIVMRAQKPLLLQVGLGFYFHLPLFT

>HoblOR32

LLILHFYYFCIGFPVVFGFDLIYFALCVHVIIQTRLLKRKLKNVSRNCGKNSVSELNSCIQHHQFLFSMFLRMKDVYSMMFLFHHFLTLISTCSTLFEVLNGHNTDLTNYFIKFVLILLFISQFAYYALPAAQVASEFSEVSDAIYISEWYNKEVVLQKCMLFIMMKAQRIHYFSGGGLMDINTDTLGSVIRKTFSFYAIIRNLINK

>HoblOR33

RNDNQSLLIKTHQKRMLRFCYVFVCMGITTCSLFAVFPFADPRELKLPLSGWYPFAEEPFVILFIYQITALSVIGVSNISLDCIIVCFLNHICIQIDLLNHELRYMRGVCLEKLKARYKINSKHEFKIKLQMLMNAELESCIIHHQTILSMTRDFQQIFSVGIFTVFIFGCATLCMTMLQFVMVSIKSIKFVSLVI

>HoblOR34

EKVIKCVEYHIFIMSFFKNLRKLCSSLFLCQYTIALVSICTELYAFSNTKEEFDITELFKSMFYTSTILLEFGMYCFCSQYVVDEIRSLSDAIYASRWYECKTNFQKDLMFIIMRTQSQTEFTAGGLVAMDVQAFTSVIKRAFSFYALMKSLF

>HoblOR35

PFEIDFSIKLLIQIMDFFYVLWVGITCVLIGFVVGCAELIIIRVRHLNIMFKDALSFASCVNSKKLLVTCVKYHAHIISLTDRYNKCFDKFVMLFLMQTGPTIAVASFSIIIEPKISVMLHLSGWVVTLFILCISGQRLTDESLVISQSVYDTEWYQIDISLRKYVILILMQSQRPLRAKMWMFSEASYMTFAKVIKMSYSIITLLNGTLARKN

>HoblOR36

LYSLLKLRFLESNVKLFEDGAKYTIIFSQIIANFINIWPEKFSTSTMICFSVTFLVCILQEVSLFVFLITSIEDVDSFTKVLASMSIVMQSMVKGGTFYYKAKEMNDVIKIIRTEFWPSNTMGKDLDHKIRGNSKILLTVLLAQYLFAVAFLLFYVILPLIQGTKQLPHTSWYPFDWSASPAYQVIYCLQAYITAYFNENVVCAYDYLYCTICANCVAQFRLLSEAIKQIGTGREDEIARSLLKISGVSYRPILKVEDFSERRLLVICIRHHQKLIEVSNRLNNIFGNGHLVQVFASVLGSCT

>HoblOR37

QVFASVLGSCTTIYRITMKNGLNDLTLLISCYMAHFMQLLEYCALSNELSYWSTCLSETAFQSCWYEKKYSDIRRCLSILIMRSQKPISMNGLGLFELNYVFFMSVMRFTFSLYTFLSRFSE>HoblOR38

KKLKKLVEKMNEILAVPLFIQSVLGAVILCLAMYKLTKVAPMSGEALTYINYYIAMLIQLSVYFWYSNEILWKSDELSNSAYQCQWVDKTTSFKRNLLFFILSAHSPLKIYGGYFVVLSMDLLIAIVKFSWTCFTLLKSM

>HoblOR39

FPLFVQYVCGCFTICNAILQLTVMKESGSSNLLSMCAYTGVTFGQMTAYHWLGNEIIFKSNQIIQSSYCSKWYALNTKHQKELLLLMERAKRPLIIQLYKFIYISLDSLGVIVRWAYSVFALIS

>HoblOR40

GLCKLYSWMKYNKKIQRMLRTIDERFWDTSIVNEKLSTGLSLRVQLISKTVASHIFISVGLCLMIVIFPLVQYPDGRKQLPSAIWFPYNTDKRPLYEITYVLLGISNHISVLVNLNYDSLYVYFMQNISIQF

>HoblOR41

LQLTLWSNKIINATYSSKWYELDIGAQTKLLILMERAKRPLNVQVYKFIFISLESLVTVVRWAYSVFALLRARYS

>HoblOR42

ICSASLILKVDNSQFLKMLTFAAGNTAQLFYYCYAGHQLAYESNRLADAVCGCDWHLHYDRSFRKALIMIIQRSQKGQSLTAAGITTLDFASFLAIMRLSFSFYTLLSNLLMKNKN

>HoblOR43

YHQQQLLCSAPKCALYFSIRKKLDNIIKIVWYEFWPSNMMGTIVEKNIKSDSKTLLVGFLIEYGVGCVFLLLFIIAPAMTGIRQLPYNAWYPFDWSRTPTYEILYLFQVYIDIYIIANTVCGYDFLYGSICANCVAQFRLLNETIKK

>HoblIR25a

MLNLFYLVLFIASCDRLRTQTIQNINVLYANEEDNDVADKAVDVALDYVKRNSKLGVKVDIRKVVGNRTDSKGMLDSLCKTYGSMLDNKGPPHLVLDTTMTGLVSETVKSFVKALQLPTISGSFGQEGDLRQWRDIDDAQQNYLIQIMPPADIIPELIRSIVINQNISNAAILFDNSYVMDHKFKSLLQNVATRHVIRPIQDDSAIRDQLQNLRKLDIVNFFILGSIVNIRKVLDVADSISYFNRKFAWHSITQDKGDLKCMCKNATVLFAKPVMDTKYQDRLGLIKTSYQLTSDPEISAAFYFDLALQAFLSIKNMINDGGWPSNQSYITCDDYDGKNSPDRKGFNLKKYFGKDPTETPSYGPMNIARNGESFMQFNMQLTAVSVRAGSSDKAVNLGTWKAGFNNNMSLIDPESMGNYTADIVYRVATVLQAPFVMVDSEAVKGYSGYCIDLIDEIANILKFDYEIFVVPDGKFGNMDLKGNWNGIVKELMEKKADIGLGSISVMAERENVIDFTVPYYDLVGITILMKLPKTPTSLFKFLTVLENDVWLCILAAYFFTSFLMWIFDRYSPYSYQNNRDKYKDDEEKREFNLKECLWFCMTSLTPQGGGEAPKNLSGRLVAATWWLFGFIIIASYTANLAAFLTVSRLDTPVESLDDLSKQYKIQYAPLNGSASMTYFERMANIEAKFYDIWKDMSLNDSLSDVERAQLAVWDYPVSDKYTKMWQAMKEAGLPNTLDEAVERVRSSRSSSEGFAFLGDATDIRYLELTNCDLQMVGEEFSRKPYAIAVQQGSPLKDQFNTAILQLLNRRQLERLKEKWWTNNPKALKCEKQDDQSDGISIQNIGGVFIVIFVGIGLASITLAFEYWWYKYRKTSKVITIQDNPQQSVQKHKSKPDNSKTMALGKLYPRSRF

>HoblIR8a

HRRSIDRNWLYDLVSGQVLSLQCPEQQKGLPISLQASCREFTLKESFWFALTSFTPQGGGEAPKSLSGRTLVAAYWLFVVLMLATFSSNLSAFLTVEMMQTSVQSLEQLAQQSRINYTVVEASQTHHYFINMKNAEDTLYRLWKELTLNASTDETQYRVWDYPIREQYGHILIAINDSIPVANAAEGFRKVNEYTDFAFIHDSAEIKYEVSRNCNLTEVGEVFAEKPYAVAIQQGSQLNDEISKTILDLQKDRFFEYLQAKYWNYSKRGECDNSDNNEGITLESLGGVFIATLFGLALAMVTLVGEIIYYKRKRTKKVYPPGKDIQSIRTVSVKPAIPDSITFGTTFKPVLPDKDNLRVSPFTLYPRSRNRIN

>HoblIR64a

SSSVICDLQEMQMYSPLQTRTSLQKHSPFRNMLGFCMIRLFETGVSTRLRNIYDARKSKCTSNSFSIRTRVGLHEFSAVLYIYIIGIVASVTILTIEIIIYKKNYLHLYPFTH

>HoblIR75a

RQKIKNIKFRVQQYGLLLCRSSKSFHFVKEKLKNLNLRIDSNLYVALKSTVGEYEVHEFYNPGYKNGGTLMSYNSFNYTQRGAFASNYLSGYQMRKDMRSVHLRVAFVVTKKVSAPLEYLKDQRTKQFDTSSKVNFGIFGHMIDIHRYRWDVVITPAWFGSKRHGVEIGLANVLHQNLADISGSSGLMTPGRVEAFDFGVGTYLFRTSFLFRNPYTYDDDVGEALVLRPFSRGAWLCAGLFALILGLSLKLVFQFETRVLKRTSQTYSLCSIVVITIAAFCQQGEFYFRIDLQKLNDETTFSNIGSGLHYNSVCGRVLLLQLLVFAYVLYNYYTSSIVSSVINSKKKTLDTLEELVKSDLDIGIERIAYARVLNATNNPILFHLNNEANANNTRISFFPQSEGIQKIREGNFAYLAETITAYNDMDRVFSNEEICETVELDGARPTLIYIVGKKNGQYNELFSISYRQIVHSGLLQRQQKIFTNQKPHCLNAIQFVQVGFGQLTSAFVLLTAGYGITLMILLIEIVHFRIKSGSYKNIQ

>HoblIR40a

YFLRNIHEAMKVILITNPRYDAYRVYYNQATSHRKHHMTMVNWWTKHKKLFKYPTLPASIDIFKDFKGKIIYVPVIHKPPWHFVRYKNNSFDILGGRDDKLLRLIAEKLNFRYQYIDPPERIQGSSFSPNGSFEGVLGLIWKREVEFFLGDVALTWERFNAVEFSFLTLADSDAFVTHAPDTLNEAFALVRPFHWKVWPVIILTFLISGPALYALITIPNSWQPRFLIKSRRKLFGECIWFTFSLFLRQSEKEPSSSHKSRFFIILLSIAATYVIDDMYSANLTSLLAKPGREKSINNLVQLEKAIKLKGFQLYVEKYSSTYGLLENGTSIYGRLW

>HoblIR21a

LGSSAPRILTSWRNGSLTRPQVKLFSKKMHTGFSGHRFITSVAHQPPFVIKRGLDENDDIVWDGIEIRLLKMLSRMYNFTLDIKAAKDDISKSPADKVIDYVNDGTVNVGLSGIYLTKERLENLDVGYPHSYDCAAFISLTSTALPRYRAIMGPFQWTVWLALTITYLFAIFPLAFSDKHTLKHLLTKPEEMENMFWYVFGTFTNCFTFGKDTWTKSPKITPRLLMGFYWIFTTIITACYTGSIIAFITIPIFPTTVDTIQQLLSGRFQIGTLDKGGWEFWFRNSSDKNSQKLLKNLEFLPNIESGLRNITKAFFWPYAFLGSKAQLDYIVQTNFTTTNKKSLFHISSECFVPFGVSVVFGKYSIYKDIIDRGISYISQSGLIIKLEHDIRWDFMRSPTGKLLQANSMNTLKLISVEDRSLTLDDTQGTFLLLFAGFLGGMLSLIFERVGGCFKCYKKRRFSTSSSISSKPRSYDEPTPREKLDSIQYSYDEFQLLNNVQENNRNKTDVDAEFENMHHINKELQKTSTNLIVRTFNFDKLFGEENLNSHHETVEDH

>HoblIR76b

QTYMWIQNTRCKG-IE-ASFYFCSKMALIDIILIGLCANLTCPGDKIPDLSKRTRSLLREQEELIRNYTLKIATVHNPPLSIIETVDGVLRARGIAFEYIEILQNKLGFKYELVKPPDNSLRPEDNGIIGMLSRNEVDIGAAFLPPFPYLSNYIRFSTNLDKGEWVVLMRRPPVSATGSGLLAPFTFQVWLLILVSLFAVGPIIYFLILLQSRLCKEDDNIIYPLPSCVWFVYGALLKQGSTLSPHTDSSRILFATWWIFITILTAFYTANLTAFLTLSRFTLPISSITDIGTKKYSWVSPKGSAIEAALDIDDTFKQSLDGSHGQFSEEDASIILDNWVTRRDYMYIGERPIVEHLMYRDYLAKIDMNIAEGDRCTFVITKWVVRDNMRAFGYSPEFPFQKLFDNLLEHLVESGIVMYSLRKGLPDTQICPLDLGSKERQLQNTDLLMTYYIVAGGFIVSTVAFAGELLSKKCSGRVKSRKATASKDLFTISKKRKKGVLNEDHLFPPPPPYHALFKPPFPHSENAKTKTINGRDYWVVKSTDGDTRLIPIRAPSAFLFQYDN

>HoblIR93a

CKMLPVQLLIGLGFVNFVFSNNFPSLLSANATLAIVIDKEYLGDNYESIKSTIEDYIYITKRDRLKHGGINVFYYSWTSITIRKEISAILTIAS CADTWKLFKRANVENILHMAISESDCPRLPPNEGFTIPTIVRGEELPQILLDLRSIKAYDWQSVVILYDDSLGRDFVTRVLTSLTIDTKEVTGGGTAVSLIKLDKHNTGLDKTSIKNTLSTIAARLSGTNFLVIVSMELVTYVMETATALRLVDTNNQWLYVISNHKLNNKSISGILKNLKEGNNVAFLYNISTSGAKCKEGMECHIREMLDAFSNALDVAILDEFELAGQVSDEEWDAIRPTKLERRNFLLDTMKAYLIKNSVCGNCTAWQMQACDTWGKEFKTSSSSEFSLIQVGYWRLGSGPSMTDVLFPHVAHGFRGKSFPLISFHNPPWQIIKINKTGGANCRGLVFDIINELAKSLNFTYTVIVLDNGQNVSGNNSNYNNEISYGVTYTIPERVIEMVQNKFVFLAAAAYTVTEQSKTMVNFTMPVSTQTYSLLAARPKELSRALLFMSPFTYNTWLCLLLSIFVVGPLLYIVHKYSPANEYNGMNVRGGLSSVYNCIWYIYGALLQQGGLYLPYADSARIVVGAWWLVVLVLSTTYCGNLVAFLTFPNSDKPITTINELLNRRDTITWSITPASFFEYEIKMSNEPKHQILYQGSTKGIKNFEEMIKNIELGKHVHIDWKIRLQYIMKKQFLSKSTCDLSMSKEDFFEEKLGIIVAQDNPYLGRINREIKRLHQVGLIEKWLRDYLPKRDRCFKTKGGSGVNNHTVNLDDMQGCFFVLFLGCSISFLLICFERLFYKYQKKREKKVVQPFIS

>HoblIR68a

CINVLLFYFLQIFVQESEDLLSPHNKTQKSLLQIKHDDCQTYIILISNGQQVSRLLRYGDRYRILDTRAKFIMLHDHRLFHKSLHYLWKRIVNIIFIKEYVGMKKSGDTTIAIPWFEISTVPFPSPIHNVFVPKRLDIWRKSKFRSGVNLFQDKTSDLRNQTLNIVVMKHTPATTNTLLVQDDTVRAVMGDGSKGFAGLEVEILAAVSKAMNFKCKLYEAPNADVEFWGKKHPGGQYTGLIGEMIGGKADVALGDLYYTSYILELMDLTVPYNAECLTFLTPESLSDNSWKTLILPFKLFMWLAVIFCLFFCGIVFHYLAQFHCNINRLKRNAQNSDEIFPKKNQTLTLPTISIDQMNYNSKYFLMKQQFVTKRETNDPEGLYLFSDFSNSMLYTYSMLVMVSLPKLPTGWSLRMLVGWYWLYCTLVVVSYRASMTAILANPAPRVTIDTLQELVNSKLSYGSWSEVNKDLFKTSSDPISQTIGNNFQIIRNSSMAVEKVSEGKFALYENVYFLKEAFVIRQLQVQSATNSTENQVTEQVSNKPGERNLHIMKNCAINMPISIGLQKNSPIKPRADKYIRKVLEGGLIKKWLDDVMQPTLNAERPSTLQTTKALMSMQKFIGAIVALFIGYLIGFAALCTEIIYFHYIVKRHPNFNKYSRRIN

>Hobl SNMP1

MQFPARLALASGIILTCITIFGWVAFPNLIKSKIKTGVTLKPGSELREMYMKIPFAITFKIYVFNLTNPEDVAKGKTPIVQEVGPYMFEEWRSKVFVSEDDEDDTMTFYSKETFIFRPDQSSPLTGNEVLTIPHPLIVAILLTVVRDKPSALNLINKAMNSIFKNPKTPFLTATFKQIFFDGVIVNCSVSDFAGKAVCTQLKTEGAKDFEFIEENVFKFSLLGTKNGTASNKYKVKRGLKDYRDTGRVIEYNDMTELSVWPTKECNQFHGTEGTIFPGLTPHGSEIPSFAAMLCRSMGAKYLGDTKYNGIPVSRYTLDFGDQTNNPEDKCYCPSPDECMKKGVMDLRKCSGPVVASMPHFYNADPSYANGVKGVFPDKDKHELYLLFEITTGSPLAARNRLQFSMPLLPIPKVDVMKNCPDTLVPMFWVEESIDLNKTMTKPIKTMFVTMKTVRIISWIILLGTIGGLCYAAFLYYKRSREVQITPVKSVSQKKDNAISTVMTKSAGGVSNPAVSDNEIDKY

>Hobl SNMP2

MYKNCPIIVGVSGLAVLILGIVCTWYGFPALVESQINQNIILENGSQAFKVWQKQPFPLHFKVYFFNVTNPEEIMVGATPILREVGPYVYDLYIEREVTEVNEDADTIEYFLTKRFHFNPSMSGCRSDHEMVTIINAPLMGTLLKTNSISSHLLKMVHDGYQFIYPGIIDMFLRVQIKDLLFGGIPVYCSAQEITSLCSAMRFALPSTMKRAPNKMDFIFSMFGKFNETSFGPFEMTRGIKNTTRGSIISYQEEQMLDYWSGDLCNMLNGSDSGLYERMFEPVDKVYTFTPEICRSVGISFEKKMKKSNFVVYKYSGTQESLSHRGSDQCFCENVGDKNYECPLDGLVNLDSCLRAPIFMSNPHFYLADESLLNYTVGLAPRKRAHESFLILEPNTATPLKGAKRTQMNVEVKRFDLFPLTKYMPEGIFPILWIEEGMELPHNLLAHLENSFMKITMLDYIKWIIILAGIALMILSFILIMQQERLMCFSSKGSLTINDGKHMVTHIKAYDDMSFSPPSGYPKPDDPIFKLVAAHSNNNNNSSNVAWPYRE

2、將2日齡的華北大黑鰓金龜雄性成蟲(chóng)150頭置于3個(gè)80cm×80cm×80cm的有機(jī)玻璃箱中，頂端開(kāi)一個(gè)直徑1cm的小孔作透氣孔，養(yǎng)蟲(chóng)箱內(nèi)不放置任何寄主植物，饑餓處理24h；隨后將5個(gè)分別盛有1mL芳樟醇溶液玻璃瓶(5mL)分別放置于養(yǎng)蟲(chóng)箱的四個(gè)角落和中間，打開(kāi)玻璃瓶蓋子，瓶口封封口膜，封口膜上面用針扎5個(gè)小洞，用來(lái)緩慢揮發(fā)化合物，24h后提取華北大黑鰓金龜觸角總RNA，反轉(zhuǎn)錄成cDNA，用熒光定量PCR檢測(cè)不同嗅覺(jué)基因表達(dá)量的差異。同時(shí)以饑餓處理24h，正常飼養(yǎng)(以小葉女貞新鮮葉片飼養(yǎng))24h的成蟲(chóng)為對(duì)照，提取RNA，熒光定量檢測(cè)不同嗅覺(jué)基因表達(dá)量。以上處理設(shè)立3次重復(fù)。

以Actin為內(nèi)參基因，引物序列見(jiàn)表1；qPCR反應(yīng)體系及反應(yīng)條件如下：

qPCR反應(yīng)體系：

qPCR反應(yīng)程序：95℃預(yù)變性60s；95℃5s，60℃15s，40個(gè)循環(huán)。

結(jié)果表明，華北大黑鰓金龜雄蟲(chóng)對(duì)于其性信息素芳樟醇具有明顯的行為反應(yīng)，其在對(duì)芳樟醇的識(shí)別過(guò)程中，OBP作為信息化合物的運(yùn)輸載體，與芳樟醇識(shí)別相關(guān)的OBPs在其處理后表達(dá)量出現(xiàn)明顯變化。根據(jù)熒光定量PCR結(jié)果(圖1)，與飼喂新鮮樹(shù)葉的對(duì)照相比，利用芳樟醇處理華北大黑鰓金龜雄蟲(chóng)后多個(gè)OBPs基因表達(dá)量顯著增加，其中OBP7、8、9、11、13、15、27、28蛋白表達(dá)量增加3倍以上，這些蛋白均可能在芳樟醇的識(shí)別中具有重要作用。

與傳統(tǒng)的逐個(gè)OBP功能研究相比，本方法一次即可獲得多個(gè)與化合物相關(guān)的OBPs，效率明顯提高，且3次生物學(xué)重復(fù)試驗(yàn)穩(wěn)定，誤差小。

實(shí)施例2華北大黑鰓金龜觸角中識(shí)別寄主植物揮發(fā)物反-2-己烯醇?xì)馕督Y(jié)合蛋白的篩選

采用與實(shí)施例1相同的方法，用能引起華北大黑鰓金龜明顯行為反應(yīng)的寄主植物揮發(fā)物反-2-己烯醇處理華北大黑鰓金龜雌性成蟲(chóng)，同樣以饑餓處理24h，正常飼養(yǎng)(以小葉女貞新鮮葉片飼養(yǎng))24h的成蟲(chóng)為對(duì)照，提取RNA，熒光定量檢測(cè)不同嗅覺(jué)基因表達(dá)量。并設(shè)立3次重復(fù)。

結(jié)果表明，與飼喂新鮮樹(shù)葉的對(duì)照相比，利用反-2-己烯醇處理華北大黑鰓金龜雌蟲(chóng)后多個(gè)OBPs基因表達(dá)量顯著增加，其中OBP4、9、13蛋白表達(dá)量極顯著增加，OBP11和16蛋白表達(dá)量也明顯增加(圖2)，這些蛋白均可能在反-2-己烯醇的識(shí)別中具有重要作用。

雖然，上文中已經(jīng)用一般性說(shuō)明及具體實(shí)施方案對(duì)本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對(duì)之作一些修改或改進(jìn)，這對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見(jiàn)的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。

序列說(shuō)明：

SEQ ID NO:1-52為熒光定量PCR所用引物序列。其中，SEQ ID NO:1-2為一對(duì)引物組合，SEQ ID NO:3-4為一對(duì)引物組合，以此類(lèi)推。

序列表

<110> 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所

<120> 利用特異性揮發(fā)物篩選昆蟲(chóng)相關(guān)嗅覺(jué)蛋白的方法

<130> KHP161116845.4Q

<160> 52

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

gccgcctctt caacttcttt a 21

<210> 2

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

ccacaggatt ccatacccaa g 21

<210> 3

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

attgtgggag atgatggtg 19

<210> 4

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 4

cggttctgct tatccttgt 19

<210> 5

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 5

ggaacagata cccgacagt 19

<210> 6

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 6

gatgtccttg accttctcg 19

<210> 7

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 7

cactgttgcc tggcgactat 20

<210> 8

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 8

atccttcacc agagtcagcg 20

<210> 9

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 9

gctgcccttt ctttctatc 19

<210> 10

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 10

tctcctgacc atcctttg 18

<210> 11

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 11

agaccaagtt ccaaatcagg 20

<210> 12

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 12

tcccatcaat cctccgtta 19

<210> 13

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 13

tgggctttca gtgtcttg 18

<210> 14

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 14

ctctattcgt tgttccgtct 20

<210> 15

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 15

gacaaggagc aaagtcaatg 20

<210> 16

<211> 17

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 16

cagccgcctc taacaaa 17

<210> 17

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 17

ggaatgatga tgacgacg 18

<210> 18

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 18

cccctccaaa cttgaaac 18

<210> 19

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 19

aaatagcgac ggcaaagaca ga 22

<210> 20

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 20

cacccatcat tatcatcgga ag 22

<210> 21

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 21

aatgtatggc agagttaggc 20

<210> 22

<211> 17

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 22

ttcgtcgcaa tcgtcaa 17

<210> 23

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 23

tccgacaaca aaagaaggc 19

<210> 24

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 24

ctggcaagcg tccaatac 18

<210> 25

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 25

gccgaaaagg agacgatta 19

<210> 26

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 26

gttatggctg ggcgtttta 19

<210> 27

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 27

catacgcaga aaccgcaaca 20

<210> 28

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 28

aacacgcctt catccgcat 19

<210> 29

<211> 16

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 29

atgacgaagc cgcaca 16

<210> 30

<211> 17

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 30

aaccaatcca gcccagt 17

<210> 31

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 31

tccagcactc attgataagg 20

<210> 32

<211> 16

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 32

gtttcgcaag catccg 16

<210> 33

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 33

aatcgttgtc gctttatgtg 20

<210> 34

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 34

atttcggatc tactcctgtt g 21

<210> 35

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 35

cgacggcact tactgatga 19

<210> 36

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 36

ggatcgtttt cgatttctcc 20

<210> 37

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 37

ccagatagaa gctgccaagc 20

<210> 38

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 38

tcatgtcccc attttggtct 20

<210> 39

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 39

tggaagatgt ccaagccttc 20

<210> 40

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 40

tttggaagcc caatttcttg 20

<210> 41

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 41

cccgatactt cgttagtgat 20

<210> 42

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 42

cgttgctgat tcctgtttg 19

<210> 43

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 43

tgaatgccgt tttaggaatc 20

<210> 44

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 44

accattccat gcgttcct 18

<210> 45

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 45

gtcaatacat ccccaaccat 20

<210> 46

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 46

atttgattaa cgatggtggc 20

<210> 47

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 47

gaagagttag gtttaggacc aa 22

<210> 48

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 48

gccgcaatca tcatcaccag tt 22

<210> 49

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 49

gaaatatctc caggaatg 18

<210> 50

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 50

ggtaacaggc taacaaac 18

<210> 51

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 51

ggacagtagc gtcataaa 18

<210> 52

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 52

aatcttcaat cgtctcgt 18