專利名稱：乳粉蛋白質(zhì)含量快速檢測(cè)試劑盒及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于檢測(cè)乳粉中蛋白質(zhì)含量的試劑盒。具體涉及基于雙縮脲法，利用比色卡測(cè)定乳粉中蛋白質(zhì)含量的試劑盒及其制造方法和蛋白質(zhì)含量的檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
乳粉是消費(fèi)者，尤其是嬰幼兒的一種重要食物來(lái)源。其蛋白質(zhì)含量的高低是乳粉質(zhì)量?jī)?yōu)劣的重要指標(biāo)?，F(xiàn)行乳粉中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定方法采用GB/T5413.1-1997《嬰幼兒配方食品和乳粉蛋白質(zhì)的測(cè)定》中規(guī)定的凱氏定氮法。該方法是將乳粉樣品與濃硫酸和催化劑一同加熱消化，使蛋白質(zhì)分解，其中碳和氫被氧化為二氧化碳和水逸出反應(yīng)溶液，而樣品中的有機(jī)氮轉(zhuǎn)化為氨，并與硫酸結(jié)合成硫酸銨；然后加入堿進(jìn)行蒸餾，使氨逸出溶液，并用硼酸溶液吸收逸出的氨；最后以標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液滴定吸收了氨的硼酸溶液。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)硼酸銨溶液所消耗的鹽酸量計(jì)算乳粉樣品中的蛋白質(zhì)含量。該方法的優(yōu)點(diǎn)是檢測(cè)精度高。但是其檢測(cè)步驟繁瑣，所需的測(cè)定時(shí)間較長(zhǎng)。另外，需要配備多種的儀器設(shè)備；所用的一些試劑，比如濃硫酸等，具有較高的危險(xiǎn)性；樣品消化過(guò)程中還會(huì)產(chǎn)生有毒有害氣體。因而對(duì)實(shí)驗(yàn)條件和操作人員的實(shí)驗(yàn)技能要求較高，檢測(cè)成本也較高?？梢?jiàn)，該方法只能在具備必要設(shè)備和條件的實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行，而難以在乳粉的存放或銷售等流通環(huán)節(jié)中對(duì)其蛋白質(zhì)含量進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)的快速測(cè)定。這給乳粉產(chǎn)品的質(zhì)量監(jiān)測(cè)工作造成了極大的制約和不便，不利于對(duì)劣質(zhì)乳粉的查剿。
另一種常用的蛋白質(zhì)含量的測(cè)定方法是雙縮脲法。眾所周知，雙縮脲與堿及少量硫酸銅溶液作用生成紫紅色的配合物，此反應(yīng)稱為雙縮脲反應(yīng)。由于蛋白質(zhì)分子中含有肽鍵(-CO-NH-)，與雙縮脲結(jié)構(gòu)相似，故也能呈現(xiàn)此反應(yīng)而生成紫紅色配合物。并且在一定范圍內(nèi)其顏色深淺與蛋白質(zhì)含量成正比。據(jù)此可用吸收光度法來(lái)測(cè)定蛋白質(zhì)含量?；蛘呖梢灾谱飨盗斜壬埽员壬▉?lái)測(cè)定蛋白質(zhì)含量。但常規(guī)的雙縮脲法需要在每次測(cè)定前預(yù)先配制標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)含量比色管系列或用分光光度計(jì)測(cè)定一系列標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液的吸光度值繪制“蛋白質(zhì)濃度-吸光度”的標(biāo)準(zhǔn)曲線。并且在測(cè)定乳粉樣品中的蛋白質(zhì)含量時(shí)步驟也較為繁瑣首先需要精確稱取一定的乳粉樣品、定容、取一定量溶液加入雙縮脲試劑、混勻；然后離心取上清液與標(biāo)準(zhǔn)比色管系列進(jìn)行比色，或者用分光光度計(jì)測(cè)定吸光度值后，對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線得到對(duì)應(yīng)的蛋白質(zhì)含量?？梢?jiàn)，常規(guī)雙縮脲法同樣存在操作繁瑣、所需儀器設(shè)備多、耗時(shí)的缺點(diǎn)。因此該方法也不適合對(duì)乳粉產(chǎn)品中的蛋白質(zhì)含量進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)。
目前，乳粉產(chǎn)品種類繁多，產(chǎn)品質(zhì)量也魚(yú)龍混雜。特別在一些小城鎮(zhèn)和鄉(xiāng)村，由于缺乏簡(jiǎn)便、有效的檢測(cè)手段，一些劣質(zhì)乳粉已經(jīng)危害到人們，特別是嬰幼兒的身體健康，有的還造成了嚴(yán)重的后果。因此，有必要開(kāi)發(fā)一種適于現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)乳粉蛋白質(zhì)含量的檢測(cè)試劑盒。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種乳粉蛋白質(zhì)含量快速檢測(cè)試劑盒，該試劑盒包括乳粉蛋白質(zhì)含量標(biāo)準(zhǔn)比色卡、取樣器、透明刻度容器和雙縮脲顯色液。
在該試劑盒中，所述乳粉蛋白質(zhì)含量標(biāo)準(zhǔn)比色卡是一系列含有乳粉的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液與雙縮脲試劑混合后溶液顏色的色帶。
并且該試劑盒中，所述混合后的溶液中蛋白質(zhì)的濃度在0-2mg/ml的范圍內(nèi)。
該試劑盒中的乳粉蛋白質(zhì)含量標(biāo)準(zhǔn)比色卡具有至少2條以上的色帶，優(yōu)選具有3-6條色帶。
該試劑盒中的取樣器具有容納固定量的乳粉的部件，該部件具有的內(nèi)容積在可容納10-400mg乳粉的范圍內(nèi)變化，優(yōu)選可容納30-80mg乳粉的范圍內(nèi)變化。
本發(fā)明的試劑盒可進(jìn)一步包括一種或多種選自如下組中的物品試管架、試管和滴管。
本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種制造上述乳粉蛋白質(zhì)含量快速檢測(cè)試劑盒的方法，該方法包括一個(gè)制造乳粉蛋白質(zhì)含量標(biāo)準(zhǔn)比色卡的步驟，其中包括以下步驟用已知蛋白質(zhì)含量的乳粉和標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)試劑配制含有乳粉的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液系列；按照一定比例混合上述標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液和雙縮脲試劑以獲得混合溶液；對(duì)混合溶液拍照；和用圖像處理軟件處理所得的照片，得到色帶并輸出。
該方法中所述混合溶液中的蛋白質(zhì)濃度在0-2mg/ml的范圍內(nèi)。
本發(fā)明的乳粉蛋白質(zhì)含量快速檢測(cè)試劑盒是一種半定量檢測(cè)試劑盒。該試劑盒裝備簡(jiǎn)單，便于攜帶。而且檢測(cè)中不需其它輔助儀器和設(shè)備，對(duì)檢測(cè)環(huán)境也沒(méi)有特殊要求，檢測(cè)成本低，檢測(cè)時(shí)間短。特別是采用該試劑盒檢測(cè)乳粉中蛋白質(zhì)含量的方法操作簡(jiǎn)便，對(duì)檢測(cè)人員沒(méi)有特殊要求。采用該試劑盒可以當(dāng)場(chǎng)了解被檢產(chǎn)品的蛋白質(zhì)含量是否與標(biāo)稱含量相符，特別是是否符合國(guó)家乳粉制品標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的蛋白質(zhì)含量。這就為商品檢驗(yàn)人員對(duì)乳粉市場(chǎng)進(jìn)行廣泛、經(jīng)常的監(jiān)測(cè)和進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)執(zhí)法提供了可能。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明提供了一種乳粉蛋白質(zhì)含量快速檢測(cè)試劑盒，該試劑盒包括乳粉蛋白質(zhì)含量標(biāo)準(zhǔn)比色卡、取樣器、透明刻度容器和雙縮脲顯色液。
本發(fā)明的試劑盒是基于雙縮脲法檢測(cè)蛋白質(zhì)含量的原理，并結(jié)合乳粉產(chǎn)品的特點(diǎn)而設(shè)計(jì)的。
乳粉中除了含有蛋白質(zhì)外，還含有脂類、糖類、維生素、礦物質(zhì)等多種成分。其水溶液為乳濁液，無(wú)法直接測(cè)定吸光度或進(jìn)行比色。因此，采用雙縮脲法時(shí)，需要向含有乳粉樣品的雙縮脲溶液中加入四氯化碳，振蕩后靜置一段時(shí)間，然后取上清液進(jìn)行離心。再用離心后的上清液進(jìn)行檢測(cè)。這樣不僅步驟繁瑣、耗時(shí)，而且還需要用到四氯化碳、離心機(jī)等試劑和設(shè)備。
為避免常規(guī)雙縮脲法檢測(cè)中存在的這些繁瑣步驟，以及試劑、設(shè)備，本發(fā)明采用已知蛋白質(zhì)含量的乳粉來(lái)配制標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液，并制作比色卡。這樣比色卡中就摻入了乳粉的乳濁液的白色色調(diào)，從而使本發(fā)明的比色卡與實(shí)際乳粉樣品溶液的背景色澤、色調(diào)一致，利于檢測(cè)者用肉眼直接比色判斷，大大簡(jiǎn)化了檢測(cè)中為獲得蛋白質(zhì)上清液而進(jìn)行的繁瑣步驟。
根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 5410-1999《全脂乳粉、脫脂乳粉、全脂加糖乳粉和調(diào)味乳粉》中的規(guī)定，全脂乳粉中的蛋白質(zhì)的含量應(yīng)大于或等于乳粉中非脂乳固體的34wt％，脫脂乳粉中的蛋白質(zhì)的含量應(yīng)大于或等于乳粉中非脂乳固體的34wt％，全脂加糖乳粉中的蛋白質(zhì)的含量應(yīng)大于或等于乳粉的18.5wt％，全脂調(diào)味乳粉中的蛋白質(zhì)的含量應(yīng)大于或等于乳粉的16.5wt％，脫脂調(diào)味乳粉的蛋白質(zhì)的含量應(yīng)大于或等于乳粉的22.0wt％。在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB10765-1997《嬰兒配方乳粉I》和GB 10765-1997《嬰兒配方乳粉II、III》中規(guī)定，蛋白質(zhì)含量分別為≥18.0wt％和12.0wt％-18.0wt％。
據(jù)此，以待測(cè)乳粉樣品的總重量為100wt％計(jì)，本發(fā)明的乳粉蛋白質(zhì)含量標(biāo)準(zhǔn)比色卡所表示的蛋白質(zhì)含量范圍設(shè)定為0-35wt％。根據(jù)現(xiàn)行的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，各種乳粉中的蛋白質(zhì)含量均在12wt％以上，低含量出現(xiàn)的可能性較小，而多數(shù)乳粉產(chǎn)品的蛋白質(zhì)含量在20wt％左右。因此，優(yōu)選的檢測(cè)范圍為5-25wt％。也可以將檢測(cè)范圍設(shè)定為10-20wt％，因?yàn)樵谠摲秶鷥?nèi)，根據(jù)本發(fā)明的方法，顏色的變化對(duì)于肉眼來(lái)說(shuō)最容易分辨。
此外，在常規(guī)的雙縮脲法中，通常將含有蛋白質(zhì)的樣品溶液與雙縮脲試劑按照一定比例，例如以1∶4的比例進(jìn)行混合?；旌虾蟮娜芤褐械鞍踪|(zhì)的濃度在0-約2mg/ml的范圍內(nèi)，這時(shí)混合溶液的顏色變化與蛋白質(zhì)濃度呈線性關(guān)系。因此本發(fā)明的標(biāo)準(zhǔn)比色卡中每條色帶所對(duì)應(yīng)的蛋白質(zhì)的實(shí)際濃度也在0-2mg/ml的范圍內(nèi)。
本發(fā)明的比色卡的色帶數(shù)目至少為2條，最多可直至形成連續(xù)的色帶。從降低制造成本和實(shí)際使用效果的角度考慮，優(yōu)選的色帶數(shù)目為3-6條。
同時(shí)，為了進(jìn)一步簡(jiǎn)化檢測(cè)步驟，降低檢測(cè)成本，簡(jiǎn)化試劑盒的裝備，根據(jù)一定體積乳粉的重量是一定的原理，本發(fā)明的試劑盒中設(shè)置了取樣器以代替天平等稱量設(shè)備。該取樣器具有可容納固定量乳粉的部件，其所具有的內(nèi)容積可盛取與預(yù)先設(shè)計(jì)的取樣量相一致乳粉樣品。
如上所述，在樣品與雙縮脲試劑的混合溶液中，蛋白質(zhì)的濃度應(yīng)在0-2mg/ml范圍內(nèi)。因此，樣品的取樣量應(yīng)與混合溶液的體積相適應(yīng)，使其中的蛋白質(zhì)含量落在0-2mg/ml的范圍內(nèi)。如果混合溶液的體積為4-50ml時(shí)，乳粉樣品的取樣量相應(yīng)地在約10-400mg的范圍內(nèi)變化。優(yōu)選為30-80mg。如果取樣量低于10mg，將會(huì)增大檢測(cè)誤差。如果取樣量超過(guò)400mg，則還需要相應(yīng)地增大反應(yīng)體系以保證體系中的蛋白質(zhì)濃度落在線性范圍內(nèi)。但是對(duì)于大的反應(yīng)體系必須配備較大的反應(yīng)容器，這將使本發(fā)明的試劑盒具有較大的體積而不方便攜帶。因此，雖然可以采用更大的取樣量，但不是本發(fā)明的試劑盒所優(yōu)選的。
根據(jù)上述的取樣原則，本發(fā)明的取樣器的可容納固定量乳粉的部件所具有的內(nèi)容積也相應(yīng)的可容納10-400mg，優(yōu)選30-80mg的乳粉。該取樣器通常為勺形，還可以為任何合適的形狀，比如帶有手柄的中空半球體、圓柱體、圓錐體、棱柱體等。取樣器可用任何合適的材料制成，比如塑料、金屬、玻璃等。
本發(fā)明的試劑盒還包括用于進(jìn)行顯色反應(yīng)的帶有刻度的透明容器，用于量取雙縮脲顯色液，同時(shí)也作為反應(yīng)容器，使雙縮脲顯色液與乳粉樣品進(jìn)行顯色反應(yīng)。該容器的容積應(yīng)便于操作和攜帶，其刻度應(yīng)與取樣量相適應(yīng)。當(dāng)然，帶有刻度的容器也可以用量筒和不帶有刻度的容器，如試管等的組合來(lái)代替。所述容器可以為任何合適的材料制成，比如玻璃、透明塑料等。從耐用性方面考慮，優(yōu)選采用透明塑料容器。
另外，本發(fā)明的試劑盒還包括雙縮脲顯色液。該顯色液可按照常規(guī)雙縮脲法中的方法進(jìn)行配制，然后適當(dāng)稀釋即可直接用于檢測(cè)。
為了進(jìn)一步方便操作，本發(fā)明的試劑盒可進(jìn)一步包括試管架、滴管等輔助器材。此外，該試劑盒還可配備使用說(shuō)明書(shū)，以指導(dǎo)操作人員正確操作和作出準(zhǔn)確判斷。
本發(fā)明的乳粉蛋白質(zhì)快速檢測(cè)試劑盒的制造方法包括制造標(biāo)準(zhǔn)比色卡的步驟，其中包括以下步驟用已知蛋白質(zhì)含量的乳粉和蛋白質(zhì)試劑配制含有乳粉的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液系列；按照一定比例混合上述標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液和雙縮脲試劑以獲得混合溶液；對(duì)混合溶液拍照；和用圖像處理軟件處理所得的照片，得到色帶并輸出。
為了得到具有真實(shí)乳粉溶液背景的比色卡，需要采用已知蛋白質(zhì)含量的乳粉來(lái)配制標(biāo)準(zhǔn)溶液。用凱氏定氮法精確測(cè)得某乳粉中的蛋白質(zhì)含量。然后，用該乳粉和標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)試劑配合使用，配成含有乳粉的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液系列。例如使該系列標(biāo)準(zhǔn)溶液中的蛋白質(zhì)濃度在0-10mg/ml的范圍內(nèi)分布。
雙縮脲試劑是預(yù)先制備好的，可采用常規(guī)的方法制備。然后，分別將一定量的雙縮脲試劑與以上配制的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液混合，例如以標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液與雙縮脲試劑以1∶3或1∶4倍的比例混合。選取適當(dāng)?shù)幕旌媳壤够旌先芤褐械牡鞍踪|(zhì)含量在0-2mg/ml的范圍內(nèi)?；靹蚝箪o置2-10分鐘。然后，用相機(jī)照相，并將圖片輸入計(jì)算機(jī)。方便起見(jiàn)可用數(shù)碼相機(jī)拍照。然后對(duì)照混合溶液的顏色，用photoshop、fireworks等圖像處理軟件對(duì)各照片進(jìn)行處理，得到色帶。為方便讀取測(cè)得的乳粉中蛋白質(zhì)含量，還可將每條色帶所代表的實(shí)際蛋白質(zhì)濃度折算為對(duì)應(yīng)的乳粉樣品中的蛋白質(zhì)含量，并標(biāo)在色帶下面。最后，彩色打印輸出所得色帶，即得到本發(fā)明試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)比色卡。為防止使用中色帶被污染或損壞，可對(duì)比色卡進(jìn)行塑封。
制備標(biāo)準(zhǔn)比色卡所用的乳粉種類對(duì)比色卡的色調(diào)影響不大，肉眼難以分辨由乳粉種類不同帶來(lái)的變化。
將制得的乳粉蛋白質(zhì)含量標(biāo)準(zhǔn)比色卡、雙縮脲顯色液、取樣器、透明刻度容器以及可選配的其它物品，例如說(shuō)明書(shū)、量筒、試管架、試管、滴管等裝在一個(gè)盒子里就組成了本發(fā)明的乳粉蛋白質(zhì)含量快速檢測(cè)試劑盒。
采用本發(fā)明的乳粉蛋白質(zhì)含量快速檢測(cè)試劑盒，可在任何環(huán)境下快速測(cè)定乳粉樣品中蛋白質(zhì)含量。
具體的做法是用取樣器取預(yù)定量的乳粉樣品于透明容器中，向該容器中加入預(yù)定量的雙縮脲顯色液并混勻，然后將所得溶液與標(biāo)準(zhǔn)比色卡對(duì)照，即可讀取比色卡上對(duì)應(yīng)顏色的蛋白質(zhì)含量。
當(dāng)乳粉產(chǎn)品的標(biāo)稱蛋白質(zhì)含量高于比色卡的檢測(cè)范圍時(shí)，可采用2倍稀釋法測(cè)得1/2的蛋白質(zhì)含量，再乘以2即可。具體做法是取2倍預(yù)定量的雙縮脲顯色液，用取樣器量取乳粉樣品并加入顯色液中，充分混勻，靜置幾分鐘，然后與標(biāo)準(zhǔn)比色卡對(duì)照，將讀數(shù)乘以2即得到乳粉樣品中的蛋白質(zhì)含量?；蛘呷?份預(yù)定量的雙縮脲顯色液，用取樣器量取乳粉樣品并加入顯色液中，充分混勻，然后用量筒量取適量的溶液，再加入同等體積的顯色液混合，與標(biāo)準(zhǔn)比色卡對(duì)照，將讀數(shù)乘以2即得到乳粉樣品中的蛋白質(zhì)含量。
通常，乳粉產(chǎn)品中的蛋白質(zhì)含量應(yīng)大于10wt％，低于35wt％。對(duì)于檢測(cè)值低于10wt％的產(chǎn)品，可以暫列為不達(dá)標(biāo)的可疑劣質(zhì)產(chǎn)品，先期采取必要的措施后，再用國(guó)標(biāo)中規(guī)定的凱氏定氮法進(jìn)行進(jìn)一步精確測(cè)定。這樣就可以防止檢測(cè)期間劣質(zhì)產(chǎn)品的進(jìn)一步流通，或不法分子逃逸。
以下結(jié)合實(shí)施例具體說(shuō)明本發(fā)明的乳粉蛋白質(zhì)含量快速檢測(cè)試劑盒，其制備方法以及其檢測(cè)方法，但不是對(duì)本發(fā)明的限制。
實(shí)施例1制備包括6色帶比色卡的試劑盒設(shè)定乳粉蛋白質(zhì)含量快速檢測(cè)試劑盒中的比色卡共有6個(gè)色帶，分別代表的蛋白質(zhì)濃度為0、1.5、3.0、4.5、6.0和7.5mg/ml；乳粉樣品的取樣量為30mg，最終溶液體積為4ml；則比色卡對(duì)應(yīng)的乳粉樣品的蛋白質(zhì)含量為0、5、10、15、20和25wt％。
標(biāo)準(zhǔn)比色卡的制作首先配制10％氫氧化鈉溶液備用。
其次，配制雙縮脲試劑。稱取1.5g硫酸銅(CuSO4·5H2O，分析純，購(gòu)自北京化工廠)和6.0g酒石酸鉀鈉(NaKC4H4O6·4H2O，分析純，購(gòu)自北京化學(xué)試劑公司)，用500ml水溶解，然后在攪拌下加入300ml 10％氫氧化鈉溶液，最后用蒸餾水稀釋到1000ml，儲(chǔ)存于塑料瓶中。
雙縮脲試劑可長(zhǎng)期使用，密閉儲(chǔ)存，室溫下可保存3-6個(gè)月，4℃可保存1年，若出現(xiàn)沉淀則不能使用。
然后，用凱氏定氮法精確測(cè)得某乳粉中的蛋白質(zhì)含量為24.38wt％。準(zhǔn)確稱取一定量的該乳粉，配成1.5mg/ml的乳粉標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液。然后分別稱取一定量的牛血清白蛋白(購(gòu)自Roche公司)用上述乳粉標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液依次配制成總蛋白質(zhì)含量為3.0、4.5、6.0和7.5mg/ml標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液。以蒸餾水作為空白，形成梯度為0、1.5、3.0、4.5、6.0和7.5mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液系列。分別取1毫升標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液注入6只試管中，加入以上配制的3毫升雙縮脲試劑，充分混勻，靜置2分鐘，用奧林巴斯U600數(shù)碼相機(jī)拍照，將圖片輸入計(jì)算機(jī)。對(duì)照上述6個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液，用photoshop軟件處理圖片，得到6條分別與標(biāo)準(zhǔn)溶液顏色一致的色帶。在6條色帶下標(biāo)明蛋白質(zhì)含量值為0、5、10、15、20、25(g/100g乳粉樣品)。彩色打印輸出該比色卡。
制備試劑盒中的雙縮脲顯色液將3份上述配制的雙縮脲試劑與1份蒸餾水混合，裝入密封性能良好的塑料瓶中，作為試劑盒中的雙縮脲顯色液。
配制其它物品30mg取樣器一個(gè)，其容納樣品的部件為中空的半球體，帶有一個(gè)長(zhǎng)的手柄，由塑料制成；刻度塑料試管若干，均在2ml和4ml處進(jìn)行標(biāo)示；試管架一個(gè)；使用說(shuō)明書(shū)一份。
實(shí)施例2制備3色帶比色卡的試劑盒設(shè)定乳粉蛋白質(zhì)含量快速檢測(cè)試劑盒中的比色卡共有3個(gè)色帶，分別代表的蛋白質(zhì)濃度為4.0、6.0和8.0mg/ml；乳粉樣品的取樣量為80mg，最終顯色溶液體積為10ml；則比色卡對(duì)應(yīng)的乳粉樣品的蛋白質(zhì)含量為10、15和20wt％。
標(biāo)準(zhǔn)比色卡的制作按照實(shí)施例1中的方法配制雙縮脲試劑備用。
然后，準(zhǔn)確稱取一定量的已知蛋白質(zhì)含量為24.38wt％的乳粉，配成4.0mg/ml的乳粉標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液。然后分別稱取一定量的牛血清白蛋白(購(gòu)自Roche公司)用上述乳粉標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液依次配制成總蛋白質(zhì)含量為6.0和8.0mg/ml標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液。形成梯度為4.0、6.0和8.0mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液系列。分別取2毫升標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液注入3只試管中，加入以上配制的8毫升雙縮脲試劑，充分混勻，靜置2分鐘，用奧林巴斯U600數(shù)碼相機(jī)拍照，將圖片輸入計(jì)算機(jī)。對(duì)照上述3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液，用photoshop軟件處理圖片，得到3條分別與標(biāo)準(zhǔn)溶液顏色一致的色帶。在3條色帶下標(biāo)明蛋白質(zhì)含量值為10、15、20(g/100g乳粉樣品)。彩色打印輸出該比色卡并進(jìn)行塑封。
制備試劑盒中的雙縮脲顯色液將4份上述配制的雙縮脲試劑與1份蒸餾水混合，裝入密封性能良好的塑料瓶中，作為試劑盒中的雙縮脲顯色液。
配制其它物品80mg取樣器一個(gè)，其容納樣品的部件為中空的圓錐體，帶有一個(gè)長(zhǎng)的手柄，由不銹鋼制成；10ml的量筒一個(gè)；25ml的試管若干；滴管若干；試管架一個(gè)；使用說(shuō)明書(shū)一份。
實(shí)施例3制備4色帶比色卡的試劑盒設(shè)定乳粉蛋白質(zhì)含量快速檢測(cè)試劑盒中的比色卡共有4個(gè)色帶，分別代表的蛋白質(zhì)濃度為4.0、6.0、8.0和10.0mg/ml；乳粉樣品的取樣量為160mg，最終顯色溶液體積為25ml；則比色卡對(duì)應(yīng)的乳粉樣品的蛋白質(zhì)含量為10、15、20和25wt％。
標(biāo)準(zhǔn)比色卡的制作按照實(shí)施例1中的方法配制雙縮脲顯色液備用。
然后，準(zhǔn)確稱取一定量的已知蛋白質(zhì)含量為24.38wt％的乳粉，配成4.0mg/ml的乳粉標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液。然后分別稱取一定量牛血清白蛋白(購(gòu)自Roche公司)用上述乳粉標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液依次配制成總蛋白質(zhì)含量為6.0、8.0和10.0mg/ml標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液。形成梯度為4.0、6.0、8.0和10.0mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液系列。分別取5毫升標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液注入4只試管中，加入以上配制的20毫升雙縮脲試劑，充分混勻，靜置2分鐘，用奧林巴斯U600數(shù)碼相機(jī)拍照，將圖片輸入計(jì)算機(jī)。對(duì)照上述4個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液，用photoshop軟件處理圖片，得到4條分別與標(biāo)準(zhǔn)溶液顏色一致的色帶。在4條色帶下分別標(biāo)明蛋白質(zhì)含量值為10、15、20和25(g/100g乳粉樣品)。彩色打印輸出該比色卡并進(jìn)行塑封。
制備試劑盒中的雙縮脲顯色液將4份上述配制的雙縮脲試劑與1份蒸餾水混合，裝入密封性能良好的塑料瓶中，作為劑盒中的雙縮脲顯色液。
配制其它物品160mg取樣器一個(gè)，其容納樣品的部件為中空的半球體，帶有一個(gè)長(zhǎng)的手柄，由塑料制成；50ml容量的透明塑料管若干，每5ml處進(jìn)行標(biāo)示，標(biāo)示到25ml；使用說(shuō)明書(shū)一份。
實(shí)施例4用實(shí)施例1的試劑盒檢測(cè)乳粉樣品的蛋白質(zhì)含量從商場(chǎng)購(gòu)得不同品牌、不同種類的乳粉產(chǎn)品共5種，分別編號(hào)為A全脂甜乳粉、B全脂乳粉、C加鋅乳粉、D嬰兒配方乳粉、E全脂甜乳粉。用實(shí)施例1中制造的試劑盒檢測(cè)這5種乳粉產(chǎn)品的蛋白質(zhì)含量。
用刻度試管量取4毫升雙縮脲顯色液，然后用取樣器取一平勺乳粉樣品加入試管中，充分混勻，靜置2分鐘，然后與乳粉蛋白質(zhì)含量標(biāo)準(zhǔn)比色卡對(duì)照。結(jié)果如下表1。

表1實(shí)施例5用實(shí)施例2的試劑盒檢測(cè)乳粉樣品的蛋白質(zhì)含量用實(shí)施例2中制造的試劑盒檢測(cè)上述實(shí)施例4中的5種乳粉產(chǎn)品的蛋白質(zhì)含量。
用量筒量取10毫升雙縮脲顯色液加入試管中，然后用取樣器取一平勺乳粉樣品加入試管中，充分混勻，靜置2分鐘，然后與乳粉蛋白質(zhì)含量標(biāo)準(zhǔn)比色卡對(duì)照。由于B樣品的標(biāo)稱含量超過(guò)了比色卡的測(cè)量范圍，因此采用2倍稀釋的方法。用量筒量取10毫升雙縮脲顯色液加入試管中，然后用取樣器取一平勺乳粉樣品加入試管中，充分混勻。量取5ml的混合液于另一試管中，再加入5ml顯色液混勻，靜置2分鐘，然后與乳粉蛋白質(zhì)含量標(biāo)準(zhǔn)比色卡對(duì)照后將讀數(shù)乘2即為B樣品的蛋白質(zhì)含量。結(jié)果如下表2。

表2對(duì)比例1用凱氏定氮法檢測(cè)乳粉樣品的蛋白質(zhì)含量用凱氏定氮法測(cè)定上述實(shí)施例4中的5種乳粉樣品中的蛋白質(zhì)含量。
所需的主要儀器設(shè)備包括凱氏燒瓶(500ml)、定氮蒸餾裝置、分析天平、高溫爐、容量瓶、酸性滴定管、量筒、通風(fēng)柜等所用試劑主要有濃硫酸、硫酸銅、硫酸鉀、40％氫氧化鈉溶液、4％硼酸吸收液(稱取20g硼酸溶解于500ml熱水中，搖勻備用)、甲基紅-溴甲酚綠混合指示劑(5份0.2％溴甲酚綠的乙醇溶液與1份0.2％甲基紅乙醇溶液混合均勻)、0.1000mol/l鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液等。所用試劑均為分析純，購(gòu)自北京化學(xué)試劑公司。
具體檢測(cè)步驟如下分別準(zhǔn)確稱取樣品A、B、C、D、E各0.2g，小心移入干燥潔凈的500ml凱氏燒瓶中，然后加入研細(xì)的硫酸銅0.5g、硫酸鉀10g和濃硫酸20ml，輕輕搖勻后，按裝消化裝置，于凱氏瓶口放一小漏斗，并將其以45°斜支于有小孔的石棉網(wǎng)上。用電爐以小火加熱，待內(nèi)容物全部炭化，泡沫停止產(chǎn)生后，加大火力，保持瓶?jī)?nèi)液體微沸，至液體變藍(lán)綠色透明后，再繼續(xù)加熱微沸30min。冷卻后，小心加入100ml蒸餾水，冷卻至室溫，轉(zhuǎn)入200ml容量瓶中，定容。
然后用20ml移液管取20ml加入蒸餾燒瓶?jī)?nèi)，加入100ml蒸餾水，加入玻璃珠數(shù)粒以防蒸餾時(shí)爆沸。連好蒸餾裝置，塞緊瓶口，冷凝管下端插入吸收瓶液面下(瓶?jī)?nèi)預(yù)先裝入50ml 14％硼酸溶液及混合指示劑2-3滴)。放松夾子，通過(guò)漏斗加入70-80ml 40％氫氧化鈉溶液，并搖動(dòng)蒸餾燒瓶，至瓶?jī)?nèi)溶液度為深藍(lán)色，或產(chǎn)生黑色沉淀，再加入100ml蒸餾水(從漏斗中加入)，夾緊夾子，加熱蒸餾，至氨全部蒸出(餾液約250ml即可)，將冷凝管下端提離液面，用蒸餾水沖洗管口，繼續(xù)蒸餾1min，用表面皿接幾滴餾出液，以奈氏試劑檢查，如無(wú)紅棕色物生成，表示蒸餾完畢，即可停止加熱。
將上述吸收液用0.1000mol/l鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液直接滴定至由藍(lán)色變?yōu)槲⒓t色即為終點(diǎn)，記錄鹽酸溶液用量，同時(shí)做一份試劑空白(除不加樣品外，從消化開(kāi)始操作完全相同)作為對(duì)照，記錄空白試驗(yàn)消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積。
按照下式計(jì)算結(jié)果 其中C為鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度(mol/l)；
V1為滴定樣品吸收液時(shí)所消耗的鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積(ml)；V2為滴定空白吸收液時(shí)所消耗的鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積(ml)；M為樣品的質(zhì)量(g)；M氮為氮的摩爾質(zhì)量(14.01g/mol)；F為氮換算為蛋白質(zhì)的系數(shù)6.38。
結(jié)果如下表3所示

表3對(duì)比例2；用雙縮脲法檢測(cè)乳粉樣品的蛋白質(zhì)含量用常規(guī)雙縮脲法測(cè)定上述實(shí)施例4中的5種乳粉樣品中的蛋白質(zhì)含量。
所用主要儀器有分光光度計(jì)、離心機(jī)(4000rpm)、分析天平、容量瓶、納氏比色管等。
主要試劑有10％氫氧化鈉溶液、雙縮脲試劑、四氯化碳等。以上試劑均為分析純，購(gòu)自北京化學(xué)試劑公司。
具體檢測(cè)步驟為分別精確稱取牛血清白蛋白40mg、50mg、60mg、70mg、80mg、90mg、100mg和110mg，放入8支50ml納氏比色管中，然后各加入1ml四氯化碳，再用雙縮脲試劑準(zhǔn)確稀釋至50ml，振搖10min，靜置1h，取上層清液離心5min，取離心分離后的透明液于比色皿中，在560nm波長(zhǎng)下以蒸餾水作參比液調(diào)節(jié)儀器(722型分光光度計(jì)，上海精密儀器儀表有限公司)零點(diǎn)并測(cè)定各溶液的吸光度A，以蛋白質(zhì)質(zhì)量為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
準(zhǔn)確稱取乳粉樣品適量，使得其中蛋白質(zhì)的量在40～110mg之間。加入50ml納氏比色管中，加1ml四氯化碳，按上述步驟顯色后，在相同條件下測(cè)定其吸光度A。用測(cè)得的A值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上即可查得被測(cè)樣品中的蛋白質(zhì)的質(zhì)量(mg)，進(jìn)而由此求得乳粉樣品中的蛋白質(zhì)含量。
按照下式計(jì)算結(jié)果蛋白質(zhì)含量(g/100g)＝(C/M)×100其中C為由標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的蛋白質(zhì)質(zhì)量(mg)；M為所稱取的乳粉樣品質(zhì)量(mg)。
結(jié)果如下表4所示

表4對(duì)以上實(shí)施例3、4以及對(duì)比例1、2所測(cè)得的乳粉樣品中蛋白質(zhì)含量的結(jié)果與乳粉樣品的標(biāo)稱蛋白質(zhì)含量在以下表5中進(jìn)行對(duì)比。

表5對(duì)采用本發(fā)明的乳粉蛋白質(zhì)含量快速檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)方法、凱氏定氮法和常規(guī)雙縮脲法所用的儀器設(shè)備、試劑、具體步驟、檢測(cè)時(shí)間、人員和場(chǎng)地要求以及檢測(cè)結(jié)果等進(jìn)行比較(見(jiàn)表6)。

表6
由以上對(duì)比結(jié)果可以看出，本發(fā)明根據(jù)雙縮脲法原理，結(jié)合乳粉檢測(cè)的特點(diǎn)進(jìn)行改進(jìn)，提供了一種乳粉蛋白質(zhì)含量快速檢測(cè)試劑盒。本發(fā)明的試劑盒具有使用簡(jiǎn)便、檢測(cè)快捷以及便于攜帶的特定。采用本發(fā)明試劑盒的檢測(cè)效率較常規(guī)雙縮脲法提高6倍以上，較凱氏定氮法提高20倍以上，適用于現(xiàn)場(chǎng)對(duì)乳粉蛋白質(zhì)含量的快速檢測(cè)。本發(fā)明的檢測(cè)試劑盒可對(duì)乳粉產(chǎn)品中的蛋白質(zhì)含量進(jìn)行半定量的檢測(cè)，能迅速檢測(cè)出蛋白質(zhì)含量明顯與標(biāo)稱值不符，以及蛋白質(zhì)含量低于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的可疑產(chǎn)品。便于商品檢驗(yàn)人員和工商執(zhí)法人員迅速采取措施，防止可疑產(chǎn)品繼續(xù)流通。對(duì)維護(hù)乳粉產(chǎn)品的正常市場(chǎng)秩序、保護(hù)消費(fèi)者的利益有積極的作用。
權(quán)利要求
1.一種乳粉蛋白質(zhì)含量檢測(cè)試劑盒，該試劑盒包括乳粉蛋白質(zhì)含量標(biāo)準(zhǔn)比色卡、取樣器、透明刻度容器和雙縮脲顯色液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其中所述乳粉蛋白質(zhì)含量標(biāo)準(zhǔn)比色卡是一系列含有乳粉的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液與雙縮脲試劑混合后溶液顏色的色帶。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其中所述混合后的溶液中蛋白質(zhì)的濃度在0-2mg/ml的范圍內(nèi)。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒，其中所述乳粉蛋白質(zhì)含量標(biāo)準(zhǔn)比色卡具有至少2條以上的色帶。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒，其中所述乳粉蛋白質(zhì)含量標(biāo)準(zhǔn)比色卡具有3-6條色帶。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒，其中所述取樣器具有容納固定量的乳粉的部件，該部件具有的內(nèi)容積在可容納10-400mg乳粉的范圍內(nèi)變化。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的試劑盒，其中所述部件具有的內(nèi)容積在可容納30-80mg乳粉的范圍內(nèi)變化。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任意一項(xiàng)所述的試劑盒，其中該試劑盒進(jìn)一步包括一種或多種選自如下組中的物品試管架、試管和滴管。
9.一種制造權(quán)利要求1-8中任意一項(xiàng)所述的試劑盒的方法，該方法包括一個(gè)制造乳粉蛋白質(zhì)含量標(biāo)準(zhǔn)比色卡的步驟，其中包括以下步驟用已知蛋白質(zhì)含量的乳粉和標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)試劑配制含有乳粉的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液系列；按照一定比例混合上述標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液和雙縮脲試劑以獲得混合溶液；對(duì)混合溶液拍照；和用圖像處理軟件處理所得的照片，得到色帶并輸出。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述混合溶液中的蛋白質(zhì)濃度在0-2mg/ml的范圍內(nèi)。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種乳粉蛋白質(zhì)含量檢測(cè)試劑盒，該試劑盒包括乳粉蛋白質(zhì)含量標(biāo)準(zhǔn)比色卡、取樣器、透明刻度容器和雙縮脲顯色液。本發(fā)明還公開(kāi)了該試劑盒的制造方法，其中包括一個(gè)制造乳粉蛋白質(zhì)含量標(biāo)準(zhǔn)比色卡的步驟，該步驟包括用已知蛋白質(zhì)含量的乳粉和標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)試劑配制含有乳粉的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液系列；向上述系列標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液中加入雙縮脲試劑獲得混合溶液；對(duì)混合溶液拍照；和用圖像處理軟件處理照片，得到色帶并輸出。該試劑盒裝備簡(jiǎn)單，便于攜帶。用于檢測(cè)乳粉蛋白質(zhì)含量時(shí)不需其它輔助儀器和設(shè)備，檢測(cè)成本低，檢測(cè)時(shí)間短。其檢測(cè)方法操作簡(jiǎn)便，對(duì)檢測(cè)人員沒(méi)有特殊要求。為商品檢驗(yàn)人員對(duì)乳粉市場(chǎng)進(jìn)行廣泛、經(jīng)常的監(jiān)測(cè)和進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)執(zhí)法提供了可能。
文檔編號(hào)G01N21/25GK101034065SQ20061005699
公開(kāi)日2007年9月12日 申請(qǐng)日期2006年3月7日 優(yōu)先權(quán)日2006年3月7日
發(fā)明者桑華春 申請(qǐng)人:桑華春