); L-艾杜糖醛酸轉(zhuǎn)化成艾杜糖二酸（步驟7b);以及 艾杜糖二酸轉(zhuǎn)化成DDG(步驟8a)。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述底物是葡萄糖并且所述產(chǎn)物是DDG，所述方 法包括以下步驟： D-葡萄糖轉(zhuǎn)化成1，5-葡萄糖酸內(nèi)酯（步驟1); 1，5-葡萄糖酸內(nèi)酯轉(zhuǎn)化成葡萄糖酸（步驟la); 葡萄糖酸轉(zhuǎn)化成5-酮葡萄糖酸（5-KGA)(步驟14); 5-酮葡萄糖酸（5-KGA)轉(zhuǎn)化成4, 6-二羥基2, 5-二酮基己酸（2, 5-DDH)(步驟16); 4, 6-二羥基2, 5-二酮基己酸（2, 5-DDH)轉(zhuǎn)化成4-脫氧-5-蘇-己酮糖糖醛酸（DTHU) (步驟4);以及 4_脫氧-5-蘇-己酮糖糖醛酸（DTHU)轉(zhuǎn)化成DDG(步驟5)。
11. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述底物是葡萄糖并且所述產(chǎn)物是DDG，所述方 法包括以下步驟： D-葡萄糖轉(zhuǎn)化成1，5-葡萄糖酸內(nèi)酯（步驟1); 1，5-葡萄糖酸內(nèi)酯轉(zhuǎn)化成葡萄糖酸（步驟la); 葡萄糖酸轉(zhuǎn)化成5-酮葡萄糖酸（5-KGA)(步驟14); 5_酮葡萄糖酸（5-KGA)轉(zhuǎn)化成L-艾杜糖醛酸（步驟15); L-艾杜糖醛酸轉(zhuǎn)化成4-脫氧-5-蘇-己酮糖糖醛酸（DTHU)(步驟7c);以及 4_脫氧-5-蘇-己酮糖糖醛酸（DTHU)轉(zhuǎn)化成DDG(步驟5)。
12. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其還包括將所述DDG轉(zhuǎn)化成2, 5-呋喃-二甲酸 (FDCA)的步驟。
13. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其還包括將所述DDG轉(zhuǎn)化成2, 5-呋喃-二甲酸 (FDCA)的步驟。
14. 根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其還包括將所述DDG轉(zhuǎn)化成2, 5-呋喃-二甲酸 (FDCA)的步驟。
15. 根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其還包括將所述DDG轉(zhuǎn)化成2, 5-呋喃-二甲酸 (FDCA)的步驟。
16. 根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中將所述DDG轉(zhuǎn)化成FDCA包括使DDG與酸接觸以 將所述DDG轉(zhuǎn)化成FDCA。
17. 根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中將所述DDG轉(zhuǎn)化成FDCA包括使DDG與酸接觸以 將所述DDG轉(zhuǎn)化成FDCA。
18. 根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中將所述DDG轉(zhuǎn)化成FDCA包括使DDG與酸接觸以 將所述DDG轉(zhuǎn)化成FDCA。
19. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中將所述DDG轉(zhuǎn)化成FDCA包括使DDG與酸接觸以 將所述DDG轉(zhuǎn)化成FDCA。
20. -種用于合成FDCA的衍生物的方法，所述方法包括： 使DDG與醇、無機(jī)酸在超過60C的溫度下接觸以形成FDCA。
21. 根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其中所述醇是丁醇或乙醇。
22. 根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其具有至少25%摩爾濃度的產(chǎn)率。
23. -種合成DDG的衍生物的方法，其包括： 使DDG與醇、無機(jī)酸以及任選地共溶劑接觸以產(chǎn)生DDG的衍生物。
24. 根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中： a) 所述醇是乙醇或丁醇； b) 所述無機(jī)酸是硫酸；以及 c) 所述共溶劑選自由以下組成的組：THF、丙酮、乙腈、醚、乙酸乙酯、乙酸丁酯、二噁 烷、氯仿、二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、己烷、庚烷、甲苯、四氯化碳、石油醚以及二甲苯。
25. -種用于合成FDCA的衍生物的方法，其包括： 使DDG的衍生物與無機(jī)酸接觸以產(chǎn)生FDCA的衍生物。
26. 根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其具有大于25%摩爾濃度的產(chǎn)率。
27. 根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中所述衍生物是選自由以下組成的組的DDG:甲基 DDG、乙基DDG、丁基DDG、二甲基DDG、二乙基DDG以及二丁基DDG。
28. 根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其還包括使所述FDCA的衍生物去酯化以得到FDCA。
29. 根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其還包括使所述FDCA的衍生物聚合的步驟。
30. -種用于合成FDCA的方法，其包括： 使DDG與無機(jī)酸在氣相中接觸。
31. -種用于合成FDCA的方法，其包括： 使DDG與無機(jī)酸在超過120C的溫度下接觸。
32. -種用于合成FDCA的方法，其包括： 使DDG與無機(jī)酸在無水反應(yīng)條件下接觸。
33. -種從起始底物產(chǎn)生酶途徑或化學(xué)途徑產(chǎn)物的方法，所述途徑包括選自由以下組 成的組的一個(gè)或多個(gè)轉(zhuǎn)化步驟： DTHU轉(zhuǎn)化成DDG(步驟-5); 葡萄糖酸轉(zhuǎn)化成古羅糖醛酸（步驟-6); DEHU轉(zhuǎn)化成DDH(步驟7A); 古羅糖醛酸轉(zhuǎn)化成DEHU(步驟17A)。
34. 根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中所述底物是葡萄糖并且所述產(chǎn)物是DDG，所述方 法包括以下步驟： D-葡萄糖轉(zhuǎn)化成1，5-葡萄糖酸內(nèi)酯（步驟1); 1，5-葡萄糖酸內(nèi)酯轉(zhuǎn)化成葡萄糖酸（步驟la); 葡萄糖酸轉(zhuǎn)化成3-脫氫-葡萄糖酸（DHG)(步驟-2) 3-脫氫葡萄糖酸（DHG)轉(zhuǎn)化成4, 6-二羥基2, 5-二酮基己酸（2, 5-DDH)(步驟-3) 2,OTDH轉(zhuǎn)化成4-脫氧-5-蘇-己酮糖糖醛酸（DTHU)(步驟4) DTHU轉(zhuǎn)化成DDG(步驟-5)。
35. 根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中所述底物是葡萄糖并且所述產(chǎn)物是DDG，所述方 法包括以下步驟： D-葡萄糖轉(zhuǎn)化成1，5-葡萄糖酸內(nèi)酯（步驟1); 1，5-葡萄糖酸內(nèi)酯轉(zhuǎn)化成葡萄糖酸（步驟la); 葡萄糖酸轉(zhuǎn)化成古羅糖醛酸（步驟-6) 古羅糖醛酸轉(zhuǎn)化成葡萄糖二酸（步驟-7) 葡萄糖酸轉(zhuǎn)化成DDG(步驟-8)。
36. 根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中所述底物是葡萄糖并且所述產(chǎn)物是DDG，所述方 法包括以下步驟： D-葡萄糖轉(zhuǎn)化成1，5-葡萄糖酸內(nèi)酯（步驟1); 1，5-葡萄糖酸內(nèi)酯轉(zhuǎn)化成葡萄糖酸（步驟la); 葡萄糖酸轉(zhuǎn)化成5-酮葡萄糖酸（5-KGA)(步驟14); 5-酮葡萄糖酸（5-KGA)轉(zhuǎn)化成4, 6-二羥基2, 5-二酮基己酸（2, 5-DDH)(步驟16); 4, 6-二羥基2, 5-二酮基己酸（2, 5-DDH)轉(zhuǎn)化成4-脫氧-5-蘇-己酮糖糖醛酸（DTHU) (步驟4);以及 4_脫氧-5-蘇-己酮糖糖醛酸（DTHU)轉(zhuǎn)化成DDG(步驟5)。
37. 根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中所述底物是葡萄糖并且所述產(chǎn)物是DDG，所述方 法包括以下步驟： D-葡萄糖轉(zhuǎn)化成1，5-葡萄糖酸內(nèi)酯（步驟1); 1，5-葡萄糖酸內(nèi)酯轉(zhuǎn)化成葡萄糖酸（步驟la); 葡萄糖酸轉(zhuǎn)化成5-酮葡萄糖酸（5-KGA)(步驟14); 5_酮葡萄糖酸（5-KGA)轉(zhuǎn)化成L-艾杜糖醛酸（步驟15); L-艾杜糖醛酸轉(zhuǎn)化成4-脫氧-5-蘇-己酮糖糖醛酸（DTHU)(步驟7B); 4_脫氧-5-蘇-己酮糖糖醛酸（DTHU)轉(zhuǎn)化成DDG(步驟5)。
38. 根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中所述底物是葡萄糖并且所述產(chǎn)物是DDH，所述方 法包括以下步驟： D-葡萄糖轉(zhuǎn)化成1，5-葡萄糖酸內(nèi)酯（步驟1); 1，5-葡萄糖酸內(nèi)酯轉(zhuǎn)化成古羅糖醛酸內(nèi)酯（步驟19); 古羅糖醛酸內(nèi)酯轉(zhuǎn)化成古羅糖醛酸（步驟1B); 古羅糖醛酸轉(zhuǎn)化成DEHU(步驟17A); DEHU轉(zhuǎn)化成DDH(步驟7A)。
39. 根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中所述底物是葡萄糖并且所述產(chǎn)物是DDH，所述方 法包括以下步驟： D-葡萄糖轉(zhuǎn)化成1，5-葡萄糖酸內(nèi)酯（步驟1); 1，5-葡萄糖酸內(nèi)酯轉(zhuǎn)化成葡萄糖酸（步驟la); 葡萄糖酸轉(zhuǎn)化成古羅糖醛酸（步驟6); 古羅糖醛酸轉(zhuǎn)化成DEHU(步驟17A); DEHU轉(zhuǎn)化成DDH(步驟7A)。
40. 根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中所述一個(gè)或多個(gè)轉(zhuǎn)化步驟是DTHU轉(zhuǎn)化成 DDG(步驟-5)。
41. 根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中所述一個(gè)或多個(gè)轉(zhuǎn)化步驟是葡萄糖酸轉(zhuǎn)化成古 羅糖醛酸（步驟-6)。
42. 根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中所述一個(gè)或多個(gè)轉(zhuǎn)化步驟是DEHU轉(zhuǎn)化成 DDH(步驟 7A)。
43. 根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中所述一個(gè)或多個(gè)轉(zhuǎn)化步驟是古羅糖醛酸轉(zhuǎn)化成 DEHU(步驟 17A)。
【專利摘要】本發(fā)明提供了產(chǎn)生一種或多種酶途徑產(chǎn)物的方法。所述方法包括作為步驟的酶轉(zhuǎn)化和化學(xué)轉(zhuǎn)化。提供了各種途徑來將葡萄糖轉(zhuǎn)化成5-脫氫-4-脫氧葡萄糖二酸(DDG)，以及將葡萄糖轉(zhuǎn)化成2,5-呋喃二甲酸(FDCA)。所述方法還包括使用以高特異性和效率進(jìn)行反應(yīng)的工程化酶。
【IPC分類】C12P7-58, C12N9-04
【公開號(hào)】CN104769122
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201380056638
【發(fā)明人】S·坎博烏拉卡斯, B·M·格里芬, K·V·馬丁
【申請(qǐng)人】合成基因組股份有限公司
【公開日】2015年7月8日
【申請(qǐng)日】2013年9月20日
【公告號(hào)】CA2885662A1, EP2898083A1, US20140106414, WO2014047510A1