生物合成1,3丁二烯的方法
【專利說明】生物合成1，3 丁二烯的方法
[0001] 相關申請的交叉引用
[0002] 本申請要求2012年11月30日提交的國際申請?zhí)朠CT/US2012/067463(該申請要 求了 2011年12月2日提交的美國申請?zhí)?1/566, 085和2012年10月17日提交的美國申 請?zhí)?1/714, 883的優(yōu)先權）的優(yōu)先權；以及要求2012年6月15提交的國際申請?zhí)朠CT/ 舊2012/042757(該申請要求了2012年10月17日提交的美國臨時申請?zhí)?1/714,883;2011 年12月2日提交的美國臨時申請?zhí)?1/566, 085和2011年6月17日提交的美國臨時申請 號61/498, 408的優(yōu)先權）的優(yōu)先權，其全部內容通過引用并入本申請。
技術領域
[0003] 本發(fā)明涉及生物合成1，3-丁二烯的方法，更具體地涉及使用一種或多種分離的 酶如脫氫酶、單加氧酶、去飽和酶、脫水酶和脫羧酶，或者使用表達一種或多種此類酶的重 組宿主細胞合成1，3-丁二烯。
[0004] 背景
[0005] 1，3_ 丁二烯（下文稱丁二烯）是用于產(chǎn)生包括苯乙烯-丁二烯-橡膠（SBR)、聚丁 二烯（PB)、苯乙烯-丁二烯乳膠（SBL)、丙烯腈-丁二烯-苯乙烯樹脂（ABS)的合成橡膠、 腈橡膠和己二腈的重要單體，所述己二腈用于生產(chǎn)尼龍-66 (White,Chemico-Biological Interactions, 2007, 166, 10-14)。
[0006] 丁二烯通常作為蒸汽裂解工藝的副產(chǎn)物而產(chǎn)生，其被蒸餾為粗丁二烯流并通 過萃取蒸饋純化（White,Chemico-BiologicalInteractions, 2007, 166, 10-14)。已 專門采用其他方法制備丁二烯，通過n-丁烷和n-丁烯的脫氫反應（胡得利工藝）； 和n_ 丁稀的氧化脫氫反應（Ox〇-D或 0-X-D工藝）（White,Chemico-Biological Interactions, 2007, 166, 10-14)。
[0007] 工業(yè)上，全球95 %的丁二烯生產(chǎn)是通過使用石化基原料如石腦油的蒸汽裂解 工藝進行的。考慮到較高的生產(chǎn)成本和較低的工藝收率，專門生產(chǎn)丁二烯是沒有意義的 (White,Chemico-BiologicalInteractions, 2007, 166, 10-14)。鑒于對石化原料的依賴以 及對于專門生產(chǎn)丁二烯的高能耗催化步驟而言；生物技術通過生物催化提供了一種替代方 法。生物催化是使用生物催化劑如酶對有機化合物進行生物化學轉化。
[0008] 因此，在這一背景下，很明顯需要生產(chǎn)中間體特別是丁二烯的適宜方 法，其中所述方法是基于生物催化劑的（Jang等，Biotechnology&Bioengineeri ng，2012, 109(10)，2437 - 2459)。
[0009] 生物來源的原料和石化原料均是生物催化工藝可行的初始原料。
[0010] 在中碳鏈長度的酶底物中生成兩個乙烯基是通過生物催化工藝合成丁二烯的關 鍵考慮因素。
[0011] 尚無任何已知的在原核生物或真核生物中合成丁二烯的酶途徑。已提出的 由生物質-糖生產(chǎn)1，3-丁二烯的三個潛在的途徑為：（1)由乙?；?CoA通過巴豆 ?；?C〇A;(2)由赤蘚糖-4-磷酸；和（3)通過丙二?；?CoA和乙?；?CoA的縮合 反應。然而，尚無使用這些策略的信息報道（Jang等，Biotechnology&Bioengineeri ng，2012, 109(10)，2437 - 2459)。
[0012] 利用原核生物或真核生物合成的最為類似的化合物是2-甲基-1，3- 丁二烯（異 戊二烯），其具有短的5碳鏈長和兩個乙烯基。異戊二烯可以通過產(chǎn)生前體二甲基乙烯 基-PP的兩條路線，即甲輕戊酸（mevalonate)和非甲輕戊酸途徑合成〇(1^115^11^，13;[08(3；[. Biotechnol.Biochem.，2002, 66(8)，1619-1627)0
[0013] 甲羥戊酸途徑引入了脫羧酶甲羥戊酸二磷酸脫羧酶（下文稱MDD)，其在 形成異戊二稀的前體中生成第一個乙烯基（Kuzuyama,Biosci.Biotechnol.Bioch em.，2002, 66(8)，1619-1627)〇
[0014] 因此，可以將甲羥戊酸二磷酸脫羧酶（EC4. 1. 1. 33)標記為在由非天然底物合成 丁二烯中的候選酶。
[0015] 在對與天然底物甲羥戊酸二磷酸相關聯(lián)的3-甲基的作用的闡述中，已證實如 圖12(a)所示的3-羥基-5-二磷酸戊酸的周轉（turn-over)數(shù)KcatS〇. 23±0. (^[s-1]， 其與天然底物的名義8. 33 ±Us-1]相比顯著降低（Dhe-Paganon等，Biochemist ry，1994, 33, 13355 - 13362)。此外，與底物的反應僅進行得遠到3-羥基的磷酸化，即無 可檢測的脫羧產(chǎn)物，這意味著與天然底物相比脫羧率降低了至少300倍。總而言之， 認為3-甲基在穩(wěn)定碳陽離子過渡態(tài)中是不可或缺的（Dhe-Paganon等，Biochemist ry,1994, 33, 13355 - 13362)。
[0016] 已證實來自釀酒酵母（Saccharomycescerevisiae)的MDD酶接受3_羥基_3_甲 基-丁酸（圖12(b))，其包括穩(wěn)定碳陽離子過渡態(tài)的3-甲基，其是將所述底物轉化為 異丁烯的底物。然而，與天然底物活性6. 4[ym0V(min?mg)]相比，該比活性顯著降低 為 4. 8 ? 1CT6[ymol/(min?mg) ] (Gogerty&Bobik，Applied&EnvironmentalMicrobiolo gy,2010, 76(24), 8004 - 8010) 〇
[0017] 在催化裂隙周圍的絲氨酸和精氨酸殘基與天然底物甲羥戊酸二磷酸的磷酸基之 間關鍵的底物結合相互作用已被闡明。因此，在催化裂隙中正確的底物方向對酶活性是重 要的，這就合理地解釋了當接受3-羥基-3-甲基-丁酸（圖14 (b))作為底物時MDD具有 低活性（Barta等，Biochemistry, 2012, 51，5611-5621)〇
[0018] 與天然底物結合的3-甲基和焦磷酸基對于支撐MDD活性作用的重要性反對在由 不含這些關鍵基團的非天然前體合成丁二烯中使用MDD。
[0019] 異戊二烯合酶（下文稱ISPS)在異戊二烯合成的最終前體二甲基乙烯基-PP中生 成第二個乙烯基。
[0020] 因此，可以將異戊二烯合酶（EC4. 2. 3. 27)標記為由非天然底物合成丁二烯的候 選酶。
[0021] 與MDD類似，與天然底物二甲基乙烯基-PP結合的3-甲基 在穩(wěn)定碳陽離子中起重要作用，假定所述碳正離子是過渡態(tài)中間體 (Silver&Fal1，J.Biol.Chem.，1995, 270 (22)，13010 - 13016;Kuzma等，Current Microbiology, 1995, 30, 97 - 103)〇
[0022] 3-甲基對于支撐ISPS活性作用的重要性反對在由不含3-甲基的非天然前體合成 丁二烯中使用ISPS。
[0023]除了MDD和ISPS以外，微生物通常能夠通過脫水酶、解氨酶（ammonialyase)、去 飽和酶或脫羧酶的活性在代謝物中生成乙烯基。然而，這些酶的活性很少能夠催化末端乙 烯基的形成。脫水酶和解氨酶通常接受具有活化的氫原子的脂肪酸類似物或芳香族化合 物，其中芳香環(huán)作為吸電子基團。去飽和酶在脂肪酸合成中占支配地位，其在沿著長鏈脂肪 酸的固定的非末端位置產(chǎn)生不飽和鍵。繼而，脫羧酶作用于末端的羧基，其在催化后通常留 下末端位置上結合的a官能團。因此，這些酶的相關酶促活性反對其在導致丁二烯合成的 短鏈或中鏈碳代謝物中產(chǎn)生末端乙烯基的用途。
[0024] 發(fā)明概述
[0025] 本申請至少部分地基于這樣一個發(fā)現(xiàn)，有可能構建用于生產(chǎn)中鏈碳代謝物的生化 途徑，在所述代謝物中能夠形成兩個乙烯基，從而導致丁二烯的合成。本申請所描述的這些 途徑依賴于用于最終的酶促步驟的酶諸如MDD、ISPS和脫水酶。
[0026] 在本發(fā)明人的這個令人吃驚的發(fā)現(xiàn)之前，尚不知曉存在能夠在中鏈碳代謝物中形 成兩個末端乙烯基的酶或者其可以被生成以合成丁二烯。
[0027] 因此，在一方面，本申請?zhí)峁┝四軌驅⒍《┖铣傻孜镛D化成丁二烯的酶。在 本申請中使用的術語"丁二烯合成底物"指如下的底物，所述底物的酶能夠催化直接產(chǎn)生 1，3- 丁二烯或在經(jīng)過一個或多個酶催化的反應后轉化為1，3- 丁二烯的產(chǎn)物的反應。
[0028] 在一些實施方式中，導致合成丁二烯的第一個乙烯基是在4-草酰巴豆酸 (4_oxalocrotonate)、2-羥基粘康酸半酸（2-hydroxymuconatesemialdehyde)或 2_ 輕 基-6-氧代壬 _2, 4_ 二稀-1，9_ 二醋（2-hydroxy-6-〇xonona-2, 4-diene-l，9-dioate)中 酶促形成的，以生產(chǎn)2-氧代戊-4-稀酸（2-〇xopent-4_enoate)。見圖2。
[0029] 在一些實施方式中，導致丁二烯合成的第一個乙烯基是在丙 酰基-CoA(propanoyl-CoA)、乳?；?CoA(lactoyl-CoA)或 3-羥基丙 ?；?CoA(3-hydroxypropionyl_CoA)中酶促形成的，以生產(chǎn)丙稀酰 基-CoA(propenoyl-CoA)。見圖 3〇
[0030] 在一些實施方式中，導致丁二烯合成的第一個乙烯基是在（R) 3-羥 基-戊酸（(R) 3-hydroxy-pentanoate)中酶促形成的，以生產(chǎn)3-羥基戊-4-稀酸 (3_hydroxypent-4-enoate)。見圖 4。
[0031] 在一些實施方式中，導致丁二烯合成的第一個乙烯基是在戊-2-烯酰 基[acp] (pent-2_enoyl[acp])中酶促形成的，以生產(chǎn)2, 4-戊二稀?；?[acp] (2, 4-pentadienoyl_[acp])。見圖 5。
[0032] 在一些實施方式中，導致丁二烯合成的第一個乙烯基是在5-羥基戊酰 基-CoA(5-hydroxypentanoyl-CoA)(通過 5_ 羥基-戊 _2_ 稀?；?CoA(5-hydroxy-pent-2-enoyl-CoAasintermediate)作為中間體）或戊 _3_ 稀?；?CoA(pent-3-enoyl_CoA) 中酶促形成的，生產(chǎn)2, 4-戊二稀?；?CoA(2, 4-pentadienoyl-CoA)。見圖6。
[0033] 在一些實施方式中，導致丁二烯合成的第一個乙烯基是在4-羥基丁酰 基-CoA(4-hydroxybutyryl-CoA)、（R) 3_ 羥基丁?；?CoA((R) 3-hydroxybutanoyl-CoA)或 戊稀二酰基-(>^&11^3(3〇1171-(>^)中酶促形成的，以生產(chǎn)巴豆?；?(>^((^〇1:〇1171-(]〇八）。 見圖7。
[0034] 在一些實施方式中，導致丁二烯合成的第一個乙烯基是在2-丁醇中酶促形成的， 以生產(chǎn)3-丁烯-2-醇。見圖8。
[0035] 在一些實施方式中，導致丁二烯合成的第二個乙烯基是利用分類為EC4. 1. 1.33 的酶甲輕戊酸二磷酸脫羧酶（mevalonatediphosphatedecarboxylase，MDD)形成的（圖 9)。例如，利用兩種或更多種酶連續(xù)轉化2-羥基戊-4-烯酸；在通過脫羧的最后酶促轉化 中直接產(chǎn)生丁二烯（圖1，反應X)。
[0036] 在一些實施方式中，導致合成丁二烯的第二個乙烯基是利用分類為EC4. 2. 3. 27 的酶異戊二稀合酶（isoprenesynthase,ISPS)形成的（圖10)。例如，可以利用一種或多 種酶由丁烯醇生成活化的丁烯醇（二磷酸酯）（圖1，反應II);在通過脫磷酸化的最后酶促 轉化中直接產(chǎn)生丁二烯（圖1，反應III)。
[0037] 在一些實施方式中，導致丁二烯合成的第二個乙烯基是利用分類為EC 4. 2. 1.-的酶脫水酶形成的，如芳樟醇脫水酶（linalooldehydratase)(EC4. 2. 1. 127)、奇 維酮水合酶（kievitonehydratase)(EC4.2. 1.95)、油酸水合酶（oleatehydratase)(EC 4. 2. 1. 53)或類胡蘿卜素 1，2_ 水合酶（carotenoid1，2-hydratase)(EC4. 2. 1. 131)(圖 11)。此類脫水酶接受羥基化的底物如丁烯醇。例如，可以在一個或多個酶促步驟中利用脫 水酶、水合酶、去飽和酶、脫氫酶或脫羧酶的活性由丁二醇、丁醇、丁烯、丁烯醛或C5烯醇生 成丁烯醇（圖1，反應IV、V、VI、VII、IX);通過脫水在最后的酶促轉化中直接生產(chǎn)丁二烯 (圖1，反應I)。丁烯醇包括例如1- 丁烯-1-醇、2- 丁烯-1-醇和3- 丁烯-2-醇（見圖 1)〇
[0038]例如，本申請?zhí)峁┝藢⒍∠┐嫁D化為丁二烯的酶。這種轉化可以利用單一的酶進 行，或者可以利用兩種或更多種酶順序作用進行（也就是說，例如第一種酶作用于四碳分 子以生產(chǎn)第一丁烯醇，然后該第一丁烯醇在第二個酶的作用下生產(chǎn)丁二烯）（參見例如圖 1，反應I)。
[0039] 本申請還提供了由不飽和的羥基化四碳分子生產(chǎn)丁二烯的方法，所述方法包括至 少一個生物催化步驟。例如，在轉化為丁二烯之前可以將丁烯醇活化為相應的丁烯醇二磷 酸酯（參見例如圖1，反應II&III)。在一些實施方式中，所述丁烯醇選自由以下組成的組： 1 丁烯2醇、1 丁烯3醇、1 丁烯4醇、2 丁烯1醇、2 丁烯2醇、2 丁烯3醇或2 丁烯4醇。對 于丁烯醇如1- 丁烯-1醇、1- 丁烯-2醇、2- 丁烯-2-醇和2- 丁烯-3-醇而言，可以利用相 應的酮或醛如1- 丁醛或2- 丁酮在原位生成丁烯醇。
[0040] 在一些實施方式中，丁烯醇由選自由以下組成的組的四碳分子通過酶的作用生 產(chǎn)：丁二醇（1，4_丁二醇、1，3_ 丁二醇、2,3_ 丁二醇）（圖1，反應IV)或丁醇（1-丁醇或 2_ 丁醇）（圖1，反應V)或丁烯（1-丁烯或2-丁烯）（圖1，反應VI)或丁醛如1-丁醛或 2-丁醛或者2-酮-丁-1-烯（圖1，反應VII)。
[0041] 利用酶進行的反應可以是凈脫水（即利用具有脫水酶活性的酶從分子中除去4〇， 反應IV)，利用具有去飽和酶活性的酶或酶的復合物的脫氫（即從分子中除去氫，這在由酶 催化的反應中導致所述分子的碳骨架去飽和）（反應V)，利用具有羥化酶活性的酶的羥基 化（即使用羥基取代氫），如烯烴單加氧酶或細胞色素P450或《 -羥化酶（反應VI)或利 用氧化還原酶/酮還原酶的還原，以便將丁醛或C4不飽和酮轉化為丁烯醇。對于脫水步驟 而言，所述酶可以是與在用于將丁烯醇脫水成丁二烯的酶類別相同的酶類別，或者可以是 其他酶類的。在所述丁烯醇中的雙鍵迀移可以由異構酶催化。
[0042] 本申請還提供了來自酶類4. 2. 1.-.的酶，其將丁二醇轉化為丁烯醇（圖1，反應 VIII)〇
[0043] 在一些實施方式中，丁烯醇如1-丁烯-4-醇由五碳分子如2-羥基戊-4-烯酸通 過脫羧酶（如來自EC4. 1.L-的脫羧酶）的作用生產(chǎn)（圖1，反應IX)。還可以利用脫羧 酶或GHMP激酶將2-羥基戊-4-烯酸直接轉化為丁二烯而不形成中間體丁烯醇（圖1，反應 X) 〇
[0044] 在一些實施方式中，所述丁烯醇選自由以下組成的組：1 丁烯2醇、1 丁烯3醇、1 丁 烯4醇、2 丁烯1醇、2 丁烯2醇、2 丁烯3醇或2 丁烯4醇。對于丁烯醇如1- 丁烯-2醇、 2- 丁烯-2-醇和2- 丁烯-3-醇而言，可以利用相應的酮或醛如1- 丁醛或2- 丁酮在原位生 成所述丁烯醇。
[0045] 在一方面，本申請的特征在于一種生物合成丁二烯的方法。所述方法包括在丁二 烯合成底物中形成兩個末端乙烯基?？梢栽诙《┖铣傻孜镏忻复傩纬傻谝粋€乙烯基以生 產(chǎn)選自由以下組成的組的化合物：2-氧代戊-4-烯酸、丙烯基-CoA、（R) 3-羥基戊-4-烯酸、 2, 4_戊二條醜基-[acp]、2, 4_戊二條醜基-CoA、巴醜基-CoA和3_ 丁條_2_醇。
[0046] 在一方面，可以通過（i)使用分類為EC4. 1. 1. 77的4-草酰巴豆酸脫羧酶在4-草 酰巴豆酸中，（ii)使用分類為EC3.7. 1.9的2-羥基粘康酸半醛水解酶在2-羥基粘康酸 半醛中，或（iii)使用分類為EC3.7. 1.14的2-羥基-6-氧代壬-2, 4-二烯二酯水解酶 在2-羥基-6-氧代壬-2, 4-二烯-1，9-二酯中形成第一個乙烯基來生產(chǎn)2-氧代戊-4-烯 酸?？梢酝ㄟ^使用分類為EC1.2.1.32的2氨基粘康酸半醛脫氫酶（2&111；[1101]111〇〇11&七6 semialdehydedehydrogenase)將2-羥基粘康酸半醛轉化為2-羥基粘康酸，使用分 類為EC5. 3. 2. 6的2_羥基粘康酸互變異構酶（2-hydroxymuconatetautomerase)將 2_羥基粘康酸轉化為4-草酰巴豆酸和使用分類為EC4. 1. 1. 77的4-草酰巴豆酸脫羧酶 (4-oxalocrotonatedecarboxylase)將4_草酰巴豆酸轉化為2_氧代戊_4_稀酸來生產(chǎn) 2_氧代戊-4-稀酸?？梢酝ㄟ^使用分類為EC1. 13. 11. 2的兒茶酷2, 3-雙加氧酶（catechol 2, 3-dioxygenase)將兒茶酷轉化為2-羥基粘康酸半醛來生產(chǎn)2-羥基粘康酸半醛。通過使 用分類為EC1. 14. 12. 1的鄰氨基苯甲酸1，2_雙加氧酶（anthranilate1，2-dioxygenase) 轉化鄰氨基苯甲酸或使用分類為EC4. 1. 1. 63的原兒茶酸脫羧酶（protocatechuate decarboxylase)轉化原兒茶酸（Protocatechuate)生產(chǎn)兒茶酸?？梢酝ㄟ^使用分類為 EC4. 1. 3. 27的鄰氨基苯甲酸合酶（anthranilatesynthase)轉化分支酸生產(chǎn)鄰氨基苯甲 酸。可以通過使用分類為EC4. 2. 1. 118的3-脫氫莽草酸脫水酶（3-dehydroshikimate dehydratase)轉化3_脫氫莽草酸（3-dehydroshikimate)生產(chǎn)原兒茶酸。
[0047] 在一方面，可以通過使用5-羧基-2-羥基粘康酸-6-半醛脫羧酶，如由praH 編碼的5-羧基-2-羥基粘康酸-6-半醛脫羧酶轉化5-羧基-2-羥基粘康酸-6-半醛 生產(chǎn)2-羥基粘康酸半醛?？梢酝ㄟ^使用原兒茶酸2, 3-雙加氧酶，如由praA編碼的原 兒茶酸2, 3-雙加氧酶轉化原兒茶酸生產(chǎn)5-羧基-2-羥基粘抗酸-6-半醛?？梢酝ㄟ^ 使用分類為EC1. 13. 11. 16的3-羧乙基兒茶酚2, 3-雙加氧酶轉化2, 3-二羥基苯基丙 酸生產(chǎn)2-羥基-6-氧代壬-2, 4-二烯-1,9-二酯?？梢酝ㄟ^使用分類為EC1.3. 1.87 的3-(順式-5, 6-二羥基環(huán)己-1，3-二烯-1-基）丙酸脫氫酶轉化順式_3_(羧基-乙 基）-3, 5-環(huán)-己二烯-1，2-二醇生產(chǎn)2, 3-二羥基苯基丙酸?？梢酝ㄟ^使用分類為 EC1. 14. 12. 19的3-苯基丙酸雙加氧酶轉化3-苯基-丙酸生產(chǎn)順式-3-(羧基-乙 基）-3, 5-環(huán)-己二烯-1,2-二醇?？梢酝ㄟ^使用分類為EC1.3. 1.31的2-烯酸還原酶轉 化E-肉桂酸生產(chǎn)3-苯基-丙酸?？梢酝ㄟ^使用分類為EC4.3. 1.24的苯丙氨酸解氨酶轉 化L-苯丙氨酸生產(chǎn)E-肉桂酸。
[0048] 在一方面，所述丁二烯合成底物可以是丙酰基-CoA。可以通過（i)使用分類為 EC1. 3. 8. 1的丁?；?CoA脫氫酶或分類為EC1. 3. 8. 7的中鏈酰基-CoA脫氫酶在丙烯酰 基-CoA中，（ii)使用分類為EC4. 2. 1. 54的乳?；?CoA脫氫酶在乳酰基-CoA或（iii) 使用分類為EC4. 2. 1. 116的3-羥基丙?；?CoA脫氫酶在3-羥基丙酰基-CoA中形成第 一個乙烯基來生產(chǎn)丙烯?；?CoA?？梢酝ㄟ^使用分類為EC2. 1. 3. 1的甲基丙二酰基-CoA 羧基轉移酶或分類為EC4. 1. 1.41的甲基丙二?；?CoA脫羧酶轉化（2S)-甲基丙二酰 基-CoA生產(chǎn)丙酰基-CoA?？梢酝ㄟ^使用分類為EC5. 1.99. 1的甲基丙二?；?CoA表異構 酶轉化（2R)-甲基丙二?；?CoA生產(chǎn)（2S)-甲基丙二酰基-CoA。可以通過使用分類為EC 5. 4. 99. 2的甲基丙二?；?CoA變位酶生產(chǎn)（2R)-甲基丙二?；?CoA。
[0049] 可以通過使用分類為EC2.3. 1.-的2-酮丁酸甲酸裂解酶，如由tdcE編碼的2-酮 丁酸甲酸裂解酶轉化2-氧代-丁酸生產(chǎn)丙酰基-CoA。可以通過使用分類為EC4. 3. 1. 19 的蘇氨酸解氨酶轉化L-蘇氨酸生產(chǎn)2-氧代-丁酸。
[0050] 可以通過使用丙醛脫氫酶，如由pduP編碼的丙醛脫氫酶轉化丙醇生產(chǎn)丙酰 基-CoA?？梢酝ㄟ^使用分類為EC4. 2. 1. 28的丙二醇脫水酶轉化1，2-丙二醇生產(chǎn)丙醇。
[0051] 可以通過使用分類為EC2. 3. 1.-的轉移酶轉化乙酰丙酰 基-CoA(levulinyl-CoA)由乙酰丙酸（levulinicacid)生產(chǎn)丙?；?CoA。可以通過使用 分類為EC6. 2. 1.-的?；?CoA合成酶或連接酶轉化乙酰丙酸生產(chǎn)丙?；?CoA。
[0052] 可以通過使用分類為EC2.8. 3. 1的丙酸CoA轉移酶轉化L-乳酸生產(chǎn)乳酰 基-CoA?？梢酝ㄟ^使用分類為EC1. 1. 1. 27的L-乳酸脫氫酶轉化丙酮酸生產(chǎn)L-乳酸。
[0053] 可以通過使用分類為EC3. 1. 2. 4的3-羥基異丁酰基-CoA水解酶轉化3-羥基丙 酸或者通過使用分類為EC1. 1. 1. 59的3-羥基丙酸脫氫酶轉化丙二酸半醛來生產(chǎn)3-羥基 丙?；?CoA。可以通過使用分類為EC1. 2. 1. 75的丙二酸單?；?CoA還原酶轉化丙二酸 單酰基-CoA來生產(chǎn)丙二酸半醛。