用于轉化麥角肽堿的酶及其方法
【專利說明】用于轉化麥角肽堿的酶及其方法
[0001] 本發(fā)明涉及用于轉化（特別是水解裂解）麥角肽堿類（Ergopeptinen)的酶，用 于轉化麥角肽堿類的方法，以及用于生產代謝麥角肽堿的酶的方法。
[0002] 麥角肽堿類是一組麥角生物堿，并且還是由屬于麥角菌（Clavicipitaceae)科麥 角菌（Claviceps)屬的植物相關的真菌形成的二次代謝產物。該屬最突出的成員是麥角菌 (Clavicepspurpurea)，其最主要影響如黑麥、小麥、黑小麥、大麥和玉米的谷物。另一個成 員（即非洲麥角菌（Clavicepsafricana))被廣泛發(fā)現于小米中。該科的進一步的產麥角 生物堿的真菌包括香柱菌（功?/<^67汾）、他(^5^110(1；[111]1和瘤座菌（1^1311813)屬的草內生 菌，還有煙曲霉菌（Aspergillusfumigatus)和各種青霉屬（Penicilliumspp.)種也能夠 產生麥角生物堿。
[0003] -般情況下，麥角生物堿具有在6-位置包含甲基化氮的四環(huán)麥角靈環(huán)的特征骨 架結構并且可以在C-8位置具有不同的取代基?；谶@些取代基，麥角生物堿被分類為棒 麥角堿（Clavine)、簡單的麥角酸酰胺、麥角肽堿和麥角肽胺（Ergopeptame)。
【主權項】
1. 用于轉化、特別是水解裂解麥角肽堿的酶，其特征在于，所述酶是在環(huán)醇環(huán)處水解裂 解麥角肽堿的a/ 0 -水解酶。
2. 根據權利要求1的酶，其特征在于，所述酶包含由親核氨基酸、組氨酸和酸性氨基酸 組成的催化三聯體，并且所述三聯體被包含于具有a/e_水解酶折疊的肽鏈中。
3. 根據權利要求2的酶，其特征在于，所述催化三聯體由親核氨基酸絲氨酸、組氨酸和 酸性氨基酸天冬氨酸或谷氨酸之一組成，并且所述三聯體被包含于具有a/e-水解酶折 疊的肽鏈中。
4. 根據權利要求1、2或3的酶，其特征在于，所述a/0 -水解酶包含具有序列 Gly-Gln-Ser-Arg-Asn-Gly的親核肘。
5. 根據權利要求1-4中任一項的酶，其特征在于，與序列IDNo. 1具有至少96%的序 列同一性。
6. 根據權利要求5的酶，其特征在于，特別是具有序列IDNo. 3的酶。
7. 根據權利要求5的酶，其特征在于，特別是具有序列IDNo. 1的酶。
8. 根據權利要求5的酶，其特征在于，是具有不同于序列IDNo. 1的N-或C-末端的序 列、特別是延長的N-或C-末端的序列，特別是序列IDNo. 3或序列IDNo. 5的酶。
9. 用于酶促轉化麥角肽堿的方法，其特征在于，所述麥角肽堿在環(huán)醇環(huán)處被水解裂解 為初級代謝物。
10. 根據權利要求9的方法，其特征在于，所述裂解是通過環(huán)醇環(huán)的C3' -原子上的親 核攻擊實現的。
11. 根據權利要求9或10的方法，其特征在于，所述環(huán)醇環(huán)的C3'-原子上的親核攻擊 是通過催化三聯體實現的，所述催化三聯體被包含于具有a/e_水解酶折疊的肽鏈中并 由親核氨基酸絲氨酸、組氨酸和酸性氨基酸天冬氨酸或谷氨酸之一組成。
12. 根據權利要求9、10或11的方法，其特征在于，由所述麥角肽堿的環(huán)醇環(huán)的水解裂 解形成的初級代謝物被進一步發(fā)生反應。
13. 根據權利要求12的方法，其特征在于，所述初級代謝物的進一步反應是通過自發(fā) 化學反應實現的。
14. 根據權利要求12或13的方法，其特征在于，在所述初級代謝物的進一步反應中形 成麥角酰胺。
15. 根據權利要求12、13或14的方法，其特征在于，所述初級代謝物的進一步反應是通 過在反應介質中存在的酶實現的。
16. 用于生產對麥角肽堿進行代謝、特別是對麥角肽堿進行解毒的酶的方法，其特征在 于，將編碼根據權利要求1 一 8任一項的基因克隆入表達載體、轉化入原核和/或真核宿主 細胞并且在宿主細胞中表達。
17. 根據權利要求16的方法，其特征在于，具有序列IDNo. 2、4或6的基因被用作所述 基因。
18. 根據權利要求16或17的方法，其特征在于，將所述基因轉化入作為宿主細胞的 選自巴斯德畢赤酵母（Pichiapastoris)、大腸桿菌（E.coli)或枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis)的微生物中并在其中進行表達。
【專利摘要】本發(fā)明涉及用于轉化、特別是水解裂解麥角肽堿、用于麥角肽堿的轉化的酶，以及用于生產代謝麥角肽堿的酶的方法，所述麥角肽堿是α/β-水解酶在環(huán)醇環(huán)處水解裂解的麥角肽堿。
【IPC分類】C12P17-18, C12N9-52
【公開號】CN104769124
【申請?zhí)枴緾N201380052664
【發(fā)明人】G·沙特茲瑪瑞, E-M·班德, M·薩姆赫斯勒, D·莫勒
【申請人】愛爾伯股份公司
【公開日】2015年7月8日
【申請日】2013年10月4日
【公告號】CA2885760A1, EP2906709A1, US20150274775, WO2014056006A1