用于治療胰腺癌的生物堿化合物及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及從牛蒡的干燥成熟果實(shí)中分離得到的一種生 物堿類化合物，含其的藥物組合物及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 牛蒡(Arctium IappaL.)又名白肌人參、蒡翁菜，屬菊科牛蒡?qū)俣晟荼局参铮?其果實(shí)牛蒡子被歷版中國藥典收載，為常用中藥。牛蒡子性寒、味辛苦、歸肺胃二經(jīng)。具有疏 散風(fēng)熱、祛痰止咳、解毒透疹、利咽消腫等功效。牛蒡營養(yǎng)豐富，富含菊糖、纖維素、蛋白質(zhì)、 鈣、磷、鐵等礦物質(zhì)和多種維生素，具有很強(qiáng)的保健功能。另外牛蒡根、莖、葉均可入藥。
[0003] 牛蒡子的化學(xué)成分有木脂素類、黃酮類、揮發(fā)油類、脂肪酸類、生物堿類、酚羥基化 合物等。牛蒡根除含有豐富的蛋白質(zhì)、低聚糖等營養(yǎng)成份外，還含牛蒡酸、醛類、多炔類及揮 發(fā)油等多種小分子活性成份。牛蒡葉中含有揮發(fā)油、鞣質(zhì)、粘液質(zhì)、咖啡酸、綠原酸、異綠原 酸等物質(zhì)。
[0004] 現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明其有抗氧化、抗腫瘤、抗炎、抗過敏、抗病毒、抗菌、提高免疫 力和降血脂等作用，對糖尿病也有一定的治療作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種從牛蒡的干燥成熟果實(shí)中分離得到的一種生物堿類化 合物，含其的藥物組合物及其制備方法和應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：
[0007] 具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物(I):
[0009]所述的化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將牛蒡的干燥成熟果實(shí)粉 碎，用70~80%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水 飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a) 中乙酸乙酯萃取物用大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫6個(gè)柱體積，再用70%乙醇洗脫8個(gè) 柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙醇洗脫濃 縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為85:1、50:1、25:1、10:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度 洗脫得到5個(gè)組分；（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為15:1、10:1 和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的 反相硅膠分離，用體積百分濃度為70 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~12個(gè)柱體積洗脫 液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物(I)。
[0010] 進(jìn)一步地，步驟(a)中，用75%乙醇熱回流提取，合并提取液。
[0011] 進(jìn)一步地，所述大孔樹脂為DlOl型大孔吸附樹脂。
[0012] -種藥物組合物，其中含有治療有效量的所述的化合物（I)和藥學(xué)上可接受的載 體。
[0013] 所述的化合物(I)在制備治療胰腺癌的藥物中的應(yīng)用。
[0014] 所述的藥物組合物在制備治療胰腺癌的藥物中的應(yīng)用。
[0015] 本發(fā)明化合物用作藥物時(shí)，可以直接使用，或者以藥物組合物的形式使用。
[0016] 該藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明化合物（I)，其余為藥物學(xué)上可接受的、對 人和動(dòng)物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0017] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 以及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明藥物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時(shí)，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等;用于注射時(shí)，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質(zhì)體或乳劑等。
【附圖說明】
[0018] 圖1為化合物(I)結(jié)構(gòu)式；
[0019] 圖2為化合物⑴計(jì)算ECD和實(shí)驗(yàn)ECD圖。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實(shí)施例對本發(fā)明作了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。
[0021] 主要材料、試劑來源及儀器類型：
[0022]乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化學(xué)試劑有限 公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。
[0023]實(shí)施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0024] (a)牛蒡的干燥成熟果實(shí)（IOkg)粉碎，用75%乙醇熱回流提取(30LX3次），合并提 取液，濃縮至無醇味(6L)，依次用石油醚(6L X 3次）、乙酸乙酯(6L X 3次)和水飽和的正丁醇 (6LX3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物(381g)和正丁醇萃取物；（b)步驟 (a)中乙酸乙酯萃取物用DlOl大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫6個(gè)柱體積，再用70%乙醇 洗脫8個(gè)柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物（131g); (c)步驟(b)中 70 %乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為85:1 (8個(gè)柱體積）、50 :1 (8個(gè)柱體 積）、25:1 (8個(gè)柱體積）、10:1 (10個(gè)柱體積)和1:1 (8個(gè)柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得 到5個(gè)組分；（d)步驟(c)中組分4(27g)用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為15:1(8個(gè)柱 體積）、10:1(8個(gè)柱體積)和5:1(6個(gè)柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步 驟(d)中組分2(18g)用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為70 %的甲醇 水溶液等度洗脫，收集8~12個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物（I) (230mg)〇
[0025] 結(jié)構(gòu)確證:淺黃色油狀物;HR-ESMS顯示[M+Na]+為m/z 363.1718，結(jié)合核磁特征 可得分子式為C2qH24N2O3，不飽和度為10。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)δ Η(ppm，DMS〇-d6，400MHz):H-3 (3.86，m)，H-5(2.78，m)，H-5(3.01，m)，H-6(1.77，dd，J=13,7)，H-6(2.85，m)，H-9(7.11，d， J = 7.5)，H-10(6.82，t，J = 7.5)，H-ll(7.06，td，J = 7.5，l)，H-12(6.74，d，J = 7.5)，H-14 (1.29，m)，H-14(1.95，dt，J=13,3)，H-15(2.03，m)，H-16(2.78，m)，H-18(1.27，d，J = 6)，H-19(3.52，m)，H-20(1.75，m)，H-21(2.21，t，J=12)，H-21(3.15，dd，J=12,4.5)，16-C〇2Me (3 · 71，s);核磁共振碳譜數(shù)據(jù)δ。(ppm，DMSO-Cl6，I OOMHz ):171.4(C，2-C)，60.3(CH，3-C)，53.2 (CH2,5-C)，42.5(CH2,6-C)，56.1(C，7-C)，134.8(C，8-C)，119.4(CH，9-C)，120.9(CH，10-C)， 127.3(CH，n-C)，109.4(CH，12-C)，143.7(C，13-C)，31.6(CH2，14-C)，29.7(CH，15-C)，42.8 (CH，16-C)，21.7(CH 3，18-C)，69.3(CH，19-C)，44.6(CH，20-C)，46.9(CH2,21-C)，168.3(C， 16<0 21^)，51.1((：!13，16-〇)216);碳原子標(biāo)記參見圖1。11?光譜表明該化合物含有羥基 (3358cm-〇和酯羰基（1725cm-〇基團(tuán)。 1H NMR譜顯示四個(gè)芳族共振信號(hào)(δΗ6·74,6·82,7.06， 7 · 11)，一個(gè)甲基酯基（δΗ3 · 71)，以及一個(gè)CH3CHOH側(cè)鏈(δΗΙ · 27，3 · 52) ,3C NMR譜顯示了20 個(gè)共振碳信號(hào)，包括兩個(gè)甲基，四個(gè)亞甲基，九個(gè)次甲基，三個(gè)季碳，以及與吲哚氮相連的兩 個(gè)叔碳(C-2和C-13)。四個(gè)芳香族次甲基共振碳為吲哚部分的芳族碳(C-9，C-10，C-11，C- 12)，烯屬季碳信號(hào)δ(：171.4歸屬于C-2。酯羰基碳的信號(hào)為δ(：168.3,側(cè)鏈CH3CHOH的含氧次 甲基的信號(hào)為6〇69.30!13.52)。(：〇5￥譜顯示該化合物存在叱!12(：!1(〇1〇!1〇13)〇1〇12〇1和 NCH2CH2 部分結(jié)構(gòu)，后者對應(yīng)于 C-5-C-6,前者對應(yīng) C-21-C-20-(C-19-C-18)-C-15-C-14-C-3。 綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和NOESY譜，以及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物 如圖1所示，立體構(gòu)型進(jìn)一步通過E⑶試驗(yàn)確定，理論值與實(shí)驗(yàn)值基本一致(圖2)。
[0026]實(shí)施例2:化合物(I)藥理作用試驗(yàn) [0027] 一、材料和儀器
[0028]人胰腺癌MiaPaCa-2細(xì)胞由天津醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院腫瘤研究所惠贈(zèng)?；衔?(I)自制，HPLC歸一化純度大于98% ABS、胰蛋白酶-EDTA消化液購于美國Hyclone公司。PBS 粉購于天津潤泰科技發(fā)展有限公司。DMEM低糖培養(yǎng)液購于美國Gibco公司。MTT購于美國 Sigam公司。DMSO購于北京化工廠。注射用青霉素鈉購于哈藥集團(tuán)制藥總廠。注射