一種異吲哚生物堿類化合物及制備方法和應用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于植物化學技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種源于云南翅莢決明樹皮中異吲哚生 物堿類化合物及其制備方法與應用。
【背景技術(shù)】
[0002] 翅莢決明aJaia L.)為豆科決明屬下的一個種。原產(chǎn)美洲熱帶地區(qū)，廣 布于全世界熱帶地區(qū)，在我國分布于廣東和云南南部地區(qū)。該植物花色艷麗，有較高的觀賞 價值，常用作園林綠化樹種。同時，它也是重要的藥用植物，具有殺真菌的作用，可以用來治 療皮膚病，是香皂、洗發(fā)液、洗液的常用原料之一。它的種子含有的皂角苷可以作為驅(qū)除腸 道寄生蟲的驅(qū)蟲劑；其葉水煎液常被用來治療高血壓、胃病、發(fā)燒、哮喘、毒蛇咬傷、性病等。
[0003] 目前國內(nèi)外學者對翅莢決明進行過一些研究，主要報道的化學成分有色酮、黃酮、 萜、留體、生物堿等類化合物。異吲哚類生物堿是生物堿類成分的重要組成部分，該類生物 堿數(shù)量多，結(jié)構(gòu)類型復雜，藥用價值突出，具有多方面的生理活性。為充分利用我國豐富的 資源，進一步尋找新的活性天然產(chǎn)物，我們對翅莢決明化學成分進行了研究，并從中分離到 一個新的異吲哚生物堿，該化合物具有明顯的抗煙草花葉病毒活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的第一方面在于提供一種結(jié)構(gòu)新穎的異吲哚生物堿類化合物，第二目的在 于提供所述異吲哚生物堿類化合物的制備方法；第三目的在于提供所述異吲哚生物堿類化 合物在制備抗煙草花葉病毒藥物中的應用。
[0005] 本發(fā)明的第一目的是這樣實現(xiàn)的，所述異吲哚生物堿類化合物，是從翅莢決明 L.)樹皮中分離得到，命名為5_(羥甲基）-2_甲基-6-異戊烯基-異吲 哚-1-酮，其分子式為C15H19N02，具有下述結(jié)構(gòu)：
本發(fā)明的第二目的是這樣實現(xiàn)的，所述異吲哚生物堿類化合物以翅莢決明（仏Mia ahia L.)樹皮為原料，經(jīng)浸膏提取、硅膠柱層析、高壓液相色譜分離步驟，具體為： A、 浸膏提?。簩⒊崆v決明ahia L.)樹皮粉碎到20~40目，用60~100%有機溶 劑浸泡并提取2~4次，每次12 h~72 h，合并提取液、過濾，減壓濃縮成浸膏； B、 硅膠柱層析：浸膏用有機溶劑溶解后，用浸膏重量比1~1. 6倍量的60~120目硅膠 拌樣，再用浸膏重量比2~5倍量的160~300目硅膠干法裝柱進行硅膠柱層析；以體積配比 1〇:〇~5:5的氯仿-甲醇溶液進行梯度洗脫，洗脫液的9:1部分用硅膠層析柱繼續(xù)分離，用 體積配比15:1-2:1的氯仿-丙酮溶液進行梯度洗脫，將其先后劃分成6個部分，收集各部 分洗脫液并濃縮； C.高壓液相色譜分離：B步驟洗脫液的6:4部分進一步用高壓液相色譜分離純化即得 所述的異喹啉生物堿類化合物。
[0006] 以上述方法制備的新型異吲哚生物堿類化合物的結(jié)構(gòu)是通過以下方法測定出來 的： 本發(fā)明化合物為淺黃色固體；紫外光譜(溶劑為甲醇)，^_(l〇ge ):210 (4.05)、 260 (3. 68)、296 (3.04);紅外光譜（溴化鉀壓片）vnax:3386、2938、1670、1610、1533、1468、 1355、1267、1131、1074、837、759 cnf1;高分辨質(zhì)譜（HRESIMS)顯示本發(fā)明化合物準分子離 子峰餘々 268. 1319 [M+Na] + (計算值268. 1313)。其紅外光譜顯示化合物中有羥基（3386 〇111)、羰基（1670 〇111)，和芳環(huán)（1610、1533、1468 〇111)信號，紫外光譜在210、260、296 11111 有最大吸收也證實化合物中存在芳環(huán)結(jié)構(gòu)?；衔锏?H-和13C-NMR譜（表-1)顯示其 含有15個碳和19個氫，包括1個異吲哚-1-酮母核（C-l~C-7a，H-3、H-4和H-6)，一個 異戊烯基（C-Γ ~C-5'，Η-Γ、H-2'、H-4' 和 H-5'），一個羥甲基（C-6,，H-6'），和一個 N-甲 基（C-7,，H-7'）?；衔镏?H2-3 和 C-l、C-3a、C-4、C-7a、C-7'，H-4 和 C-3, H-7 和 C-1， H2-7'和C-l、C-3的HMBC (圖-3)進一步證實化合物中存在異吲哚-1-酮母核?；衔?的骨架類型得到確認后，可進一步通過HMBC相關(guān)譜確定取代基位置；根據(jù)H2-l'和C-5、 C-6,C-7,H-2,和C-6的HMBC相關(guān)可確定異戊烯基取代在C-6位；羥甲基取代在C-5位 可通過羥甲基氫（H2-6')和C-4、C-5、C-6的HMBC相關(guān)證實。甲基和氮原子相連和通過 甲基氫（H3-7')和C-l、C-3,以及H-3和C-7的HMBC相關(guān)確認。至此化合物的結(jié)構(gòu)得到 確定，該化合物被命名為：5_(輕甲基）-2_甲基-6-異戊烯基-異吲噪-1-酮；5-(hydroxy methy1)-2-methyl-6-preny1i soindolin-1-one 〇
[0007] 本發(fā)明的第三目的是這樣實現(xiàn)的，即將所述異吲哚生物堿類化合物應用于抗煙草 花葉病毒藥物的制備。
[0008] 本發(fā)明化合物是首次被分離出來的，通過核磁共振和質(zhì)譜測定方法確定為異吲 哚生物堿類化合物，并表征了其具體結(jié)構(gòu)。經(jīng)對抗煙草花葉病毒的實驗，其相對抑制率達 到36. 8%，具有很好的抗煙草花葉病毒活性，比陽性對照品南寧霉素的相對抑制率（31. 5%) 高。以上結(jié)果揭示了本發(fā)明的化合物在制備抗煙草花葉病毒藥物中有良好的應用前景。本 發(fā)明化合物結(jié)構(gòu)簡單活性較好，可作為抗煙草花葉病毒藥物研發(fā)的先導性化合物用于抗煙 草花葉病毒藥物制劑研發(fā)。
【附圖說明】
[0009] 圖1為本發(fā)明化合物的核磁共振碳譜。
[0010] 圖2為本發(fā)明化合物的核磁共振氫譜。
[0011] 圖3為本發(fā)明化合物的主要HMBC相關(guān)圖示。
【具體實施方式】
[0012] 下面結(jié)合實施例及附圖對本發(fā)明作進一步的說明，但不以任何方式對本發(fā)明加以 限制，基于本發(fā)明教導所作的任何變換或改進，均落入本發(fā)明的保護范圍。
[0013] 本發(fā)明所用原料不受地區(qū)和品種限制，任何來源的翅莢決明aJaia L.) 樹皮均可以實現(xiàn)本發(fā)明，下面以來源于云南的翅莢決明（仏Mia L.)樹皮為原料對 本發(fā)明做進一步說明。
[0014] 除非另有說明，本發(fā)明中所采用的百分數(shù)均為質(zhì)量百分數(shù)。
[0015] 本發(fā)明所述的異吲哚生物堿類化合物，是從翅莢決明（Cassia alata L.)樹皮 中分離得到，命名為5_(羥甲基）-2-甲基-6-異戊烯基-異吲哚-1-酮，其分子式為 C15H19N02,具有下述結(jié)構(gòu)：
本發(fā)明所述異吲哚生物堿類化合物的制備方法，是以翅莢決明（仏·ahia L.)樹 皮為原料，經(jīng)浸膏提取、硅膠柱層析、高壓液相色譜分離步驟，具體為： A、 浸膏提?。簩⒊崆v決明ahia L.)樹皮粉碎到20~40目，用60~100%有機溶 劑浸泡并提取2~4次，每次12 h~72 h，合并提取液、過濾，減壓濃縮成浸膏； B、 硅膠柱層析：浸膏用有機溶劑溶解后，用浸膏重量比1~1. 6倍量的60~120目硅膠 拌樣，再用浸膏重量比2~5倍量的160~300目硅膠干法裝柱進行硅膠柱層析；以體積配比 1〇:〇~5:5的氯仿-甲醇溶液進行梯度洗脫，洗脫液的9:1部分用硅膠層析柱繼續(xù)分離，用 體積配比15:1-2:1的氯仿-丙酮溶液進行梯度洗脫，將其先后劃分成6個部分，收集各部 分洗脫液并濃縮； C、 高壓液相色譜分離：B步驟洗脫液的6:4部分進一步用高壓液相色譜分離純化即得 所述的異喹啉生物堿類化合物。
[0016] 所述A步驟中有機溶劑是乙醇、甲醇或丙酮與水的混合物。
[0017] 所述A步驟中有機溶劑與樹皮的重量比是1. 5~4:1。
[0018] 所述B步驟的有機溶劑是純甲醇、純乙醇或純丙酮。
[0019] 所述B步驟中的氯仿-甲醇溶液體積配比為10:0、9:1、8:2、7:3、6:4和5:5。
[0020] 所述C步驟中高壓液相色譜分離純化是采用21. 2 mm X 250 mm，5 jwm的C1S色 譜柱，流動相為52 wt%的甲醇水溶液，流動相流速為15 mL/min，紫外檢測器檢測波長為 295nm，每次進樣60~150 #L，收集22. 8 min的色譜峰，多次累加后蒸干。
[0021] 所述C步驟中高壓液相色譜是指使用時壓力在5-15 Mpa的反相制備色譜。
[0022] 所述C步驟中高壓液相色譜分離純化后的物質(zhì)再次用甲醇溶解，再以甲醇溶液為 流動相，用凝膠柱層析分離，以進一步分離純化。
[0023] 本發(fā)明所述異吲哚生物堿類化合物在制備抗煙草花葉病毒藥物中的應用。
[0024] 實施例1 所用翅莢決明樹皮采于云南德宏。將樹皮取樣3. 2 kg粉碎以70%的丙酮/水提取3 次，每次提取24 h，提取液合并，過濾，減壓濃縮成浸膏，得浸膏158 g。浸膏用重量比180 g 的純甲醇溶解后用200 g的80目粗硅膠拌樣，1.0 kg的160目硅膠裝柱進行硅膠柱層析， 用體積配比為10:0、9:1、8:2、7:3、6:4、5:5的氯仿-甲醇梯度洗脫，將其中體積配比為9:1 的氯仿-甲醇洗脫部分進一步用15:1-2:1的一系列氯仿-丙酮溶液進行梯度洗脫，將其先 后劃分成6個部分，其中6:4洗脫部分用安捷侖