本發(fā)明涉及一種新的喜樹堿7-位哌嗪硫脲類化合物，以及這種化合物的制備方法和其在制備抗腫瘤藥物中的用途，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
喜樹堿是源于我國珙桐科植物喜樹（Camptotheca acuminata）中的一種具有顯著細胞毒活性的喹啉類生物堿（J.Nat.Prod.2004,67,129-135），對骨癌、肝癌、膀胱癌和白血病等多種惡性腫瘤表現(xiàn)出較好的抑制作用，但喜樹堿在發(fā)揮其抗腫瘤活性時會產(chǎn)生骨髓抑制、嘔吐和腹瀉等較嚴重的副作用，且因其水溶性較差而不能直接人體非腸道給藥。為改善其水溶性和降低其毒副作用，近年來，大量的喜樹堿類化合物被設計合成與結(jié)構(gòu)優(yōu)化，其中多個活性化合物如伊立替康、拓撲替康、9-氨基喜樹堿、9-硝基喜樹堿、DX-8951f、GG211、BNP-1350、ST-1481和CKD-602等已被FDA批準上市或處于臨床研究階段（Bioorg.Med.Chem.2004,12,1585-1604;Phytochem.2004,65,2735-2749）。根據(jù)對喜樹堿的構(gòu)效關(guān)系研究表明，在喜樹堿B環(huán)C-7位進行結(jié)構(gòu)修飾而獲得的化合物與喜樹堿相比具好的成藥性價值，這可能是由于參與CPT與TopoⅠ-DNA的相互作用和穩(wěn)定E環(huán)羥基內(nèi)酯環(huán)等多種特殊功能的結(jié)果，且通過7-位取代提高了內(nèi)酯環(huán)形式在人體血漿中的比例從而間接提高該類化合物的活性并降低毒性。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一類喜樹堿7-位哌嗪硫脲類化合物，同時，本發(fā)明的另一目的是提供這一類新型化合物的制備方法及其在抗腫瘤藥物中的用途。
本發(fā)明所述的化合物為式1示的喜樹堿7-位哌嗪硫脲類化合物，
結(jié)構(gòu)式（I）中：取代基R選自對氟苯基、對氯苯基、對溴苯基、苯基、對甲基苯基、鄰甲基苯基、對甲氧基苯基、鄰甲氧基苯基、間氯苯基、對苯氧基苯基、萘基、 芐基、環(huán)己基、正丁基、正丙基、異丁基。
本發(fā)明所述化合物的制備方法是：將7-芐基哌嗪-喜樹堿三氟乙酸鹽溶于二氯甲烷中，加入適量三乙胺并攪拌使溶液澄清，再在其中加入烷基或芳基的異硫氰酸酯，在常溫下攪拌反應，反應結(jié)束后淬滅反應、除去溶劑，得到目標產(chǎn)物的粗品。本發(fā)明中所用的原料，7-芐基哌嗪-喜樹堿的制備方法參見文獻方法（J. Am. Chem. Soc. 2013, 135, 9412?9419）,烷基/芳基異硫氰酸酯，的制備方法參見文獻方法（J. Org. Chem. 2007, 72, 3969-3971和J. Org. Chem., Vol. 62, No. 13, 1997）。
原料7-芐基哌嗪-喜樹堿三氟乙酸鹽的制備方法為：在冰浴條件下，取喜樹堿2.5克于圓底燒瓶中，加入60mL75%的硫酸溶液使其攪拌溶解，隨后加入3.125克七水硫酸亞鐵，攪拌5min，在冰浴條件下，滴加40mL 40%的氯乙醛溶液，滴加完畢后攪拌5min，仍在冰浴條件下，加入12.5mL，的雙氧水。冰浴條件下反應半小時后撤去冰浴。常溫條件下反應10h后將反應進行冰浴，然后加入適量冰水，有大量黃色固體析出，抽濾得7-芐氯-喜樹堿（化合物2）。將7-芐氯-喜樹堿1.5克于圓底燒瓶中，溶于適量的干燥DMF中，再向其中加入1.6克的Boc哌嗪，室溫攪拌10hr，減壓濃縮，柱層析（氯仿-甲醇）得到7-芐基Boc哌嗪-喜樹堿（化合物3）。取7-芐基Boc哌嗪-喜樹堿1克于圓底燒瓶中，加入CH2Cl2和TFA各4mL，室溫攪拌10小時，減壓濃縮至干燥狀態(tài)，加入乙醚適量，從瓶壁上刮下化合物，過濾，得到化合物為黃色粉末（化合物4）。
其完整的制備方法參見式2：
反應中反應條件和試劑：(a) FeSO4·7H2O, 30% H2O2, ClCH2CHO, 75% H2SO4; (b) N-Boc-piperazine; (c) 50% TFA-CH2Cl2; (d) TEA, CH2Cl2。
上述制備方法中所述的烷基或芳基的異硫氰酸酯是：異硫氰酸酯化合物為對氟苯基異硫氰酸酯、對氯苯基異硫氰酸酯、對溴苯基異硫氰酸酯、苯基異硫氰酸酯、對甲基苯基異硫氰酸酯、鄰甲基苯基異硫氰酸酯、對甲氧基苯基異硫氰酸酯、鄰甲氧基苯基異硫氰酸酯、間氯苯基異硫氰酸酯、對苯氧基苯基異硫氰酸酯、萘基異硫氰酸酯、 芐基異硫氰酸酯、環(huán)己基異硫氰酸酯、正丁基異硫氰酸酯、正丙基異硫氰酸酯、異丁基異硫氰酸酯中的任意一個。
本發(fā)明所述的制備方法中優(yōu)選的方法是將0.2 mmol 7-芐基哌嗪-喜樹堿三氟乙酸鹽溶于10 mL二氯甲烷中，加入適量三乙胺并攪拌使溶液澄清，再加入0.6 mmol烷基或芳基的異硫氰酸酯。
用本發(fā)明的方法得到的目標產(chǎn)物粗品可用硅膠柱層析法進行純化，用體積比為: 70:1~100 :1的氯仿-甲醇進行洗脫。最好使用200~300目的柱層析用硅膠層析法進行純化。
本發(fā)明的化合物可在制備治療各種癌癥的藥物中的應用。這里所指的癌癥是指肺腺癌細胞（A549）、人乳腺癌細胞株（MDA-MB-231）、人口腔表皮樣癌細胞（KB）、人口腔表皮樣癌細胞耐藥株（KBvin）和人乳腺癌細胞（MCF-7）。
為了提高喜樹堿的成藥性，以現(xiàn)有喜樹堿的構(gòu)效關(guān)系研究為指導，考慮將喜樹堿7位進行修飾和改造，將有可能提高其活性并增強內(nèi)酯環(huán)穩(wěn)定性，從而得到活性更高、毒性更低的喜樹堿衍生物。基于此，本發(fā)明的實施例中將硫脲這一藥物分子上常用的活性官能團與7-芐基哌嗪-喜樹堿結(jié)合而合成了16個新型喜樹堿衍生物，以尋求更具有成藥性的喜樹堿衍生物。
經(jīng)體外抗腫瘤活性篩選結(jié)果表明，式1的化合物對人肺腺癌細胞（A549）、人乳腺癌細胞株（MDA-MB-231）、人口腔表皮樣癌細胞（KB）、人口腔表皮樣癌細胞耐藥株（KBvin）和人乳腺癌細胞（MCF-7）表現(xiàn)出較強的抑制活性，且一些化合物高于目前臨床藥物伊立替康，因此，本發(fā)明的化合物可用于制備抗腫瘤的藥物。本發(fā)明所述的喜樹堿7-位哌嗪硫脲類化合物結(jié)構(gòu)新穎、合成工藝簡單、產(chǎn)品純度高，對腫瘤細胞表現(xiàn)出較強的抑制作用，具有很好的應用前景。
具體實施方式
以下通過實施例對本發(fā)明進行解說。
實施例1：目標化合物 Ia（結(jié)構(gòu)式參見式3）的合成
原料7-芐基哌嗪-喜樹堿的合成：取喜樹堿2.5克于圓底燒瓶中，加入60mL75%的硫酸溶液使其攪拌溶解，隨后在冰浴條件下，加入3.125克七水硫酸亞鐵，攪拌5min，依舊在冰浴條件下，用恒壓漏斗滴加40mL 40%的氯乙醛溶液，滴加完畢后攪拌5min，仍在冰浴條件下，用恒壓漏斗加入12.5mL，的雙氧水。冰浴條件下反應半小時后撤去冰浴。常溫條件下反應10h后將反應進行冰浴，然后加入適量冰水，有大量黃色固體析出，抽濾，用冰水沖洗濾餅多次，再用氯仿/正己烷=7/3的溶液沖洗濾餅多次，將濾餅放入干燥塔干燥，備用，得7-芐氯-喜樹堿（化合物2）。將7-芐氯-喜樹堿1.5克于圓底燒瓶中，溶于適量的干燥DMF中，再向其中加入1.6克的Boc哌嗪，室溫攪拌10hr，減壓濃縮，柱層析（氯仿-甲醇）得到7-芐基Boc哌嗪-喜樹堿（化合物3）。取7-芐基Boc哌嗪-喜樹堿1克于圓底燒瓶中，加入CH2Cl2和TFA各4mL，室溫攪拌10小時，減壓濃縮至干燥狀態(tài)，加入乙醚適量，從瓶壁上刮下化合物，過濾，得到化合物為黃色粉末（化合物4）。
其反應參見反應式4，
反應條件和試劑：(a) FeSO4·7H2O, 30% H2O2, ClCH2CHO, 75% H2SO4; (b) N -Boc-piperazine; (c) 50% TFA-CH2Cl2。
Ia的合成：取0.2 mmol 7-芐基哌嗪-喜樹堿三氟乙酸鹽溶于10 mL二氯甲烷中，加入適量三乙胺使溶液澄清，再加入0.6mmol對甲基苯基異硫氰酸酯。在常溫下攪拌反應30-60min。反應結(jié)束后，用2 mL二氯甲烷淬滅反應，然后減壓蒸除溶劑，粗產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化，用氯仿-甲醇洗脫，得目標產(chǎn)物。
其反應參見反應式5
反應條件和試劑：(d) TEA, CH2Cl2。產(chǎn)率: 70%; 1H NMR (DMSO- d6, 400 MHz) δ : 9.25 (s, 1H, NH-H), 8.50 (d, 1H, J =8Hz, C9-H), 8.19 (d, 1H,J =8Hz, C12-H), 7.87 (t, 1H, J =8Hz, C10-H), 7.74 (t, 1H, J =8Hz, C11-H), 7.33 (s, 1H, C14-H), 7.15-7.08 (m, 4H, Ar-H), 6.55 (s, 1H, C20-OH), 5.45 (s, 2H, C17-H), 5.39 (s, 2H, C5-H), 4.17 (s, 2H, -CH2- piperazine), 3.87 (s, 4H, piperazine-H), 2.60 (s, 4H, piperazine-H), 2.27 (s, 3H, Ar-CH3-H), 1.93-1.84 (m, 2H, C19-H), 0.89 (t, 3H, J =8Hz, C18-H); MS-ESI m/z: 618.3 [M+Na]+.。
實施例2：目標化合物 Ib（結(jié)構(gòu)式參見式6）的合成
與實施例1同，僅以間氯苯基異硫氰酸酯代替對甲基苯基異硫氰酸酯。反應所得產(chǎn)物檢測數(shù)據(jù)如下：產(chǎn)率: 66%; 1H NMR (DMSO- d6, 400 MHz) δ : 9.43 (s, 1H, NH-H), 8.50 (d, 1H, J =8Hz, C9-H), 8.19 (d, 1H,J =8Hz, C12-H), 7.87 (t, 1H, J =8Hz, C10-H), 7.74 (t, 1H, J =8Hz, C11-H), 7.35-7.25 (m, 4H, C14-H, Ar-H), 7.15-7.13 (m, 1H, Ar-H), 6.55 (s, 1H, C20-OH), 5.45 (s, 2H, C17-H), 5.40 (s, 2H, C5-H), 4.18 (s, 2H, -CH2- piperazine), 3.89 (s, 4H, piperazine-H), 2.62 (s, 4H, piperazine-H), 1.92-1.84 (m, 2H, C19-H), 0.89 (t, 3H, J =8Hz, C18-H); MS-ESI m/z: 638.2 [M+Na]+.。
實施例3：目標化合物 Ic（結(jié)構(gòu)式參見式7）的合成
與實施例1同，僅以環(huán)己基異硫氰酸酯代替對甲基苯基異硫氰酸酯。反應所得產(chǎn)物檢測數(shù)據(jù)如下：產(chǎn)率: 66%; 1H NMR (DMSO- d6, 400 MHz) δ : 8.47 (d, 1H, J =8Hz, C9-H), 8.18 (d, 1H,J =8Hz, C12-H), 7.86 (t, 1H, J =8Hz, C10-H), 7.73 (t, 1H, J =8Hz, C11-H), 7.34 (s, 1H, C14-H), 6.55 (s, 1H, C20-OH), 5.44 (s, 2H, C17-H), 5.37 (s, 2H, C5-H), 4.16 (s, 2H, -CH2- piperazine), 3.86 (s, 4H, piperazine-H), 2.59 (s, 4H, piperazine-H), 2.33-2.31 (m, 1H, cyclohexylamine-H), 1.93-1.84 (m, 2H, C19-H), 1.70 (s, 2H, cyclohexylamine-H), 1.61-1.58 (m, 2H, cyclohexylamine-H), 1.26-1.07 (m, 6H, cyclohexylamine-H), 0.88 (t, 3H, J =8Hz, C18-H); MS-ESI m/z: 610.4 [M+Na]+.。
實施例4：目標化合物 Id（結(jié)構(gòu)式參見式8）的合成
與實施例1同，僅以異丁基異硫氰酸酯代替對甲基苯基異硫氰酸酯。反應所得產(chǎn)物檢測數(shù)據(jù)如下：產(chǎn)率: 75%; 1H NMR (DMSO- d6, 400 MHz) δ : 8.48 (d, 1H, J =8Hz, C9-H), 8.18 (d, 1H,J =8Hz, C12-H), 7.86 (t, 1H, J =8Hz, C10-H), 7.72 (t, 1H, J =8Hz, C11-H), 7.35 (s, 1H, C14-H), 6.55 (s, 1H, C20-OH), 5.44 (s, 2H, C17-H), 5.37 (s, 2H, C5-H), 4.13 (s, 2H, -CH2- piperazine), 3.76 (s, 4H, piperazine-H), 2.54 (s, 4H, piperazine-H), 2.00-1.82 (m, 4H, C19-H, iso-butyl-H), 1.25-1.16 (m, 1H, iso-butyl-H), 0.93-0.77 (m, 9H, C18-H, iso-butyl-H); MS-ESI m/z: 584.7 [M+Na]+.。
實施例5：目標化合物 Ie（結(jié)構(gòu)式參見式9）的合成
與實施例1同，僅以正丙基異硫氰酸酯代替對甲基苯基異硫氰酸酯。反應所得產(chǎn)物檢測數(shù)據(jù)如下：產(chǎn)率: 65%; 1H NMR (DMSO- d6, 400 MHz) δ : 8.47 (d, 1H, J =8Hz, C9-H), 8.17 (d, 1H,J =8Hz, C12-H), 7.86 (t, 1H, J =8Hz, C10-H), 7.71 (t, 1H, J =8Hz, C11-H), 7.34 (s, 1H, C14-H), 6.54 (s, 1H, C20-OH), 5.44 (s, 2H, C17-H), 5.36 (s, 2H, C5-H), 4.13 (s, 2H, -CH2- piperazine), 3.75 (s, 4H, piperazine-H), 2.54 (s, 4H, piperazine-H), 1.93-1.82 (m, 2H, C19-H), 1.53 (q, 2H, J =8Hz, n -propyl-H), 1.23-1.21 (m, 2H, n -propyl-H), 0.91-0.77 (m, 6H, C18-H, n-propyl-H); MS-ESI m/z: 570.8 [M+Na]+.。
實施例6：目標化合物 If（結(jié)構(gòu)式參見式10）的合成
與實施例1同，僅以鄰甲氧基異硫氰酸酯代替對甲基苯基異硫氰酸酯。反應所得產(chǎn)物檢測數(shù)據(jù)如下：產(chǎn)率: 73%; 1H NMR (DMSO- d6, 400 MHz) δ : 8.80 (s, 1H, NH-H), 8.50 (d, 1H, J =8Hz, C9-H), 8.19 (d, 1H,J =8Hz, C12-H), 7.87 (t, 1H, J =8Hz, C10-H), 7.74 (t, 1H, J =8Hz, C11-H), 7.35 (s, 1H, C14-H), 7.21-7.18 (m, 2H, Ar-H), 7.02 (d, 1H, J =8Hz, Ar-H), 6.90 (t, 1H, J =8Hz, Ar-H), 6.55 (s, 1H, C20-OH), 5.45 (s, 2H, C17-H), 5.39 (s, 2H, C5-H), 4.17 (s, 2H, -CH2- piperazine), 3.89 (s, 4H, piperazine-H), 3.76 (s, 3H, Ar-O-CH3), 2.61 (s, 4H, piperazine-H), 1.93-1.83 (m, 2H, C19-H), 0.88 (t, 3H, J =8Hz, C18-H); MS-ESI m/z: 634.8 [M+Na]+.
實施例7：目標化合物 Ig（結(jié)構(gòu)式參見式11）的合成
與實施例1同，僅以對氯苯基異硫氰酸酯代替對甲基苯基異硫氰酸酯。反應所得產(chǎn)物檢測數(shù)據(jù)如下：產(chǎn)率: 67%; 1H NMR (DMSO- d6, 400 MHz) δ : 9.39 (s, 1H, NH-H), 8.50 (d, 1H, J =8Hz, C9-H), 8.19 (d, 1H,J =8Hz, C12-H), 7.87 (t, 1H, J =8Hz, C10-H), 7.74 (t, 1H, J =8Hz, C11-H), 7.35-7.30 (m, 5H, C14-H, Ar-H), 6.55 (s, 1H, C20-OH), 5.44 (s, 2H, C17-H), 5.39 (s, 2H, C5-H), 4.17 (s, 2H, -CH2- piperazine), 3.88 (s, 4H, piperazine-H), 2.62 (s, 4H, piperazine-H), 1.92-1.84 (m, 2H, C19-H), 0.89 (t, 3H, J =8Hz, C18-H); MS-ESI m/z: 638.2 [M+Na]+.。
實施例8：目標化合物 Ih（結(jié)構(gòu)式參見式12）的合成
與實施例1同，僅以對溴苯基異硫氰酸酯代替對甲基苯基異硫氰酸酯。反應所得產(chǎn)物檢測數(shù)據(jù)如下：產(chǎn)率: 67%; 1H NMR (DMSO- d6, 400 MHz) δ : 9.39 (s, 1H, NH-H), 8.50 (d, 1H, J =8Hz, C9-H), 8.19 (d, 1H,J =8Hz, C12-H), 7.87 (t, 1H, J =8Hz, C10-H), 7.74 (t, 1H, J =8Hz, C11-H), 7.47-7.25 (m, 5H, C14-H, Ar-H), 6.55 (s, 1H, C20-OH), 5.45 (s, 2H, C17-H), 5.39 (s, 2H, C5-H), 4.17 (s, 2H, -CH2- piperazine), 3.88 (s, 4H, piperazine-H), 2.62 (s, 4H, piperazine-H), 1.93-1.82 (m, 2H, C19-H), 0.89 (t, 3H, J =8Hz, C18-H); MS-ESI m/z: 638.2 [M+Na]+.
實施例9：目標化合物 Ii（結(jié)構(gòu)式參見式13）的合成
與實施例1同，僅以正丁基異硫氰酸酯代替對甲基苯基異硫氰酸酯。反應所得產(chǎn)物檢測數(shù)據(jù)如下：產(chǎn)率: 64%; 1H NMR (DMSO- d6, 400 MHz) δ : 8.47 (d, 1H, J =8Hz, C9-H), 8.18 (d, 1H,J =8Hz, C12-H), 7.86 (t, 1H, J =8Hz, C10-H), 7.73 (t, 1H, J =8Hz, C11-H), 7.34 (s, 1H, C14-H), 6.54 (s, 1H, C20-OH), 5.44 (s, 2H, C17-H), 5.36 (s, 2H, C5-H), 4.13 (s, 2H, -CH2- piperazine), 3.74 (s, 4H, piperazine-H), 2.54 (s, 4H, piperazine-H), 1.91-1.84 (m, 2H, C19-H), 1.50 (q, 2H, J =8Hz, n -butyl-H), 1.32-1.23 (m, 4H, n -butyl-H), 0.91-0.83 (m, 6H, C18-H, n -butyl-H); MS-ESI m/z: 584.7 [M+Na]+.。
實施例10：目標化合物 Ij（結(jié)構(gòu)式參見式14）的合成
與實施例1同，僅以苯基異硫氰酸酯代替對甲基苯基異硫氰酸酯。反應所得產(chǎn)物檢測數(shù)據(jù)如下：產(chǎn)率: 77%; 1H NMR (DMSO- d6, 400 MHz) δ : 9.33 (s, 1H, NH-H), 8.50 (d, 1H, J =8Hz, C9-H), 8.19 (d, 1H,J =8Hz, C12-H), 7.87 (t, 1H, J =8Hz, C10-H), 7.75 (t, 1H, J =8Hz, C11-H), 7.35 (s, 1H, C14-H), 7.31-7.26 (m, 4H, Ar-H), 7.13-7.07 (m, 1H, Ar-H), 6.54 (s, 1H, C20-OH), 5.45 (s, 2H, C17-H), 5.39 (s, 2H, C5-H), 4.17 (s, 2H, -CH2- piperazine), 3.87 (s, 4H, piperazine-H), 2.62 (s, 4H, piperazine-H), 1.92-1.84 (m, 2H, C19-H), 0.89 (t, 3H, J =8Hz, C18-H); MS-ESI m/z: 604.7 [M+Na]+.。
實施例11：目標化合物 Ik（結(jié)構(gòu)式參見式15）的合成
與實施例1同，僅以鄰甲基苯基異硫氰酸酯代替對甲基苯基異硫氰酸酯。反應所得產(chǎn)物檢測數(shù)據(jù)如下：產(chǎn)率: 61%; 1H NMR (DMSO- d6, 400 MHz) δ : 9.10 (s, 1H, NH-H), 8.50 (d, 1H, J =8Hz, C9-H), 8.19 (d, 1H,J =8Hz, C12-H), 7.87 (t, 1H, J =8Hz, C10-H), 7.74 (t, 1H, J =8Hz, C11-H), 7.35 (s, 1H, C14-H), 7.29-7.03 (m, 4H, Ar-H), 6.55 (s, 1H, C20-OH), 5.45 (s, 2H, C17-H), 5.40 (s, 2H, C5-H), 4.17 (s, 2H, -CH2- piperazine), 3.88 (s, 4H, piperazine-H), 2.61 (s, 4H, piperazine-H), 2.17 (s, 3H, Ar-CH3-H), 1.92-1.84 (m, 2H, C19-H), 0.89 (t, 3H, J =8Hz, C18-H); MS-ESI m/z: 618.3 [M+Na]+.。
實施例12：目標化合物 Il（結(jié)構(gòu)式參見式16）的合成
與實施例1同，僅以對苯氧基苯基異硫氰酸酯代替對甲基苯基異硫氰酸酯。反應所得產(chǎn)物檢測數(shù)據(jù)如下：產(chǎn)率: 72%; 1H NMR (DMSO- d6, 400 MHz) δ : 9.20 (s, 1H, NH-H), 8.50 (d, 1H, J =8Hz, C9-H), 8.19 (d, 1H,J =8Hz, C12-H), 7.87 (t, 1H, J =8Hz, C10-H), 7.74 (t, 1H, J =8Hz, C11-H), 7.35 (s, 1H, C14-H), 7.15 (d, 2H, J =8Hz, Ar-H), 6.87 (d, 2H, J =8Hz, Ar-H), 6.55 (s, 1H, C20-OH), 5.45 (s, 2H, C17-H), 5.39 (s, 2H, C5-H), 4.18 (s, 2H, -CH2- piperazine), 3.89 (s, 4H, piperazine-H), 2.62 (s, 4H, piperazine-H), 2.17 (s, 3H, Ar-CH3-H), 1.92-1.84 (m, 2H, C19-H), 0.89 (t, 3H, J =8Hz, C18-H); MS-ESI m/z: 696.8 [M+Na]+.。
實施例13：目標化合物 Im（結(jié)構(gòu)式參見式17）的合成
與實施例1同，僅以對甲氧基苯基異硫氰酸酯代替對甲基苯基異硫氰酸酯。反應所得產(chǎn)物檢測數(shù)據(jù)如下：產(chǎn)率: 74%; 1H NMR (DMSO- d6, 400 MHz) δ : 9.20 (s, 1H, NH-H), 8.50 (d, 1H, J =8Hz, C9-H), 8.19 (d, 1H,J =8Hz, C12-H), 7.87 (t, 1H, J =8Hz, C10-H), 7.74 (t, 1H, J =8Hz, C11-H), 7.35 (s, 1H, C14-H), 7.15 (d, 2H, J =8Hz, Ar-H), 6.86 (d, 2H, J =8Hz, Ar-H), 6.54 (s, 1H, C20-OH), 5.44 (s, 2H, C17-H), 5.38 (s, 2H, C5-H), 4.17 (s, 2H, -CH2- piperazine), 3.87 (s, 4H, piperazine-H), 3.74 (s, 3H, Ar-O-CH3), 2.60 (s, 4H, piperazine-H), 1.93-1.83 (m, 2H, C19-H), 0.87 (t, 3H, J =8Hz, C18-H); MS-ESI m/z: 634.8 [M+Na]+.。
實施例14：目標化合物 In（結(jié)構(gòu)式參見式18）的合成
與實施例1同，僅以對氟苯基異硫氰酸酯代替對甲基苯基異硫氰酸酯。反應所得產(chǎn)物檢測數(shù)據(jù)如下：產(chǎn)率: 68%; 1H NMR (DMSO- d6, 400 MHz) δ : 9.31 (s, 1H, NH-H), 8.50 (d, 1H, J =8Hz, C9-H), 8.19 (d, 1H,J =8Hz, C12-H), 7.87 (t, 1H, J =8Hz, C10-H), 7.74 (t, 1H, J =8Hz, C11-H), 7.35 (s, 1H, C14-H), 7.30-7.26 (m, 2H, Ar-H), 7.14-7.10 (m, 2H, Ar-H), 6.53 (s, 1H, C20-OH), 5.44 (s, 2H, C17-H), 5.39 (s, 2H, C5-H), 4.18 (s, 2H, -CH2- piperazine), 3.89 (s, 4H, piperazine-H), 2.62 (s, 4H, piperazine-H), 1.93-1.83 (m, 2H, C19-H), 0.89 (t, 3H, J =8Hz, C18-H); MS-ESI m/z: 622.7 [M+Na]+.。
實施例15：目標化合物 Io（結(jié)構(gòu)式參見式19）的合成
與實施例1同，僅以芐基異硫氰酸酯代替對甲基苯基異硫氰酸酯。反應所得產(chǎn)物檢測數(shù)據(jù)如下：產(chǎn)率: 74%; 1H NMR (DMSO- d6, 400 MHz) δ : 8.48 (d, 1H, J =8Hz, C9-H), 8.18 (d, 1H,J =8Hz, C12-H), 7.86 (t, 1H, J =8Hz, C10-H), 7.73 (t, 1H, J =8Hz, C11-H), 7.35 (s, 1H, C14-H), 7.31-7.20 (m, 5H, Ar-H), 6.55 (s, 1H, C20-OH), 5.44 (s, 2H, C17-H), 5.38 (s, 2H, C5-H), 4.80 (d, 2H, J =4Hz, benzylamine-H), 4.15 (s, 2H, -CH2- piperazine), 3.81 (s, 4H, piperazine-H), 2.56 (s, 4H, piperazine-H), 1.93-1.82 (m, 2H, C19-H), 0.89 (t, 3H, J =8Hz, C18-H); MS-ESI m/z: 618.7 [M+Na]+.。
實施例16：目標化合物 Ip（結(jié)構(gòu)式參見式20）的合成
與實施例1同，僅以萘基異硫氰酸酯代替對甲基苯基異硫氰酸酯。反應所得產(chǎn)物檢測數(shù)據(jù)如下：產(chǎn)率: 73%; 1H NMR (DMSO- d6, 400 MHz) δ : 9.18 (s, 1H, NH-H), 8.53 (d, 1H, J =8Hz, C9-H), 8.25 (d, 1H, J =8Hz, naphthalene-H), 8.20 (d, 1H,J =8Hz, C12-H), 8.08 (d, 1H, J =8Hz, naphthalene-H), 7.99-7.48 (m, 7H, naphthalene-H, C10-H, C11-H), 7.36 (s, 1H, C14-H), 6.55 (s, 1H, C20-OH), 5.45 (s, 2H, C17-H), 5.39 (s, 2H, C5-H), 4.20 (s, 2H, -CH2- piperazine), 3.98 (s, 4H, piperazine-H), 2.68 (s, 4H, piperazine-H), 1.92-1.85 (m, 2H, C19-H), 0.89 (t, 3H, J =8Hz, C18-H); MS-ESI m/z: 654.8 [M+Na]+.。
化合物a-p的抗腫瘤活性的試驗方法及結(jié)果
本發(fā)明的藥理實驗采用磺酰羅丹明B（sulforhodamine B，SRB）比色法。腫瘤細胞培養(yǎng)選用10%胎牛血清（FBS）的RPMI-1640培養(yǎng)基，將腫瘤細胞接種于96孔板，每個孔培養(yǎng)3-5×103個細胞，加入不同濃度的待測試目標化合物溶液。培養(yǎng)72小時后，每孔加入預冷的三氯乙酸溶液（50%，w/v）固定細胞，冰箱中固定30分鐘。待96孔板室溫下晾干后，每孔加入0.04%（w/v）的SRB染液（1%的乙酸配制，購自Sigma Chemical公司），染色30分鐘后倒掉染液，用乙酸沖洗4次，去除未結(jié)合的染料，室溫晾干。用100μL非緩沖Tris-base堿液溶解與細胞蛋白結(jié)合的染料，水平搖床上振蕩20分鐘，采用ELx800吸收光酶標儀（美國Bio-Tek公司生產(chǎn)，操作軟件Gen5）測定515nm處吸收值。所有試驗設3個平行組或重復三次?；衔颽-p的細胞毒活性測試結(jié)果見表1。
對五種腫瘤細胞體外細胞毒活性測試結(jié)果顯示，本發(fā)明所合成的化合物對人肺腺癌細胞（A549）、人乳腺癌細胞株（MDA-MB-231）、人口腔表皮樣癌細胞（KB）、人口腔表皮樣癌細胞耐藥株（KBvin）和人乳腺癌細胞（MCF-7）等腫瘤細胞株均表現(xiàn)出較好的抑制活性，且一些化合物高于臨床藥物伊立替康的體外細胞毒活性。其中化合物f和p對受試的五種細胞均顯示出較高的活性，其活性顯著高于伊立替康，表現(xiàn)出較好的應用前景。