一種從禽肉中提取哌嗪殘留的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及獸藥殘留檢測領(lǐng)域,具體涉及一種禽肉中哌嗪殘留的提取和凈化的方 法。
【背景技術(shù)】
[0002] 在對動物源性食品中的獸藥進行檢測時,只有將藥物從樣本中提取出來,才可能 建立起高效的檢測方法。哌嗪為白色葉片狀結(jié)晶,弱堿性,在空氣中吸收4〇和C02,易溶于 水,微溶于乙醇。國內(nèi)外關(guān)于哌嗪的提取方法有一些報道,提取劑一般為甲醇、乙腈、三氯乙 酸溶液和高氯酸溶液等。目前,國內(nèi)外對豬組織、雞蛋、牛組織及蜂蜜中哌嗪提取和凈化的 方法均有報道,以1%氨水乙腈為提取劑,乙腈飽和正己烷去除脂肪以達到凈化的效果,但 該方法在本發(fā)明建立的色譜條件下所得色譜峰峰形較差,有嚴重拖尾現(xiàn)象,且提取回收率 低于60%,不能滿足哌嗪在禽肉中殘留檢測的要求。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0003] 為了解決現(xiàn)有技術(shù)不能從禽肉中提取哌嗪殘留的問題,本試驗建立了一種提取和 凈化的方法,該方法簡單、方便、快速,有機試劑用量少,提取回收率高。
[0004] 本發(fā)明的技術(shù)方案是:一種從禽肉中提取哌嗪殘留的方法,是以5. 0%三氯乙酸 水溶液和乙腈的混合溶液為提取劑處理禽肉樣品得提取液,提取液中加入乙腈飽和的正己 烷去除脂肪后,用固相萃取法凈化,再通過UPLC-MS/MS測定分析。
[0005] 具體地,將禽肉樣品均質(zhì)后,加入5. 0%三氯乙酸水溶液和乙腈混合溶液(體積比 3:1)振蕩、混勻直接提取,離心,將上清液轉(zhuǎn)移。重復(fù)提取1-2次,合并上清液,即得提取液。
[0006] 向提取液中加入乙腈飽和的正己烷去除脂肪后,過混合陽離子固相萃取小柱 (Strata-X-C),先依次用甲醇、超純水、2. 0%甲酸水溶液將SPE小柱活化平衡,上樣后待 提取液勻速流干后,再依次用2. 0%甲酸水溶液、超純水、甲醇淋洗,待小柱干燥后,最終用 10.0%氨水乙腈進行洗脫。最后洗脫液用氮氣吹干,上機前用2.OmL20.0%甲醇水溶液渦 旋振蕩溶解殘渣,轉(zhuǎn)移2.OmL復(fù)溶液至離心管中,常溫離心lOmin,將上層清液過0. 22ym濾 膜,濾液供UPLC-MS/MS和HPLC-MS/MS測定分析。
[0007] 與現(xiàn)有的技術(shù)相比,本發(fā)明采用5. 0%三氯乙酸水溶液和乙腈混合溶液為提取劑 (體積比3:1),固相萃取法凈化,所得色譜峰峰形較好,且回收率達85. 33 %以上。乙腈和三 氯乙酸可以有效地去除蛋白質(zhì),并將藥物高效地提取出來,固相萃取法能減少內(nèi)源性雜質(zhì) 的污染,樣品凈化效果較好,明顯優(yōu)于傳統(tǒng)技術(shù)。
[0008] 有益效果:本發(fā)明比較了不同提取劑(甲醇、乙腈、氨水乙腈和三氯乙酸)、不同凈 化方法(液液萃取法和固相萃取法)對提取回收率的影響,最終選擇5. 0%二氯乙酸水溶液 和乙腈混合溶液為提取劑(體積比3:1)為提取劑,固相萃取法為凈化方法,哌嗪的提取回 收率均達到90%以上。不同提取試劑、提取方法對雞肌肉中哌嗪提取回收率的影響見表1。
[0009] 表1不同提取試劑、提取方法對雞肌肉中哌嗪提取回收率的影響(% )
[0010]
【主權(quán)項】
1. 一種從禽肉中提取哌嗪殘留的方法,其特征在于,以5. 0%三氯乙酸水溶液和乙腈 的混合溶液為提取劑處理禽肉樣品得提取液,提取液中加入乙腈飽和的正己烷去除脂肪 后,用固相萃取法凈化。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述5. 0%三氯乙酸水溶液和乙腈的混合 溶液,其中5. 0%三氯乙酸水溶液和乙腈的體積比為3 :1。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述固相萃取法具體是:過混合陽離子固 相萃取小柱Strata-X-C,先依次用甲醇、超純水、2. 0%甲酸水溶液將SPE小柱活化平衡,上 樣后待提取液勻速流干后,再依次用2. 0%甲酸水溶液、超純水、甲醇淋洗,待小柱干燥后, 最終用10.0%氨水乙腈進行洗脫。
【專利摘要】本發(fā)明涉及獸藥殘留檢測領(lǐng)域,具體涉及一種禽肉中哌嗪殘留的提取和凈化的方法。該方法是以5.0%三氯乙酸水溶液和乙腈的混合溶液為提取劑處理禽肉樣品得提取液,提取液中加入乙腈飽和的正己烷去除脂肪后,用固相萃取法凈化。經(jīng)提取和凈化的樣品可供UPLC-MS/MS和HPLC-MS/MS測定分析。本發(fā)明哌嗪的提取回收率均達到90%以上。
【IPC分類】G01N30-14, G01N30-06
【公開號】CN104820045
【申請?zhí)枴緾N201510231081
【發(fā)明人】謝愷舟, 孫禮瑞, 龐茂達, 王冉, 王劍鋒, 崔璐璐, 劉建宇, 高強, 劉亞楠, 王波, 張跟喜, 戴國俊, 卜仕金, 王金玉
【申請人】揚州大學(xué)
【公開日】2015年8月5日
【申請日】2015年5月7日