吡喃衍生物對(duì)黃嘌呤氧化酶顯示出較強(qiáng)的體外抑制作用，特別是 化合物7和13對(duì)黃嘌呤氧化酶的抑制作用與陽性藥物別嘌呤醇相當(dāng)，可作為潛在的黃嘌呤 氧化酶抑制劑用于高尿酸血癥的治療。
[0057] 實(shí)驗(yàn)例2 :苯并吡喃衍生物對(duì)降低高尿酸血癥小鼠的血清尿酸水平
[0058] 試驗(yàn)動(dòng)物及分組：健康雄性KM小鼠100只，體重為15_18g，由上海靈暢生物科技 有限公司提供；
[0059] 按每籠5只進(jìn)行分籠處理后，在蘇州凱祥生物科技有限公司的屏障系統(tǒng)內(nèi)適應(yīng)性 飼養(yǎng)4天，從100只小鼠中選取體重集中的90只小鼠按體重隨機(jī)平均分為9組，每組10只， 分別為空白對(duì)照組，高尿酸血癥模型組，陽性對(duì)照組，受試化合物組（分別為本發(fā)明化合物 1、 2、3、4、5、13)。
[0060] 高尿酸血癥的造模：
[0061] 適應(yīng)期過后隨即對(duì)小鼠進(jìn)行灌胃給藥，每天上午灌胃1次，其中受試化合物組，化 合物用純水進(jìn)行混懸，按照20mg/kg進(jìn)行灌胃；陽性對(duì)照非布司他用純水進(jìn)行混懸，按照 2. 5mg/kg進(jìn)行灌胃；空白對(duì)照組和高尿酸血癥模型組均用純水灌胃進(jìn)行對(duì)照，連續(xù)灌胃7 天；
[0062] 在第7天上午灌胃0. 5小時(shí)后對(duì)小鼠進(jìn)行腹腔注射造模，其中空白對(duì)照組腹腔注 射0. 5%羧甲基纖維素鈉（CMC-Na)溶液；高尿酸血癥模型組、陽性對(duì)照組和受試化合物組 注射氧嗪酸鉀（0A)，用CMC-Na溶液進(jìn)行溶解，注射量均為300mg/kg體重；
[0063] 腹腔注射1. 5小時(shí)后摘除小鼠的眼球進(jìn)行采血，采血容量不低于0. 5mL，血樣采集 后于室溫放置約1小時(shí)，待血液完全凝固后于3500rpm/4°C條件下離心10分鐘，取血清在同 等條件下復(fù)離5分鐘，而后取0. 2mL血清使用生化分析儀檢測(cè)UA值；
[0064] 用Excel和SPSS對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)算平均數(shù)和SD，經(jīng)單因素方差分析后比 較各實(shí)驗(yàn)組的組間差異，與空白對(duì)照組相比，高尿酸血癥模型組、陽性對(duì)照組和受試化合物 組小鼠的血清尿酸水平顯著提高，有顯著性差異，表明造模成功。
[0065] 灌胃給藥與血清尿酸檢測(cè)：
[0066] 空白對(duì)照組和高尿酸血癥模型組均施以0.5%CMC-Na溶液；陽性對(duì)照組按照 2. 5mg/kg的劑量給予非布司他水溶液；受試化合物組按照20mg/kg的劑量分別給予本發(fā)明 化合物1-5、13的水溶液；
[0067] 灌胃給藥1小時(shí)后，從小鼠尾靜脈采血，室溫下放置1小時(shí)后以3000r/min離心10 分鐘，取血清，用尿酸試劑盒（磷鎢酸法）測(cè)定血尿酸值，結(jié)果如表2所示。
[0068] 表2化合物1-5、13對(duì)高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平的影響（μmol/L)

[0071] 注：*表示與高尿酸血癥模型組相比，P< 0.05 ;**表示與高尿酸血癥模型組相 t匕，P< 〇· 01 (t-test檢驗(yàn)）。
[0072] 本發(fā)明所述苯并吡喃衍生物能夠明顯降低患有高尿酸血癥小鼠的血清尿酸水平， 與高尿酸血癥模型組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可作為潛在降尿酸藥物用于高尿酸血癥的治 療。
[0073] 實(shí)驗(yàn)例3:苯并吡喃衍生物降低高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平的量效關(guān)系研究
[0074] 試驗(yàn)動(dòng)物及分組：
[0075] 健康雄性KM小鼠140只，體重為13_15g，由上海靈暢生物科技有限公司提供；
[0076] 按每籠5只進(jìn)行分籠處理后，在蘇州凱祥生物科技有限公司的屏障系統(tǒng)內(nèi)適應(yīng)性 飼養(yǎng)4天，從140只小鼠中選取體重集中的120只小鼠按體重隨機(jī)平均分為12組，每組10 只，分別為空白對(duì)照組，高尿酸血癥模型組，陽性對(duì)照組非布司他，受試化合物組（共9組， 分別為本發(fā)明化合物2-4,每個(gè)化合物分3種劑量）。
[0077] 高尿酸血癥的造模：
[0078] 適應(yīng)期過后隨即對(duì)小鼠進(jìn)行灌胃給藥，每天上午灌胃1次，其中受試化合物組，化 合物用純水混懸，分別按照10mg/kg、50mg/kg、200mg/kg三種劑量進(jìn)行灌胃；陽性對(duì)照組， 非布司他用純水混懸，按照2. 5mg/kg進(jìn)行灌胃；空白對(duì)照組和高尿酸血癥模型組均用純水 灌胃進(jìn)行對(duì)照，連續(xù)灌胃7天；
[0079] 在第7天上午灌胃0. 5h后對(duì)小鼠進(jìn)行腹腔注射造模，其中空白對(duì)照組腹腔注射 0. 5%CMC-Na溶液；高尿酸血癥模型組、陽性對(duì)照組和受試化合物組注射氧嗪酸鉀（0A)，用 CMC-Na溶液進(jìn)行溶解，注射量均為300mg/kg;
[0080] 腹腔注射1. 5h后摘除小鼠的眼球進(jìn)行采血，采血容量不低于0. 5mL，血樣采集后 于室溫放置約lh，待血液完全凝固后于3500rpm/4°C條件下離心lOmin，取血清在同等條件 下重復(fù)離心5min，而后取0. 2mL血清使用生化分析儀檢測(cè)UA值；
[0081] 用Excel和SPSS對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)算平均數(shù)和SD，經(jīng)單因素方差分析后比 較各實(shí)驗(yàn)組的組間差異，與空白對(duì)照組相比，高尿酸血癥模型組、陽性對(duì)照組和受試化合物 組小鼠的血清尿酸水平顯著提高，有顯著性差異，表明造模成功。
[0082] 灌胃給藥與血清尿酸檢測(cè)：
[0083] 空白對(duì)照組和高尿酸血癥模型組均施以0. 5 %CMC-Na溶液；陽性對(duì)照組按照 2. 5mg/kg的劑量給予非布司他水溶液；受試化合物組按照10mg/kg、50mg/kg、200mg/kg三 種劑量分別施以化合物2-4的水溶液；
[0084] 灌胃給藥lh后，從小鼠尾靜脈采血，室溫下放置lh后以3000r/min離心lOmin，取 血清，用尿酸試劑盒（磷鎢酸法）測(cè)定血尿酸值，結(jié)果如表3所示。
[0085] 表3不同劑量化合物對(duì)高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平的影響
[0087] 注：*表示與高尿酸血癥模型組相比，P< 0. 05 ;**表示與高尿酸血癥模型組相 t匕，P< 〇· 01 (t-test檢驗(yàn)）。
[0088] 本發(fā)明所述苯并吡喃衍生物能夠明顯降低患有高尿酸血癥小鼠的血清尿酸水平， 且呈現(xiàn)劑量依賴性，與高尿酸血癥模型組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可作為潛在降尿酸藥物用 于高尿酸血癥的治療。
[0089] 實(shí)驗(yàn)例4 :苯并吡喃衍生物的初步毒性和安全性研究
[0090] 試驗(yàn)動(dòng)物及分組：
[0091] 健康KM小鼠46只，雌雄各半，體重為15-18g，由上海靈暢生物科技有限公司提供； 隨機(jī)分為3組，分別為空白對(duì)照組（6只，雌雄各半）和受試化合物組（分別為化合物2、化 合物3,共2組，每組20只，雌雄各半）。
[0092] 灌胃給藥及體征觀察：
[0093] 試驗(yàn)動(dòng)物在給藥前禁食12小時(shí)，化合物2、化合物3分別用純水混懸，按最大濃度、 最大體積一次灌胃30mL/kg，最終給藥10g/kg;空白對(duì)照組用純水灌胃進(jìn)行對(duì)照；
[0094] 給藥后連續(xù)14天觀察記錄動(dòng)物中毒情況和死亡情況；
[0095] 第14天觀察結(jié)束后摘小鼠的眼球進(jìn)行采血，采血容量不低于0. 5mL，血樣采集后 于室溫放置約lh，待血液完全凝固后于3500rpm/4°C條件下離心lOmin，取血清在同等條件 下重復(fù)離心5min，取0.2mL血清使用生化儀（BECKMANCOULTERAU480)檢測(cè)丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶 (ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST)、肌酐（CRE)、甘油三酯（TG)和膽固醇（CH0L)數(shù)值，以驗(yàn)證受試化 合物對(duì)小鼠是否有影響。
[0096]觀察結(jié)果：
[0097] 灌胃給藥后，小鼠未出現(xiàn)明顯異常反應(yīng)；14天連續(xù)觀察，未見動(dòng)物出現(xiàn)任何中毒 反應(yīng)，活動(dòng)自如，進(jìn)食飲水和大小便均正常，體重正常增長，一般情況良好；46只小鼠無一 死亡，處死小鼠后尸檢，各臟器未見肉眼可見的病理改變；生化分析儀檢測(cè)結(jié)果如表4所 /_J、1〇
[0098]表4 化合物2、化合物3對(duì)小鼠丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST)、肌酐 (CRE)、甘油三酯（TG)和膽固醇（CH0L)的影響
[0099]
[0101] 本發(fā)明苯并吡喃衍生物在大劑量灌胃的條件下，未見明顯中毒跡象，同時(shí)對(duì)肝腎 功能均沒有顯著影響，顯示其具有非常高的安全性。
【具體實(shí)施方式】
[0102] 實(shí)施例1 :本發(fā)明化合物4的制備與表征
[0103] 將化合物3溶于蒸餾水中，配制成質(zhì)量百分濃度為3 %的溶液，調(diào)整溶液pH為 4. 0-6. 0,將反應(yīng)液放入高壓滅菌鍋中，在120-130°C條件下反應(yīng)40-60分鐘。待反應(yīng)液冷卻 至室溫后采用D101大孔吸附樹脂進(jìn)行分離，依次用蒸餾水和70%乙醇洗脫，濃縮洗脫液并 放置結(jié)晶，收集晶體即為本發(fā)明化合物4,對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)及表征數(shù)據(jù)如下：
[0104] (DMSO-d6,400ΜΗζ)δ：11. 90 (1Η,s), 10. 78 (1H,s), 6. 16 (1H,d,J= 5. 1Hz), 5. 27(1H,brs) ,4. 02(1H,