一種3，5?雙(羥甲基)?6?甲氧基?1h?異苯并吡喃?1?酮的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種3，5?雙（羥甲基）?6?甲氧基?1H?異苯并吡喃?1?酮的制備方法，屬于植物化學技術領域。首先將煙草全株用超聲波進行超聲提取，再用CO2超臨界萃取進行萃取，得到異香豆素類化合物，異香豆素類化合物用有機酸進行改性，液氮降溫，使一些異香豆素類化合物形成沉淀，將濾液再用有機堿進行改性，液氮降溫，再使一些異香豆素類化合物形成沉淀，將溶液通過液氮梯度降溫，產(chǎn)生沉淀，直到沉淀為3，5?雙（羥甲基）?6?甲氧基?1H?異苯并吡喃?1?酮，然后通過重結晶、干燥得到3，5?雙（羥甲基）?6?甲氧基?1H?異苯并吡喃?1?酮，使得提取工藝變得簡單，提取率增加，提取時間較常用的提取方法減少了24～26h，產(chǎn)品的純度較常規(guī)提取方法增加了20%～30%。
【專利說明】
一種3，5-雙(羥甲基)-6-甲氧基-1 H-異苯并吡喃-1 -酮的制備方法
技術領域
[0001]本發(fā)明公開了一種3，5_雙(羥甲基)-6-甲氧基-1H-異苯并吡喃-1-酮的制備方法，屬于植物化學技術領域。
【背景技術】
[0002]煙草是世界上化學成分最為復雜的植物，次生代謝產(chǎn)物非常豐富，據(jù)1982年Dube和Green等報道，煙草中已鑒定出的化學成分就超過2549種，到2008年，Rodgmar^Pperfetti的報道稱，煙草、煙草代用品以及卷煙煙氣中發(fā)現(xiàn)的化合物總數(shù)大約為8700種。目前，人們從煙草中鑒定出來的單體化學物質就超過3000多種，而且還有許多成分尚未鑒定出來。煙草除主要用于卷煙抽吸用途外，還可從中提取多種有利用價值的化學成分，從中發(fā)現(xiàn)有開發(fā)利用價值的先導性化合物。
[0003]異香豆素是一些天然產(chǎn)物的基本結構，廣泛分布于自然界中，種類繁多，人們曾用多種方法對此類化合物進行了合成。特別是最近發(fā)現(xiàn)其衍生物具有抗菌、消炎、抗癌、抑制蛋白酶和除草等生理和生物活性。由于有明顯的抗癌活性，對此類化合物研究更加活躍。為了研究這類化合物的構效關系，尋找有實用價值的抗癌藥物人們對此類化合物還進行了大量的生物活性研究。對于常見植物中有關異香豆素類化合物的提取，傳統(tǒng)方法多采用回流、滲漉法等，這些方法都需要乙醇或有機溶劑提取，再進行后續(xù)的工藝研究，其缺點是提取時間較長，工藝繁瑣且純度低。申請?zhí)枮?01410603525的專利申請文件中公開了一種異香豆素類化合物的提取方法，是以煙草全株為原料，經(jīng)浸膏提取、硅膠柱層析、高壓液相色譜分離步驟，該方法需要使用多種有機溶劑提取，并且，工藝繁瑣純度低，因此，找到一條高效的異香豆素類化合物的提取方法是非常有必要的。

【發(fā)明內容】

[0004]本發(fā)明主要解決的技術問題:針對目前3，5_雙(羥甲基)-6_甲氧基-1H-異苯并吡喃-1-酮的制備方法時間長，工藝繁瑣且純度低的問題，提供了一種3，5_雙(羥甲基)-6-甲氧基-1H-異苯并吡喃-1-酮的提取方法，首先將煙草全株用超聲波進行超聲提取，然后將提取液除去不溶物后，繼續(xù)用CO2超臨界萃取進行萃取，得到異香豆素類化合物，將異香豆素類化合物用有機酸進行改性，通過液氮降溫，使其中的一些異香豆素類化合物形成沉淀，過濾，將濾液再用四乙基氫氧化銨進行改性，通過液氮降溫，使其中的一些異香豆素類化合物形成沉淀，將溶液通過液氮以20°C為降溫梯度從_20°C開始降溫至_70°C，每次降溫都會得到沉淀，將溶液淀繼續(xù)降溫，直到產(chǎn)生的沉淀為3，5_雙(羥甲基)-6-甲氧基-1H-異苯并吡喃-1-酮，然后通過重結晶、干燥得到3，5_雙(羥甲基)-6-甲氧基-1H-異苯并吡喃-1-酮，本發(fā)明運用超聲波與CO2超臨界萃取協(xié)同進行提取，使得提取工藝變得簡單，提取率增加，提取時間較常用的提取方法減少了24?26h，本發(fā)明適合用于工業(yè)生產(chǎn)，對設備要求不高，產(chǎn)品的純度較常規(guī)提取方法增加了 20%?30%。
[0005]為了解決上述技術問題，本發(fā)明所采用的技術方案是:
(1)取干燥的煙草全株，用粉粹機粉粹，過篩，得100?200目粉末，稱取100?200g粉末放入到燒瓶中，加入600?700mL無水乙醇，置于3000?3200W超聲波萃取機上，超聲提取30?40min，過濾，得濾液，將濾液進行減壓蒸餾，濃縮至濾液體積的I /4，靜置，過濾，除去沉淀物，將濾液再次進行減壓蒸餾，得到浸膏a;
(2)將上述浸膏a置于CO2超臨界萃取儀中，加入600?700mL無水乙醇，控制萃取壓力為25?30MPa，萃取溫度為50?60°C，C02的流量為20?25kg/h，萃取2?3h，得到異香豆素類化合物；
(3)將上述異香豆素類化合物溶液加入到盛有單口燒瓶中，向燒瓶中加入3?5g馬來酸，攪拌反應I?2h，將1.0?1.2L液氮噴淋到燒瓶上，使燒瓶溫度降至-1 1?-90 °C，過濾，得濾液，自然冷卻至室溫，將濾液置于帶有溫度計的二口燒瓶中，向燒瓶中加入6?Sg四乙基氫氧化銨，攪拌反應2?3h，將0.8?1.0L液氮噴淋到燒瓶上，使燒瓶溫度降至-90?-80°C，過濾，得到濾渣；
(4)將上述濾渣置于燒杯中，向燒杯中加入300?400mL無水乙醇，將0.1?0.3L.液氮噴淋到燒杯上，使燒杯溫度降至-30?-20 °C，攪拌1?20mi η，過濾，得濾液，將濾液用0.4?
0.6L液氮噴淋，使溶液溫度降至-50?-40 0C，過濾，得濾液，將濾液用0.6?0.8L液氮噴淋，使濾液溫度降至-70?-60°C，過濾，得濾渣，S卩3，5_雙(羥甲基)-6-甲氧基-1H-異苯并吡喃-1-酮；
(5)將上述3，5_雙(羥甲基)-6-甲氧基-1H-異苯并吡喃-1-酮加入到燒杯中，向燒杯中加入200?300mL無水乙醇，攪拌20?30min，將0.6?0.8L液氮噴淋到燒杯上，使燒杯溫度降至-70?-60 °C，攪拌10?20min，過濾，得濾渣，將濾渣置于95?105 °C烘箱內干燥2?3h，得到3，5_雙(羥甲基)-6-甲氧基-1H-異苯并吡喃-1-酮。
[0006]本發(fā)明的應用方法是:稱取20?30mg本發(fā)明制備的異香豆素類化合物加入到燒杯中，向燒杯中加入200?300mL無水乙醇，攪拌20?30min，使異香豆素類化合物溶解，在5?6齡烤煙的植株上，選取適用于測試的葉片(葉行正常，無病無蟲)，先將葉片均勻撒上細金剛砂，用毛筆將備用的煙草花葉病毒源均勻抹在撒有金剛砂的葉片上，待所有中選的葉片接毒結束后，立即放在盛有藥液的培養(yǎng)皿中處理20?30 min，取出，擦去葉片上水珠和藥液，將兩個半葉復原排放在鋪有衛(wèi)生紙保濕的玻璃缸中，并蓋上玻璃蓋，控溫溫度在21?25°C，放在溫室自然光照射，2?3 d即可見枯斑，計算得到本化合物的相對抑制率為42.6%以上，本發(fā)明有很好的抗煙草花葉病毒活性。
[0007]本發(fā)明的有益效果是:
(1)本發(fā)明運用超聲波與CO2超臨界萃取協(xié)同進行提取，使得提取工藝變得簡單，提取率增加，提取時間較常用的提取方法減少了 24?26h，本發(fā)明適合用于工業(yè)生產(chǎn)，對設備要求不高，產(chǎn)品的純度較常規(guī)提取方法增加了20%?30%;
(2)本發(fā)明有很好的抗煙草花葉病毒活性。
【具體實施方式】
[0008]首先取干燥的煙草全株，用粉粹機粉粹，過篩，得100?200目粉末，稱取100?200g粉末放入到燒瓶中，加入600?700mL無水乙醇，置于3000?3200W超聲波萃取機上，超聲提取30?40min，過濾，得濾液，將濾液進行減壓蒸餾，濃縮至濾液體積的1/4，靜置，過濾，除去沉淀物，將濾液再次進行減壓蒸餾，得到浸膏a;將上述浸膏a置于CO2超臨界萃取儀中，加入600?700mL無水乙醇，控制萃取壓力為25?30MPa，萃取溫度為50?60 °C，CO2的流量為20?25kg/h，萃取2?3h，得到異香豆素類化合物;將上述異香豆素類化合物溶液加入到盛有單口燒瓶中，向燒瓶中加入3?5g馬來酸，攪拌反應I?2h，將1.0?1.2L液氮噴淋到燒瓶上，使燒瓶溫度降至-110?-90 V，過濾，得濾液，自然冷卻至室溫，將濾液置于帶有溫度計的二口燒瓶中，向燒瓶中加入6?8g四乙基氫氧化銨，攪拌反應2?3h，將0.8?1.0L液氮噴淋到燒瓶上，使燒瓶溫度降至-90?-80°C，過濾，得到濾渣;將上述濾渣置于燒杯中，向燒杯中加入300?400mL無水乙醇，將0.1?0.3L液氮噴淋到燒杯上，使燒杯溫度降至-30?-20°C，攪拌10?20min，過濾，得濾液，將濾液用0.4?0.6L液氮噴淋，使溶液溫度降至_50?-40°C，過濾，得濾液，將濾液用0.6?0.8L液氮噴淋，使濾液溫度降至-70?-60°C，過濾，得濾渣，SP3，5_雙(羥甲基)-6-甲氧基-1H-異苯并吡喃-1-酮;將上述3，5_雙(羥甲基)-6-甲氧基-1H-異苯并卩比喃-1-酮加入到燒杯中，向燒杯中加入200?300mL無水乙醇，攪拌20?30min，將0.6?0.8L.液氮噴淋到燒杯上，使燒杯溫度降至-70?-60°C，攪拌10?20min，過濾，得濾渣，將濾渣置于95?105°C烘箱內干燥2?3h，得到3，5_雙(羥甲基)-6-甲氧基-1H-異苯并吡喃-1-酮。
[0009]實例I
首先取干燥的煙草全株，用粉粹機粉粹，過篩，得100目粉末，稱取10g粉末放入到燒瓶中，加入600mL無水乙醇，置于3000W超聲波萃取機上，超聲提取30min，過濾，得濾液，將濾液進行減壓蒸餾，濃縮至濾液體積的1/4，靜置，過濾，除去沉淀物，將濾液再次進行減壓蒸餾，得到浸膏a;將上述浸膏a置于CO2超臨界萃取儀中，加入600mL無水乙醇，控制萃取壓力為25MPa，萃取溫度為50 V，CO2的流量為20kg/h，萃取2h，得到異香豆素類化合物;將上述異香豆素類化合物溶液加入到盛有單口燒瓶中，向燒瓶中加入3g馬來酸，攪拌反應lh，將1.0L液氮噴淋到燒瓶上，使燒瓶溫度降至-1lOtC，過濾，得濾液，自然冷卻至室溫，將濾液置于帶有溫度計的二口燒瓶中，向燒瓶中加入6g四乙基氫氧化銨，攪拌反應2h，將0.8L液氮噴淋到燒瓶上，使燒瓶溫度降至_90°C，過濾，得到濾渣;將上述濾渣置于燒杯中，向燒杯中加入300mL無水乙醇，將0.1L液氮噴淋到燒杯上，使燒杯溫度降至-30°C，攪拌lOmin，過濾，得濾液，將濾液用0.4L.液氮噴淋，使溶液溫度降至-50 0C，過濾，得濾液，將濾液用0.6L.液氮噴淋，使濾液溫度降至_70°C，過濾，得濾渣，S卩3，5_雙(羥甲基)-6-甲氧基-1H-異苯并吡喃-1-酮;將上述3，5-雙(輕甲基)-6_甲氧基-1H-異苯并卩比喃-1-酮加入到燒杯中，向燒杯中加入200mL無水乙醇，攪拌20min，將0.6L.液氮噴淋到燒杯上，使燒杯溫度降至_70°C，攪拌1min，過濾，得濾渣，將濾渣置于95°C烘箱內干燥2h，得到3，5_雙(羥甲基)-6-甲氧基-1H-異苯并吡喃-1-酮。
[0010]稱取20mg本發(fā)明制備的異香豆素類化合物加入到燒杯中，向燒杯中加入200mL無水乙醇，攪拌20min，使異香豆素類化合物溶解，在5齡烤煙的植株上，選取適用于測試的葉片(葉行正常，無病無蟲)，先將葉片均勻撒上細金剛砂，用毛筆將備用的煙草花葉病毒源均勻抹在撒有金剛砂的葉片上，待所有中選的葉片接毒結束后，立即放在盛有藥液的培養(yǎng)皿中處理20 min，取出，擦去葉片上水珠和藥液，將兩個半葉復原排放在鋪有衛(wèi)生紙保濕的玻璃缸中，并蓋上玻璃蓋，控溫溫度在21°C，放在溫室自然光照射，3d即可見枯斑，計算得到本化合物的相對抑制率為42.6%，本發(fā)明有很好的抗煙草花葉病毒活性。
[0011]實例2
首先取干燥的煙草全株，用粉粹機粉粹，過篩，得150目粉末，稱取150g粉末放入到燒瓶中，加入650mL無水乙醇，置于3100W超聲波萃取機上，超聲提取35min，過濾，得濾液，將濾液進行減壓蒸餾，濃縮至濾液體積的1/4，靜置，過濾，除去沉淀物，將濾液再次進行減壓蒸餾，得到浸膏a;將上述浸膏a置于CO2超臨界萃取儀中，加入650mL無水乙醇，控制萃取壓力為28MPa，萃取溫度為55°C，CO2的流量為23kg/h，萃取2.5h，得到異香豆素類化合物;將上述異香豆素類化合物溶液加入到盛有單口燒瓶中，向燒瓶中加入4g馬來酸，攪拌反應1.5h，將
1.1L液氮噴淋到燒瓶上，使燒瓶溫度降至-100°C，過濾，得濾液，自然冷卻至室溫，將濾液置于帶有溫度計的二口燒瓶中，向燒瓶中加入7g四乙基氫氧化銨，攪拌反應2.5h，將0.9L液氮噴淋到燒瓶上，使燒瓶溫度降至_85°C，過濾，得到濾渣;將上述濾渣置于燒杯中，向燒杯中加入350mL無水乙醇，將0.2L液氮噴淋到燒杯上，使燒杯溫度降至_25°C，攪拌15min，過濾，得濾液，將濾液用0.5L液氮噴淋，使溶液溫度降至-45 V，過濾，得濾液，將濾液用0.7L液氮噴淋，使濾液溫度降至_65°C，過濾，得濾渣，S卩3，5_雙(羥甲基)-6-甲氧基-1H-異苯并吡喃-1-酮;將上述3，5_雙(羥甲基)-6-甲氧基-1H-異苯并吡喃-1-酮加入到燒杯中，向燒杯中加入250mL無水乙醇，攪拌25min，將0.7L液氮噴淋到燒杯上，使燒杯溫度降至_65°C，攪拌15min，過濾，得濾渣，將濾渣置于100°C烘箱內干燥2.5h，得到3，5_雙(羥甲基)-6-甲氧基-1H-異苯并吡喃-1-酮。
[0012]稱取25mg本發(fā)明制備的異香豆素類化合物加入到燒杯中，向燒杯中加入250mL無水乙醇，攪拌25min，使異香豆素類化合物溶解，在5齡烤煙的植株上，選取適用于測試的葉片(葉行正常，無病無蟲)，先將葉片均勻撒上細金剛砂，用毛筆將備用的煙草花葉病毒源均勻抹在撒有金剛砂的葉片上，待所有中選的葉片接毒結束后，立即放在盛有藥液的培養(yǎng)皿中處理25min，取出，擦去葉片上水珠和藥液，將兩個半葉復原排放在鋪有衛(wèi)生紙保濕的玻璃缸中，并蓋上玻璃蓋，控溫溫度在23 V，放在溫室自然光照射，2.5 d即可見枯斑，計算得到本化合物的相對抑制率為43.1%，本發(fā)明有很好的抗煙草花葉病毒活性。
[0013]實例3
首先取干燥的煙草全株，用粉粹機粉粹，過篩，得200目粉末，稱取200g粉末放入到燒瓶中，加入700mL無水乙醇，置于3200W超聲波萃取機上，超聲提取40min，過濾，得濾液，將濾液進行減壓蒸餾，濃縮至濾液體積的1/4，靜置，過濾，除去沉淀物，將濾液再次進行減壓蒸餾，得到浸膏a;將上述浸膏a置于CO2超臨界萃取儀中，加入700mL無水乙醇，控制萃取壓力為30MPa，萃取溫度為60 V，CO2的流量為25kg/h，萃取3h，得到異香豆素類化合物;將上述異香豆素類化合物溶液加入到盛有單口燒瓶中，向燒瓶中加入5g馬來酸，攪拌反應2h，將1.2L液氮噴淋到燒瓶上，使燒瓶溫度降至-900C，過濾，得濾液，自然冷卻至室溫，將濾液置于帶有溫度計的二口燒瓶中，向燒瓶中加入8g四乙基氫氧化銨，攪拌反應3h，將1.0L液氮噴淋到燒瓶上，使燒瓶溫度降至-80°C，過濾，得到濾渣;將上述濾渣置于燒杯中，向燒杯中加入400mL無水乙醇，將0.3L液氮噴淋到燒杯上，使燒杯溫度降至-20 V，攪拌20min，過濾，得濾液，將濾液用0.6L液氮噴淋，使溶液溫度降至-40 0C，過濾，得濾液，將濾液用0.8L.液氮噴淋，使濾液溫度降至_60°C，過濾，得濾渣，S卩3，5_雙(羥甲基)-6-甲氧基-1H-異苯并吡喃-1-酮;將上述3，5-雙(輕甲基)-6_甲氧基-1H-異苯并卩比喃-1-酮加入到燒杯中，向燒杯中加入300mL無水乙醇，攪拌Omin，將0.8L液氮噴淋到燒杯上，使燒杯溫度降至_60 °C，攪拌20min，過濾，得濾渣，將濾渣置于105°C烘箱內干燥3h，得到3，5_雙(羥甲基)-6-甲氧基-1H-異苯并吡喃-1-酮。
[0014]稱取30mg本發(fā)明制備的異香豆素類化合物加入到燒杯中，向燒杯中加入300mL無水乙醇，攪拌30min，使異香豆素類化合物溶解，在6齡烤煙的植株上，選取適用于測試的葉片(葉行正常，無病無蟲)，先將葉片均勻撒上細金剛砂，用毛筆將備用的煙草花葉病毒源均勻抹在撒有金剛砂的葉片上，待所有中選的葉片接毒結束后，立即放在盛有藥液的培養(yǎng)皿中處理30 min，取出，擦去葉片上水珠和藥液，將兩個半葉復原排放在鋪有衛(wèi)生紙保濕的玻璃缸中，并蓋上玻璃蓋，控溫溫度在25°C，放在溫室自然光照射，2 d即可見枯斑，計算得到本化合物的相對抑制率為44.7%，本發(fā)明有很好的抗煙草花葉病毒活性。
【主權項】
1.一種3，5_雙(羥甲基)-6-甲氧基-1H-異苯并吡喃-1-酮的制備方法，其特征在于具體制備步驟為: (1)取干燥的煙草全株，用粉粹機粉粹，過篩，得100?200目粉末，稱取100?200g粉末放入到燒瓶中，加入600?700mL無水乙醇，置于3000?3200W超聲波萃取機上，超聲提取30?40min，過濾，得濾液，將濾液進行減壓蒸餾，濃縮至濾液體積的I /4，靜置，過濾，除去沉淀物，將濾液再次進行減壓蒸餾，得到浸膏a; (2)將上述浸膏a置于⑶2超臨界萃取儀中，加入600?700mL無水乙醇，控制萃取壓力為25?30MPa，萃取溫度為50?60°C，C02的流量為20?25kg/h，萃取2?3h，得到異香豆素類化合物溶液； (3)將上述異香豆素類化合物溶液加入到盛有單口燒瓶中，向燒瓶中加入3?5g馬來酸，攪拌反應I?2h，將1.0?1.2L液氮噴淋到燒瓶上，使燒瓶溫度降至-1 1?-90 °C，過濾，得濾液，自然冷卻至室溫，將濾液置于帶有溫度計的二口燒瓶中，向燒瓶中加入6?Sg四乙基氫氧化銨，攪拌反應2?3h，將0.8?1.0L液氮噴淋到燒瓶上，使燒瓶溫度降至-90?-80°C，過濾，得到濾渣； (4)將上述濾渣置于燒杯中，向燒杯中加入300?400mL無水乙醇，將0.1?0.3L液氮噴淋到燒杯上，使燒杯溫度降至-30?-20 °C，攪拌1?20mi η，過濾，得濾液，將濾液用0.4?.0.6L液氮噴淋，使溶液溫度降至-50?-40 0C，過濾，得濾液，將濾液用0.6?0.8L液氮噴淋，使濾液溫度降至-70?-60°C，過濾，得濾渣，S卩3，5_雙(羥甲基)-6-甲氧基-1H-異苯并吡喃-1-酮； (5)將上述3，5_雙(羥甲基)-6-甲氧基-1H-異苯并吡喃-1-酮加入到燒杯中，向燒杯中加入200?300mL無水乙醇，攪拌20?30min，將0.6?0.8L液氮噴淋到燒杯上，使燒杯溫度降至-70?-60 °C，攪拌10?20min，過濾，得濾渣，將濾渣置于95?105 °C烘箱內干燥2?3h，得到3，5_雙(羥甲基)-6-甲氧基-1H-異苯并吡喃-1-酮。
【文檔編號】C07D311/76GK106083801SQ201610485014
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年6月28日
【發(fā)明人】陳建峰, 孟浩影
【申請人】陳建峰