一種促進木瓜蛋白酶活性的方法及其在啤酒澄清中的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明涉及食品加工領(lǐng)域，具體涉及一種促進木瓜蛋白酶活性的方法及其在啤酒澄清中的應(yīng)用。本發(fā)明所述的促進木瓜蛋白酶活性及其澄清啤酒的方法，是將酶促進劑8?(（4?（2,4?二甲氧基苯基）哌嗪?1?基）甲基）?5,7?二羥基?3?（4?羥基苯基）?4H?苯并吡喃?4?酮與木瓜蛋白酶一起添加到原漿啤酒中，可制備澄清的啤酒。本發(fā)明的木瓜蛋白酶促進劑提高了木瓜蛋白酶的活性，改善澄清效果，降低木瓜蛋白酶的使用量；本發(fā)明可以保證啤酒在運輸、冷藏過程中的高澄清度，也能改善啤酒的口感，提高了啤酒中多肽的含量，增加了啤酒的營養(yǎng)價值。
【專利說明】
一種促進木瓜蛋白酶活性的方法及其在啤酒澄清中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及食品加工領(lǐng)域，具體涉及一種促進木瓜蛋白酶活性的方法及其在啤酒 澄清中的應(yīng)用"。 技術(shù)背景
[0002] 木瓜蛋白酶是一種熱穩(wěn)定性好、天然衛(wèi)生安全的蛋白質(zhì)水解酶，別名番木瓜酶或 木瓜酶，分子量為23406,由一種單肽鏈組成，具有低特異性的特點，Cys25、Hisl59和Aspl58 這三個氨基酸殘基存在于木瓜蛋白酶的活性中心部位?？蓮姆竟系母⑶o、葉和果實內(nèi)提 取出木瓜蛋白酶。根據(jù)《GB 2760-2011食品安全國家標準食品添加劑使用標準》的規(guī)定， 木瓜蛋白酶可用作食品工業(yè)的加工助劑，即酶制劑"。
[0003] 啤酒在運輸、冷藏過程中，由于光照、震動、溫度等環(huán)境條件的作用，會產(chǎn)生渾濁、 沉淀的現(xiàn)象，引起啤酒渾濁、沉淀的原因是啤酒中殘留的蛋白質(zhì)與多元酚結(jié)合成大分子的 復(fù)合物。采用木瓜蛋白酶處理原漿啤酒，可以分解啤酒中的大分子蛋白質(zhì)，此法具有快速、 簡便、效果好等特點，在生產(chǎn)中有重要的應(yīng)用價值。但木瓜蛋白酶價格較高，影響了啤酒的 生產(chǎn)成本和木瓜蛋白酶的應(yīng)用領(lǐng)域"。
[0004] 8-((4-(2,4-二甲氧基苯基)哌嗪-1-基）甲基）_5,7 -二羥基-3-(4-羥基苯基）-4H-苯并吡喃-4-酮是染料木素與1-(2,4_二甲基苯基)哌嗪經(jīng)化學(xué)合成得到的一種染料木 素衍生物，是對染料木素的改性。8-((4-(2,4_二甲氧基苯基)哌嗪-1-基）甲基）_5,7 -二 羥基-3-(4-羥基苯基）-紐-苯并吡喃-4-酮分子式為〇28112必2〇5，分子量472.52，其結(jié)構(gòu)式如 下"。
[00WI
目前，國內(nèi)外未見8-((4-(2,4-二甲氧基苯基)哌嗪-1-基）甲基）_5,7 -二羥基-3-(4-羥基苯基）-4H-苯并吡喃-4-酮在促進木瓜蛋白酶活性方面的應(yīng)用報道"。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種采用8-((4-(2,4_二甲氧基苯基)哌嗪-1-基）甲基）-5， 7 -二羥基-3-(4-羥基苯基）-4H-苯并吡喃-4-酮作為酶促進劑，促進木瓜蛋白酶活性的方 法，不僅改善啤酒的澄清效果，而且得到的澄清啤酒，營養(yǎng)價值更高"。
[0007] 本發(fā)明所述的促進木瓜蛋白酶活性的方法，是將酶促進劑8-((4-(2,4-二甲氧基 苯基）哌嗪-1-基）甲基）-5,7 -二羥基-3-(4-羥基苯基）-4H-苯并吡喃-4-酮與木瓜蛋白 酶一起添加到原漿啤酒中，制備澄清的啤酒"。
[0008] 其中： 木瓜蛋白酶促進劑的添加量為木瓜蛋白酶質(zhì)量的2~4%，木瓜蛋白酶的添加量為每升 原衆(zhòng)啤酒中添加4~5mg"。
[0009] 酶解溫度為60~65°C，酶解時間為32~34h"。
[0010]酶解之后，采用截斷分子量為20000的中空纖維超濾膜超濾"。
[0011] 木瓜蛋白酶促進劑8-((4-(2,4-二甲氧基苯基)哌嗪-1-基）甲基）_5,7 -二羥基- 3-(4-羥基苯基）-4H-苯并吡喃-4-酮，為染料木素與1-(2,4-二甲基苯基)哌嗪的化學(xué)合成 物，具體制備過程如下"。
[0012] 在50mL圓底燒瓶中加入染料木素 lmmol，無水乙醇25mL和37%甲醛水溶液0.08mL， 加熱至55~60 °C，反應(yīng)液澄清后，加入1-(2，4-二甲基苯基)哌嗪0.19mL，室溫攪拌48h，有 固體析出，過濾，固體經(jīng)重結(jié)晶分離純化，得到本發(fā)明的酶促進劑"。
[0013] 木瓜蛋白酶促進劑與木瓜蛋白酶的一個精氨酸殘基以一個氫鍵相互結(jié)合，并以四 個η鍵分別與另外兩個精氨酸殘基結(jié)合，這種結(jié)合導(dǎo)致了木瓜蛋白酶構(gòu)象的改變，從而提高 了木瓜蛋白酶的活性"。
[0014] 與現(xiàn)有的技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果如下"。
[0015] (1)本發(fā)明的木瓜蛋白酶促進劑提高了木瓜蛋白酶的活性，其與木瓜蛋白酶一起 添加到原漿啤酒中，具有協(xié)同作用，降低了木瓜蛋白酶的使用量，改善了啤酒的澄清效果， 保證了啤酒在運輸、冷藏過程中的高澄清度"。
[0016] (2)本發(fā)明的制作方法，改善了啤酒的口感，提高了多肽的含量，增加了啤酒的營 養(yǎng)價值"。
【具體實施方式】
[0017] 以下結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步描述"。
[0018] 實施例1 在原漿啤酒中，加入4mg/L的木瓜蛋白酶，同時加入占木瓜蛋白酶質(zhì)量2%的木瓜蛋白酶 促進劑8-((4-(2,4-二甲氧基苯基）哌嗪-1-基）甲基）_5,7 -二羥基-3-(4-羥基苯基）-4H-苯并吡喃-4-酮，在溫度為65°C條件下氣浴震蕩32h，酶解澄清結(jié)束后，中空纖維超濾膜 超濾，得到澄清的啤酒"。
[0019]加木瓜蛋白酶促進劑后比未使用木瓜蛋白酶的啤酒比，澄清度提高了37%，比未使 用木瓜蛋白酶促進劑相比澄清度提高了 13%。使用和未使用木瓜蛋白酶促進劑的啤酒比未 使用木瓜蛋白酶的啤酒的多肽含量分別升高了 9.6%和3.5%"。
[0020] 實施例2 在原漿啤酒中，加入5mg/L的木瓜蛋白酶，同時加入占木瓜蛋白酶質(zhì)量4%的木瓜蛋白酶 促進劑8-((4-(2,4-二甲氧基苯基）哌嗪-1-基）甲基）_5,7 -二羥基-3-(4-羥基苯基）-4H-苯并吡喃-4-酮，在溫度為60°C條件下氣浴震蕩34h，酶解澄清結(jié)束后，中空纖維超濾膜 超濾，得到澄清的啤酒"。
[0021]加木瓜蛋白酶促進劑后比未使用木瓜蛋白酶的啤酒比，澄清度提高了25%，比未使 用木瓜蛋白酶促進劑相比澄清度提高了 3%。使用和未使用木瓜蛋白酶促進劑的啤酒比未使 用木瓜蛋白酶的啤酒的多肽含量分別升高了 7.5%和1.2%"。
【主權(quán)項】
1. 一種促進木瓜蛋白酶活性的方法及其在啤酒澄清中的應(yīng)用，其特征在于:木瓜蛋白 酶促進劑8-((4-(2,4-二甲氧基苯基)哌嗪-1-基）甲基）_5,7 -二羥基-3-(4-羥基苯基）-4H-苯并吡喃-4-酮與木瓜蛋白酶一起添加到原漿啤酒中，制備澄清的啤酒。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種促進木瓜蛋白酶活性的方法及其在啤酒澄清中的應(yīng)用， 其特征在于:酶促進劑的添加量為木瓜蛋白酶質(zhì)量的2~4%，木瓜蛋白酶的添加量為每升原 衆(zhòng)啤酒中添加4~5mg木瓜蛋白酶。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種促進木瓜蛋白酶活性的方法及其在啤酒澄清中的應(yīng)用， 其特征在于:酶解溫度為60~65 °C，酶解時間為32~34 h。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種促進木瓜蛋白酶活性的方法及其在啤酒澄清中的應(yīng)用， 其特征在于:在原漿啤酒中，加入木瓜蛋白酶和木瓜蛋白酶促進劑，經(jīng)酶解、超濾后即可得 到澄清的啤酒;加木瓜蛋白酶促進劑后比未使用木瓜蛋白酶的啤酒比，澄清度提高了 25~ 37%，比未使用木瓜蛋白酶促進劑相比澄清度提高了 3~13%;使用和未使用木瓜蛋白酶促進 劑的啤酒比未使用木瓜蛋白酶的啤酒的澄清度提高了多肽含量分別升高了 7.5~9.6%和 1.2~3.5%〇5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種促進木瓜蛋白酶活性的方法及其在啤酒澄清中的應(yīng)用， 其特征在于:采用截斷分子量為20000的中空纖維超濾膜超濾。
【文檔編號】C12H1/15GK106065389SQ201610638165
【公開日】2016年11月2日
【申請日】2016年8月8日
【發(fā)明人】周泉城, 馮傳興, 王琪, 孫婉婷, 王賽, 解志軻, 孫陽, 董芬
【申請人】山東理工大學(xué)