二酮哌嗪類化合物及其制備方法和用途
【專利摘要】本發(fā)明公開了二酮哌嗪類化合物及其制備方法和用途，其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是有兩個苯丙氨酸縮合而成，并有苯環(huán)部分雙鍵的水解和乙?；唧w結(jié)構(gòu)如化合物1和2所示，其制備步驟如下：1）將球孢枝孢菌保藏號CCTCC?NO：M2014098劃線接種到2216-E固體培養(yǎng)基上，于28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)活化1天后接種到2216-E液體培養(yǎng)基中在溫度為28℃，搖床轉(zhuǎn)速為150r/min的條件下發(fā)酵8天獲取發(fā)酵液；2）將發(fā)酵液用離心機(jī)離心去除菌體，用活化的大孔樹脂吸附過濾發(fā)酵上清液后用乙醇洗脫后，蒸干洗脫液獲取粗浸膏；3）將粗浸膏經(jīng)HSCCC分離純化得到化合物1和2，優(yōu)點(diǎn)是具有細(xì)胞增殖抑制以及直接殺傷癌細(xì)胞等抗腫瘤活性。
【專利說明】二酮哌嗪類化合物及其制備方法和用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種二酮哌嗪類化合物，尤其是涉及一種用球孢枝孢菌制備二酮哌嗪類化合物的方法以及該類化合物在制備細(xì)胞增殖抑制劑或抗腫瘤劑中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002]二酮哌嗪類化合物(Diketopiperazines, DKPs)的基本結(jié)構(gòu)是由2個氨基酸縮合而成的環(huán)二肽(DKP)，因其骨架具有穩(wěn)定的六元環(huán)結(jié)構(gòu)，且有2個氫鍵給體和2個氫鍵受體，使得DKPs在藥物化學(xué)中成為一個重要的藥效團(tuán)，且它們的研究也為多肽化學(xué)方向研究奠定了基礎(chǔ)。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)許多有活性的DKP。如Ambewelamide A、AmbewelamideB、phenylahistin 和 verticillin A 具有抗腫瘤活性(參見文獻(xiàn)如 Chu M, TruumeesI, Rothofsky ML, Patel MG, Gentile F，Das PR, Puar MS, Lin SL(1995) Inhibit1n ofc-fos proto-oncogene induct1n by Sch52900and Sch52901, novel diketopiperazinesproduced by Gl1cladium sp.J Antib1t (Tokyo) 48:1440-1445 ；如 Kanoh K, Kohno S,Katada J, Hayashi Y, Muramatsu M, Uno I (1999a) Anti tumor activity of phenylahistin invitro and in viv0.B1sci B1technol B1chem63:1130-1133 ；Kanoh K, Kohno S, KatadaJ, Takahashi J, Uno I (1999b) (-)-等；)Gl1toxin 和 sirodesmin PL 具有抗菌、抗病毒和免疫抑制活性(參見文獻(xiàn)如 Sutton P, Newcombe NR, Waring P, Miillbacher A(1994)In vivo immunosuppressive activity of gl1toxin, a metabolite produced by humanpathogenic fung1.1nfect Tmmun62:1192-1198 ； 如 Sutton P, Waring P, Mil llbacherA(1996)Exacerbat1n of invasive aspergillosis by the immunosuppressive fungalmetabolite, gl1toxin.Tmmunol Cell B1l74:318-322 ；ffaring P, Beaver J(1996)Gl1toxin and related epipolyth1d1xopiperazines.Gen Pharmaco127:1311-1316)等。
[0003]該類化合物是一類較常見的真菌代謝產(chǎn)物，其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是都是有兩個氨基酸酰胺化環(huán)合衍生而得。本發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)球孢枝孢菌Cladosporiumsphaerospermum液體發(fā)酵產(chǎn)物經(jīng)超聲破碎后的粗提物有很好的細(xì)胞壞死活性，遂對其活性成分進(jìn)行了研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)了三個含硫二酮哌嗪類化合物具有抗腫瘤活性，目前尚未見對該化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)及細(xì)胞增殖抑制活性的報(bào)道，因此市場上也尚未見有與此相關(guān)的藥物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種結(jié)構(gòu)獨(dú)特的具有細(xì)胞增殖抑制以及直接殺傷癌細(xì)胞等抗腫瘤活性的二酮哌嗪類化合物及其制備方法和用途。
[0005]本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為:一種二酮哌嗪類化合物，其結(jié)構(gòu)有兩個苯丙氨酸縮合而成，并有苯環(huán)部分雙鍵的水解和乙?；唧w結(jié)構(gòu)如化合物I和2所示，
[0006](I)化合物 I
[0007]
【權(quán)利要求】
1.一種二酮哌嗪類化合物，其特征在于:其結(jié)構(gòu)有兩個苯丙氨酸縮合而成，并有苯環(huán)部分雙鍵的水解和乙?；唧w結(jié)構(gòu)如化合物I和2所示， (1)化合物I

2.—種權(quán)利要求1所述的二酮哌嗪類化合物的制備方法，其特征在于具體包括如下步驟: (O發(fā)酵生產(chǎn) 將球孢枝孢菌iCladosporiumsphaerospermum，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號是:CCTCC NO: M 2014098)劃線接種到含有2216-E固體培養(yǎng)基的平板上，于28°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)活化I天后，將活化的單克隆菌落接種到裝有2216-E液體培養(yǎng)基的裝液量為40%的三角錐形瓶中發(fā)酵培養(yǎng)，在溫度為28°C，搖床轉(zhuǎn)速為150 r/min的條件下發(fā)酵8天，獲取發(fā)酵液； (2)浸膏的獲得 將發(fā)酵液用離心機(jī)離心去除菌體，獲取發(fā)酵上清液，然后用活化的大孔樹脂吸附過濾發(fā)酵上清液，接著用80%乙醇對其洗脫，最后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干洗脫液，獲取粗浸膏； (3)化合物的分離精制 a.將正己烷、乙酸乙酯、甲醇和純水按體積比1:1:1:1的比例混合后作為高速逆流色譜儀(HSCCC)的第一兩相體系，將正己烷、乙酸乙酯、甲醇和純水按體積比2:1:2:1的比例混合后作為高速逆流色譜儀(HSCCC)的第二兩相體系； b.取300毫克粗浸膏溶于6毫升第一兩相體系中，離心獲取上清液，然后在HSCCC梯度洗脫模式下先在第一兩相體系的下相的洗脫下獲取化合物I (14.3毫克)，接著在第二兩相體系的下相的洗脫下獲取化合物2 (25.4毫克)，化合物結(jié)構(gòu)如下所示，(I)化合物I
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種二酮哌嗪類化合物的制備方法，其特征在于:所述的2216-E固體培養(yǎng)基的配制方法如下:將蛋白胨0.5g，酵母膏0.lg，硫酸鐵0.01g,固體瓊脂2g，溶于10ml海水中，調(diào)PH值至7.2。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種二酮哌嗪類化合物的制備方法，其特征在于:所述的2216-E液體培養(yǎng)基的配制方法如下:將蛋白胨5g，酵母膏l(xiāng)g，硫酸鐵0.lg，溶于100ml海水中，調(diào)PH值至7.2。
5.權(quán)利要求1所述的二酮哌嗪類化合物1、2在制備抗腫瘤藥物中的用途。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用途，其特征在于:所述的抗腫瘤藥物是指所述的酮哌嗪類化合物1、2在制備抑制腫瘤細(xì)胞增殖抑制劑或腫瘤細(xì)胞殺傷劑中的用途。
【文檔編號】A61P35/00GK104031051SQ201410213098
【公開日】2014年9月10日 申請日期:2014年5月20日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月20日
【發(fā)明者】何山, 嚴(yán)小軍, 顧斌斌, 丁立建 申請人:寧波大學(xué)