專利名稱：苯并吡喃化合物的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及苯并吡喃化合物或含至少一種苯并吡喃化合物提取物在制備用于預(yù)防或治療丙型肝炎產(chǎn)品中的用途。
背景技術(shù)：
下面通式1-4代表的苯并吡喃化合物是已知化合物，但有關(guān)通式1-4針對丙肝生物活性至今未見報(bào)道。
丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus，HCV)是一種導(dǎo)致丙型肝炎的病毒，目前對HCV的治療還沒有很好的方法或藥物。由于HCV的組織培養(yǎng)和方便的動(dòng)物模型目前還沒有得到解決，因此，目前人們對拮抗HCV產(chǎn)品的尋找可通過確定是否對HCV基因組編碼的NS3絲氨酸蛋白酶產(chǎn)生抑制來進(jìn)行。即人們選擇HCV NS3絲氨酸蛋白酶作為靶酶進(jìn)行抗丙肝產(chǎn)品的研究和確定。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明人經(jīng)研究現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)通式1-4的多羥基-β-D-葡萄糖衍生物或含至少一個(gè)通式1-4化合物的提取物在丙肝(HCV)NS3絲氨酸蛋白酶上顯示出拮抗活性。
因此，本發(fā)明涉及至少一個(gè)通式1-4化合物或其藥用鹽在制備用于預(yù)
防和/或治療和/或緩解丙型肝炎的產(chǎn)品中用途。
本發(fā)明還涉及含至少一個(gè)通式1-4或其藥用鹽的提取物在制備用于
預(yù)防和/或緩解和/或治療丙型肝炎的產(chǎn)品中用途。
本發(fā)明還涉及用于預(yù)防或治療丙型肝炎的組合物或產(chǎn)品，其包括至少一種通式1-4化合物或其藥用鹽和載體或賦形劑。
本發(fā)明還涉及用于預(yù)防或治療丙型肝炎的組合物或產(chǎn)品，其包括含至少一種通式1-4化合物或其藥用鹽的提取物和載體或賦形劑。
本發(fā)明還涉及預(yù)防或治療丙型肝炎的方法，其包括給予需要預(yù)防或治療的患者預(yù)防或治療有效量的至少一種通式1-4的化合物或藥用鹽或含至少一種通式1-4化合物的提取物。
本發(fā)明進(jìn)一步涉及至少一種通式1-4化合物或含至少一種通式1-4化合物的提取物在制備用于抑制HCV NS3絲氨酸蛋白酶的產(chǎn)品中用途。
根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明中所述的藥用鹽并不加以特別限定，舉例講，例如鹽酸鹽、硫酸鹽、碳酸鹽、碳酸氫鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽等無機(jī)鹽的加成鹽；醋酸鹽、馬來酸鹽、乳酸鹽、酒石酸鹽、三氟代醋酸鹽等有機(jī)羧酸的加成鹽；甲磺酸鹽、羥基甲磺酸鹽、羥基乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、甲苯磺酸鹽、牛磺酸等有機(jī)磺酸加成鹽；三甲胺鹽、三乙胺鹽、吡啶鹽、普魯卡因鹽、吡啶甲基鹽、二環(huán)己胺鹽、N，N，-二芐基乙二胺鹽、N-甲基葡糖胺鹽、二乙醇胺鹽、三乙醇胺鹽、三(羥基甲氨基)甲烷鹽、苯乙基芐胺鹽等胺的加成鹽；精氨酸鹽、賴氨酸鹽、絲氨酸鹽、甘氨酸鹽、天門冬氨酸鹽、谷氨酸鹽等氨基酸的加成鹽。
本發(fā)明的式1-4化合物或其藥用鹽也包括它們的對映異構(gòu)體和/或幾何的異構(gòu)體等立體異構(gòu)體。
化合物1-4一般的制備方法是使用水、低級脂肪醇類、含水的低級脂肪醇類、芳香族醇類、低級酮類(丙酮等)，含鹵素溶劑溶劑以及它們的混合溶劑在0℃左右至沸點(diǎn)范圍內(nèi)，在減壓、常壓或加壓下對含有式1-4化合物的植物的全草或其部位如根、莖、葉、花等進(jìn)行提取，可得到含至少一種通式1-4化合物的提取物。對提取物進(jìn)行各種分離精制法就可得到作為活性物質(zhì)的通式1-4化合物。
本發(fā)明中的通式1-4化合物廣泛存在于許多植物中，舉例講，例如狹葉紅景天(Rhodiolakirilowii，藏文音譯為索羅瑪保)，綠茶。進(jìn)一步講，通式1-4化合物為已知化合物，其可通過本領(lǐng)域已知方法或文獻(xiàn)中公開的方法制備。舉例講，化合物1-4一般的制備方法是使用水、低級脂肪醇類、含水的低級脂肪醇類、芳香族醇類、低級酮類(丙酮等)，含鹵素溶劑溶劑以及它們的混合溶劑在0℃左右至沸點(diǎn)范圍內(nèi)，在減壓、常壓或加壓下對含有式1-4化合物的植物的全草或其部位如根、莖、葉、花等進(jìn)行提取，可得到含至少一種通式1-4化合物的提取物。對提取物進(jìn)行各種分離精制法就可得到作為活性物質(zhì)式1-4化合物。
具體實(shí)施例方式
下面實(shí)施例用于進(jìn)一步說明本發(fā)明，但其不意味著對本發(fā)明的任何限制。
實(shí)施例1
索羅瑪保干燥粗粉3300g用80％的乙醇在室溫下進(jìn)行滲漉，將滲漉液合并，40℃下減壓回收溶劑，得到浸膏630g。將浸膏分散在2000ml水中，用石油醚萃取脫脂后，水相依次用氯仿、乙酸乙酯萃取(600ml×5次)，將合并后的乙酸乙酯萃取相40℃下減壓回收溶劑后得到48g萃取物。將此萃取物用柱層析的方法分離精制得到化合物1-4依次為120、150、50、30mg。
乙酸乙酯部分NS3蛋白酶抑制活性IC50(0.05mg/mL)，正丁醇部分NS3蛋白酶抑制活性IC50(0.07mg/mL)，主要成分為3-O-棓酰-表?xiàng)攦翰杷?2)、3-O-棓酰-表兒茶素-(4→8)3-O-棓酰-表兒茶素(3)、3-O-棓酰-表?xiàng)攦翰杷?(4→8)3-O-棓酰-表?xiàng)攦翰杷?4)、2-O-二棓?；?1，3，4-三棓酰基-β-D-葡萄糖、木犀草素、槲皮素、紅景天苷、紅景天苷元、沒食子酸。
這些主要成分化合物占乙酸乙酯部分60％以上。這些主要成分化合物占正丁醇部分60％以上。
實(shí)施例2綠茶干燥粗粉1000g用80％的乙醇在室溫下進(jìn)行滲漉，將滲漉液合并，40℃下減壓回收溶劑，得到浸膏。將浸膏分散在水中，用石油醚萃取脫脂后，水相依次用氯仿、乙酸乙酯萃取(600ml×5次)，將合并后的乙酸乙酯萃取相40℃下減壓回收溶劑后得到150g萃取物。將此萃取物用柱層析的方法分離精制得到化合物1。
乙酸乙酯部分主要成分為3-O-棓酰-表兒茶素(1)、3-O-棓酰-兒茶素、兒茶素、1，3，6-三棓?；?β-D-葡萄糖。
這些主要成分化合物占乙酸乙酯部分50％以上。
化合物1-4的波譜數(shù)據(jù)化合物1黃色無定形粉末，負(fù)離子電噴霧飛行時(shí)間質(zhì)譜ESI-TOF-MS獲得準(zhǔn)分子離子峰m/z441[(C22H18O10)-H]-，13C NMR和1H NMR數(shù)據(jù)見表1和2。鑒定為3-O-棓酰-表兒茶素[13-15]。
化合物2黃色無定形粉末，負(fù)離子電噴霧飛行時(shí)間質(zhì)譜ESI-TOF-MS獲得準(zhǔn)分子離子峰m/z457[(C22H18O11)-H]-，13C NMR和1H NMR數(shù)據(jù)見表1和2。鑒定為3-O-棓酰-表?xiàng)攦翰杷豙13-15]。
化合物3黃色無定形粉末，負(fù)離子電噴霧飛行時(shí)間質(zhì)譜ESI-TOF-MS獲得準(zhǔn)分子離子峰m/z881[(C44H34O20)-H]-，13C NMR和1H NMR數(shù)據(jù)見表1和2。鑒定為3-O-棓酰-表兒茶素-(4→8)3-O-棓酰-表兒茶素[13-15]。
化合物4黃色無定形粉末，負(fù)離子電噴霧飛行時(shí)間質(zhì)譜ESI-TOF-MS獲得準(zhǔn)分子離子峰m/z913[(C44H36O20)-H]-，13C NMR和1H NMR數(shù)據(jù)見表1和2。鑒定為3-O-棓酰-表?xiàng)攦翰杷?(4→8)3-O-棓酰-表?xiàng)攦翰杷豙13-15]。
表1化合物1-313C NMR數(shù)據(jù)(δc，CD3OD，ppm，參見式(III))Compound 123C環(huán) c-2 78.6 78.6 76.4c-3 70.0 70.0 69.8c-4 30.7 30.7 34.6A環(huán) c-4a 99.4 99.5 97.1c-5 157.9157.9156.2c-6 96.6 96.6 96.3c-7 157.7157.2156.2c-8 95.9 95.9 96.0c-8a 157.3157.2156.2B環(huán) c-1’ 131.5130.8131.8c-2’ 115.1106.9115.0c-3’ 145.9146.3145.8c-4’ 145.9133.8145.5c-5’ 116.0146.3116.0c-6’ 119.4106.9119.8棓?；鵦-1” 121.4121.6121.6c-2” 110.2110.3110.3c-3” 146.3146.7146.2c-4” 139.8139.8139.8c-5” 146.3146.7146.2c-6” 110.2110.3110.3C＝O 167.6167.7167.7表2化合物1-41H NMR數(shù)據(jù)(δc，CD3OD，ppm，參見式(III))Compound1 2 34C環(huán) H-2 4.95，s 4.85，s 4.87，s 4.86，sH-3 5.51，s 5.51，s 5.45，m 5.54，sH-4 2.82-3.00，m 2.80-3.00，m 3.59，m 3.30，m 3.59，m 330，mA環(huán) H-6 5.95，s 5.95，s 5.83，s 5.95，sH-8 5.95，s 5.95，s 6.03，s 6.05，sB環(huán) H-2’6.68，d 6.49，s 6.53，d 6.39，sH-3’6.79.d 6.73，dH-6’6.81，d 6.49，s 6.92，m 6.52，s棓?；鵋-2”，6” 6.93，s 6.94，s 6.98，s 6.98，s

式(III)實(shí)施例3式1-4化合物拮抗HCV NS3絲氨酸蛋白酶的活性抗HCV NS3絲氨酸蛋白酶活性測定是本領(lǐng)域用來判斷拮抗丙型肝炎的常規(guī)實(shí)驗(yàn)，該方法是將包含了NS3蛋白酶基因質(zhì)粒pMANS34NsH克隆進(jìn)入JM109細(xì)胞，然后進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)、收集細(xì)胞、破碎、離心、收集上清液。通過直鏈淀粉親和柱及金屬螯合柱分離純化得到NS3蛋白酶[11a]。NS3蛋白酶抑制活性測定方法是采用了ELISA方法[11b]?；衔?-4對NS3蛋白酶的活性測定結(jié)果如表3所示表3.抗HCV NS3絲氨酸蛋白酶活性

由表3可看到，式1-4化合物分別對NS3蛋白酶有良好的抑制活性。
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權(quán)利要求
1.至少一種下面通式1-4的化合物或其藥用鹽或其立體異構(gòu)體在制 備用于預(yù)防和/或治療丙型肝炎的產(chǎn)品中用途。
2.至少一種下面通式1-4的化合物或其藥用鹽或其立體異構(gòu)體在制 備用于抑制HCV NS3絲氨酸蛋白酶的產(chǎn)品中用途。
3.含至少一種通式1-4化合物或其藥用鹽或其立體異構(gòu)體的提取物在制備用于預(yù)防和/或治療丙型肝炎的產(chǎn)品中用途。
4.用于預(yù)防和/或治療丙型肝炎的產(chǎn)品，其包括至少一種通式1-4化合物或含至少一種通式1-4化合物的提取物，及載體或賦形劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及苯并吡喃化合物或含至少一種苯并吡喃化合物在制備用于預(yù)防或治療丙型肝炎產(chǎn)品中的用途。
文檔編號(hào)A61K31/353GK1704051SQ20041004288
公開日2005年12月7日 申請日期2004年5月28日 優(yōu)先權(quán)日2004年5月28日
發(fā)明者徐筱杰, 左國營, 段德良, 李正全, 陳麗蓉 申請人:養(yǎng)生堂有限公司