本發(fā)明涉及化合物快速檢測(cè)
技術(shù)領(lǐng)域：
，尤指一種吲哚美辛的快速檢測(cè)試劑及其檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
：風(fēng)濕病是一種常見(jiàn)多發(fā)病，在我國(guó)的自然人群中患病率已超過(guò)10%，在中老年階段其發(fā)病率迅速增高。風(fēng)濕病是一種全身性疾病，主要體現(xiàn)為關(guān)節(jié)、結(jié)締組織及肌肉的病變，其纏綿難愈，給患者身體和心理帶來(lái)極大的痛苦和折磨。吲哚美辛為常用的強(qiáng)力鎮(zhèn)痛非甾體抗炎藥，對(duì)炎癥性疼痛作用顯著，對(duì)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎及骨關(guān)節(jié)炎療效好，故其被添加至中成藥及保健品等健康產(chǎn)品中的情況多見(jiàn)。吲哚美辛在臨床使用中存在皮膚過(guò)敏反應(yīng)、胃腸道反應(yīng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)反應(yīng)和造血系統(tǒng)反應(yīng)等不良反應(yīng)，且有特定的禁用或慎用人群，若不按說(shuō)明服用可能會(huì)引起嚴(yán)重后果，危及生命。許多患者選擇抗風(fēng)濕類中成藥及保健品等健康產(chǎn)品來(lái)進(jìn)行治療或輔助治療，希望能標(biāo)本兼治并減少毒副作用。然而因該類產(chǎn)品自身特點(diǎn)，其起效較慢，故一些不法分子利用人們急于見(jiàn)到療效的心理，非法添加處方以外的化學(xué)藥物，夸大宣傳，鼓吹“速效”和“高效”，虛開(kāi)高價(jià)出售?；颊叻煤竽軙簳r(shí)緩解癥狀，故誤以為療效好而長(zhǎng)期大量服用，致使其在不知情的情況下，未按照正確用法、用量使用藥物，極易造成藥源性疾病，對(duì)患者健康造成極大的危害。目前對(duì)于吲哚美辛的檢測(cè)，各版《中國(guó)藥典》、衛(wèi)生部標(biāo)準(zhǔn)及新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)主要采用化學(xué)反應(yīng)法，少數(shù)采用紅外光譜法；國(guó)外藥典（jp16、bp2015、ep9.0、who藥典第五版）主要采用紫外、紅外光譜法，部分采用化學(xué)反應(yīng)法；市面上已有的基本藥物（吲哚美辛）快篩試劑盒（生產(chǎn)單位：廣東達(dá)元食品藥品安全技術(shù)有限公司）采用化學(xué)反應(yīng)法。采用以上標(biāo)準(zhǔn)的化學(xué)反應(yīng)法或試劑盒應(yīng)用于吲哚美辛類化學(xué)藥品、中成藥及保健品等健康產(chǎn)品中吲哚美辛的快速檢測(cè)，其結(jié)果的專屬性、靈敏度及準(zhǔn)確度較差，部分需使用設(shè)備或有機(jī)試劑，不適用于現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)。發(fā)明專利《一種中成藥及保健品中非法添加吲哚美辛的快速篩查方法》通過(guò)顯色方法判斷是否含吲哚美辛，但其方法的步驟c中，滴加顯色劑后溶液顏色變黃，故低濃度的陽(yáng)性樣品為疊合色，致使反應(yīng)的靈敏度降低，結(jié)果判斷的難度增加；此外，該顯色反應(yīng)須等待5分鐘以上再判斷結(jié)果，致使整個(gè)檢測(cè)周期長(zhǎng)，降低了該方法在快速檢測(cè)中的實(shí)用性。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明提供一種吲哚美辛的快速檢測(cè)試劑及其檢測(cè)方法，檢測(cè)過(guò)程簡(jiǎn)便快捷、專屬、靈敏及準(zhǔn)確,適用于吲哚美辛類化學(xué)藥、中成藥及保健品的現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)。為實(shí)現(xiàn)上述目的之一，本發(fā)明提供一種吲哚美辛的快速檢測(cè)試劑，包括堿性試劑、酸性試劑、第一顯色劑、第二顯色劑，并對(duì)應(yīng)放置在堿性試劑瓶、酸性試劑瓶、第一顯色劑瓶、第二顯色劑瓶中，其中堿性試劑為氫氧化鈉或氫氧化鉀溶液，質(zhì)量體積濃度范圍為0.1%-4.0%，體積范圍為3-6ml；可保證樣品中的吲哚美辛充分水解，增加反應(yīng)靈敏度；酸性試劑為硫酸、硝酸及鹽酸溶液的一種，摩爾體積濃度范圍為0.1-6.0mol/l，體積范圍為1-4ml；若選擇鹽酸溶液，滴加第一顯色劑后，溶液顏色變黃，使陽(yáng)性顏色產(chǎn)生疊加，不利于低濃度陽(yáng)性樣品的顏色變化觀察；而硝酸溶液遇光、熱易分解且使用較危險(xiǎn)，出于儲(chǔ)存及使用安全考慮，不適合選用；選用硫酸溶液時(shí)則可避免上述情況發(fā)生，故優(yōu)選硫酸溶液，優(yōu)選為2ml，此時(shí)可促進(jìn)其它雜質(zhì)沉淀，并保證混合體系的強(qiáng)酸性，防止出現(xiàn)假陽(yáng)性，增加反應(yīng)的靈敏度。第一顯色劑為三氯化鐵、硫酸鐵、硫酸鐵銨溶液中的一種，質(zhì)量體積濃度范圍為1.0-20%；第二顯色劑為過(guò)氧化氫溶液，質(zhì)量體積濃度范圍為1.5-30%。為實(shí)現(xiàn)上述目的之二，本發(fā)明提供一種吲哚美辛的快速檢測(cè)方法，包括以下步驟：a.取經(jīng)簡(jiǎn)單前處理的樣品適量放置入堿性試劑瓶?jī)?nèi)，閉塞振搖，靜置；簡(jiǎn)單前處理為片劑、顆粒劑及丸劑置取樣紙稍研細(xì)，膠囊劑直接取內(nèi)容物。所述樣品適量具體為片劑取1片，膠囊劑取1粒，顆粒劑及丸劑取約0.5g。優(yōu)選的，如樣品片劑或丸劑的表層包衣顏色為紅色時(shí)，取樣時(shí)可以先用水濕潤(rùn)的棉花或紙巾擦去顏色，減少干擾，閉塞振搖為強(qiáng)力振搖，時(shí)間10秒，靜置時(shí)間約20秒，取上層清液作為樣品，此操作可使樣品中吲哚美辛的充分溶解及靜置后液/固或液/液分層；所述堿性試劑為質(zhì)量體積濃度為0.4%的氫氧化鈉溶液，體積范圍為3-6ml，優(yōu)選為4ml；b.用吸管吸取堿性試劑瓶上清液或下清液至酸性試劑瓶中，搖勻反應(yīng)；所述吸管為1次性塑料吸管，刻度范圍可為1-3ml，優(yōu)選為2ml刻度吸管；因樣品可能為固體或油狀液體，存在液/固及液/液分層情況，故需對(duì)應(yīng)分別取上/下清液，取液體積為1ml；c.取反應(yīng)后酸性試劑瓶溶液適量，濾過(guò)，濾液置離心管；所述濾過(guò)為使用1ml注射器吸取溶液，加置針頭式過(guò)濾器過(guò)濾；針頭式過(guò)濾器材質(zhì)為水系或有機(jī)系，內(nèi)徑范圍為13-25mm，孔徑范圍為0.22或0.45μm，優(yōu)選內(nèi)徑25mm，孔徑為0.45μm的有機(jī)系過(guò)濾器，此規(guī)格時(shí)可降低過(guò)濾壓力，方便操作，防止濾膜穿孔，所述濾液體積為1ml；所述離心管為pp（聚丙烯）材質(zhì)的一次性塑料離心管，規(guī)格范圍為1.5-2ml；d.加入第一顯色劑及第二顯色劑至離心管，觀察離心管內(nèi)溶液顏色變化；第一顯色劑為三氯化鐵、硫酸鐵、硫酸鐵銨溶液中的一種，質(zhì)量體積濃度范圍為1.0-20%，考慮到以上三種成分的溶解度及加入后溶液的顏色、顯色反應(yīng)的靈敏度，優(yōu)選為5%三氯化鐵溶液，加入量為1滴；第二顯色劑為過(guò)氧化氫溶液，質(zhì)量體積濃度范圍為1.5-30%，隨濃度的升高，其顯色速度加快，但若加入濃度過(guò)大，致使過(guò)度氧化，反而使褪色變黃（漂白作用），故優(yōu)選為3%過(guò)氧化氫溶液，加入量為1滴，此時(shí)可加快反應(yīng)速度并保證顯色效果，在25-37℃常溫范圍內(nèi)，反應(yīng)顯色時(shí)間小于10秒，且在90分鐘內(nèi)可保持顯色效果；優(yōu)選的，加入第一顯色劑、第二顯色劑后，可先不搖勻，觀察上層接觸面環(huán)溶液的顏色變化，此時(shí)可提升顯色反應(yīng)觀察的靈敏度。吲哚美辛常用口服劑量為25mg/次，而本發(fā)明檢出限約為0.25mg/次，有很高的應(yīng)用價(jià)值；e.結(jié)果判斷：若溶液顏色變?yōu)榈t至紫紅色，表明樣品含吲哚美辛；若顏色無(wú)變化，表明其不含吲哚美辛。本發(fā)明的有益效果在于：1、待測(cè)樣品中成分復(fù)雜，干擾物質(zhì)多，現(xiàn)有技術(shù)對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行預(yù)處理多采用萃取、柱色譜分離等操作，步驟繁瑣耗時(shí)，且涉及使用有機(jī)試劑，易造成健康損害及環(huán)境環(huán)境，本發(fā)明通過(guò)合理設(shè)計(jì)操作步驟，科學(xué)設(shè)置各種試劑的濃度及用量，有效地排除了干擾成分，反應(yīng)專屬性強(qiáng)。2、本發(fā)明人采用本發(fā)明的快速檢測(cè)試劑及其檢測(cè)方法對(duì)收集的112批樣品進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性樣品16批，經(jīng)確證本發(fā)明的快速檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法正確率為100%。3、本發(fā)明的快速檢測(cè)試劑及其檢測(cè)方法操作簡(jiǎn)便，無(wú)需使用有機(jī)溶劑，無(wú)需額外設(shè)備，檢測(cè)成本低、時(shí)間短，結(jié)果靈敏，一般2～5分鐘內(nèi)即可得出結(jié)果，檢測(cè)限約為0.25mg/次。4、本發(fā)明具有良好的實(shí)用性及推廣價(jià)值，可廣泛應(yīng)用于監(jiān)管部門的現(xiàn)場(chǎng)快速篩查，可威懾及快速打擊及不法分子的制假售假違法行為，提升科學(xué)監(jiān)管效率。具體實(shí)施方式為了便于本領(lǐng)域技術(shù)人員的理解，下面結(jié)合專屬性、靈敏度及不同劑型的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于下述的實(shí)施例。實(shí)施例1取抗風(fēng)濕鎮(zhèn)痛類常用藥物雙氯芬酸鈉、布洛芬、保泰松、吡羅昔康、氨基比林、醋酸潑尼松、氫化可的松、地塞米松、阿司匹林、萘普生、甲氧芐啶、對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品適量，各自加入陰性樣品中，混勻，制成12種專屬性試驗(yàn)樣品。其中陰性樣品不含吲哚美辛，陽(yáng)性樣品含吲哚美辛。分別取以上12種樣品1粒內(nèi)容物置取樣紙，傾入內(nèi)裝0.4%氫氧化鈉溶液（體積為4ml）的堿性試劑瓶中，閉塞，強(qiáng)力振搖10秒，靜置20秒后，用2ml一次性塑料吸管吸取1ml上清液，置內(nèi)裝3mol/l硫酸溶液（體積為2ml）的酸性試劑瓶中，搖勻后用1ml注射器吸取溶液，加置內(nèi)徑為25mm，孔徑為0.45μm，材質(zhì)為有機(jī)系的針頭式過(guò)濾器，過(guò)濾，取濾液1ml置2ml離心管，依次加入第一顯色試（5%的三氯化鐵溶液）及的第二顯色劑（3%的過(guò)氧化氫溶液）各1滴，最終所有樣品的離心管溶液顏色1分鐘后均不變色（t=25℃），表明同類抗風(fēng)濕鎮(zhèn)痛添加成分均無(wú)干擾，方法的專屬性強(qiáng)。實(shí)施例2取吲哚美辛對(duì)照品加入陰性樣品中，制成0.25mg/粒-10mg/粒的陽(yáng)性樣品。分別取以上不同濃度的陽(yáng)性樣品1粒內(nèi)容物置取樣紙，傾入內(nèi)裝0.4%氫氧化鈉溶液（體積為4ml）的堿性試劑瓶中，閉塞，強(qiáng)力振搖10秒，靜置20秒后，用2ml一次性塑料吸管吸取1ml上清液，置內(nèi)裝3mol/l硫酸溶液（體積為2ml）的酸性試劑瓶中，搖勻后用1ml注射器吸取溶液，加置內(nèi)徑為25mm，孔徑為0.45μm，材質(zhì)為有機(jī)系的針頭式過(guò)濾器，過(guò)濾，取濾液1ml置2ml離心管，依次加入第一顯色劑（5%的三氯化鐵溶液）及的第二顯色劑（3%的過(guò)氧化氫溶液）各1滴，結(jié)果各陽(yáng)性樣品的離心管溶液顏色約10秒后各變?yōu)榈奂t色至紫紅色（t=25℃），故本發(fā)明的檢出限為0.25mg/次?？紤]到吲哚美辛的口服起效劑量為25mg/次，本發(fā)明的檢出限僅為起效劑量的百分之一，故靈敏度高，實(shí)用性強(qiáng)。實(shí)施例3取河南萬(wàn)民康生產(chǎn)的鹿骨蝮蛇軟膠囊1粒內(nèi)容物，傾入內(nèi)裝0.4%氫氧化鈉溶液（體積為4ml）的堿性試劑瓶中，閉塞，強(qiáng)力振搖10秒，靜置20秒后，用2ml一次性塑料吸管吸取1ml下清液，置內(nèi)裝3mol/l硫酸溶液（體積為2ml）的酸性試劑瓶中，搖勻后用1ml注射器吸取溶液，加置內(nèi)徑為25mm，孔徑為0.45μm，材質(zhì)為有機(jī)系的針頭式過(guò)濾器，過(guò)濾，取濾液1ml置2ml離心管，依次加入第一顯色劑（5%的三氯化鐵溶液）及的第二顯色劑（3%的過(guò)氧化氫溶液）各1滴，離心管溶液顏色不變（t=25℃），可判定本實(shí)施例樣品中不含吲哚美辛。實(shí)施例4取東莞市中醫(yī)院生產(chǎn)的川芎活血片1片，置取樣紙稍研細(xì)，傾入內(nèi)裝0.4%氫氧化鈉溶液（體積為4ml）的堿性試劑瓶中，閉塞，強(qiáng)力振搖10秒，靜置20秒后，用2ml一次性塑料吸管吸取1ml上清液，置內(nèi)裝3mol/l硫酸溶液（體積為2ml）的酸性試劑瓶中，搖勻后用1ml注射器吸取溶液，加置內(nèi)徑為25mm，孔徑為0.45μm，材質(zhì)為有機(jī)系的針頭式過(guò)濾器，過(guò)濾，取濾液1ml置2ml離心管，依次加入第一顯色劑（5%的三氯化鐵溶液）及的第二顯色劑（3%的過(guò)氧化氫溶液）各1滴，離心管溶液1分鐘后不變色（t=25℃），可判定本實(shí)施例樣品中不含吲哚美辛。實(shí)施例5取廣西南寧市壽竹根生產(chǎn)的壽竹根沖劑（規(guī)格：6g/袋）約1/10袋，置取樣紙稍研細(xì)，傾入內(nèi)裝0.4%氫氧化鈉溶液（體積為4ml）的堿性試劑瓶中，閉塞，強(qiáng)力振搖10秒，靜置20秒后，用2ml一次性塑料吸管吸取1ml上清液，置內(nèi)裝3mol/l硫酸溶液（體積為2ml）的酸性試劑瓶中，搖勻后用1ml注射器吸取溶液，加置內(nèi)徑為25mm，孔徑為0.45μm，材質(zhì)為有機(jī)系的針頭式過(guò)濾器，過(guò)濾，取濾液1ml置2ml離心管，依次加入第一顯色劑（5%的三氯化鐵溶液）及的第二顯色劑（3%的過(guò)氧化氫溶液）各1滴，離心管溶液1分鐘后不變色（t=25℃），可判定本實(shí)施例樣品中不含吲哚美辛。實(shí)施例6取寧夏六盤(pán)山藥業(yè)生產(chǎn)的風(fēng)濕骨痛丸（規(guī)格：每10粒重1.5g）3粒，置取樣紙研細(xì)，傾入內(nèi)裝0.4%氫氧化鈉溶液（體積為4ml）的堿性試劑瓶中，閉塞，強(qiáng)力振搖10秒，靜置20秒后，用2ml一次性塑料吸管吸取1ml上清液，置內(nèi)裝3mol/l硫酸溶液（體積為2ml）的酸性試劑瓶中，搖勻后用1ml注射器吸取溶液，加置內(nèi)徑為25mm，孔徑為0.45μm，材質(zhì)為有機(jī)系的針頭式過(guò)濾器，過(guò)濾，取濾液1ml置2ml離心管，依次加入第一顯色劑（5%的三氯化鐵溶液）及的第二顯色劑（3%的過(guò)氧化氫溶液）各1滴，離心管溶液1分鐘后不變色（t=25℃），可判定本實(shí)施例樣品中不含吲哚美辛。實(shí)施例7取德國(guó)漢堡里哈明藥廠生產(chǎn)的德國(guó)漢堡滅濕痛膠囊1粒內(nèi)容物置取樣紙，傾入內(nèi)裝0.4%氫氧化鈉溶液（體積為4ml）的堿性試劑瓶中，閉塞，強(qiáng)力振搖10秒，靜置20秒后，用2ml一次性塑料吸管吸取1ml上清液，置內(nèi)裝3mol/l硫酸溶液（體積為2ml）的酸性試劑瓶中，搖勻后用1ml注射器吸取溶液，加置內(nèi)徑為25mm，孔徑為0.45μm，材質(zhì)為有機(jī)系的針頭式過(guò)濾器，過(guò)濾，取濾液1ml置2ml離心管，依次加入第一顯色劑（5%的三氯化鐵溶液）及的第二顯色劑（3%的過(guò)氧化氫溶液）各1滴，離心管溶液顏色約10秒變?yōu)樯钭霞t色（t=25℃），可判定本實(shí)施例樣品中含有吲哚美辛。實(shí)施例8取香港濟(jì)眾堂中藥廠生產(chǎn)的追風(fēng)透骨丸1粒，置取樣紙研細(xì)，傾入內(nèi)裝0.4%氫氧化鈉溶液（體積為4ml）的堿性試劑瓶中，閉塞，強(qiáng)力振搖10秒，靜置20秒后，用2ml一次性塑料吸管吸取1ml上清液，置內(nèi)裝3mol/l硫酸溶液（體積為2ml）的酸性試劑瓶中，搖勻后用1ml注射器吸取溶液，加置內(nèi)徑為25mm，孔徑為0.45μm，材質(zhì)為有機(jī)系的針頭式過(guò)濾器，過(guò)濾，取濾液1ml置2ml離心管，依次加入第一顯色劑（5%的三氯化鐵溶液）及的第二顯色劑（3%的過(guò)氧化氫溶液）各1滴，離心管溶液顏色約10秒變?yōu)榈t色（t=25℃），可判定本實(shí)施例樣品中含有吲哚美辛。實(shí)施例9采用本發(fā)明的快速檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法對(duì)市售的共計(jì)112種藥品及保健品進(jìn)行測(cè)定，同時(shí)按照《國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局藥品檢驗(yàn)補(bǔ)充檢驗(yàn)方法和檢驗(yàn)項(xiàng)目批準(zhǔn)件2009025》所附質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)經(jīng)液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法進(jìn)行驗(yàn)證，檢測(cè)結(jié)果及驗(yàn)證結(jié)果如表1:表1驗(yàn)證結(jié)果根據(jù)廣東省藥品檢驗(yàn)所制定的《中成藥和保健食品中擅自添加化學(xué)成分的快速篩查方法指導(dǎo)原則和技術(shù)要求(試行)》的要求，對(duì)本發(fā)明的檢測(cè)試劑及其檢測(cè)方法進(jìn)行總結(jié)，見(jiàn)表2：表2總結(jié)表劑型指標(biāo)膠囊劑、片劑、顆粒劑、丸劑靈敏度100%特異度100%漏檢率0%誤檢率0%正確率100%正確指數(shù)1以上實(shí)施方式僅僅是對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式進(jìn)行描述，并非對(duì)本發(fā)明的范圍進(jìn)行限定，在不脫離本發(fā)明設(shè)計(jì)精神的前提下，本領(lǐng)域普通工程技術(shù)人員對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作出的各種變形和改進(jìn)，均應(yīng)落入本發(fā)明的權(quán)利要求書(shū)確定的保護(hù)范圍內(nèi)。當(dāng)前第1頁(yè)12