專利名稱：面粉違禁添加劑過氧化苯甲酰快速檢測試劑盒及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及快速檢測試劑盒及制備方法，具體涉及面粉違禁添加劑過氧化苯甲?？焖贆z測試劑盒及制備方法。
背景技術(shù)：
過氧化苯甲酰(Benzoyl Peroxide，ΒΡ0)，化學(xué)式[C6H5C(0) 0]2，是一種有機(jī)過氧化物，其對面粉有顯著增白作用。1986年，全國食品添加劑標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會安全評審?fù)ㄟ^， 將過氧化苯甲酰列入我國《食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》(GB2760)，允許作為面粉處理劑、漂白劑在小麥粉加工中使用，最大使用限量為60mg/kg。但由于過氧化苯甲酰破壞面粉的營養(yǎng)成份，尤其是對面粉中胡蘿卜素和Ve有較強(qiáng)的破壞作用。過氧化苯甲酰氧化產(chǎn)物苯甲酸的攝入加重了肝臟負(fù)擔(dān)，易引發(fā)多種疾病。此外，現(xiàn)有面粉加工工藝很難將過氧化苯甲酰添加均勻，極容易造成過氧化苯甲酰含量局部超標(biāo)。2011年2月，衛(wèi)生部等七部門聯(lián)合發(fā)文，自2011年5月1日起，禁止在面粉生產(chǎn)中添加過氧化苯甲酰。關(guān)于面粉中過氧化苯甲酰含量的檢測，國標(biāo)方法為氣相色譜法(GB 18415-2001) 和高效液相色譜法(GB22325-2008)。該兩種方法檢出限低、準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好。但這兩種方法操作繁瑣，耗時(shí)長，需要價(jià)格昂貴的氣相色譜儀或液相色譜儀，不適宜用于面粉中過氧化苯甲酰快速檢測和現(xiàn)場分析。過氧化苯甲酰檢測方法在期刊文獻(xiàn)中報(bào)道較多，主要分為化學(xué)定性法、氧化還原滴定法、分光光度法、氣相色譜法、高效液相色譜法、離子色譜法、電化學(xué)方法和化學(xué)發(fā)光法?；瘜W(xué)定性法和氧化還原滴定法存在的主要缺點(diǎn)是靈敏度和準(zhǔn)確度較低。而分光光度法、 氣相色譜法、高效液相色譜法、離子色譜法、電化學(xué)方法和化學(xué)發(fā)光法雖然靈敏度和準(zhǔn)確度有所提高，但這些方法存在的共性缺點(diǎn)是樣品前處理復(fù)雜，樣品分析時(shí)間長，需要價(jià)格昂貴的分析儀器。過氧化苯甲酰檢測方法在專利文獻(xiàn)中已有一些報(bào)道。中國專利公開號1776409Α， 公開了一種檢測面粉中過氧化苯甲酰含量的方法，檢測原理是利用過氧化苯甲酰能使鄰菲啰啉與硫酸亞鐵生成的橙紅色絡(luò)合物褪色，其褪色程度與過氧化苯甲酰濃度有相關(guān)性。中國專利公開號101042354Α，公開了一種商品小麥粉中過氧化苯甲酰定量分析方法，檢測原理是通過色度學(xué)原理，利用隨著過氧化苯甲酰添加時(shí)間的延長，過氧化苯甲酰發(fā)揮增白作用，小麥粉中的呈色物質(zhì)減少，以乙醇浸泡小麥粉所得溶液的顏色變淺，其褪色程度與小麥粉中原始過氧化苯甲酰添加量有相關(guān)性。然而上述兩種方法需要圖像采集器，并需要基于計(jì)算機(jī)色度識別的過氧化苯甲酰含量測定軟件系統(tǒng)，且褪色程度與過氧化苯甲酰濃度相關(guān)性不強(qiáng)，檢測準(zhǔn)確度不高。中國專利公開號101210907Α，公開了一種小麥粉中過氧化苯甲酰的高效液相色譜檢測法，該方法檢測靈敏度和準(zhǔn)確度較高，然而該方法需要對樣品進(jìn)行復(fù)雜的前處理操作，樣品分析時(shí)間較長，需要價(jià)格昂貴的高效液相色譜儀。中國專利公開號 101339136Α，公開了一種測定過氧化苯甲酰的化學(xué)發(fā)光體系及方法，檢測原理是利用過氧化苯甲酰與魯米諾反應(yīng)產(chǎn)生波長為425nm的光輻射，該方法檢出限低，靈敏度高，然而該方法需要化學(xué)發(fā)光儀，反應(yīng)過程需要二價(jià)鈷離子作為催化物質(zhì)，操作步驟復(fù)雜。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種面粉違禁添加劑過氧化苯甲?？焖贆z測試劑盒及其制備方法，采用該試劑盒檢測過氧化苯甲酰，簡單、快速、準(zhǔn)確，不需要大型儀器設(shè)備，適合現(xiàn)場定性判斷和半定量測量，防止過氧化苯甲酰在面粉中的違禁添加，提高面粉質(zhì)量和保證食品安全。本發(fā)明的技術(shù)解決方案是該過氧化苯甲酰快速檢測試劑盒由反應(yīng)試劑、顯色劑、 陽性對照試劑儲備液和標(biāo)準(zhǔn)比色卡組成?？焖贆z測試劑盒的制備方法是所述的反應(yīng)試劑是亞鐵離子的酸性水溶液，亞鐵離子的濃度在100 mg/L至300 mg/L，亞鐵離子由氯化亞鐵、或硫酸亞鐵銨、或硫酸亞鐵提供，反應(yīng)試劑的酸性由鹽酸或硫酸提供并保持，反應(yīng)試劑包裝在深色或不透光的容器中，用手?jǐn)D壓容器可以逐滴擠出反應(yīng)試劑；所述的顯色劑是硫氰酸根水溶液，硫氰酸根由硫氰酸銨、或硫氰酸鉀、或硫氰酸鈉提供，硫氰酸根的濃度在0.5 mol/L至0.75 mol/L，反應(yīng)試劑包裝在容器中，容器不限于深色或不透光的容器，用手?jǐn)D壓容器可以逐滴擠出顯色劑；所述的陽性對照試劑儲備液是過氧化苯甲酰無水乙醇溶液，過氧化苯甲酰的濃度在500 mg/L至 1500 mg/L，陽性對照試劑儲備液包裝在深色或不透光的容器中；所述的標(biāo)準(zhǔn)比色卡包括若干長方形色塊，每一個(gè)色塊代表相應(yīng)的過氧化苯甲酰濃度。其中，標(biāo)準(zhǔn)比色卡的制作過程是配系列不同濃度的過氧化苯甲酰標(biāo)準(zhǔn)溶液，向各個(gè)過氧化苯甲酰標(biāo)準(zhǔn)溶液中依次加入一定量的反應(yīng)試劑和顯色劑，發(fā)生顯色反應(yīng)，根據(jù)反應(yīng)后顏色的深淺對應(yīng)過氧化苯甲酰標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，制成標(biāo)準(zhǔn)比色卡。
本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)
1、試劑盒利用過氧化苯甲酰的強(qiáng)氧化性，將反應(yīng)試劑中的亞鐵離子氧化成三價(jià)鐵離子，三價(jià)鐵離子再在酸性溶液中與顯色劑中的硫氰酸根發(fā)生顯色反應(yīng)，生成橙紅色硫氰酸鐵配合物，橙紅色配合物顏色的深淺與過氧化苯甲酰含量呈相關(guān)性，試劑盒顯色反應(yīng)靈敏、 反應(yīng)條件溫和、反應(yīng)速度快、抗干擾能力強(qiáng)、測定結(jié)果準(zhǔn)確。2、試劑盒內(nèi)包含一張標(biāo)準(zhǔn)比色卡，過氧化苯甲酰待測樣品溶液按照試劑盒操作方法顯色后，對照該標(biāo)準(zhǔn)比色卡，不需要借助大型分析儀器，不需要操作者配制過氧化苯甲酰標(biāo)準(zhǔn)溶液，直接對待測樣品進(jìn)行定性判斷和半定量分析，簡化了操作過程，縮短了分析時(shí)間，用于現(xiàn)場定性判斷待測面粉是否添加了違禁添加劑過氧化苯甲酰和現(xiàn)場半定量檢測面粉中過氧化苯甲酰含量，是定性判斷、快速檢測、現(xiàn)場分析的有效手段。3、試劑盒內(nèi)的反應(yīng)試劑和顯色劑中各化合物的濃度經(jīng)過精確計(jì)算，對照試劑盒使用方法，操作者進(jìn)行反應(yīng)試劑和顯色劑移取操作時(shí)，不需要借助相關(guān)液體移取設(shè)備，只需要滴加一滴即可，適合現(xiàn)場定性判斷和半定量測量面粉中的過氧化苯甲酰。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明技術(shù)解決方案作進(jìn)一步描述。實(shí)施例1 試劑盒制備
1.制備反應(yīng)試劑準(zhǔn)確稱取0. 140 g六水合硫酸亞鐵銨((NH4)2Fe(SO4)2XeH2O)于100ml容量瓶中，加水溶解，再加入10 mol/L的鹽酸溶液2 ml，用水稀釋至刻度，即為反應(yīng)試劑；將反應(yīng)試劑包裝在深色或不透光的容器中，用手?jǐn)D壓容器可以逐滴擠出反應(yīng)試劑；
2.制備顯色劑準(zhǔn)確稱取6.074 g硫氰酸鉀(KSCN)于100 ml容量瓶中，加水溶解，再用水稀釋至刻度，即為顯色劑；將顯色劑包裝在容器中，容器可以是但不限于深色或不透光的容器，用手?jǐn)D壓容器可以逐滴擠出顯色劑；
3.制備陽性對照試劑儲備液準(zhǔn)確稱取0.1g過氧化苯甲酰于100 ml容量瓶中，加無水乙醇溶解，再用無水乙醇稀釋至刻度，即為陽性對照試劑儲備液；將陽性對照試劑儲備液包裝在深色或不透光的容器中；
4.制備標(biāo)準(zhǔn)比色卡用無水乙醇分別配制濃度為0mg/L、l mg/L、2 mg/L、3 mg/L、4 mg/L、5 mg/L、6 mg/L、7 mg/L、8 mg/L、9 mg/L、10 mg/L、12 mg/L、15 mg/L、20 mg/L、30 mg/ L的過氧化苯甲酰標(biāo)準(zhǔn)溶液，取15支規(guī)格為10 ml的比色管，在各比色管中分別加入上述過氧化苯甲酰標(biāo)準(zhǔn)溶液1 ml、反應(yīng)試劑一滴(約40 ul)、顯色劑一滴(約40 ul),50 °C水浴反應(yīng)10 min，相機(jī)拍攝各比色管內(nèi)溶液照片，根據(jù)各比色管內(nèi)溶液顏色對應(yīng)過氧化苯甲酰標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度制成標(biāo)準(zhǔn)比色卡。實(shí)施例2:試劑盒制備
1.制備反應(yīng)試劑準(zhǔn)確稱取0.356 g四水合氯化亞鐵(FeCl2X4H20)于1000 ml容量瓶中，加水溶解，再加入10 mol/L的鹽酸溶液20 ml，用水稀釋至刻度，即為反應(yīng)試劑；將反應(yīng)試劑包裝在深色或不透光的容器中，用手?jǐn)D壓容器可以逐滴擠出反應(yīng)試劑；
2.制備顯色劑準(zhǔn)確稱取3.806硫氰酸銨(NH4SCN)于100 ml容量瓶中，加水溶解，再用水稀釋至刻度，即為顯色劑；將顯色劑包裝在容器中，容器可以是但不限于深色或不透光的容器，用手?jǐn)D壓容器可以逐滴擠出顯色劑；
3.制備陽性對照試劑儲備液準(zhǔn)確稱取0.125g過氧化苯甲酰于250 ml容量瓶中，加無水乙醇溶解，再用無水乙醇稀釋至刻度，即為陽性對照試劑儲備液；將陽性對照試劑儲備液包裝在深色或不透光的容器中；
4.制備標(biāo)準(zhǔn)比色卡用無水乙醇分別配制濃度為0mg/L、l mg/L、2 mg/L、3 mg/L、4 mg/L、5 mg/L、6 mg/L、7 mg/L、8 mg/L、9 mg/LUO mg/L 的過氧化苯甲酰標(biāo)準(zhǔn)溶液，取 11 支規(guī)格為10 ml的比色管，在各比色管中分別加入上述過氧化苯甲酰標(biāo)準(zhǔn)溶液1 ml、反應(yīng)試劑一滴(約40 ul)、顯色劑一滴(約40 ul),50 ！水浴反應(yīng)10 min，相機(jī)拍攝各比色管內(nèi)溶液照片，根據(jù)各比色管內(nèi)溶液顏色對應(yīng)過氧化苯甲酰標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度制成標(biāo)準(zhǔn)比色卡。實(shí)施例3:試劑盒制備
1.制備反應(yīng)試劑準(zhǔn)確稱取0.149 g七水合硫酸亞鐵(Fe (SO4)2 X 7H20)于100 ml容量瓶中，加水溶解，再加入10 mol/L的硫酸溶液2 ml，用水稀釋至刻度，即為反應(yīng)試劑；將反應(yīng)試劑包裝在深色或不透光的容器中，用手?jǐn)D壓容器可以逐滴擠出反應(yīng)試劑；
2.制備顯色劑準(zhǔn)確稱取6.080 g硫氰酸鈉(NaSCN)于100 ml容量瓶中，加水溶解， 再用水稀釋至刻度，即為顯色劑；將顯色劑包裝在容器中，容器可以是但不限于深色或不透光的容器，用手?jǐn)D壓容器可以逐滴擠出顯色劑；
3.制備陽性對照試劑儲備液準(zhǔn)確稱取0.15 g過氧化苯甲酰于100 ml容量瓶中，加無水乙醇溶解，再用無水乙醇稀釋至刻度，即為陽性對照試劑儲備液；將陽性對照試劑儲備液包裝在深色或不透光的容器中；4.制備標(biāo)準(zhǔn)比色卡用無水乙醇分別配制濃度為0 mg/L、l mg/L、2 mg/L、4 mg/L、6 mg/L、8 mg/LUO mg/L、12 mg/L、14 mg/L、16 mg/L、18 mg/L 的過氧化苯甲酰標(biāo)準(zhǔn)溶液，取 11支規(guī)格為10 ml的比色管，在各比色管中分別加入上述過氧化苯甲酰標(biāo)準(zhǔn)溶液1 ml、反應(yīng)試劑一滴(約40 ul)、顯色劑一滴(約40 ul),50 ！水浴反應(yīng)10 min，相機(jī)拍攝各比色管內(nèi)溶液照片，根據(jù)各比色管內(nèi)溶液顏色對應(yīng)過氧化苯甲酰標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度制成標(biāo)準(zhǔn)比色卡。實(shí)施例4:試劑盒使用
本實(shí)施例選用實(shí)施例1制備的試劑盒，說明試劑盒使用
1.過氧化苯甲酰樣品溶液制備準(zhǔn)確稱取Mg (0.5 ^ M ^ 1.5)待測面粉于錐形瓶、或燒杯、或離心管等容器中，然后向容器中加入V ml (5 ^ V ^ 15)無水乙醇，輕搖容器10 min或超聲提取2 min，使待測面粉充分分散于無水乙醇中，通過靜置方法或過濾方法或離心方法，獲得1 ml以上無水乙醇溶液，即為過氧化苯甲酰樣品溶液；
2.試劑盒檢測
(1)制備陽性對照試劑工作液準(zhǔn)確移取陽性對照試劑儲備液1ml于100 ml容量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，即為陽性對照試劑工作液；
(2)取3支試管或3支規(guī)格為10ml的比色管，分別作為樣品測定管、陰性對照管和陽性對照管，移取過氧化苯甲酰樣品溶液1 ml于樣品測定管中；
(3)向陰性對照管加入無水乙醇Iml；
(4)向陽性對照管加入1ml陽性對照試劑工作液；
(5)分別向樣品測定管、陰性對照管和陽性對照管中加入一滴反應(yīng)試劑(約40ul)；
(6)分別向樣品測定管、陰性對照管和陽性對照管中加入一滴顯色劑(約40ul)；
(7)樣品測定管、陰性對照管和陽性對照管均在50°C水浴中反應(yīng)10 min；
(8)將陰性對照管與標(biāo)準(zhǔn)比色卡比較，若過氧化苯甲酰濃度大于1mg/L，則提示此次樣品測定管測定結(jié)果不準(zhǔn)確；
(9)將陽性對照管與標(biāo)準(zhǔn)比色卡比較，若過氧化苯甲酰濃度不等于10mg/L，則提示此次樣品測定管測定結(jié)果不準(zhǔn)確；
(10)若陰性對照管與標(biāo)準(zhǔn)比色卡比較，過氧化苯甲酰濃度小于1mg/L，同時(shí)陽性對照管與標(biāo)準(zhǔn)比色卡比較，過氧化苯甲酰濃度等于10 mg/L，則將樣品測定管與標(biāo)準(zhǔn)比色卡比較，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行定性判斷和半定量分析。試劑盒檢測操作表如下
權(quán)利要求
1.面粉違禁添加劑過氧化苯甲?？焖贆z測試劑盒，其特征在于該過氧化苯甲?？焖贆z測試劑盒由反應(yīng)試劑、顯色劑、陽性對照試劑儲備液和標(biāo)準(zhǔn)比色卡組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的面粉違禁添加劑過氧化苯甲?？焖贆z測試劑盒的制備方法，其特征在于該快速檢測試劑盒的制備方法是所述的反應(yīng)試劑是亞鐵離子的酸性水溶液，亞鐵離子的濃度在100 mg/L至300 mg/L，亞鐵離子由氯化亞鐵、或硫酸亞鐵銨、或硫酸亞鐵提供，反應(yīng)試劑的酸性由鹽酸或硫酸提供并保持，反應(yīng)試劑包裝在深色或不透光的容器中，用手?jǐn)D壓容器可以逐滴擠出反應(yīng)試劑；所述的顯色劑是硫氰酸根水溶液，硫氰酸根由硫氰酸銨、或硫氰酸鉀、或硫氰酸鈉提供，硫氰酸根的濃度在0. 5 mol/L至0. 75 mol/L,反應(yīng)試劑包裝在容器中，容器不限于深色或不透光的容器，用手?jǐn)D壓容器可以逐滴擠出顯色劑；所述的陽性對照試劑儲備液是過氧化苯甲酰無水乙醇溶液，過氧化苯甲酰的濃度在500 mg/L至1500 mg/L，陽性對照試劑儲備液包裝在深色或不透光的容器中；所述的標(biāo)準(zhǔn)比色卡包括若干個(gè)長方形色塊，每一個(gè)色塊代表相應(yīng)的過氧化苯甲酰濃度。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的面粉違禁添加劑過氧化苯甲酰快速檢測試劑盒的制備方法，其特征在于其中，標(biāo)準(zhǔn)比色卡的制作過程是配制系列不同濃度的過氧化苯甲酰標(biāo)準(zhǔn)溶液，向各過氧化苯甲酰標(biāo)準(zhǔn)溶液中依次加入一定量的反應(yīng)試劑和顯色劑，發(fā)生顯色反應(yīng)， 根據(jù)反應(yīng)后顏色的深淺對應(yīng)過氧化苯甲酰標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，制成標(biāo)準(zhǔn)比色卡。
全文摘要
本發(fā)明公開了面粉違禁添加劑過氧化苯甲?？焖贆z測試劑盒及制備方法，該試劑盒由反應(yīng)試劑、顯色劑、陽性對照試劑儲備液和標(biāo)準(zhǔn)比色卡組成；反應(yīng)試劑是濃度100mg/L至300mg/L的亞鐵離子酸性水溶液；顯色劑是濃度0.5mol/L至0.75mol/L的硫氰酸根水溶液；陽性對照試劑儲備液是濃度500mg/L至1500mg/L的過氧化苯甲酰乙醇溶液；標(biāo)準(zhǔn)比色卡包括若干小色塊，每個(gè)色塊對應(yīng)過氧化苯甲酰濃度。本發(fā)明將待測樣品按照試劑盒操作方法顯色后，對照標(biāo)準(zhǔn)比色卡直接進(jìn)行定性和半定量分析，整個(gè)樣品分析過程不需要借助大型分析儀器，簡化了操作過程，縮短了分析時(shí)間。
文檔編號G01N21/78GK102207466SQ20111008423
公開日2011年10月5日 申請日期2011年4月6日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月6日
發(fā)明者吳存兵, 屠湘君, 李逸鶴, 田林雙, 穆飛虎, 陳芳, 陳長毅, 顧鵬程 申請人:江蘇財(cái)經(jīng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院