一種新型二苯乙烯類衍生物及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種新型二苯乙烯類衍生物，所述新型二苯乙烯類衍生物為具有下述通式Ⅰ或通式Ⅱ的化合物，或所述新型二苯乙烯類衍生物為具有所述通式Ⅰ或所述通式Ⅱ的化合物與無機酸或有機酸形成的可接受的鹽；其中，所述通式Ⅰ或所述通式Ⅱ中，X代表的原子為氫原子或鹵原子；R代表的取代基為C1-C6烷基、1-6元雜烷基、C2-C4烯基、C2-C4炔基、C3-C6環(huán)烷基、取代C3-C6環(huán)烷基、3-6元雜環(huán)烷基、取代3-6元雜環(huán)烷基、5-18元芳基、取代5-18元芳基、5-18元雜芳基、取代5-18元雜芳基；所述新型二苯乙烯類衍生物具有神經發(fā)生活性和低神經細胞毒性。
【專利說明】
一種新型二苯乙烯類衍生物及其制備方法
技術領域
[0001] 本發(fā)明涉及化學合成及制藥領域，特別是涉及一種新型二苯乙烯類衍生物，以及 一種新型二苯乙烯類衍生物的制備方法。
【背景技術】
[0002] 阿爾茲海默病(Alzheimer's disease，AD)是一種中樞神經系統(tǒng)變性疾病，早期是 隱匿性認知功能減退，在5-10年內發(fā)展成嚴重的記憶喪失、行為和人格改變、語言障礙、喪 失獨立生活能力。2015年全球登記的病例達到4680萬，被列為心血管疾病、中風和腫瘤之后 的第四大致死疾病，臨床無治愈藥物。阿爾茲海默病的發(fā)病率與年齡密切相關，隨著年齡的 增長，AD的發(fā)病率呈指數(shù)增長的方式驟增，據(jù)統(tǒng)計，AD發(fā)病率在60歲左右為1%，之后平均每 5-6年，發(fā)病率會翻一番。隨著人口老齡化現(xiàn)象的加劇，阿爾茲海默病的發(fā)病率越來越高，進 行性的記憶能力、學習能力、日常生活能力的下降，嚴重影響著老年人的生活質量，給家庭 和社會帶來了沉重的負擔。
[0003] AD患者大腦基本的病理學改變有淀粉樣蛋白斑塊、神經纖維纏結以及神經元缺 失。大量的動物實驗證明正常成年哺乳動物的側腦室下區(qū)（8111^6111：1'；[011131'，3￥2)和海馬齒 狀回亞顆粒區(qū)（subgranular zone，SGZ)在一定外界條件刺激下，神經祖細胞具有增殖和分 化成成熟神經元的獨特能力?，F(xiàn)階段對于海馬區(qū)神經發(fā)生的研究，主要采用BrdU(5-溴脫氧 尿嘧啶核苷)標記的方法。BrdU是一個胸腺嘧啶類似物，能整合到處于S期的分裂細胞DNA雙 鏈中，并可通過免疫組化熒光染色檢測標記細胞在體內的變化，BrdU陽性細胞可被看作是 具有增殖活性的細胞，是神經干細胞研究中最常用的標記物。隨著個體衰老或是病變引起 的腦神經元功能受損或是神經元死亡引發(fā)的機體功能喪失表現(xiàn)為:學習記憶能力減退，空 間認知障礙和身體運動機能受損等。由于海馬區(qū)功能與學習記憶和認知能力緊密相關，因 此有望通過神經發(fā)生建立新的神經元替代受損或是凋亡神經元的功能，讓老年癡呆癥患者 恢復生理機能，重新獲得高質量的生活。
[0004]人們對已知藥物進行隨機篩選，發(fā)現(xiàn)了一些具有神經發(fā)生作用的化合物，例如姜 黃素，紫花前胡苷，白藜蘆醇和氨丙基咔唑類等，還發(fā)現(xiàn)了一些中草藥萃取物，例如銀杏葉 提取物等。動物行為學實驗證明神經發(fā)生確實能提高動物的記憶、學習和認知能力。
[0005] 但目前的神經發(fā)生研究還存在幾個重要問題亟待解決：1)絕大多數(shù)研究是隨機的 試錯篩選，很少涉及具有共同基團（特別是藥效團）的報道，不利于進一步更強活性化合物 的設計和篩選;2)大多數(shù)研究是建立在對其他已知靶點或者具有其他藥理活性化合物的篩 選，因此這些藥理上的副作用會限制其治療癡呆的臨床應用前景；3)血腦屏障是神經藥物 的重要障礙，許多藥物結構上不滿足突破血腦屏障的最優(yōu)理化性質，例如含有過多的氫鍵 供體-羥基或者氨基，導致滲透性低，無法有效通過親脂性的血腦屏障，最終體現(xiàn)在給藥劑 量非常大(例如具有三個酚羥基的白藜蘆醇腹腔注射給藥劑量為40mg/Kg)，必然限制今后 的臨床應用，有必要進行結構改造。
[0006] 綜上所述，需要本領域技術人員迫切解決的一個技術問題就是：如何能夠提供一 類新型化合物，這類化合物不但有著共同的藥效團，同時這類分子對神經細胞毒性低，且能 有效通過血腦屏障，在較低劑量下就能促進海馬齒狀回亞顆粒區(qū)神經發(fā)生。

【發(fā)明內容】

[0007] 本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種具有神經發(fā)生活性的化合物，以及一種具 有神經發(fā)生活性的新型二苯乙烯類衍生物化合物，的制備方法，還提供一種具有神經發(fā)生 活性的新型二苯乙烯類衍生物，以及一種制備具有神經發(fā)生活性的新型二苯乙烯類衍生物 的制備方法。
[0008] 為了解決上述問題，本發(fā)明公開了一種新型二苯乙烯類衍生物，所述新型二苯乙 烯類衍生物為具有下述通式I或通式Π 的化合物，或所述新型二苯乙烯類衍生物為具有所 述通式I或所述通式Π 的化合物與無機酸或有機酸形成的可接受的鹽；
[0009]
[0010] 其中，所述通式I或所述通式Π 中，X代表的原子為氫原子或鹵原子；
[0011] R代表的取代基為C1-C6烷基、1-6元雜烷基、C2-C4烯基、C2-C4炔基、C3-C6環(huán)烷基、 取代C3-C6環(huán)烷基、3-6元雜環(huán)烷基、取代3-6元雜環(huán)烷基、5-18元芳基、取代5-18元芳基、5-18元雜芳基、取代5-18元雜芳基；
[0012] 所述新型二苯乙烯類衍生物具有神經發(fā)生活性和低神經細胞毒性。
[0013] 可選地，所述X代表的原子為氫原子或氟原子；
[0014] 所述R代表的取代基為C1-C4烷基、3-5元雜烷基、C3-C6環(huán)烷基、取代C3-C6環(huán)烷基、 3-6元雜環(huán)烷基、取代3-6元雜環(huán)烷基、6-10元芳基、取代6-10元芳基、5-10元雜芳基、取代5-10元雜芳基。
[0015] 可選地，所述C1-C4烷基為甲基、乙基、正丙基、異丙基或叔丁基；
[0016] 所述3-5元雜烷基為N，N-二甲基氨基、N-甲基-N-乙基氨基、N，N-二甲基氨基甲基、 N，N-二乙基氨基、甲氧基、乙氧基、異丙氧基或叔丁氧基；
[0017] 所述C3-C6環(huán)烷基為環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基或環(huán)己基；
[0018] 所述取代C3-C6環(huán)烷基為甲基環(huán)丙基、氟代環(huán)丙基、氰基環(huán)丙基、環(huán)丙基甲基或(環(huán) 己基）乙基；
[0019] 所述3-6元雜環(huán)烷基為四氫呋喃基、吡咯烷基、嗎啉基、哌啶基或哌嗪基；
[0020] 所述取代3-6元雜環(huán)烷基為N-甲基哌啶基、N-乙基哌啶基、N-乙?；哙せ?N-甲基哌啶基)哌啶基；
[0021] 所述6-10元芳基為苯基或萘基；
[0022]所述取代6-10元芳基為取代苯基或取代萘基；
[0023] 所述5-10元雜芳基為呋喃基、吡咯基、噻吩基、吡啶基、喹啉基或異喹啉基；
[0024] 所述取代5-10元雜芳基為取代呋喃基、取代吡咯基、取代噻吩基、取代吡啶基、取 代喹啉基或取代異喹啉基。
[0025] 可選地，所述取代苯基為甲基苯基、二甲基苯基、氟代苯基、氯代苯基、溴代苯基、 異丙基苯基、叔氨基苯基、甲氧基苯基、二甲氧基苯基、乙?；交⑶杌交?、(R)-1-苯基- 1-甲氧基甲基或（S)-1-苯基-1-甲氧基甲基、甲氧基芐基、甲基芐基、叔氨基芐基、氟代芐 基、氯代芐基或氰基芐基；
[0026] 所述取代萘基為甲氧基萘基、甲基萘基、叔氨基萘基、氟代萘基、氯代萘基或氰基 蔡基；
[0027] 所述取代呋喃基為甲氧基呋喃基、甲基呋喃基、氟代呋喃基、氯代呋喃基或氰基呋 喃基；
[0028] 所述取代噻吩基為甲氧基噻吩基、甲基噻吩基、氟代噻吩基、氯代噻吩基或氰基噻 吩基；
[0029] 所述取代P比啶基為甲基P比啶基、甲氧基P比啶基、氟代P比啶基、氯代P比啶基、氰基P比 啶基、啦啶基甲基、（吡啶基）乙基或(吡啶基巰基）甲基；
[0030] 所述取代喹啉基為甲氧基喹啉基、甲基喹啉基、氟代喹啉基、氯代喹啉基或氰基喹 琳基；
[0031] 所述取代異喹啉基為甲氧基異喹啉基、甲基異喹啉基、氟代異喹啉基、氯代異喹啉 基或氰基異喹啉基。
[0032]可選地，具有所述通式I或所述通式Π 的所述化合物由?；噭；疎-4'-氨基_ 3，4_亞甲基二氧-二苯乙稀或者E_3，4_亞甲基二氧_3 氣_4 氛基-二苯基乙稀得到。
[0033] 可選地，所述?；噭轸人?、酸酐或酰氯。
[0034] 可選地，所述羧酸為2-呋喃甲酸、2-噻吩甲酸、2-吡啶甲酸、2-四氫呋喃甲酸、（R)-2_四氫呋喃甲酸、（S)-2-四氫呋喃甲酸、1-甲基哌啶-4-甲酸、環(huán)丙基甲酸、1-甲基環(huán)丙基甲 酸、2-甲基環(huán)丙基甲酸、1-氰基環(huán)丙基甲酸、環(huán)丙基乙酸或環(huán)丁甲酸；
[0035] 所述酸酐為苯甲酸酐、醋酸酐、乙酸酐、丙酸酐、正丁酸酐、異丁酸酐、苯甲酸酐或 二碳酸二叔丁酯；
[0036]所述酰氯為新戊酰氯、N，N-二甲基甲酰氯、苯磺酰氯、環(huán)丙基磺酰氯、異丙基磺酰 氯、4-甲氧基苯甲酰氯、4-氰基苯甲酰氯、4-氯苯磺酰氯、苯基乙酰氯、芐基磺酰氯、對甲苯 磺酰氯、1-吡咯烷羰酰氯、N-乙?；哙?4-酰氯、氯甲酸異丙酯、二甲氨基磺酰氯或4-二甲 氨基苯甲酰氯。
[0037]可選地，具有所述通式I或所述通式Π 的所述新型二苯乙烯類衍生物或形成所述 新型二苯乙烯類衍生物的化合物由所述?；噭；?'-氨基-3,4-亞甲基二氧-二苯 乙烯得到；
[0038] 當所述酰化試劑為2-噻吩甲酸、2-吡啶甲酸、環(huán)丙基甲酸、環(huán)丁甲酸、2-四氫呋喃 甲酸或1-甲基哌啶-4-甲酸時，所述化合物的結構式為以下i~vi任意一種：
[0039]
[0040]
[0041] 當所述酰化試劑為乙酸酐、丙酸酐、正丁酸酐、異丁酸酐、苯甲酸酐或二碳酸二叔 丁酯時，所述化合物的結構式為以下vii~xii任意一種：
[0042]
[0043] 當所述?；噭閷妆交酋Ｂ?、N，N-二甲基甲酰氯、苯磺酰氯、新戊酰氯、環(huán)丙 基磺酰氯、異丙基磺酰氯、4-甲氧基苯甲酰氯、4-氰基苯甲酰氯、4-氯苯磺酰氯、苯基乙酰 氯、芐基磺酰氯、氯甲酸異丙酯、二甲氨基磺酰氯或4-二甲氨基苯甲酰氯時，所述化合物的 結構式為以下xii i~xxvi任意一種：
[0044]
[0045] 可選地，所述具有所述通式I或所述通式Π 的化合物由?；噭；疎-3,4-亞甲 基二氧_3 ' -氣-4 ' -氨基-二苯基乙稀得到；
[0046]當所述?；噭橐宜狒麜r，所述新型二苯乙烯類衍生物的結構式為：
[0047] 可選地，所述無機酸為鹽酸、硫酸、氫溴酸、氫碘酸或磷酸；
[0048] 所述有機酸為醋酸、丙二酸、甲磺酸、琥珀酸、對甲苯磺酸、檸檬酸、馬來酸或酒石 酸。
[0049] 本發(fā)明還提供了一種新型二苯乙烯類衍生物的制備方法，制備所述具有所述通式 I或所述通式Π 的化合物的方法包括：
[0050] 化合物粗品的制備:將反應基材溶解在二氯甲烷中，加入催化劑得到混合物，向所 述混合物中滴加?；噭┗蛱幚砗蟮孽；噭┎嚢?，直至反應結束，蒸干所述二氯甲烷， 得到所述化合物粗品，所述反應基材為E-4 氨基-3，4-亞甲基二氧-二苯乙烯或E-3，4-亞 甲基二氧_3 ' -氣-4 ' -氨基-二苯基乙??；
[0051 ]化合物的制備：向所述化合物粗品中加入飽和NaHC〇3溶液，另加入二氯甲烷進行 萃取，獲取下層的有機相，依次用蒸餾水和飽和食鹽水洗滌所述有機相，對洗滌后的有機相 進行旋蒸濃縮和干燥，得到固體物質，再對得到的固體物質進行柱層析處理，得到具有神經 發(fā)生活性和低神經細胞毒性的化合物。
[0052] 可選地，當?；噭樗狒蝓Ｂ葧r，所述化合物粗品的制備方法包括：
[0053] 將所述反應基材溶解在二氯甲烷中，加入吡啶和4-二甲氨基吡啶，得到混合物，冷 水浴冷卻所述混合物的溫度至〇 °C以下，向始終低于0 °C的所述混合物中滴加所述?；噭?并攪拌，直至反應結束，蒸干二氯甲烷，得到所述化合物粗品。
[0054]可選地，當?；噭樗釙r，所述化合物粗品的制備方法包括：
[0055]將?；噭┤芙庠诙燃淄橹校尤肴野窋嚢璨⑷芙夂?，再加入新戊酰氯攪拌， 待所述新戊酰氯溶解后，得到所述處理后的?；噭?；
[0056] 將所述反應基材溶解于二氯甲烷，并逐滴加入所述處理后的?；噭?，置于室溫 至反應結束，蒸干所述二氯甲烷，得到所述化合物粗品。
[0057] 可選地，所述方法還包括：
[0058] 可接受的鹽的制備：向得到的所述化合物中加入無機酸或有機酸，生成具有神經 發(fā)生活性和低神經細胞毒性的可接受的新型二苯乙烯類衍生物。
[0059] 與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明包括以下優(yōu)點：
[0060] 本發(fā)明經過多次試驗和理論研究，發(fā)現(xiàn)通式（I)或通式（π)化合物具有新型結構， 依據(jù)所述新型結構使得所述新型二苯乙烯類衍生物具有較好的神經發(fā)生活性。
[0061 ]并且，在生物學毒性上，本發(fā)明中的新型二苯乙烯類衍生物對神經細胞的毒性較 低，對神經細胞的損傷較小，具有重要的生物學意義。例如E-4'-氨基-3,4_亞甲基二氧-二 苯乙烯(WS-4)體外測試具有較高的神經細胞毒性，在本發(fā)明實施例的測試條件下，高劑量、 中劑量和低劑量下細胞生存率均不到50%，而?；蟮幕衔锷窠浂拘跃薪档?，特別是 E-4 ' -乙酰氨基-3，4-亞甲基二氧-二苯乙烯(WS-6)、E-4 ' -苯甲酰氨基-3，4-亞甲基二氧-二 苯乙烯(WS-70)、E-4 ' -環(huán)丙基甲酰氨基-3，4-亞甲基二氧-二苯乙烯(WS-74)的神經毒性大 大降低，所有劑量下細胞生存率都超過了80%。
[0062]此外，與已經報道的白藜蘆醇相比，本發(fā)明中的新型二苯乙烯類衍生物可以在較 低劑量下就表現(xiàn)出明顯的神經發(fā)生活性，例如腹腔注射給藥28天，2mg/kg或者4mg/kg。而白 藜蘆醇需要在40mg/kg的高劑量下才可以表現(xiàn)出神經發(fā)生活性。因此，本發(fā)明的新型二苯乙 烯類衍生物的使用劑量較少。
[0063]實驗研究表明，即使在相同使用劑量下，改變二苯乙烯類化合物的基團就會導致 化合物的神經發(fā)生活性發(fā)生明顯變化，因為選擇的基團和化合物的神經發(fā)生活性之間沒有 已知規(guī)律可循，所以本發(fā)明中的具有神經活性新型二苯乙烯類衍生物無法從現(xiàn)有技術直接 推導出來。另外，本發(fā)明已經突破已有的二苯乙烯結構構效關系知識，研究表明，包含特定 取代基的二苯乙烯結構具有較低的神經毒性、較高的神經發(fā)生活性和能夠穿越血腦屏障的 結構優(yōu)勢，而現(xiàn)有技術中關于二苯乙烯結構及性質的報道中并未公開該結構優(yōu)勢。因此，本 發(fā)明的具有通式I或通式II的二苯乙烯類衍生物具有新穎性和創(chuàng)造性。
【附圖說明】
[0064]圖1是本發(fā)明實施例1的一種新型二苯乙烯類衍生物的制備方法流程圖；
[0065]圖2是本發(fā)明實施例2的一種新型二苯乙烯類衍生物的制備方法流程圖；
[0066]圖3是本發(fā)明實施例的一個示例的新型二苯乙烯類衍生物的體外細胞毒性測試 圖；
[0067]圖4(a)為對照化合物WS-77的BrdU標記圖；
[0068] 圖4(b)為對照化合物WS-80的BrdU標記圖；
[0069] 圖 5(a)為WS-69 的 BrdU 標記圖；
[0070] 圖 5(b)為 WS-70 的 BrdU 標記圖；
[0071] 圖 5(c)為 WS-71 的 BrdU 標記圖；
[0072] 圖 6(a)為 WS-54 的 BrdU 標記圖；
[0073] 圖 6(b)為 WS-73 的 BrdU 標記圖；
[0074] 圖 6(c)為 WS-74 的 BrdU 標記圖；
[0075]圖7是本發(fā)明實施例的一個示例的新型二苯乙烯類衍生物的BrdU和NeuN熒光雙染 實驗測試圖。
【具體實施方式】
[0076]為使本發(fā)明的上述目的、特征和優(yōu)點能夠更加明顯易懂，下面結合附圖和具體實 施方式對本發(fā)明作進一步詳細的說明。
[0077]本發(fā)明提供了一種新型二苯乙烯類衍生物，所述新型二苯乙烯類衍生物為具有下 述通式I或通式Π 的化合物，或所述新型二苯乙烯類衍生物為具有所述通式I或所述通式Π 的化合物與無機酸或有機酸形成的可接受的鹽，該鹽作為前藥(prodrug)在體內生理條件 下釋放出通式結構所示游離堿并作為活性成分起著藥理作用。
[0078]
[0079]
[0080] 其中，所述通式I或所述通式Π 中，X代表的原子為氫原子或鹵原子；
[0081 ] R代表的取代基為C1-C6烷基、1-6元雜烷基、C2-C4烯基、C2-C4炔基、C3-C6環(huán)烷基、 取代C3-C6環(huán)烷基、3-6元雜環(huán)烷基、取代3-6元雜環(huán)烷基、5-18元芳基、取代5-18元芳基、5-18元雜芳基、取代5-18元雜芳基；
[0082]所述新型二苯乙烯類衍生物具有神經發(fā)生活性和低神經細胞毒性。
[0083] 本發(fā)明實施例中所用的術語"芳基"意指具有一個單環(huán)或兩個或更多個稠合環(huán)的 芳族碳環(huán)基。所述芳基優(yōu)選具有5-18個、5-14個、5-10個、5-8個、5-6個或6個碳原子。所述 "芳基"的典型實例包括但不限于苯基、萘基、蒽基等等。所述"芳基"最優(yōu)選為苯基，萘基。
[0084] 本發(fā)明實施例中所用的術語"雜芳基"表示如本發(fā)明實施例中所定義的芳基，其中 一個或兩個或更多個碳原子被一個或兩個或更多個獨立地選自〇、S或Ν的雜原子替代。所述 雜芳基優(yōu)選為5-18元、5-14元、5-10元、5-8元、5-6元或5元或6元雜芳基。所述"雜芳基"的典 型實例包括但不限于呋喃基、吡咯基、噻吩基、咪唑基、三唑基、四唑基、吡唑基、惡唑基、異 惡唑基、噻唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、三嗪基、苯并呋喃基、異苯并呋喃基、吲哚 基、異吲哚基、苯并[b]噻吩基、苯并[c]噻吩基、苯并咪唑基、嘌呤基、吲唑基、苯并惡唑基、 苯并異惡唑基、苯并噻唑基、喹啉基、異喹啉基、喹唑啉基、苯并吡嗪基、苯并噠嗪基，吡啶并 吡啶基等。所述"雜芳基"最優(yōu)選為呋喃基、吡咯基、噻吩基、吡啶基、喹啉基或異喹啉基。上 述多種雜芳基僅用于舉例，其他未列舉出的雜芳基也具有相似的性能，此處基于篇幅限制 不做贅述。
[0085] 本發(fā)明實施例中使用的術語"Ca-Cb烷基"（a，b為數(shù)字)是指飽和的直鏈或支鏈烴 基，具有a-b個碳原子，例如C1-C6烷基，C1-C4烷基。優(yōu)選的C1-C6烷基為甲基、乙基、正丙基、 異丙基、仲丁基、叔丁基、叔戊基或新戊基。上述多種烷基僅用于舉例，其他未列舉出的烷基 也具有相似的性能，此處基于篇幅限制不做贅述。
[0086] 本發(fā)明實施例中使用的術語"a-b元雜烷基"（a，b為數(shù)字）意指包含一個或多個獨 立地選自N、0和S的雜原子的如本發(fā)明實施例中所定義的Ca-Cb烷基，例如1-6元雜烷基，3-5 元雜烷基。優(yōu)選的雜烷基為N，N-二甲基氨基、N-甲基-N-乙基氨基、N，N-二甲基氨基甲基、N， N-二乙基氨基、甲氧基、乙氧基、異丙氧基或叔丁氧基。上述多種雜烷基僅用于舉例，其他未 列舉出的雜烷基也具有相似的性能，此處基于篇幅限制不做贅述。
[0087]本發(fā)明實施例中使用的術語"C2-C4烯基"是指含有至少一個碳碳雙鍵(_C = C_)的 烯屬不飽和直鏈或支鏈烴基，具有2-4個碳原子。優(yōu)選的烯基為乙烯基，丙烯基。本發(fā)明實施 例中使用的術語"C2-C4炔基"是指含有至少一個碳碳三鍵(_C = C_)的炔屬不飽和直鏈或支 鏈烴基，具有2-4個碳原子。優(yōu)選的炔基為乙炔基或丙炔基。上述多種烯基和炔基僅用于舉 例，其他未列舉出的烯基和炔基也具有相似的性能，此處基于篇幅限制不做贅述。
[0088]本發(fā)明實施例中使用的術語"C3-C6環(huán)烷基"意指具有3-6個碳原子的飽和環(huán)狀烴 基。優(yōu)選的環(huán)烷基為環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基或環(huán)己基。本發(fā)明實施例中所用的術語"3-6元 雜環(huán)烷基"意指包含一個或多個獨立地選自N、0和S的雜原子的如本發(fā)明實施例中所定義的 C3-C6環(huán)烷基。優(yōu)選的雜環(huán)烷基為四氫呋喃基、吡咯烷基、哌啶基、嗎啉基或哌嗪基。上述多 種環(huán)烷基僅用于舉例，其他未列舉出的環(huán)烷基也具有相似的性能，此處基于篇幅限制不做 贅述。
[0089] 本發(fā)明實施例中所用的術語"鹵素"意指氟、氯、溴或碘。優(yōu)選的鹵素為氟和氯。
[0090] 本發(fā)明實施例中所用的術語"取代"環(huán)烷基，"取代"雜環(huán)烷基，"取代"芳基，"取代" 雜芳基等，"取代"是指化合物或者基團被一個或兩個或更多個獨立選自下列的取代基取 代:芳基(例如苯基）、雜芳基(例如呋喃基、吡咯基、噻吩基、吡啶基、喹啉基、異喹啉基）、C3-C6環(huán)烷基、3-6元雜環(huán)烷基、Cl -C6烷基、C2-C4烯基、C2-C4炔基、1 -6元雜烷基、硝基、氰基、羥 基Ν ??素、氣基等。
[0091 ] 優(yōu)選的"取代C3-C6環(huán)烷基"為甲基環(huán)丙基、氟代環(huán)丙基、氰基環(huán)丙基、環(huán)丙基甲基 或(環(huán)己基）乙基。
[0092] 優(yōu)選的"取代3-6元雜環(huán)烷基"為Ν-甲基哌啶基、Ν-乙基哌啶基、Ν-乙?；哙せ?(Ν-甲基哌啶基)哌啶基。
[0093 ]優(yōu)選的"取代苯基"為甲基苯基、二甲基苯基、氟代苯基、氯代苯基、溴代苯基、異丙 基苯基、叔氨基苯基、甲氧基苯基、二甲氧基苯基、乙?；交?、氰基苯基、（R)-1-苯基-1-甲 氧基甲基、（S)-1-苯基-1-甲氧基甲基、芐基、甲氧基芐基、甲基芐基、叔氨基芐基、氟代芐 基、氯代芐基或氰基芐基。
[0094] 優(yōu)選的"取代萘基"為甲氧基萘基、甲基萘基、叔氨基萘基、氟代萘基、氯代萘基或 氰基萘基。
[0095] 優(yōu)選的"取代噻吩基"為甲氧基噻吩基、甲基噻吩基、氟代噻吩基、氯代噻吩基或氰 基噻吩基。
[0096] 優(yōu)選的"取代呋喃基"為甲氧基呋喃基、甲基呋喃基、氟代呋喃基、氯代呋喃基或氰 基呋喃基。
[0097 ]優(yōu)選的"取代P比啶基"為甲基P比啶基、甲氧基P比啶基、氟代P比啶基、氯代P比啶基、氰 基吡啶基、吡啶基甲基、（吡啶基）乙基或(吡啶基巰基）甲基。
[0098] 優(yōu)選的"取代喹啉基"為甲氧基喹啉基、甲基喹啉基、氟代喹啉基、氯代喹啉基或氰 基喹啉基。
[0099] 優(yōu)選的"取代異喹啉基"為甲氧基異喹啉基、甲基異喹啉基、氟代異喹啉基、氯代異 喹啉基或氰基異喹啉基。
[0100] 上述多種取代化合物僅用于舉例，在同一分類中，其他未列舉出的取代化合物也 具有相似的性能，此處基于篇幅限制不做贅述。
[0101] 本發(fā)明經過多次試驗和理論研究，發(fā)現(xiàn)通式（I)或通式（Π )化合物具有新型結構， 依據(jù)所述新型結構使得所述新型二苯乙烯類衍生物具有較好的神經發(fā)生活性。
[0102] 研究結構表明，在同一劑量下，改變本發(fā)明實施例中的通式（I)或者通式（Π )的基 團可能會使化合物的神經發(fā)生活性發(fā)生明顯的變化，以E-4'-乙酰氨基-3,4_亞甲基二氧-二苯乙烯(WS-6)為例，WS-6具有較好的神經發(fā)生活性。在本發(fā)明實施例的測試條件下，將 4'_乙酰氨基變成羥基或者乙酰氧基或者叔氨基，其他結構不變，則分別對應得到化合物E-4 ' -羥基-3，4-亞甲基二氧-二苯乙烯(WS-11)、E-4 ' -乙酰氧基-3，4-亞甲基二氧-二苯乙烯 (WS-10)、E-4 '-叔氨基-3，4-亞甲基二氧-二苯乙烯(WS-60)，其中WS-10和WS-11沒有神經發(fā) 生活性，WS-60神經發(fā)生活性較弱。將3,4_亞甲基二氧結構剖環(huán)，變成3,4_二甲氧基，其他結 構不變，得到的E-4'-乙酰氨基-3,4-二甲氧基-二苯乙烯(WS-43)也無明顯神經發(fā)生活性。 將中間的鏈接基團即乙烯變成乙基或者乙炔基，分別得到E-4 乙酰氨基-3，4-亞甲基二 氧-二苯乙烷(WS-35)、E-4'_乙酰氨基-3,4-亞甲基二氧-二苯乙炔(13-77)，其中13-35沒有 神經發(fā)生活性，WS-77神經發(fā)生活性較弱。WS-6的4'-乙酰氨基N上的氫被甲基取代，得到的 E-4 ' -(N-乙酰-N-甲基氨基)-3，4-亞甲基二氧-二苯乙烯(WS-80)無明顯活性。
[0103] 因此，本發(fā)明實施例的具有較好的神經發(fā)生活性的新型二苯乙烯類衍生物是經過 大量勞動創(chuàng)造得到的。
[0104] 并且，在生物學毒性上，本發(fā)明中的新型二苯乙烯類衍生物對神經細胞的毒性較 低，對神經細胞的損傷較小，具有重要的生物學意義。例如E-4'-氨基-3,4_亞甲基二氧-二 苯乙烯(WS-4)體外測試具有較高的神經細胞毒性，在本發(fā)明實施例的測試條件下，高劑量、 中劑量和低劑量下細胞生存率均不到50%，而?；蠡衔锏纳窠浂拘越档?，部分化合物 所有劑量下細胞生存率都超過了 80 %。
[0105] 實驗研究表明，低神經細胞毒性與物質結構并不存在對應關系，雖然本發(fā)明中的 具有所述通式（I)或通式（Π )的新型二苯乙烯類衍生物具有低神經細胞毒性，但是與本發(fā) 明中的化合物結構類似的物質并不具有低神經細胞毒性。如將E-4-乙酰氨基-3 '，4 亞甲 基二氧-二苯基乙烯(WS-6)分子中的乙酰氨基由4-位移至3-位，其他不變時，得到的分子E- 3-乙酰氨基-3 '，4 亞甲基二氧-二苯基乙烯(WS-49)具有較高的神經細胞毒性，所有劑量 下細胞生存率都不超過20%左右。又如在二苯乙烯的兩個苯環(huán)之間的烯烴上插入一個羰 基，得到的4-乙酰氨基-3'，4'_亞甲基二氧查耳酮(WS-37)同樣具有較高的神經細胞毒性， 所有劑量下細胞生存率都不到10%。因此，本發(fā)明實施例的具有低神經細胞毒性的新型二 苯乙烯類衍生物是經過大量勞動創(chuàng)造得到的。
[0106] 本發(fā)明實施例中，優(yōu)選地，所述X代表的原子為氫原子或氟原子；
[0107] 所述R代表的取代基為C1-C4烷基、3-5元雜烷基、C3-C6環(huán)烷基、取代C3-C6環(huán)烷基、 3-6元雜環(huán)烷基、取代3-6元雜環(huán)烷基、6-10元芳基、取代6-10元芳基、5-10元雜芳基、取代5-10元雜芳基。
[0108]本發(fā)明實施例中，優(yōu)選地，所述C1-C4烷基為甲基、乙基、正丙基、異丙基或叔丁基； [0109] 所述3-5元雜烷基為N，N-二甲基氨基、N-甲基-N-乙基氨基、N，N-二甲基氨基甲基、 N，N-二乙基氨基、甲氧基、乙氧基、異丙氧基或叔丁氧基；
[0110] 所述C3-C6環(huán)烷基為環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基或環(huán)己基；
[0111] 所述取代C3-C6環(huán)烷基為甲基環(huán)丙基、氟代環(huán)丙基、氰基環(huán)丙基、環(huán)丙基甲基或(環(huán) 己基）乙基；
[0112] 所述3-6元雜環(huán)烷基為四氫呋喃基、吡咯烷基、嗎啉基、哌啶基或哌嗪基；
[0113] 所述取代3-6元雜環(huán)烷基為N-甲基哌啶基、N-乙基哌啶基、N-乙?；哙せ?N-甲基哌啶基)哌啶基；
[0114] 所述6-10元芳基為苯基或萘基；
[0115] 所述取代6-10元芳基為取代苯基或取代萘基；
[0116] 所述5-10元雜芳基為呋喃基、吡咯基、噻吩基、吡啶基、喹啉基或異喹啉基；
[0117] 所述取代5-10元雜芳基為取代呋喃基、取代吡咯基、取代噻吩基、取代吡啶基、取 代喹啉基或取代異喹啉基。
[0118] 本發(fā)明實施例中，優(yōu)選地，所述取代苯基為甲基苯基、二甲基苯基、氟代苯基、氯代 苯基、漠代苯基、異丙基苯基、叔氣基苯基、甲氧基苯基、^甲氧基苯基、乙醜基苯基、氛基苯 基、（R)-1-苯基-1-甲氧基甲基或（S)-1-苯基-1-甲氧基甲基、甲氧基芐基、甲基芐基、叔氨 基芐基、氟代芐基、氯代芐基或氰基芐基；
[0119] 所述取代萘基為甲氧基萘基、甲基萘基、叔氨基萘基、氟代萘基、氯代萘基或氰基 蔡基；
[0120] 所述取代呋喃基為甲氧基呋喃基、甲基呋喃基、氟代呋喃基、氯代呋喃基或氰基呋 喃基；
[0121 ] 所述取代噻吩基為甲氧基噻吩基、甲基噻吩基、氟代噻吩基、氯代噻吩基或氰基噻 吩基；
[0122] 所述取代P比啶基為甲基P比啶基、甲氧基P比啶基、氟代P比啶基、氯代P比啶基、氰基P比 啶基、啦啶基甲基、（吡啶基）乙基或(吡啶基巰基）甲基；
[0123] 所述取代喹啉基為甲氧基喹啉基、甲基喹啉基、氟代喹啉基、氯代喹啉基或氰基喹 琳基；
[0124] 所述取代異喹啉基為甲氧基異喹啉基、甲基異喹啉基、氟代異喹啉基、氯代異喹啉 基或氰基異喹啉基。
[0125] 本發(fā)明實施例中，優(yōu)選地，具有所述通式I或所述通式Π 的所述化合物由?；噭?酰化E-4 ' -氨基-3，4-亞甲基二氧-二苯乙烯或者E-3，4-亞甲基二氧-3 ' -氟-4 ' -氨基-二苯 基乙稀得到。
[0126] 本發(fā)明實施例中，優(yōu)選地，所述?；噭轸人?、酸酐或酰氯。
[0127] 本發(fā)明實施例中，優(yōu)選地，所述羧酸為2-呋喃甲酸、2-噻吩甲酸、2-吡啶甲酸、2-四 氫呋喃甲酸、（R)-2-四氫呋喃甲酸、（S)-2-四氫呋喃甲酸、1-甲基哌啶-4-甲酸、環(huán)丙基甲 酸、1-甲基環(huán)丙基甲酸、2-甲基環(huán)丙基甲酸、1-氰基環(huán)丙基甲酸、環(huán)丙基乙酸或環(huán)丁甲酸；
[0128] 所述酸酐為苯甲酸酐、醋酸酐、乙酸酐、丙酸酐、正丁酸酐、異丁酸酐、苯甲酸酐或 二碳酸二叔丁酯；
[0129] 所述酰氯為新戊酰氯、N，N-二甲基甲酰氯、苯磺酰氯、環(huán)丙基磺酰氯、異丙基磺酰 氯、4-甲氧基苯甲酰氯、4-氰基苯甲酰氯、4-氯苯磺酰氯、苯基乙酰氯、芐基磺酰氯、對甲苯 磺酰氯、1-吡咯烷羰酰氯、N-乙酰基哌啶-4-酰氯、氯甲酸異丙酯、二甲氨基磺酰氯或4-二甲 氨基苯甲酰氯。
[0130] 本發(fā)明實施例中，優(yōu)選地，具有所述通式I或所述通式Π 的所述新型二苯乙烯類衍 生物或形成所述新型二苯乙烯類衍生物的化合物由所述?；噭；?'_氨基-3,4_ 亞甲基二氧-二苯乙烯得到；
[0131 ]當所述酰化試劑為2-噻吩甲酸、2-吡啶甲酸、環(huán)丙基甲酸、環(huán)丁甲酸、2-四氫呋喃 甲酸或1-甲基哌啶-4-甲酸時，所述化合物的結構式為以下i~vi任意一種：
[0132]
[0133] 當所述?；噭橐宜狒?、丙酸酐、正丁酸酐、異丁酸酐、苯甲酸酐或二碳酸二叔 丁酯時，所述化合物的結構式為以下vii~xii任意一種：
[0134]
[0135] 當所述?；噭閷妆交酋Ｂ取，N-二甲基甲酰氯、苯磺酰氯、新戊酰氯、環(huán)丙 基磺酰氯、異丙基磺酰氯、4-甲氧基苯甲酰氯、4-氰基苯甲酰氯、4-氯苯磺酰氯、苯基乙酰 氯、芐基磺酰氯、氯甲酸異丙酯、二甲氨基磺酰氯或4-二甲氨基苯甲酰氯時，所述化合物的 結構式為以下xii i~xxvi任意一種：
[0136]
[0137]
[0138] 本發(fā)明實施例中，優(yōu)選地，所述具有所述通式I或所述通式Π 的化合物由?；噭?酰化Ε-3，4-亞甲基二氧-3 ' -氣-4 ' -氨基-二苯基乙稀得到；
[0139] 當所述?；噭橐宜狒麜r，所述新型二苯乙烯類衍生物的結構式為：
[0140]
[0141] 本友明買施例中，
1尤選地，所還尤機酸為鹽酸、硫酸、氫溴酸、氫碘酸或磷酸；
[0142] 所述有機酸為醋酸、丙二酸、甲磺酸、琥珀酸、對甲苯磺酸、檸檬酸、馬來酸或酒石 酸。
[0143] 本發(fā)明還可以提供具有神經發(fā)生活性和低神經細胞毒性的藥物組合物，該組合物 可以包括具有前述通式的化合物，或者由具有前述通式的化合物形成的藥物上可接受的 鹽，以及藥物上可接受的載體。本發(fā)明還包括本發(fā)明化合物的前藥，即以某種雖未公開的結 構給藥但是在人體內代謝或者轉化成本發(fā)明中公開的化合物，并作為藥效成分發(fā)揮藥理作 用。對于本發(fā)明，各種藥用可接受的酸可以在通式I和通式II中R基團所包含的雜原子-氮上 形成鹽，如叔氨基苯基的氮原子上，甲基哌啶基的氮原子上，二甲氨基的氮原子上，R比啶基 的氮原子上。前藥的制備常規(guī)方法見《Design of Prodrugs》（H. Bundgaad,Elsevier， 1985) 〇
[0144] 本發(fā)明還提供一種新型二苯乙烯類衍生物的制備方法，具體地，制備具有所述通 式I或所述通式Π 的化合物的方法包括：
[0145] 化合物粗品的制備:將反應基材溶解在二氯甲烷中，加入催化劑得到混合物，向所 述混合物中滴加酰化試劑或處理后的?；噭┎嚢?，直至反應結束，蒸干所述二氯甲烷， 得到所述化合物粗品，所述反應基材為E-4 氨基-3，4-亞甲基二氧-二苯乙烯或E-3，4-亞 甲基二氧_3 ' -氣-4 ' -氨基-二苯基乙?。?br>[0146] 化合物的制備：向所述化合物粗品中加入飽和NaHC03溶液，另加入二氯甲烷進行 萃取，獲取下層的有機相，依次用蒸餾水和飽和食鹽水洗滌所述有機相，對洗滌后的有機相 進行旋蒸濃縮和干燥，得到固體物質，再對得到的固體物質進行柱層析處理，得到具有神經 發(fā)生活性和低神經細胞毒性的化合物。
[0147] 本發(fā)明實施例中，優(yōu)選地，當?；噭樗狒蝓Ｂ葧r，所述化合物粗品的制備方 法包括：
[0148] 將所述反應基材溶解在二氯甲烷中，加入吡啶和4-二甲氨基吡啶，得到混合物，冷 水浴冷卻所述混合物的溫度至〇 °C以下，向始終低于0 °C的所述混合物中滴加所述?；噭?并攪拌，直至反應結束，蒸干二氯甲烷，得到所述化合物粗品。
[0149] 本發(fā)明實施例中，優(yōu)選地，當?；噭樗釙r，所述化合物粗品的制備方法包括： [0150]將酰化試劑溶解在二氯甲烷中，加入三乙胺攪拌并溶解后，再加入新戊酰氯攪拌， 待所述新戊酰氯溶解后，得到所述處理后的?；噭?；
[0151] 將所述反應基材溶解于二氯甲烷，并逐滴加入所述處理后的酰化試劑，置于室溫 至反應結束，蒸干所述二氯甲烷，得到所述化合物粗品。
[0152] 本發(fā)明實施例中，優(yōu)選地，所述方法還包括：
[0153] 可接受的鹽的制備：向得到的所述化合物中加入無機酸或有機酸，生成具有神經 發(fā)生活性和低神經細胞毒性的可接受的新型二苯乙烯類衍生物。
[0154] 相應的，本發(fā)明還提供了對上述新型二苯乙烯類衍生物的制備方法，具體參見下 述實施例。
[0155] 參考圖1，示出了本發(fā)明實施例的一種新型二苯乙烯類衍生物的制備方法流程圖， 所述新型二苯乙烯類衍生物為具有下述通式I或通式Π 的化合物，制備所述新型二苯乙烯 類衍生物的方法具體可以包括以下步驟：
[0156] 步驟101、將反應基材溶解在無水二氯甲烷中，加入吡啶和4-二甲氨基吡啶，得到 混合物，冷水浴冷卻所述混合物的溫度至〇°C以下，向始終低于0°C的混合物中滴加酰化試 劑并攪拌，直至反應結束，所述反應基材為E-4 氨基-3，4-亞甲基二氧-二苯乙烯或E-3，4-亞甲基二氧_3 ' -氣_4 ' -氛基-二苯基乙稀。
[0157] 步驟102、加入飽和NaHC03溶液，另加入二氯甲烷進行萃取，獲取下層的有機相，依 次用蒸餾水和飽和食鹽水洗滌所述有機相，對洗滌后的有機相進行旋蒸濃縮和干燥，得到 固體物質，再對得到的固體物質進行柱層析處理，得到具有神經發(fā)生活性和低神經細胞毒 性的化合物。
[0158] 其中，反應基材E-4 ' -氨基-3，4-亞甲基二氧-二苯乙烯和E-3，4-亞甲基二氧-3 ' -氟-4'-氨基-二苯基乙烯均為已知物質，兩種物質的制備方法類似。以E-4'-氨基-3,4-亞甲 基二氧-二苯乙烯為例，至少可以包括三種制備方法，例如：
[0159] 第一種方法，以4-硝基苯乙烯和1-碘3，4_亞甲基二氧苯經Heck反應后，還原(例如 無水SnC12)后得到，反應式如下： 1234567 +w2i、 - I' ▼ 〇 -U^N ▼
2 第二種方法，以4-氨基苯乙烯和1-碘3,4-亞甲基二氧苯經Heck反應直接得到，反 應式如下： 3
[0162]
4 第三種方法，以胡椒醛為原料，將醛基轉化成乙烯(例如氨基鈉和三苯基甲基溴化 鱗），得到3,4_亞甲基二氧苯乙烯，再與1-碘-4-硝基苯經Heck反應得到，反應式如下： 5 6
7
[0165]需要說明的是，還可以包括其他制備E_4 氛基_3，4_亞甲基二氧-二苯乙稀的方 法，此處不再贅述。
[0166] 類似的，E-3,4-亞甲基二氧-3'-氟-4'-氨基-二苯基乙烯(WS-71b)也可使用上述 幾種方法合成得到。
[0167] 依據(jù)本發(fā)明實施例的方法制備的具有通式（I)或通式（Π )的新型二苯乙烯類衍生 物具有新型結構，依據(jù)所述新型結構使得所述新型二苯乙烯類衍生物具有較好的神經發(fā)生 活性和低神經細胞毒性，可以通過后續(xù)示例中的測試實驗和實驗數(shù)據(jù)，對所述新型二苯乙 烯類衍生物的神經發(fā)生活性和低細胞毒性等性質進行進一步解釋說明。
[0168] 參考圖2,示出了本發(fā)明實施例2的一種新型二苯乙烯類衍生物的制備方法流程 圖，所述新型二苯乙烯類衍生物為具有所述通式I或所述通式Π 的化合物與無機酸或有機 酸形成的可接受的鹽，制備所述新型二苯乙烯類衍生物的方法具體可以包括以下步驟：
[0169] 步驟201、將反應基材溶解在無水二氯甲烷中，加入吡啶和4-二甲氨基吡啶，得到 混合物，冷水浴冷卻所述混合物的溫度至〇°C以下，向始終低于0°C的混合物中滴加?；?劑并攪拌，直至反應結束，所述反應基材為E-4 氨基-3，4-亞甲基二氧-二苯乙烯或E-3，4-亞甲基二氧_3 ' -氣_4 ' -氛基-二苯基乙稀。
[0170] 步驟202、加入飽和NaHC03溶液，另加入二氯甲烷進行萃取，獲取下層的有機相，依 次用蒸餾水和飽和食鹽水洗滌所述有機相，對洗滌后的有機相進行旋蒸濃縮和干燥，得到 固體物質，再對得到的固體物質進行柱層析處理，得到具有神經發(fā)生活性和低神經細胞毒 性的化合物；
[0171] 步驟203、向得到的所述化合物中加入無機酸或有機酸，生成具有神經發(fā)生活性和 低神經細胞毒性的新型二苯乙烯類衍生物。
[0172] 為使本領域技術人員更好地理解本發(fā)明，以下通過多個具體的示例來說明本發(fā)明 中E-4-氨基-3 '，4 ' -亞甲基二氧-二苯基乙烯、E-3，4-亞甲基二氧-3 ' -氟-4 ' -氨基-二苯基 乙烯以及具有所述通式I或所述通式Π 的化合物的制備方法。
[0173] 示例1:制備E-4-氨基-3 '，4'-亞甲基二氧-二苯基乙烯(WS-4)的反應式為：
[0174]
具體步驟可以包括:將3，4-亞甲基二氧-碘苯(6.63mmo 1，1.644g)溶于DMF( 60mL) 溶液中，加入四丁基溴化銨（3 · 33mmol，1 · 10g)，醋酸鈉（3 · 57mmol，0 · 586g)，醋酸鈀 (0 · llmmol，0 · 025g)與4-硝基-苯乙?。?.44mmol，0 · 365g)。反應體系用氬氣置換5次，在氬 氣保護下，于80°C攪拌5h。反應結束后，加入蒸餾水(60mL)終止反應，用乙酸乙酯（75mL)萃 取，上層有機相用水(60mL)洗滌，再用飽和食鹽水(75mL)洗滌，旋蒸濃縮，干燥得固體物。將 固體物溶于無水乙醇(45mL)中，加入氯化亞錫(33.15mmol，6.261g)，回流攪拌4h。反應結束 后，蒸干乙醇，加入lmol/L的Na0H(60ml)，攪拌0.5h，用乙酸乙酯（75mL)萃取，上層有機相用 水(60mL)洗滌，再用飽和食鹽水(75mL)洗滌，旋蒸濃縮，干燥得固體物。經柱層析(200-400 目硅膠，流動相為V(二氯甲烷）：V(甲醇）= 10:0.1)得淡黃色粉末狀固體化合物WS-4 (0.995g，產率 62.7%)。
[0176] HRMS(ESI)(M+H)+m/z 240.10194，calcd for Ci5Hi4N02240·10191·1Η NMR(CDC13， 500MHz)5：7.29-7.23(m,2H),7.01(d,J=1.5Hz,lH),6.88-6.75(m,4H),6.65-6.63(m,2H), 5.93(s，2H)，3.69(s，2H).13C 匪R(CDC13，125MHz)S:148.0，146.7，145.9，132.5，128.1， 127.5,127.1,124.8,120.7,115.2,108.3,105.3,100.9〇
[0177] 示例2:制備E-4-乙酰氨基-3'，4'_亞甲基二氧-二苯基乙烯(WS-6)的反應式為：
[0178]
[0179] 具體步驟可以包括：向100mL圓底燒瓶中加入化合物WS-4(2.22mm〇l，0.532g)，以 無水二氯甲烷(20mL)攪拌溶解，加入吡啶(6.66mmol，0.518g)，DMAP(0.22mmol，0.027g)j7K 水浴冷卻至〇°C以下，緩慢滴加乙酸酐(6.66mmol，0.626ml)，滴加過程中始終保持溫度低于 0 °C，冰水浴攪拌反應0.5h。反應結束后，加入飽和NaHC03溶液（25mL)，攪拌0.5h。補加10mL 二氯甲烷進行萃取，下層有機相用水(20mL)洗滌，再用飽和食鹽水(25mL)洗滌，旋蒸濃縮， 干燥得固體物。經柱層析(200-400目硅膠，流動相為V(二氯甲烷）：V(甲醇）= 10:0.1)得淡 黃色粉末狀固體化合物WS-6 (0.162g，產率26.0 % )。
[0180] HRMS(ESI)(M+H)+m/z 282.11254 , calcd for Ci7Hi6N03282.11247.1H NMR (Acetone-D6,500MHz)5：7.65(d ,J = 8.5Hz,2H) ,7.49-7,48(m, 2H), 7.17(d ,J= 1.5Hz , 1H), 7.08(d ,J= 16.5Hz, 1H) ,7.04(d,J= 16.0Hz, 1H) ,7.02-7.00(m,lH) ,6.83(d, J = 8.0Hz , 1H),6.00(s，2H),3.18(s，3H)·13C 匪R(Acetone-D6,125MHz)δ:169.2,149.1,148.1， 139.6,133.6,133.2,127.8,127.5,127.3,122.2,120.1,109.1,106.0,102.1,24.l〇
[0181] 示例3:制備E-4-丙酰氨基-3 '，4 亞甲基二氧-二苯基乙烯(WS-40)的反應式為：
[0182]
[0183] 具體步驟可以包括：向100mL圓底燒瓶中加入化合物WS-4(2. OOmmo 1，0.478g)，以 無水二氯甲烷(20mL)攪拌溶解，加入吡啶（6.00mmol，0.475g)，DMAP(0.20mmol，0.027g)JK 水浴冷卻至〇°C以下，緩慢滴加丙酸酐(6. OOmmol，0.769ml)，滴加過程中始終保持溫度低于 0 °C，冰水浴攪拌反應0.5h。反應結束后，加入飽和NaHC03溶液（25mL)，攪拌0.5h。補加20mL 二氯甲烷進行萃取，下層有機相用水(20mL)洗滌，再用飽和食鹽水(25mL)洗滌，旋蒸濃縮， 干燥得固體物。經柱層析(200-400目硅膠，流動相為V(二氯甲烷）：V(甲醇）= 10:0.1)得淡 黃色粉末狀固體化合物WS-40 (0.486g，產率82.3 % )。
[0184] HRMS(ESI)(M+H)+m/z 296.1284,calcd for Ci8Hi8N03296· 1281.1H 匪R(CDC13， 500MHz)5：7.50(d ,J = 8.0Hz,2H),7.42(d ,J = 8.5Hz,2H) ,7.16(s,1H) ,7.04(d ,J= 1.5Hz , 1H) ,6.95(d,J= 16.5Hz, 1H),6.92(dd,J = 8.5,2.0Hz, 1H) ,6.88(d,J = 16.0Hz, 1H) ,6.78 (d，J = 8.0Hz,lH) ,5.97(s,2H) ,2.40(q,J = 7.5Hz，2H) ,1.26(t,J = 7.5Hz，3H). 13C 匪R (CDC13,125MHz)5：171.8,148.2,147.2,137.2,133.5,132.0,127.6,126.9,126.4,121.3, 119.8,108.4,105.5,101.1，30.8,9.6〇
[0185] 示例4:制備E-4-正丁酰氨基-3'，4'_亞甲基二氧-二苯基乙烯(WS-50)的反應式 為：
[0186]
[0187] 具體步驟可以包括：向100mL圓底燒瓶中加入化合物WS-4 (2.48mmo 1，0.593g)，以 無水二氯甲烷(20mL)攪拌溶解，加入吡啶（7.44mmol，0.579g)，DMAP(0.25mmol，0.031g)j7K 水浴冷卻至〇°C以下，緩慢滴加正丁酸酐(7.44mmol，0.699ml)，滴加過程中始終保持溫度低 于0°C，冰水浴攪拌反應0.5h。反應結束后，加入飽和NaHC0 3溶液（25mL)，攪拌0.5h。補加 10mL二氯甲烷進行萃取，下層有機相用水(20mL)洗滌，再用飽和食鹽水(25mL)洗滌，旋蒸濃 縮，干燥得固體物。經柱層析(200-400目硅膠，流動相為V(石油醚）：V(乙酸乙酯）= 10:3)得 淡黃色粉末狀固體化合物WS-50 (0.390g，產率50.7 % )。
[0188] HRMS(ESI)(M+H)+m/z 310.1435，calcd for Ci9H2qN03310.1438.1H 匪R(CDC13， 500MHz)5：7.50(d ,J = 8.5Hz,2H),7.42(d ,J = 8.5Hz,2H),7.18(br,lH),7.04(d ,J=1.5Hz, 1H) ,6.95(d ,J= 16.5Hz, 1H), 6.92(dd,J = 8.0,1.5Hz,lH) ,6.88(d,J = 16.5Hz, 1H) ,6.78 (d,J = 8.0Hz,lH) ,5.96( s,2H) ,2.34( t,J = 7.5Hz,2H) ,1.81-1.73(m,2H) ,1.02( t,J = 7.5Hz,3H).13C NMR(CDC13,125ΜΗζ)δ ： 171.0,148.1,147.2,137.2,133.4,132.0,127.6, 126.9,126.4,121.3,119.8,108.4,105.5,101.1,39.7,19.0,13.7。
[0189] 示例5:制備E-4-異丁酰氨基_3'，4'_亞甲基二氧-二苯基乙烯(WS-54)的反應式 為：
[0190]
[0191] 具體步驟可以包括：向100mL圓底燒瓶中加入化合物WS-4(4.00mmol，0.956g)，以 無水二氯甲烷（30mL)攪拌溶解，加入吡啶（12.00mmol，0.933g)，DMAP(0.40mmol，(h049g)， 冰水浴冷卻至0°C以下，緩慢滴加異丁酸酐（12. OOmmol，1.138ml)，滴加過程中始終保持溫 度低于〇°C，冰水浴攪拌反應0.5h。反應結束后，加入飽和NaHC0 3溶液(35mL)，攪拌0.5h。補 加20mL二氯甲烷進行萃取，下層有機相用水(30mL)洗滌，再用飽和食鹽水(35mL)洗滌，旋蒸 濃縮，干燥得固體物。經柱層析(200-400目硅膠，流動相為V(二氯甲烷）:V(甲醇）= 10:0.1) 得淡黃色粉末狀粗產品WS-54(0.303g，產率24.4% )。再經柱層析(200-400目硅膠，流動相 為V(二氯甲烷）:V(甲醇）=1 〇: 〇. 1)得白色粉末狀固體化合物WS-54(0.115g，產率9.3%)。
[0192] HRMS(ESI)(M+H)+m/z 310.1438，calcd for Ci9H2qN03310.1438.1H 匪R(CDC13， 500MHz)5：7.52(d ,J = 8.5Hz,2H),7.44-7.42(m,2H),7.13(br,lH),7.04(d ,J=1.5Hz,1H), 6.95(d ,J=16.0Hz,lH),6.92(dd ,J = 8.0,1.5Hz,lH),6.88(d ,J=16.0Hz,lH),6.79(d ,J = 8.0Hz，1H),5.97(s，2H)，2.55-2.47(m，lH)，l.27(s，3H)，l.26(s，3H).13C 匪R(CDC13, 125ΜΗζ)δ：175.0,148.2,147.2,137.2,133.5,132.0,127.6,126.9,126.4,121.3,119.8, 108.4,105.5,101.1,36.8,19.6ο
[0193] 示例6:制備E-4-甲磺酰氨基-3 '，4 亞甲基二氧-二苯基乙烯(WS-69)的反應式 為：
[0194]
[0195] 具體步驟可以包括：向lOOmL圓底燒瓶中加入化合物WS-4(1.60mmol，0.383g)，以 無水二氯甲烷(30mL)攪拌溶解，加入吡啶（4.80mmol，0.379g)，DMAP(0.16mmol，0.019g)JK 水浴冷卻至〇°C以下，緩慢滴加甲基磺酰氯(4. SOmmol，0.371ml)，滴加過程中始終保持溫度 低于0 °C，冰水浴攪拌反應0.5h。反應結束后，蒸干二氯甲烷，加入飽和NaHC03溶液(25mL)， 攪拌0.5h。補加30mL二氯甲烷進行萃取，下層有機相用水（20mL)洗滌，再用飽和食鹽水 (25mL)洗滌，旋蒸濃縮，干燥得固體物。經柱層析(200-300目硅膠，流動相為V(二氯甲烷）:V (甲醇）=10:0.5)得黃色粉末狀固體化合物WS-69(〇. 215g，產率42.4% )。
[0196] HRMS(ESI)(M-H)-m/z 316.0661, calcd for C16H14NO4S 316.0649.1H NMR (Acetone-D6,500MHz)5：8.57(s,lH),7.57-7.35(m,2H),7.34-7.32(m,2H),7.18(d,J= 1.5Hz,lH),7.13(d ,J = 16.5Hz, 1H), 7.08(d,J= 16.5Hz, 1H), 7.02(dd,J = 8.0,1.5Hz,lH), 6.84(d,J=8.0Hz,lH),6.01(s,2H),3.00(s,3H).13C NMR(Acetone-D6,125ΜΗζ)δ：149.3, 148.3,138.6,134.9,133.0,128.7,128.2,127.0,122.4,121.4,109.1,106.2,102.2,39.4。
[0197] 示例7:制備E-4-苯甲酰氨基_3'，4'_亞甲基二氧-二苯基乙烯(WS-70)的反應式 為：
[0198]
[0199] 具體步驟可以包括：向100mL圓底燒瓶中加入化合物WS-4(0.89mmol，0.213g)，以 無水二氯甲烷(20mL)攪拌溶解，加入吡啶（2.67mmol，0.211g)，DMAP(0.089mmol，0.011g)， 冰水浴冷卻至〇°C以下，緩慢加入苯甲酸酐(2.67!11 111〇1，0.6048)，加入過程中始終保持溫度 低于0 °C，冰水浴攪拌反應0.5h。反應結束后，蒸干二氯甲烷，加入飽和NaHC03溶液(25mL)， 攪拌0.5h。補加20mL二氯甲烷進行萃取，下層有機相用水（20mL)洗滌，再用飽和食鹽水 (25mL)洗滌，旋蒸濃縮，干燥得固體物。經柱層析(200-300目硅膠，流動相為V(二氯甲烷）:V (甲醇）=10:0.1)得淡黃色粉末狀化合物粗品（0.206g，產率67.5% )。將化合物粗品用二氯 甲烷重結晶，得白色粉末狀固體化合物WS-70 (0.120g，產率39.2 % )
[0200] HRMS(ESI)(M+H)+m/z 344.1274,calcd for C22Hi8N03344.1281.1H NMR(DMS0-D6， 500ΜΗζ)δ：10.31(s,lH),7.97-7.96(m,2H),7.80(d,J=8.5Hz,2H),7.62-7.59(m,lH), 7.56-7.53(m,4H) ,7.27(d,J=1.5Hz,lH) ,7.13(d,J=16.0Hz,lH) ,7.08(d,J=16.5Hz, 1H) ,7.02(dd,J = 8.0,1.5Hz,lH) ,6.92(d,J = 8.0Hz, 1H) ,6.04(s,2H). 13C NMR(DMS〇-D6, 125ΜΗζ)δ：165.4,147.9,146.8,138.4,134.9,132.7,131.8,131.6,128.4,127.6,127.0, 126.5,126.3,121.4,120.4,108.4,105.2,101.0〇
[0201] 示例8:制備E-3，4-亞甲基二氧-3 ' -氟-4 ' -氨基-二苯基乙烯(WS-7lb)的反應式 為：
[0202] J. ,. yJit ^ VJ -W
[0203] 具體步驟可以包括：將甲基三苯基溴化磷（15.7 2mmol，5. 58g)與氨基鈉 (15.72mmol，0.60g)在氬氣環(huán)境下溶于無水乙醚(50mL)中，在25°C下攪拌7h后，轉移至-10 °C，15min后，逐滴加入溶于無水乙醚(20mL)的胡椒醛(7.80mmol，1.20g)，待胡椒醛全部滴 加完lOmin之后，轉移至25°C，15h后，蒸干乙醚，經柱層析（100-200目硅膠，流動相為V(石油 醚）：V (乙酸乙酯）=10:3)得無色油狀粘稠液體WS-71 a。
[0204] 將2-氟-4-碘苯胺（7.05mmo 1，1.670g)溶于DMF( 40mL)溶液中，加入四丁基溴化銨 (10.65謹〇1，3.5198)，醋酸鉀（11.40111111〇1，1.1198)，醋酸鈀（0.36111111〇1，0.0758)與恥-71 &。 反應體系用氬氣置換5次，在氬氣保護下，于80°C攪拌5h。反應結束后，加入蒸餾水(30mL)中 止反應，用乙酸乙酯（35mL)萃取，上層有機相用水（20mL)洗滌，再用飽和食鹽水（25mL)洗 滌，旋蒸濃縮，干燥得固體物。經柱層析（100-200目硅膠，流動相為V(石油醚）：V(乙酸乙酯） =10:3)得棕黃粉末固體WS-71 b。
[0205] 示例9:制備E-3,4-亞甲基二氧-3'-氟-4'-乙酰氨基-二苯基乙烯(WS-71)的反應 式為：
[0206]
[0207]具體步驟可以包括：向lOOmL圓底燒瓶中加入化合物WS_71b，以無水二氯甲烷 (30mL)攪拌溶解，加入吡啶（21 · 15mmol，1.645g)，DMAP(0·705_〇1，0.099g)，冰水浴冷卻至 〇 °C以下，緩慢滴加乙酸酐(21.15mmo 1，2.05ml)，滴加過程中始終保持溫度低于0 °C，冰水浴 攪拌反應0.5h。反應結束后，蒸干二氯甲烷，加入飽和NaHC03溶液（30mL)，攪拌0.5h。補加 35mL二氯甲烷進行萃取，下層有機相用水(20mL)洗滌，再用飽和食鹽水(25mL)洗滌，旋蒸濃 縮，干燥得固體物。經柱層析(200-300目硅膠，流動相為V(二氯甲烷）:V(甲醇）= 10:0.1)得 棕黃色粉末狀固體化合物15-71(0.5118，產率24.2%)。
[0208] HRMS(ESI)(M+H)+m/z 300.1028 , calcd for Ci7Hi5FN03300.1030.1H NMR (Acetone-D6,500MHz)5：8.90(s,lH),8.24-8.22(m,lH),7.38-7.35(m,lH),7.31(d,J= 8.5Hz,lH) ,7.17(d ,J=1.5Hz,lH) ,7.15(d ,J= 16.0Hz , 1H), 7.05(d ,J= 16.0Hz , 1H), 7.03 (dd,J = 8.0,l ,5Hz,lH) ,6.84(d,J = 8.0Hz,lH) ,6.01(s,2H) ,2. 17(s,3H) . 13C NMR (Acetone-D6,125ΜΗζ)δ：169.2,149.3,148.5,135.3,132.8,129.5,127.1,127.0,126.3, 126.3,123.4,123.4,122.6,112.9,112.8,109.2,106.2,102.2,24.l〇
[0209] 示例10:制備E-4-(2-噻吩基）甲酰氨基-3'，4'-亞甲基二氧-二苯基乙烯(WS-73) 的反應式為：
[0210]
[0211 ] 具體步驟可以包括:將2-噻吩甲酸（1 · 65mmol，0 · 21 lg)溶于二氯甲烷(20mL)，加入 三乙胺（1 · 65mmol，0 · 23mL)，-15°C攪拌15min之后，滴加新戊酰氯（1 · 65mmol，0 · 21mL)，-15 °C攪拌0.5h。將WS-4 (0.5mmo 1，0.120g)溶于二氯甲烷(20mL)，逐滴加入反應體系，滴加完畢 后加入DMAP (0.5mmo 1，0.061 g)，移至室溫，反應4.5h。反應結束后，蒸干二氯甲烷，加入飽和 NaHC03溶液（25mL)，攪拌0.5h。補加20mL二氯甲烷進行萃取，下層有機相用水（20mL)洗滌， 再用飽和食鹽水(25mL)洗滌，旋蒸濃縮，干燥得固體物。經柱層析(200-300目硅膠，流動相 為二氯甲烷)得淡黃色粉末狀化合物粗品(0.160g，產率91.7% )。再經柱層析(200-300目硅 膠，流動相為V(石油醚）：V(乙酸乙酯）=1:1)得淡黃色粉末狀化合物WS-73(0.118g，產率 67.6%)〇
[0212] HRMS(ESI)(M+H)+m/z 350.0844，calcdforC2QHi6N03S 350.0773.1HNMR(DMS0-D6,500MHz)5：10.26(s,1H) ,8.03-8.02(m, lH), 7.85-7.84(m, lH), 7.74(d ,J = 8.5Hz , 2H), 7.54(d ,J = 8.5Hz,2H) ,7.26-7.22(m,2H) ,7.12(d,J= 16.5Hz, 1H) ,7.07(d,J= 16.5Hz, 1H) ,7.01 (dd,J = 8.0,1.5Hz,lH) ,6.90(d,J = 8.0Hz, 1H) ,6.03(s,2H). 13C NMR(DMS〇-D6, 125ΜΗζ)δ：159.8,147.9,146.8,140.4,137.9,132.8,131.9,131.8,129.1,128.1,127.1, 126.6,126.2,121.4,120.4,108.4,105.2,101.0〇
[0213] 示例11:制備E-4-環(huán)丙基甲酰氨基-3'，4'-亞甲基二氧-二苯基乙烯(WS-74)的反 應式尹
[0214；
[0215] 具體步驟可以包括:將環(huán)丙基甲酸（1.65mmol，0.13mL)溶于二氯甲烷（20mL)，加入 三乙胺（1 · 65mmol，0 · 23mL)，-15°C攪拌15min之后，滴加新戊酰氯（1 · 65mmol，0 · 21mL)，-15 °C攪拌0.5h。將WS-4 (0.5mmo 1，0.120g)溶于二氯甲烷(20mL)，逐滴加入反應體系，滴加完畢 后加入01^?(0.5111111〇1，0.061 8)，移至室溫，反應311。反應結束后，蒸干二氯甲烷，加入飽和 NaHC03溶液（25mL)，攪拌0.5h。補加20mL二氯甲烷進行萃取，下層有機相用水（20mL)洗滌， 再用飽和食鹽水(25mL)洗滌，旋蒸濃縮，干燥得固體物。經柱層析(200-300目硅膠，流動相 為V(二氯甲烷）:V(甲醇）=1 〇: 〇. 1)得淡黃色粉末狀化合物WS-74(0.112g，產率73.0 %)。 [0216] HRMS(ESI)(M+H)+m/z 308.1282,calcd for Ci9Hi8N03308.1281.1H NMR(DMS〇-D6, 500MHz)5：7.59(d ,J = 9.0Hz,2H),7.47(d ,J = 8.5Hz,2H),7.23(d ,J=1.0Hz,lH),7.06(d ,J = 16.5Hz,lH) ,7.02(d,J= 16.5Hz, 1H) ,6.99(dd ,J = 8.0,1.5Hz , 1H) ,6.89(d ,J = 7.5Hz , 1H)，6.02(s，2H),2.08-1.76(m，lH),0.83-0.79(m，4H)·13C 匪R(DMS0-D6，125MHz)S: 171.5.147.8.146.7.138.6.132.0. 131.8.126.7.126.6.126.3.121.3.119.0.108.4， 105.1.101.0. 14.6.7.2〇
[0217] 示例12:制備E-4-(4-甲基苯磺酰氨基)-3'，4'_亞甲基二氧-二苯基乙烯(WS-81) 的反應式為：
[0218]
v Η
[0219] 具體步驟可以包括：向lOOmL圓底燒瓶中加入化合物ws-4(1.06mmol，0.254g)，以 無水二氯甲烷（10mL)攪拌溶解，加入吡啶（3.18mmol，0.252mL)，DMAP(0.11mmol，0.013g)， 冰水浴冷卻至0 °C以下，緩慢滴加對甲基苯磺酰氯(3.18mmol，0.606g)，滴加過程中始終保 持溫度低于〇 °C，冰水浴攪拌反應0.5h。反應結束后，蒸干二氯甲烷，加入飽和NaHC03溶液 (25mL)，攪拌0.5h。補加30mL二氯甲烷進行萃取，下層有機相用水(20mL)洗滌，再用飽和食 鹽水(25mL)洗滌，旋蒸濃縮，干燥得固體物。經柱層析(200-300目硅膠，流動相為V(二氯甲 烷）:V(甲醇）=10:0.5)得淡黃色粉末狀固體化合物WS-81 (0.115g，產率27.6 % )。
[0220] 1H 匪R(Acetone-D6,500MHz)S:8.96(s，lH)，7.69(d，J = 8.0Hz，2H)，7.43(d，J = 8.5Hz,2H),7.31(d ,J = 8.0Hz,2H),7.21(d ,J = 8.5Hz,2H),7.13(d ,J=1.5Hz,lH),7.06(d, J=16.5Hz,lH),6.99(d ,J=17.0Hz,lH) ,6.98(dd ,J = 8.0,1.5Hz , 1H), 6.81 (d ,J = 8.0Hz , 1H),5.99(s，2H),2.35(s，3H).13C 匪R(Acetone-D6,125MHz)δ:149.2,148.3,144.4, 138.1,138.0,134.9,133.0,130.4,128.7,128.0,127.9,126.9,122.3,121.8,109.1， 106·1，102·1，21·4〇
[0221] 示例13:E-4-環(huán)丁甲酰氨基-3 '，4 ' -亞甲基二氧-二苯基乙烯(WS-83)的制備。
[0222]
[0223] 將環(huán)丁基甲酸（3 · 3mmol，0 · 30mL)溶于二氯甲燒（20mL)，加入三乙胺（3 · 3mmol， 0 · 46mL)，-15°C攪拌 15min之后，滴加新戊酰氯（3 · 3mmo 1，0 · 42mL)，-15°C攪拌0 · 5h。將WS-4 (1 . Ommol，0.240g)溶于二氯甲烷（20mL)，逐滴加入反應體系，滴加完畢后加入DMAP (1. Ommol，0.122g)，移至室溫，反應3h。反應結束后，蒸干二氯甲烷，加入飽和NaHC03溶液 (25mL)，攪拌0.5h。補加20mL二氯甲烷進行萃取，下層有機相用水(20mL)洗滌，再用飽和食 鹽水(25mL)洗滌，旋蒸濃縮，干燥得固體物。經柱層析(200-300目硅膠，流動相為V(二氯甲 烷）:V(甲醇）=10:0.1)得白色粉末狀化合物WS-83 (0.068g，產率21.2 %)。
[0224] 1H NMR(Acetone-D6,500MHz)S:8.91(s，lH)，7.67(d，J = 8.5Hz，2H) ,7.49-7.47 (m,2H) ,7.16(d,J=1.5Hz,lH) ,7.06-7.00(m,3H) ,6.83(d,J = 8.0Hz,lH) ,6.00(s,2H), 3.28-3.25(m,lH),2.94-2.32(m,2H),2.16-2.14(m,2H),2.09-2.04(m,lH),1.98-1.96(m, 1H).13C NMR(Acetone-D6,125MHz)5：173.6,149.2,148.2,139.9,133.5,133.3,127.8, 127.5,127.4,122.2,120.2,120.1,109.1,106.1,102.1,41.4,25.7,18.7。
[0225] 示例14:E-4-(N，N-二甲氨基）甲酰氨基-3'，4'_亞甲基二氧-二苯基乙烯(WS-82) 的制備。
[0226]
[0227] 向lOOmL圓底燒瓶中加入化合物13-4(1.00臟〇1，0.2548)，以無水二氯甲烷(301^) 攪拌溶解，加入吡啶（3 · 30mmo 1，0 · 3mL)，DMAP(0 · 1 Ommo 1，0 · 012g)，冰水浴冷卻至0 °C以下， 緩慢滴加二甲氨基甲酰氯(3.3mmol，0.30mL)，滴加過程中始終保持溫度低于0°C，冰水浴攪 拌反應0.5h。反應結束后，蒸干二氯甲烷，加入飽和NaHC03溶液(25mL)，攪拌0.5h。補加30mL 二氯甲烷進行萃取，下層有機相用水(20mL)洗滌，再用飽和食鹽水(25mL)洗滌，旋蒸濃縮， 干燥得固體物。經柱層析(200-300目硅膠，流動相為V(二氯甲烷）：V(甲醇）= 10:0.5)得白 粉末狀固體化合物WS-82 (0.213g，產率68.9 % )。
[0228] lHMMR(Acetone-D6,500MHz)S:7.73(s，lH)，7.56-7.54(m，2H)，7.43-7.41(m， 2H) ,7.15(d ,J = 2.0Hz,lH) ,7.03-6.98(m,3H) ,6.82(d ,J = 8.5Hz , 1H), 6.00(s, 2H), 3.00 (s,6H).13C NMR(Acetone-D6,125MHz)5：156.4,149.2,148.0,141.3,133.4,132.2,127.7, 127.3.127.0. 122.0.120.3.120.2.109.1.106.0.102.1.36.6。
[0229] 示例15:E-4_苯磺酰胺基-3'，4'_亞甲基二氧-二苯基乙烯(LSS-12)的制備。
[0230]
[0231 ]向 lOOmL圓底燒瓶中加入化合物WS-4 (1 · 2mmo 1，0 · 29g)，DMAP (0 · 12mmo 1，0 · 015g)， 以無水二氯甲烷(20mL)攪拌溶解，冰水浴冷卻至0°C以下，緩慢滴加吡啶(3.6mmo 1，0.3mL)， 苯磺酰氯(3.6mmo 1，0.46mL)，滴加過程中始終保持溫度低于0°C，冰水浴攪拌反應lh。反應 結束后，蒸干二氯甲烷，加入飽和NaHC0 3溶液（25mL)，攪拌0.5h。補加30mL二氯甲烷進行萃 取，下層有機相用水(20mL)洗滌，再用飽和食鹽水(25mL)洗滌，旋蒸濃縮，干燥得固體物。經 柱層析(200-300目硅膠，流動相為:V(二氯甲烷)100% )得淡黃色粉末狀固體化合物LSS-12 (0.197g，產率43.30%)。
[0232] 1H NMR(DMS0-D6,500MHz)5：10.30(s,lH),7.77(d,J=7.0Hz,2H),7.52-7.76(m, 3H) ,7.40(d ,J = 8.5Hz,2H) ,7.20(s, 1H), 7.08(d ,J = 8.5Hz , 2H), 7.02(d ,J= 16.0Hz , 1H), 6.97(d ,J = 16.0Hz, 1H) ,6.96(d ,J = 8.0Hz , 1H), 6.88(d ,J = 8.0Hz , 1H), 6.01 (s , 2H). 13C NMR(DMS0-D6，125ΜΗζ)δ:149·2，148·2，140·9，137·7，135·1，133·6，132·9，129·9，128·7， 127.9.126.8.122.3.122.0. 109.1.106.1.102.1ο
[0233] 不例16:E_4-新戊酰胺基-3'，4'_亞甲基二氧-二苯基乙稀(LSS-8)的制備。
[0234]
[0235] 向 100mL圓底燒瓶中加入化合物WS-4 (1 · 2mmo 1，0 · 29g)，DMAP (0 · 12mmo 1，0 · 015g)， 以無水二氯甲烷(20mL)溶解，冰水浴冷卻至0 °C以下，緩慢滴加吡啶(3.6mmo 1，0.3mL)，新戊 酰氯(3.6mmo 1，0.45mL)，冰水浴反應lh。反應結束后，蒸干二氯甲烷，加入飽和NaHC03溶液 (25mL)攪拌0.5h。補加30mL二氯甲烷進行萃取，下層有機相用水(20mL)洗滌，再用飽和食鹽 水(25mL)洗滌，旋蒸濃縮，干燥得固體物。經柱層析(200-300目硅膠，流動相為:V(石油醚）： V(丙酮）=1 〇: 3)得淡黃色粉末狀固體化合物LSS-8(0.159g，產率40.97 % )。
[0236] 1H NMR(DMS0-D6,500MHz)5：9.21(s,1H) ,7.68(d,J = 9.0Hz,2H) ,7.47(d,J = 9.0Hz,2H) ,7.23(d ,J=1.5Hz,lH) ,7.08(d ,J= 16.5Hz , 1H), 7.03(d ,J= 16.5Hz , 1H) ,6.99 (dd ,J = 8.0,1.5Hz,lH) ,6.88(d ,J = 8.0Hz , 1H), 6.02(s, 2H), 1.24(s ,9H). 13C NMR(DMS〇-D6,125MHz)δ：176.3,147.8,146.7,138.6,132.1,131.8,126.7,126.3,126.3,121.2, 120.3,108.3,105.1,100.9,39.1,27.1〇
[0237] 示例17:Ε-4-環(huán)丙基磺酰胺基-3'，4'_亞甲基二氧-二苯基乙烯(LSS-13)的制備。
[0238]
[0239] 向 1 OOmL圓底燒瓶中加入化合物WS-4(0 · 84mmo 1，0 · 20g)，DMAP(0 · 08mmo 1，0 · 01 g)， 以無水二氯甲烷（20mL)溶解，室溫下滴加吡啶（2.52mmo 1，0.20mL)，環(huán)丙基磺酰氯 (2.52mmol，0.25mL)，室溫下反應0.5h。反應結束后，蒸干二氯甲烷，加入飽和NaHC0 3溶液 (25mL)攪拌0.5h。補加30mL二氯甲烷進行萃取，下層有機相用水(20mL)洗滌，再用飽和食鹽 水(25mL)洗滌，旋蒸濃縮，干燥得固體物。經柱層析(200-300目硅膠，流動相為:V(二氯甲 烷)100 % )得淡黃色粉末狀固體化合物LSS-13 (0.2436g，產率84.88 % )。
[0240] lHMMR(DMS0-D6,500MHz)S:9.74(s，lH)，7.50(d，J = 8.5Hz，2H)，7.24(dd，J = 1.5Hz,lH) ,7.23(d ,J = 8.5Hz,2H) ,7.08(d ,J= 16.5Hz , 1H), 7.05(d ,J= 16.5Hz , 1H), 7.00 (dd ,J = 8.0,1.5Hz,lH),6.89(d ,J = 8.0Hz,lH),6.02(s,2H),2.60-2.64(m,lH),0.92-0.94 (m，4H).13C 匪R(DMS0-D6，125MHz)S:147.8,146.8,137.4,133.0,131.7,127.3,127.0， 126.0. 121.4.120.4.108.3.105.2.101.0.29.6.4.9。
[0241] 示例18:E-4-異丙基磺酰胺基-3 '，4'-亞甲基二氧-二苯基乙烯(LSS-14)的制備。
[0242]
[0243] 向 100mL圓底燒瓶中加入化合物WS-4(1.25mmol，(K30g)，DMAP(0.125mmol， 0.〇15g)，以無水二氯甲烷(20mL)溶解，室溫下滴加吡啶(3.75mmol，0.30mL)，異丙基磺酰氯 (3.75mmol，0.45mL)，室溫下反應6天。反應結束后，蒸干二氯甲烷，加入飽和NaHC03溶液 (25mL)攪拌0.5h。補加 30mL二氯甲烷進行萃取，下層有機相用水(20mL)洗滌，再用飽和食鹽 水(25mL)洗滌，旋蒸濃縮，干燥得固體物。經柱層析(200-300目硅膠，流動相為:V(二氯甲 烷）：V(甲醇）=10:0.03)得淡黃色粉末狀固體化合物1^5-14(0.185 8，產率42.73%)。
[0244] 1H NMR(Acetone-D6,500MHz)5：7.51-7.54(m,2H),7.35-7.38(m,2H),7.16(d,J= 1.5Hz,lH),7.10(d ,J = 16.5Hz, 1H), 7.05(d,J= 16.5Hz, 1H), 7.00(dd,J = 8.5,1.5Ηζ,1Η), 6.82(d,J=8.0Hz,lH),6.00(s,2H),3.27-3.33(m,lH),1.34(d,3H),1.31(d,3H).13C NMR (Acetone-D6,125ΜΗζ)δ：149.2,148.2,138.7,134.4,133.0,128.4,128.1,126.9,122.3, 120.7.109.0. 106.1.102.1.52.8.16.7〇
[0245] 示例19:E-4-(2-吡啶甲酰胺基）-3'，4'_亞甲基二氧-二苯基乙烯(LSS-20)的制
備。
[0246]
[0247] 將2-吡啶甲酸（3.3謹〇1，0.48)溶于二氯甲烷（2011^)，加入三乙胺（3.3111111〇1， 0.46mL)，-15°C 攪拌 15min 之后，滴加新戊酰氯（3.3111111〇1，0.411^)，-15°(：攪拌311。將￥3-4 (lmmol，0.24g)溶于二氯甲烷（20mL)，逐滴加入反應體系，滴加完畢后加入DMAP(lmmol， 0.13g)，移至室溫，反應lh。反應結束后，蒸干二氯甲烷，加入飽和NaHC03溶液（25mL)，攪拌 0.5h。補加20mL二氯甲烷進行萃取，下層有機相用水(20mL)洗滌，再用飽和食鹽水(25mL)洗 滌，旋蒸濃縮，干燥得固體物。經柱層析(200-300目硅膠，流動相為二氯甲烷)得淡黃色粉末 狀化合物粗品。再經柱層析(200-300目硅膠，流動相為V(石油醚）：V(乙酸乙酯）= 10:3)得 淡黃色粉末狀化合物LSS-20 (0.157g，產率45.71 % )。
[0248] 1H 匪R(DMS0-D6，500MHz) δ : 10 · 55(s，1H)，8 · 64(d，J= 1 · 5Hz，1H)，8 · 06(d，J = 7.5Hz，lH) ,7.96-7.99(m，lH)，7.82((1, J = 8.5Hz，2H) ,7.57-7.59(m，lH)，7.45(d，J = 8.5Hz,2H) ,7.15(s,lH) ,7.03(d,J= 16.0Hz, 1H) ,6.98(d,J= 17.0Hz, 1H) ,6.91 (dd,J = 1.0Hz,J = 8.0Hz，lH)，6.81(d，J = 7.5Hz，lH)，5.93(s，2H)。
[0249] 示例20:E-4-(叔丁氧基甲酰胺基)-3'，4'_亞甲基二氧-二苯基乙烯(LSS-19)的制 備。
[0250] Π71Ν -
tl
[0251] 向 lOOmL圓底燒瓶中加入化合物WS-4(0.83mmol，0.20g)，DMAP(0.083mmol， 〇 . 〇 1 g)，以無水二氯甲烷（20mL)溶解，冰水浴冷卻至0 °C以下，緩慢滴加吡啶（2.49mmo 1， 0.2ml)，B0C酸酐(2.49mmol，0.57ml)，室溫下反應0.5h。反應結束后，蒸干二氯甲烷，加入飽 和NaHC0 3溶液（25mL)，攪拌0.5h。補加 30mL二氯甲烷進行萃取，下層有機相用水（20mL)洗 滌，再用飽和食鹽水(25mL)洗滌，旋蒸濃縮，干燥得固體物。經柱層析(200-300目硅膠，流動 相為:V(二氯甲烷)100% )得淡黃色粉末狀固體化合物LSS-19(0.1995g，產率71.25% )。
[0252] 1H 匪R(DMS0-D6,500MHz)S:7.59-7.62(m，2H)，7.28-7.30(m，2H)，7.23(d，J= 1.5Hz,lH),7.22(d ,J = 16.5Hz, 1H), 7.14(d,J= 16.5Hz, 1H), 7.06(dd,J = 8.0,1.5Hz, 1H), 6.86(d ,J = 8.0Hz,lH),6.03(s,2H),1.47(s,9H)〇
[0253] 示例21:E-4_(4-甲氧基苯甲酰胺基)_3'，4'_亞甲基二氧-二苯基乙烯的制備。
[0254]
[0255] 采用實施例子6的方法，以WS-4與4-甲氧基苯甲酰氯反應得到上述目標化合物。
[0256] 示例22:E-4-(4-氰基苯甲酰胺基)_3'，4'_亞甲基二氧-二苯基乙烯的制備。
[0257]
[0258] 采用實施例子6的方法，以WS-4與4-氰基苯甲酰氯反應得到上述目標化合物。
[0259] 示例23:E-4-(4-氯苯磺酰胺基)_3'，4'_亞甲基二氧-二苯基乙烯的制備。
[0260]
[0261 ]采用實施例子6的方法，以WS-4與4-氯苯磺酰氯反應得到上述目標化合物。
[0262] 示例24:E-4-苯基乙酰胺基-3'，4'_亞甲基二氧-二苯基乙烯(LSS-16)的制備。
[0263]
[0264] 向 lOOmL圓底燒瓶中加入化合物WS-4(1 · 17mmol，0.28g)，DMAP(0.012mmol， 0.0148)，以無水二氯甲烷（20!1^)溶解，室溫下滴加吡啶（3.51111111〇1，0.2811^)，苯乙酰氯 (3.51mmol，0.46mL)，室溫下反應lh。反應結束后，蒸干二氯甲烷，加入飽和NaHC0 3溶液 (25mL)攪拌0.5h。補加30mL二氯甲烷進行萃取，下層有機相用水(20mL)洗滌，再用飽和食鹽 水(25mL)洗滌，旋蒸濃縮，干燥得固體物。經柱層析(200-300目硅膠，流動相為:V(二氯甲 烷）：V(甲醇）=10:0.1)得淡黃色粉末狀固體化合物LSS-16(0.2782g，產率66.56 % )。
[0265] 1H 匪R(Acetone-D6,500MHz)δ :9.29(s，lH) ,7.64-7.66(m，2H) ,7.47-7 ·49(ι?， 2H),7.38-7.39(m，2H),7.30-7.33(m，2H),7.23-7.26(m，lH)，7.16(d，J=l·5Ηζ，1Η),7.08 (d，J= 16.5Hz，1H)，7.04(d，J= 16.5Hz，1H)，7.00(dd，J = 8.0，1.5Hz，lH)，6.82(d，J = 8.0Hz，1H)，6.00(s，2H)，3.70(s，2H)·13C 匪R(Acetone-D6，125MHz)S:169.7,149.3， 148.2.139.7.136.9.133.2.130.1.129.2.128.0. 127.6.127.5.127.4.122.2.120.3， 120.2,109.1,106.1,102.1,44.8ο
[0266] 示例25:E-4-芐基磺酰胺基-3'，4'_亞甲基二氧-二苯基乙烯(LSS-15)的制備。
[0267]
[0268] 向 100mL圓底燒瓶中加入化合物WS-4(1.25mmol，(K30g)，DMAP(0.125mmol， 〇.〇15g)，以無水二氯甲烷（20mL)溶解，室溫下滴加吡啶（3.75111111〇1，0.3〇1^)，芐基磺酰氯 (3.75mmol，0.72g)，室溫下反應3h。反應結束后，蒸干二氯甲烷，加入飽和NaHC0 3溶液 (25mL)攪拌0.5h。補加30mL二氯甲烷進行萃取，下層有機相用水(20mL)洗滌，再用飽和食鹽 水(25mL)洗滌，旋蒸濃縮，干燥得固體物。經柱層析(200-300目硅膠，流動相為:V(二氯甲 烷）：V(甲醇）=10:0.03)得淡黃色粉末狀固體化合物1^5-15(0.2869 8，產率58.55%)。
[0269] lHMMR(Acetone-D6,500MHz)S:8.63(s，lH)，7.35-7.55(m，2H)，7.3h7.34(m， 7H),7.19(d,J= 1.5Hz, 1H),7.14(d,J= 16.5Hz, 1H),7.09(d,J= 16.5Hz, 1H) ,7.03(dd,J = 8.0. 1.5Hz,lH),6.84(d,J=8.0Hz,lH),6.02(s,2H),4.45(s,2H).13C NMR(Acetone-D6, 125ΜΗζ)δ：149.3,148.3,138.6,134.4,133.1,131.9,130.7,129.3,129.2,128.5,128.1, 127.1,122.4,120.6,120.5,109.2,106.1,102.2,57.9。
[0270] 示例26:E-4-(N，N-二甲氨基-磺酰胺基）-3'，4'_亞甲基二氧-二苯基乙烯(LSS-17)的制備。
[0271]
[0272] 向 lOOmL 圓底燒瓶中加入化合物 WS-4(0.83mmol，0.20g)，DMAP(0.083mmol， O.Olg)，以無水二氯甲烷（20mL)溶解，室溫下滴加吡啶（2.49111111〇1，0.21111)，二甲氨磺酰氯 (2.49mmol，0.27ml)，室溫下反應6天。反應結束后，蒸干二氯甲烷，加入飽和NaHC0 3溶液 (25mL)，攪拌0.5h。補加30mL二氯甲烷進行萃取，下層有機相用水(20mL)洗滌，再用飽和食 鹽水(25mL)洗滌，旋蒸濃縮，干燥得固體物。經柱層析(200-300目硅膠，流動相為:V(二氯甲 烷）：V(甲醇）=10:0.1)得淡黃色粉末狀固體化合物LSS-17(0.020g，產率6.93 % )。
[0273] 1H 匪R(Acetone-D6,500MHz)S:8.77(s，lH) ,7.51-7.54(m，2H) ,7.33-7 ·35(ι?， 2H),7.18(d,J=1.5Hz, 1H),7.11 (d,J= 16.5Hz, 1H),7.06(d,J= 16.5Hz, 1H) ,7.01(dd,J = 8.0,2.0Hz,lH),6.84(d,J=8.0Hz,lH),6.01(s,2H),2.79(s,6H).13C NMR(Acetone-D6, 125ΜΗζ)δ：149.2,148.2,138.9,134.2,133.1,128.3,127.9,127.1,122.3,120.9,109.1, 106.1,102.1,38.4。
[0274] 示例27:E-4-((4-N，N-二甲氨基)_苯甲酰胺基)_3'，4'_亞甲基二氧-二苯基乙烯 的制備^
[0275]
[0276] 采用實施例子6的方法，以WS-4與4-Ν，Ν_二甲氨基苯甲酰氯反應得到上述目標化 合物。
[0277] 示例28:Ε-4-(1-氰基環(huán)丙基甲酰胺基)_3'，4'_亞甲基二氧-二苯基乙烯的制備。
[0278]
[0279] 采用實施例子10的方法，以WS-4與1-氰基-環(huán)丙基甲酸反應得到上述目標化合物。
[0280] 示例29:Ε-4-(6-甲氧基-2-萘甲酰胺基)-3'，4'_亞甲基二氧-二苯基乙烯的制備。
[0281]
[0282] 采用實施例子10的方法，以WS-4與6-甲氧基-2-萘甲酸反應得到上述目標化合物。
[0283] 示例30:Ε-4_(5-甲基-2-噻吩甲酰胺基)_3 '，4'-亞甲基二氧-二苯基乙烯的制備。
[0284]
[0285] 采用實施例子10的方法，以WS-4與5-甲基-2-噻吩甲酸反應得到上述目標化合物。
[0286] 示例31:E-4-(6-氟吡啶-2-甲酰胺基)_3'，4'_亞甲基二氧-二苯基乙烯的制備。
[0287]
[0288] 采用實施例子10的方法，以WS-4與6-氟吡啶-2-甲酸反應得到上述目標化合物。 1 示例32:E-4-(2-甲基喹啉-6-甲酰胺基)_3'，4'_亞甲基二氧-二苯基乙烯的制備。
[0290]
[0291 ] 采用實施例子10的方法，以WS-4與2-甲基喹啉-6-甲酸反應得到上述目標化合物。
[0292] 實施例33:E-4-(2-四氫呋喃甲酰胺基)_3'，4'_亞甲基二氧-二苯基乙烯的制備。
[0293] 采用實施例子10的方法，以WS-4與2-四氫呋喃甲酸反應得到上述目標化合物。
[0294] 示例34:E-4-(N-甲基哌啶-4-甲酰胺基)_3'，4'_亞甲基二氧-二苯基乙烯鹽酸鹽 的制備。
[0295]
[0296] 采用實施例子10的方法，以WS-4與1-甲基哌啶-4-甲酸反應得到化合物E-4_(N-甲 基哌啶-4-甲酰胺基)-3 '，4亞甲基二氧-二苯基乙烯。將化合物溶解在氯仿中，滴加 HC1的 甲醇溶液，過濾析出的沉淀即得到上述目標化合物。
[0297] 示例35:體外細胞毒性實驗。實驗細胞系為HEK293。
[0298]實驗方法:使用96孔板培養(yǎng)細胞，細胞濃度為5000/孔。細胞培養(yǎng)24小時后進行藥 物處理，實驗分為兩組:對照組加入與實驗組相同濃度的DMS0;實驗組，每個化合物檢測低 中高3個劑量（100μΜ; 500μΜ; ΙΟΟΟμΜ)，每個劑量檢測5個平行;空白組，完全培養(yǎng)基加入與實 驗組相同濃度的待測化合物。C02孵育箱恒溫培養(yǎng)24小時后加入終濃度為0.5mg/mL的ΜΤΤ，4 小時后加入200yL DMS0溶液，在490nm處檢測吸光值。根據(jù)吸光值計算細胞存活率 Survival % = (Average濃度-Blank濃度)/(Average對照濃度-Blank濃度)*100%。
[0299] 參照圖3,示出了本發(fā)明實施例的一個示例的新型二苯乙烯類衍生物的體外細胞 毒性測試圖。由圖3可知不同化合物對細胞存活率的影響，WS-27化合物即紫檀芪(E-4-羥 基-3 '，5 ' -二甲氧基-二苯基乙烯）、WS-56 (E-4-乙酰氧基-3 '，5 ' -二甲氧基-二苯基乙烯)轉 化成酰胺基得到WS-61(E-4-乙酰氨基-3'，5'_二甲氧基-二苯基乙烯)可以降低神經毒性， 而通式I和通式II所包含的化合物如WS-6(E-4-乙酰氨基-3'，4'-亞甲基二氧-二苯基乙烯） 比WS-61毒性進一步降低。其他通式I和II的化合物如WS-54(E-4-異丁酰氨基-3'，4'_亞甲 基二氧-二苯基乙烯），WS-69(E-4-甲磺酰氨基-3 '，4 '-亞甲基二氧-二苯基乙烯），WS-70(E-4_苯甲酰氨基_3 '，4 ' -亞甲基二氧-二苯基乙烯），WS-71 (E-3，4-亞甲基二氧-3 ' -氟-4 ' -乙 酰氨基-二苯基乙烯），WS-73(E-4-(2-噻吩基）甲酰氨基-3'，4'_亞甲基二氧-二苯基乙烯）， WS-74(E-4-環(huán)丙基甲酰氨基_3'，4'_亞甲基二氧-二苯基乙烯)普遍具有低毒性。
[0300] 示例36:通過BrdU(5-Bromo_2-deoxyUridine，5_溴脫氧尿啼啶核苷）標記檢測大 鼠海馬中的神經發(fā)生。
[0301] 實驗動物:購買10周齡SD雄性大鼠，體重300g左右。大鼠在動物房適應環(huán)境一周后 開始實驗。實驗分組：對照組，藥劑組。每組2-3只。實驗試劑：使用注射用油溶解待測化合 物。對照組注射相同劑量的溶解油。
[0302] 試驗方式:腹腔注射28天，注射量每次0.。給藥量:4mg/Kg。
[0303] 實驗步驟：1)注射標記物:通過腹腔注射向大鼠體內注射BrdU(使用無菌生理鹽水 溶解，濃度為10mg/mL)溶液。（針對大鼠的不同體重，BrdU的注射劑量為50mg · kg-Ι，間隔2 小時注射2次;為麻醉前24小時腹腔注射結束。
[0304] 2)麻醉:通過腹腔注射向大鼠體內注射戊巴比妥鈉溶液對其進行麻醉。（針對大鼠 的不同體重，戊巴比妥鈉的注射劑量通常為70mg · kg-1。）
[0305] 3)心臟灌流:使用生理鹽水采取心臟灌流的一般方法灌流。
[0306] 4)取腦組織：用手術鉗和剪刀將大鼠的頭部與身體分離，接著除去顱骨上方的肌 肉和膜組織，溫和地將大腦從顱骨中剝離出來。將分離的大腦浸泡在4%的多聚甲醛中24-48小時。
[0307] 5)腦組織脫水:采用濃度20%蔗糖PBS溶液浸泡固定好的組織72小時以上，再采用 濃度30 %蔗糖PBS溶液浸泡腦組織72小時以上。
[0308] 6)冰凍切片:使用一般的冠狀切片步驟，將腦組織切成30nm厚的薄片。
[0309] 7)DAB免疫組織化學步驟:DNA變性，將切片轉移到灌注有0.1M的PBS的24孔板中 (pH7.4)。首先腦片在1 %H2〇2孵育30分鐘，去除辣根過氧化物酶;再在室溫下用2M的HC1溶液 處理切片30分鐘以使其變性。變性完成后，將腦片寖入0.1M硼酸鈉(PH8.5)溶液中5分鐘兩 次漂洗;室溫下將腦品放入0.5%的TOST中孵育1小時，隨后室溫下在搖床上用與二抗來源 相同的血清封閉液將腦片組織封閉1小時;在4°C下?lián)u床上用被封閉液稀釋過的BrdU-抗將 樣品處理過夜;常溫下生物素化二抗IgG孵育2小時；常溫下孵育C(ABC試劑盒)溶液2小時； 最后在DAB試劑盒中顯色3至5分鐘后，使用PVP封片劑封片，干燥后上顯微鏡檢測實驗結果。
[0310] 參照圖4-圖6,示出了本發(fā)明實施例的一個示例的新型二苯乙烯類衍生物的顯微 鏡視圖。
[0311] 圖4為與本發(fā)明實施例結構相類似化合物的促大鼠海馬區(qū)神經發(fā)生BrdU標記的顯 微鏡視圖，其中，圖4(a)為對照化合物WS-77的BrdU標記圖，圖4(b)為對照化合物WS-80的 BrdU標記圖。
[0312] 與對照組相比，化合物BrdU標記結果如下：
[0313] WS-77的BrdU標記呈陽性，說明WS-6的二苯乙炔類似物仍保留一定的神經發(fā)生活 性，而WS-80的BrdU標記呈陰性，說明通式I和II酰胺上未取代的氫原子對于神經發(fā)生活性 具有重要意義。
[0314] 圖5為本發(fā)明實施例的一個示例的新型二苯乙烯類衍生物促大鼠海馬區(qū)神經發(fā)生 BrdU標記的顯微鏡視圖，其中，圖5(a)為WS-69的BrdU標記圖，圖5(b)為WS-70的BrdU標記 圖，圖5 (c)為WS-71的BrdU標記圖。
[0315] 化合物 WS-69，WS-70，WS-71 的 BrdU 標記呈陽性。
[0316] 圖6為本發(fā)明實施例的一個示例的新型二苯乙烯類衍生物促大鼠海馬區(qū)神經發(fā)生 BrdU標記的顯微鏡視圖，其中，圖6(a)為WS-54的BrdU標記圖，圖6(b)為WS-73的BrdU標記 圖，圖6(c)為WS-74的BrdU標記圖。
[0317] 化合物WS-54，WS-7 3，WS-7 4 的 Br dU標記呈陽性。
[0318] 示例37: BrdU和NeuN熒光雙染實驗步驟:樣品獲得方法同實例34，首先DNA變性，將 切片轉移到灌注有2N的HC1溶液，37°C處理切片60分鐘，以使其變性。變性完成后，將腦片寖 入0.1M硼酸鈉(PH8.5)溶液中5分鐘兩次漂洗;隨后室溫下在搖床上用與二抗來源相同的血 清封閉液將腦片組織封閉1小時；在4°C下?lián)u床上用被封閉液稀釋過的BrdU( 1:500， Millipore#PNeuN(l:500，Abcam) -抗將樣品處理過夜；常溫下焚光二抗山羊抗小鼠和山 羊抗兔(1:50，中杉金橋)避光孵育2小時;使用熒光抗淬滅PVP封片劑封片，干燥后顯微鏡檢 測實驗結果。對照組(contrο 1)和藥劑組(低劑量L，2mg/kg;中劑量Μ，4mg/kg)。
[0319]參照圖7,示出了本發(fā)明實施例的一個示例的新型二苯乙烯類衍生物WS-6(E-4-乙 酰氨基-3 '，4 '-亞甲基二氧-二苯基乙烯）的BrdU和NeuN雙染實驗測試圖。由圖7可知，化合 物WS-6促進增殖的細胞(BrdU陽性)是神經細胞(NeuN陽性），也就是說WS-6可以促進神經發(fā) 生;并且WS-6存在劑量構效關系，這表明加大給藥量可以進一步增強神經發(fā)生的效果。
[0320]對于方法實施例，為了簡單描述，故將其都表述為一系列的操作組合，但是本領域 技術人員應該知悉，本發(fā)明并不受所描述的操作順序的限制，因為依據(jù)本發(fā)明，某些步驟可 以采用其他順序或者同時進行。其次，本領域技術人員也應該知悉，說明書中所描述的實施 例均屬于優(yōu)選實施例，所涉及的操作和實驗條件并不一定是本發(fā)明所必須的。
[0321]以上對本發(fā)明所提供的一種新型二苯乙烯類衍生物以及一種新型二苯乙烯類衍 生物的制備方法進行了詳細介紹，本文中應用了具體個例對本發(fā)明的原理及實施方式進行 了闡述，以上實施例的說明只是用于幫助理解本發(fā)明的方法及其核心思想；同時，對于本領 域的一般技術人員，依據(jù)本發(fā)明的思想，在【具體實施方式】及應用范圍上均會有改變之處，綜 上所述，本說明書內容不應理解為對本發(fā)明的限制。
【主權項】
1. 一種新型二苯乙烯類衍生物，其特征在于，所述新型二苯乙烯類衍生物為具有下述 通式I或通式Π 的化合物，或所述新型二苯乙烯類衍生物為具有所述通式I或所述通式Π 的 化合物與無機酸或有機酸形成的可接受的鹽；其中，所述通式I或所述通式Π 中，X代表的原子為氫原子或鹵原子； R代表的取代基為C1-C6烷基、1-6元雜烷基、C2-C4烯基、C2-C4炔基、C3-C6環(huán)烷基、取代 C3-C6環(huán)烷基、3-6元雜環(huán)烷基、取代3-6元雜環(huán)烷基、5-18元芳基、取代5-18元芳基、5-18元 雜芳基、取代5-18元雜芳基； 所述新型二苯乙烯類衍生物具有神經發(fā)生活性和低神經細胞毒性。2. 如權利要求1所述的新型二苯乙烯類衍生物，其特征在于，所述X代表的原子為氫原 子或氟原子； 所述R代表的取代基為C1-C4烷基、3-5元雜烷基、C3-C6環(huán)烷基、取代C3-C6環(huán)烷基、3-6 元雜環(huán)烷基、取代3-6元雜環(huán)烷基、6-10元芳基、取代6-10元芳基、5-10元雜芳基、取代5-10 元雜芳基。3. 如權利要求2所述的新型二苯乙烯類衍生物，其特征在于： 所述C1-C4烷基為甲基、乙基、正丙基、異丙基或叔丁基； 所述3-5元雜烷基為N，N-二甲基氨基、N-甲基-N-乙基氨基、N，N-二甲基氨基甲基、N，N-二乙基氨基、甲氧基、乙氧基、異丙氧基或叔丁氧基； 所述C3-C6環(huán)烷基為環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基或環(huán)己基； 所述取代C3-C6環(huán)烷基為甲基環(huán)丙基、氟代環(huán)丙基、氰基環(huán)丙基、環(huán)丙基甲基或（環(huán)己 基)乙基； 所述3-6元雜環(huán)烷基為四氫呋喃基、吡咯烷基、嗎啉基、哌啶基或哌嗪基； 所述取代3-6元雜環(huán)烷基為N-甲基哌啶基、N-乙基哌啶基、N-乙?；哙せ?N-甲基 哌啶基)哌啶基； 所述6-10元芳基為苯基或萘基； 所述取代6-10元芳基為取代苯基或取代萘基； 所述5-10元雜芳基為呋喃基、吡咯基、噻吩基、吡啶基、喹啉基或異喹啉基； 所述取代5-10元雜芳基為取代呋喃基、取代吡咯基、取代噻吩基、取代吡啶基、取代喹 啉基或取代異喹啉基。4. 如權利要求3所述的新型二苯乙烯類衍生物，其特征在于： 所述取代苯基為甲基苯基、二甲基苯基、氟代苯基、氯代苯基、溴代苯基、異丙基苯基、 叔氨基苯基、甲氧基苯基、二甲氧基苯基、乙?；交⑶杌交?、（R)-I-苯基-1-甲氧基甲 基或（S)-I-苯基-1-甲氧基甲基、甲氧基芐基、甲基芐基、叔氨基芐基、氟代芐基、氯代芐基 或氰基芐基； 所述取代萘基為甲氧基萘基、甲基萘基、叔氨基萘基、氟代萘基、氯代萘基或氰基萘基； 所述取代呋喃基為甲氧基呋喃基、甲基呋喃基、氟代呋喃基、氯代呋喃基或氰基呋喃 基； 所述取代噻吩基為甲氧基噻吩基、甲基噻吩基、氟代噻吩基、氯代噻吩基或氰基噻吩 基； 所述取代P比啶基為甲基P比啶基、甲氧基P比啶基、氟代P比啶基、氯代P比啶基、氰基啦啶基、 吡啶基甲基、（吡啶基）乙基或(吡啶基巰基）甲基； 所述取代喹啉基為甲氧基喹啉基、甲基喹啉基、氟代喹啉基、氯代喹啉基或氰基喹啉 基； 所述取代異喹啉基為甲氧基異喹啉基、甲基異喹啉基、氟代異喹啉基、氯代異喹啉基或 氰基異喹啉基。5. 如權利要求1任一項所述的新型二苯乙烯類衍生物，其特征在于，具有所述通式I或 所述通式Π 的所述化合物由?；噭；疎-4 氨基-3，4-亞甲基二氧-二苯乙烯或者E-3， 4_亞甲基二氧_3 氣_4 氛基-二苯基乙稀得到。6. 如權利要求5所述的新型二苯乙烯類衍生物，其特征在于，所述?；噭轸人?、酸 酐或酰氯。7. 如權利要求6所述的新型二苯乙烯類衍生物，其特征在于： 所述羧酸為2-呋喃甲酸、2-噻吩甲酸、2-吡啶甲酸、2-四氫呋喃甲酸、（R)-2-四氫呋喃 甲酸、（S)-2-四氫咲喃甲酸、1-甲基哌啶-4-甲酸、環(huán)丙基甲酸、1-甲基環(huán)丙基甲酸、2-甲基 環(huán)丙基甲酸、1-氰基環(huán)丙基甲酸、環(huán)丙基乙酸或環(huán)丁基甲酸； 所述酸酐為苯甲酸酐、醋酸酐、乙酸酐、丙酸酐、正丁酸酐、異丁酸酐、苯甲酸酐或二碳 酸二叔丁酯； 所述酰氯為新戊酰氯、N，N-二甲基甲酰氯、苯磺酰氯、環(huán)丙基磺酰氯、異丙基磺酰氯、4-甲氧基苯甲酰氯、4-氰基苯甲酰氯、4-氯苯磺酰氯、苯基乙酰氯、芐基磺酰氯、對甲苯磺酰 氯、1-吡咯烷羰酰氯、N-乙酰基哌啶-4-酰氯、氯甲酸異丙酯、二甲氨基磺酰氯或4-二甲氨基 苯甲酰氯。8. 如權利要求7所述的新型二苯乙烯類衍生物，其特征在于，具有所述通式I或所述通 式Π 的所述新型二苯乙烯類衍生物或形成所述新型二苯乙烯類衍生物的化合物由所述酰 化試劑?；? 氨基-3，4-亞甲基二氧-二苯乙烯得到； 當所述?；噭?-噻吩甲酸、2-吡啶甲酸、環(huán)丙基甲酸、環(huán)丁基甲酸、2-四氫呋喃甲 酸或1-甲基哌啶-4-甲酸時，所述化合物的結構式為以下i~vi任意一種：當所述酰化試劑為乙酸酐、丙酸酐、正丁酸酐、異丁酸酐、苯甲酸酐或二碳酸二叔丁酯 時，所述化合物的結構式為以下vii~xii任意一種：當所述?；噭閷妆交酋Ｂ?、N，N-二甲基甲酰氯、苯磺酰氯、新戊酰氯、環(huán)丙基磺 酰氯、異丙基磺酰氯、4-甲氧基苯甲酰氯、4-氰基苯甲酰氯、4-氯苯磺酰氯、苯基乙酰氯、芐 基磺酰氯、氯甲酸異丙酯、二甲氨基磺酰氯或4-二甲氨基苯甲酰氯時，所述化合物的結構式 I) J K V ?· ?· ?· V V'，?· /工·--* 壬士 ·9.如權利要求7所述的新型二苯乙烯類衍生物，其特征在于，所述具有所述通式I或所 述通式Π 的化合物由?；噭；疎-3，4-亞甲基二氧-3 氣-4 氨基-二苯基乙稀得到； 當所述?；噭橐宜狒麜r，所述新型二苯乙烯類衍生物的結構式為：10. 如權利要求1所述的新型二苯乙烯類衍生物，其特征在于： 所述無機酸為鹽酸、硫酸、氫溴酸、氫碘酸或磷酸； 所述有機酸為醋酸、丙二酸、甲磺酸、琥珀酸、對甲苯磺酸、檸檬酸、馬來酸或酒石酸。11. 一種如權利要求1-10任一項所述的新型二苯乙烯類衍生物的制備方法，其特征在 于，制備所述具有所述通式I或所述通式Π 的化合物的方法包括： 化合物粗品的制備:將反應基材溶解在二氯甲烷中，加入催化劑得到混合物，向所述混 合物中滴加?；噭┗蛱幚砗蟮孽；噭┎嚢?，直至反應結束，蒸干所述二氯甲烷，得到 所述化合物粗品，所述反應基材為E-4 氨基-3，4-亞甲基二氧-二苯乙烯或E-3，4-亞甲基 二氧_3 ' -氣-4 ' -氨基-二苯基乙?。? 化合物的制備：向所述化合物粗品中加入飽和NaHCO3溶液，另加入二氯甲烷進行萃取， 獲取下層的有機相，依次用蒸餾水和飽和食鹽水洗滌所述有機相，對洗滌后的有機相進行 旋蒸濃縮和干燥，得到固體物質，再對得到的固體物質進行柱層析處理，得到具有神經發(fā)生 活性和低神經細胞毒性的化合物。12. 如權利要求11所述的制備方法，其特征在于，當酰化試劑為酸酐或酰氯時，所述化 合物粗品的制備方法包括： 將所述反應基材溶解在二氯甲烷中，加入吡啶和4-二甲氨基吡啶，得到混合物，冷水浴 冷卻所述混合物的溫度至〇°C以下，向始終低于(TC的所述混合物中滴加所述?；噭┎?拌，直至反應結束，蒸干二氯甲烷，得到所述化合物粗品。13. 如權利要求11所述的制備方法，其特征在于，當酰化試劑為酸時，所述化合物粗品 的制備方法包括： 將酰化試劑溶解在二氯甲烷中，加入三乙胺攪拌并溶解后，再加入新戊酰氯攪拌，待所 述新戊酰氯溶解后，得到所述處理后的?；噭? 將所述反應基材溶解于二氯甲烷，并逐滴加入所述處理后的?；噭?，置于室溫至反 應結束，蒸干所述二氯甲烷，得到所述化合物粗品。14. 如權利要求11所述的制備方法，其特征在于，所述方法還包括： 可接受的鹽的制備：向得到的所述化合物中加入無機酸或有機酸，生成具有神經發(fā)生 活性和低神經細胞毒性的可接受的新型二苯乙烯類衍生物。
【文檔編號】C07D409/12GK106008487SQ201511032690
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2015年12月31日
【發(fā)明人】梁建華, 慶宏, 吳思, 劉斯斯, 李諾敏, 楊亮
【申請人】北京理工大學