一種治療糖尿病的活性物質(zhì)及其制備方法和藥物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種治療糖尿病的活性物質(zhì)及其制備方法和 藥物，特別是2型糖尿病。
【背景技術(shù)】
[0002] 糖尿病是導(dǎo)致死亡的主要原因之一，在美國的糖尿病患者人數(shù)已急劇增加，預(yù)計(jì) 在全世界范圍內(nèi)將達(dá)到3. 66億。其中2型糖尿病影響超過90%的糖尿病患者，它被認(rèn)為與 氧化應(yīng)激有關(guān)，其特征是胰島素抵抗。由于抗糖尿病藥物的副作用，一直存在著對安全和有 效的降血糖藥物的強(qiáng)烈需求。
[0003] 2, 3, 5,4'-二苯乙烯2-0-B-吡喃葡糖苷（二苯乙烯苷，簡稱SG)的化學(xué)結(jié)構(gòu)為 C2DH2209，分子量406. 39,為白色無定形粉末，易溶于水、甲醇和乙醇。它在水溶液中穩(wěn)定，但 高溫（>80°C)可能會(huì)影響其穩(wěn)定性；它在酸中非常不穩(wěn)定。SG是PM的主要活性化合物，且 在PM根中的濃度可以達(dá)到3% -6%。二苯乙烯苷有順式2, 3, 5,4'-二苯乙烯2-0-B-吡喃 葡糖苷（簡稱順式-SG)和反式2,3,5,4' -二苯乙烯2-0-B-吡喃葡糖苷（簡稱反式-SG) 之分。二苯乙烯苷被鑒定為一種植物抗毒素，是由植物在真菌感染、紫外線照射、機(jī)械損傷 等不利條件下產(chǎn)生的。研究發(fā)現(xiàn)，二苯乙烯苷具有多種生理活性與藥用價(jià)值，已在降血脂、 抗衰老、抑制腫瘤等方面顯示出功能性，這在當(dāng)今日趨老齡化的社會(huì)中凸現(xiàn)其重要的研究 和開發(fā)價(jià)值。何首烏（PM) -直被用來作為中國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的滋補(bǔ)品。PM的藥用效果被認(rèn)為 是通過其強(qiáng)大的抗氧化活性進(jìn)行調(diào)節(jié)的，但是目前還沒用發(fā)現(xiàn)其用在糖尿病中的報(bào)道，尤 其是2型糖尿病。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 為了解決上述問題，本發(fā)明的目的在于提供一種治療糖尿病的活性物質(zhì)。
[0005] 本發(fā)明的目的之二是提供了所述活性物質(zhì)的提取方法。
[0006] 本發(fā)明的目的之三是提供了使用所述活性物質(zhì)的藥物。
[0007] 本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的：
[0008] -種治療糖尿病的活性物質(zhì)，所述活性物質(zhì)為二苯乙烯苷。
[0009] 較佳地，所述二苯乙稀苷為順式二苯乙稀苷和反式二苯乙稀苷的混合物。
[0010] 較佳地，所述二苯乙烯苷由何首烏提取制得。
[0011] 較佳地，所述二苯乙烯苷為何首烏提取得到的順式二苯乙烯苷和反式二苯乙烯苷 的混合物。
[0012] 較佳地，所述反式二苯乙烯苷和順式二苯乙烯苷的重量百分比比為0~ 99% :100%~1%〇
[0013] 其中，所述順式二苯乙烯苷是由反式二苯乙烯苷通過紫外誘導(dǎo)而得。
[0014] 制備所述活性物質(zhì)的方法，具體：
[0015]A、所述反式二苯乙烯苷的制備：
[0016] 先將何首烏（PM)的干根粉碎，在室溫下放置2天；
[0017] 接著用60%乙醇提取，固液比為1:10;植物材料濾出后，將乙醇萃取液合并，并用 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器減壓濃縮；
[0018] 再將所得到的干提取物用填充有孔樹脂的開柱層析（CC)進(jìn)行分離，乙醇逐步洗 脫，得到含水乙醇餾分在減壓下用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮，得到的粉末；
[0019] 最后用HPLC對二苯乙烯苷進(jìn)行量化提取得到反式二苯乙烯苷；
[0020] B、順式二苯乙烯苷的制備：
[0021] 先將步驟A制得的所述反式二苯乙烯苷溶解在水中，放置在紫外光下過夜；然后 將溶液濃縮過濾后用制備性HPLC對溶液進(jìn)行分離；
[0022] 接著用HYPERSIL_Cls柱洗脫，合并濃縮、冷凍干燥機(jī)干燥制得純順式二苯乙烯苷。
[0023] 較佳地，所述用HYPERSIL_Cls柱洗脫的條件是流動(dòng)相的梯度為15分鐘內(nèi)，乙腈濃 度從40 %升至65 %，流速保持在8毫升/分鐘。
[0024]PM溶液，或萃取液，可以不經(jīng)過提純分離而直接進(jìn)行紫外照射。
[0025] 這一步，紫外光照射后可以分離，也可以不分離，直接用混合物作為抗糖尿病藥物 或保健品。
[0026] 紫外光照射的時(shí)間是0. 5小時(shí)到24小時(shí)，或者是其中任何時(shí)間段，即可以是1小 時(shí)、2小時(shí)、3小時(shí)、4小時(shí)、8小時(shí)、12小時(shí)、16小時(shí)、20小時(shí)或24小時(shí)。
[0027] 紫外光照射的頻率范圍，是200nm到450nm之間最佳，可以是254nm、265nm、280nm、 300nm、315nm、320nm、340nm、345nm、360nm、380nm、385nm和 400nm等。
[0028] 從反式二苯乙烯苷到順式二苯乙烯苷的轉(zhuǎn)化率為3%~100%之間，可以是3%、 5%、10%、20%、40%、60%、80%、90%、95%和100%等。用于治療糖尿病的？]?混合物，反 式二苯乙烯苷在混合物中占的比例為0%~99%。即反式二苯乙烯苷可以為0%、2%、5%、 8%、10%、15%、20%、25%、30%、40%、50%、60%、80%、90%、95%、99% 等。
[0029] -種治療糖尿病的藥物，含有所述的活性物質(zhì)（順式-SG和反式-SG)，作為藥品， 除了該活性物質(zhì)，還含有其他常規(guī)組成藥品的添加助劑。藥物可以是不同形式的藥物、片 劑、膠囊、液體□服液等。
[0030] 較佳地，所述糖尿病為2型糖尿病。
[0031]-種保健品，含有所述的活性物質(zhì)（順式-SG和反式-SG)，保健品可以是片劑、膠 囊、液體或食品添加劑。
[0032] 本發(fā)明活性物質(zhì)為PM提取物二苯乙烯苷，更優(yōu)為二苯乙烯苷為順式二苯乙烯苷 和反式二苯乙烯苷的混合物。在高脂肪誘導(dǎo)的2型糖尿病小鼠模型中，含順式-SG和反 式-SG的PM粗提取物表現(xiàn)出顯著降血糖的能力。而純的反式SG和1:20比例的粗提物則 沒有此效果通過給KKCgAy/J型2型糖尿病小鼠喂取含有0. 075 %的PM提取物的飲用水， 發(fā)現(xiàn)7周后PM提取物處理的小鼠對比對照組有顯著降低血糖水平（P〈0. 003)。
【附圖說明】
[0033] 圖1為本發(fā)明PM提取物的HPLC色譜，
[0034] 圖2為PM提取物對肝臟樣品中IL-6,IL-1β和TNF-α水平的影響；
[0035] 圖3為ΡΜ提取物對胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路標(biāo)記的作用；
[0036] 圖4為PM提取物對KKCgAy/J小鼠的血清胰島素水平的影響；
[0037] 圖5為從Η0ΜΑ模型近似實(shí)現(xiàn)胰島素抵抗（IR)和β細(xì)胞功能（β);
[0038] 圖6為SG對血糖和胰島素水平的影響一；
[0039] 圖7為SG對血糖和胰島素水平的影響二；
[0040] 圖8為SG對糖耐量和胰島素耐受的影響一；
[0041] 圖9為SG對糖耐量和胰島素耐受的影響二；
[0042] 圖10為反式-SG的NMR譜；
[0043] 圖11為順式SG的NMR譜；
[0044] 圖12為反式-SG的LC-MS譜；
[0045] 圖13為順式-SG的LC-MS譜；
[0046] 圖14為純反式-SG;
[0047] 圖15為ΡΜ根粉60%乙醇提取物（順式-SG與反式-SG比例大約是1 :20);
[0048] 圖16為溶液Β用紫外光富集順式-SG(順式-SG的反式-SG的比例大約是2:3);
[0049] 圖17為不同比例的反式-SG和-順式SG的抗糖尿病作用；
[0050] 圖18為12周高脂肪飲食后小鼠血清葡萄糖水平；
[0051] 圖19為12周高脂肪飲食后小鼠血清胰島素水平；
[0052] 圖20為反式-SG和順式-SG對雄性CF-1小鼠的葡萄糖耐受性的影響；
[0053] 圖21為反式-SG和順式-SG對從Η0ΜΑ模型近似胰島素抵抗（IR)的影響；
[0054] 圖22為PEPCKmRNA用β-肌動(dòng)蛋白標(biāo)準(zhǔn)化后的表達(dá)。
[0055] 具體的實(shí)施方式
[0056] 下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，以助于本領(lǐng)域技術(shù)人員理 解本發(fā)明。
[0057] 1、ΡΜ提取物的抗糖尿病效果極其機(jī)理
[0058] 1. 1材料與方法
[0059] 1. 1. 1ΡΜ的提取
[0060] ΡΜ的干根粉從河北省安國香草有限公司購買，然后按照呂麗爽的方法稍加修改提 取過程。簡言之，ΡΜ的干根粉碎，在室溫下放置2天用60%乙醇提取，固液比為1:10。植物 材料濾出后，將乙醇萃取液合并，并用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器減壓濃縮。然后將所得到的干提取物用填 充有孔樹脂的開柱層析（CC)進(jìn)行分離。