1.一種人羊膜上皮細(xì)胞分離培養(yǎng)方法,其特征在于,所述方法包括如下步驟:
(1)將羊膜從胎盤(pán)組織上剝離后清洗;
(2)將清洗后的羊膜剪碎,并用胰酶消化處理;
(3)將消化處理后得到的消化液過(guò)篩后,收集細(xì)胞濾液,并離心處理;
(4)將離心處理得到的細(xì)胞用培養(yǎng)基懸浮后接種,并培養(yǎng);
(5)當(dāng)培養(yǎng)的細(xì)胞匯合度達(dá)到80~90%后,加入胰酶消化,然后加入培養(yǎng)基終止消化,并傳代培養(yǎng),即得人羊膜上皮細(xì)胞。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,步驟(1)中所述清洗是以含2~5%雙抗的HBSS緩沖溶液進(jìn)行清洗。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,步驟(2)中所述胰酶消化處理是在33~39℃條件下用胰酶消化處理20~40min。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法,其特征在于,所述消化處理為消化處理2~4次。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,步驟(3)中所述過(guò)篩是以孔徑為200~400目的篩網(wǎng)進(jìn)行過(guò)濾。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,步驟(3)中所述離心是在轉(zhuǎn)速為1300~1600rpm的條件下離心5~15min。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,步驟(5)中所述胰酶消化是在33~39℃條件下用胰酶消化處理3~10min。
8.一種人羊膜上皮細(xì)胞,其特征在于,所述人羊膜上皮細(xì)胞是由權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述方法分離培養(yǎng)得到的。
9.權(quán)利要求8所述人羊膜上皮細(xì)胞在制備治療疾病藥物中的應(yīng)用。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用,其特征在于,所述疾病為糖尿病。