本發(fā)明涉及細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域，具體涉及一種Marc-145細(xì)胞低血清培養(yǎng)基及其制備方法。
背景技術(shù)：
：Marc-145細(xì)胞來源于猴腎細(xì)胞，是成上皮樣細(xì)胞，從母細(xì)胞(Ma-104細(xì)胞)克隆而得到，可連續(xù)傳代培養(yǎng)。目前，Marc-145細(xì)胞的傳統(tǒng)培養(yǎng)方式是采用最基礎(chǔ)的合成培養(yǎng)基，甚至天然培養(yǎng)基(如水解乳蛋白)加入10％左右的新生牛血清來培養(yǎng)。但是這些動(dòng)物來源成分帶來明顯的問題，大用量的血清造成細(xì)胞生長對其依賴性大，而血清的成分十分復(fù)雜，血清的組分在各個(gè)批次之間都存在一定差異，會(huì)直接影響實(shí)驗(yàn)生產(chǎn)的穩(wěn)定性與連續(xù)性。血清來源于動(dòng)物，可能含有未知的傳染源，給生物制品帶來極大威脅。最關(guān)鍵的是血清的價(jià)格十分昂貴，所以，控制血清的使用量是生物制品發(fā)展的趨勢。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在的以上問題，提供一種Marc-145細(xì)胞低血清培養(yǎng)基，本發(fā)明培養(yǎng)基成分簡單、相對成本較低、質(zhì)量穩(wěn)定，并且該培養(yǎng)基的制備方法操作簡單，易于控制，各個(gè)組分在培養(yǎng)基中分散均勻，各批次培養(yǎng)基之間的差異較小。為實(shí)現(xiàn)上述技術(shù)目的，達(dá)到上述技術(shù)效果，本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：一種Marc-145細(xì)胞低血清培養(yǎng)基，按照重量份數(shù)計(jì)，包括：進(jìn)一步地，按照重量份數(shù)計(jì)，所述氨基酸或其鹽包括：進(jìn)一步地，按照重量份數(shù)計(jì)，所述無機(jī)鹽包括：進(jìn)一步地，按照重量份數(shù)計(jì)，所述維生素包括：進(jìn)一步地，按照重量份數(shù)計(jì)，所述植物蛋白水解物包括以下中的一種或幾種：大豆蛋白水解物、小麥蛋白水解物、土豆蛋白水解物、豌豆蛋白水解物。進(jìn)一步地，按照重量份數(shù)計(jì)，所述微量元素包括：進(jìn)一步地，一種Marc-145細(xì)胞低血清培養(yǎng)基的制備方法，包括以下步驟：步驟一、按照配方中各組分的重量份數(shù)配比，將氨基酸或其鹽與碳水化合物D-葡萄糖、HEPES、苯酚紅混合均勻，干燥，制得第一組分；步驟二、按照配方中各組分的重量份數(shù)配比，將無機(jī)鹽各成分混合均勻，干燥，制得第二組分；步驟三、將維生素、谷胱甘肽、氫化可的松、次黃嘌呤、亞油酸、胰島素配制成溶液，在溶液中加入賦形劑，干燥，制得第三組分，賦形劑在第三組分中的含量為85～95％；步驟四、將微量元素中各組分配置成溶液后，在溶液中加入賦形劑，干燥，制得第四組分，賦形劑在第四組分中的含量為85～95％；步驟五、將所述第一組分、第二組分、第三組分和第四組分混合后，加入植物蛋白水解物球磨，制得Marc細(xì)胞低血清培養(yǎng)基。進(jìn)一步地，步驟一中的干燥在70～90℃的溫度下進(jìn)行，并且干燥時(shí)間為2～3小時(shí)；步驟二中的干燥在105～120℃的溫度下進(jìn)行，并且干燥時(shí)間為3～5小時(shí)；步驟三和步驟四中的干燥均為真空冷凍干燥。進(jìn)一步地，步驟五中控制球磨時(shí)間為2-4小時(shí)，并使Marc細(xì)胞低血清培養(yǎng)基的平均粒度不小于120目。進(jìn)一步地，將制備的Marc細(xì)胞低血清培養(yǎng)基配制成培養(yǎng)液，對Marc細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，其中，控制培養(yǎng)液中Marc細(xì)胞低血清培養(yǎng)基的質(zhì)量含量為1～3％。所述賦形劑可為本領(lǐng)域常規(guī)的賦形劑，例如甘露醇、氯化鉀、葡萄糖、組氨酸、甘氨酸等。在本發(fā)明的步驟三中，可以根據(jù)第三組分中各成分的溶解性質(zhì)而采用水、酸溶液、堿溶液中的一種進(jìn)行溶解，各成分可以單獨(dú)進(jìn)行溶解，也可以使溶解性質(zhì)相同的成分按照重量份同時(shí)溶解于水、酸溶液、堿溶液中的一種中，在混合形成的第一混合溶液中，各成分的重量份應(yīng)當(dāng)滿足第三組分中各成分的重量份配比要求，并且第三組分中各成分在第一混合溶液的總質(zhì)量含量可以為5～15％。在本發(fā)明的步驟四中，可以根據(jù)第四組分中各成分的溶解性質(zhì)而采用水、酸溶液、堿溶液中的一種進(jìn)行溶解，并且在混合形成的第二混合溶液中，各成分的重量份應(yīng)當(dāng)滿足第四組分中各成分的重量份配比要求，并且第四組分中各成分在第二混合溶液的總質(zhì)量含量可以為5～15％。具體地，溶解各成分所采用的水可為超純水；酸溶液的質(zhì)量濃度可以為5％-30％，并且酸溶液所采用的酸的類型可選自鹽酸、硫酸和硝酸中的一種；堿溶液的質(zhì)量濃度可以為10％-50％，并且堿溶液所采用的堿的類型可選自氫氧化鈉和氫氧化鉀中的一種。進(jìn)一步優(yōu)選地，在制備第三組分和第四組分時(shí)，可按照擴(kuò)大的重量份進(jìn)行制備，以使各成分在培養(yǎng)基中分散更加均勻；并且，在制備第三組分和第四組分后，可按照重量份要求與第一組分和第二組分進(jìn)行混合，并使最終制得的動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基中各成分的重量份滿足上述重量份要求。本發(fā)明還提供上述任一所述的Marc細(xì)胞低血清培養(yǎng)基在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)上的應(yīng)用。該Marc細(xì)胞低血清培養(yǎng)基在用于Marc細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，需添加少量血清、即可使Marc細(xì)胞生長良好且穩(wěn)定。本發(fā)明還提供一種Marc細(xì)胞低血清培養(yǎng)方法，將上述任一所述的Marc細(xì)胞低血清培養(yǎng)基制成培養(yǎng)液后，對Marc細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，其中，控制所述培養(yǎng)液中Marc細(xì)胞低血清培養(yǎng)基的質(zhì)量含量為1～3％，例如2％。并且，在對Marc細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，Marc細(xì)胞的接種密度可以為常規(guī)密度，例如1×105個(gè)細(xì)胞/cm2。進(jìn)一步優(yōu)選地，將上述任一所述的Marc細(xì)胞低血清培養(yǎng)基制成培養(yǎng)液，包括：將上述任一所述的Marc細(xì)胞低血清培養(yǎng)基溶于水后，加入碳酸氫鈉，攪拌混勻，制得培養(yǎng)液；其中，可以控制所述培養(yǎng)液中碳酸氫鈉的質(zhì)量含量為2～3％。制得的培養(yǎng)液的pH值為6.8～7.4。進(jìn)一步地，所培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞包括但不限于Marc細(xì)胞。本發(fā)明的有益效果是:1、本發(fā)明的MARC-145細(xì)胞低血清培養(yǎng)基不含血清，含植物蛋白水解物等，其組成簡單并且明確，各成分均可通過普通市售而容易地獲得，從而有利于在MARC-145細(xì)胞培養(yǎng)中的實(shí)際應(yīng)用。2、本發(fā)明的MARC-145細(xì)胞低血清培養(yǎng)基的制備方法操作簡單、易于控制，采用各組分分別進(jìn)行配制的方式不僅有利于保證各成分不受到破壞，而且有利于保證各成分在培養(yǎng)基中的均勻分散，制備的各批次培養(yǎng)基之間差異小，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。3、本發(fā)明的MARC-145細(xì)胞低血清培養(yǎng)基在應(yīng)用時(shí)針對性強(qiáng)，可用于MARC-145細(xì)胞培養(yǎng)，并且培養(yǎng)的細(xì)胞生長狀態(tài)良好且穩(wěn)定，目標(biāo)產(chǎn)品產(chǎn)量高，可達(dá)到常規(guī)含血清培養(yǎng)基的培養(yǎng)水平；此外，該MARC-145細(xì)胞低血清培養(yǎng)基在應(yīng)用時(shí)不對目標(biāo)產(chǎn)品的分離純化以及分析檢測造成影響，應(yīng)用前景廣泛。上述說明僅是本發(fā)明技術(shù)方案的概述，為了能夠更清楚了解本發(fā)明的技術(shù)手段，并可依照說明書的內(nèi)容予以實(shí)施，本發(fā)明的具體實(shí)施方式由以下實(shí)施例詳細(xì)給出。具體實(shí)施方式下面將對本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。基于本發(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。各實(shí)施例所采用的原料的質(zhì)量要求及來源為：各氨基酸或其鹽、D-葡萄糖：藥用級，純度≥99％，購自sigma；各無機(jī)鹽：注射級，純度≥99％，購自sigma；各維生素：藥用級，純度≥99％，購自sigma；各微量元素：試劑級，純度≥98％，購自國藥集團(tuán)；蛋白組分中的各成分：購自Kerry公司；HEPES：試劑級，純度≥99％，購自Robiot；膽堿、激素：試劑級，純度≥98％，購自國藥集團(tuán)藥業(yè)股份有限公司；MARC-145細(xì)胞：來自中國藥品生物制品檢定所(簡稱中檢所)。實(shí)施例1實(shí)施例1中公開了一種PK細(xì)胞低血清培養(yǎng)基，由第一組分、第二組分、第三組分、第四組分和植物水解蛋白組成，其中植物水解蛋白由2.5重量份的大豆蛋白水解物、小麥蛋白水解物、土豆蛋白水解物和豌豆蛋白水解物中的一種或多種組成。其中：第一組分由如表1中的成分組成：表1實(shí)施例1中第一組分表第二組分包括如表2中所示。表2實(shí)施例1中第二組分表組分含量(重量份)氯化鈉660無水磷酸二氫鈉11無水氯化鈣19四水合硝酸鈣5五水合硫酸銅0.00009氯化鉀47六水合氯化鎂2無水硫酸鎂7.7無水磷酸氫二鈉15.2七水合硫酸鋅0.0095七水硫酸亞鐵0.0095第三組分包括如表3中所示。表3實(shí)施例1中的第三組分表組分含量(重量份)生物素0.0023氯化膽堿1.23D-泛酸鈣0.07葉酸0.1谷胱甘肽0.008氫化可的松0.00003次黃嘌呤0.03肌醇1.6亞油酸0.0010硫辛酸0.0019亞硒酸鈉0.0002煙酰胺0.076對氨基苯甲酸0.0131,4-丁二胺二鹽酸鹽0.0018鹽酸吡哆醛0.0009鹽酸吡哆醇0.04胰島素0.0023核黃素0.0039第四組分包括如表4中所示。表4實(shí)施例1中第四組分表組分含量(重量份)四水合二氯化錳2.9×10-8亞硒酸6.6×10-7二氧化鍺4.3×10-6六水合三氯化鉻5.2×10-6偏釩酸銨4.4×10-5偏釩酸鈉5.7×10-5氯化銣1.8×10-5氯化鎘4.5×10-5六水合氯化鈷3.8×10-5硫酸鎳2.1×10-5乙酸鋇2.8×10-5溴化鉀1.9×10-5八水氧氯化鋯4.8×10-5氟化鈉5×10-5四水合鉬酸銨0.00005二水合氯化銅0.00013氯化鋰0.00007六水合氯化鋁0.0028上述MARC-145細(xì)胞低血清培養(yǎng)基可通過如下方法制備得到：1、制備第一組分按照上述重量份配比分別稱取第一組分中的各成分，將各成分混合均勻后，置于電熱鼓風(fēng)干燥箱中進(jìn)行干燥，控制干燥溫度為80℃，干燥時(shí)間為2.5小時(shí)，制得第一組分。2、制備第二組分按照上述重量份配比分別稱取第二組分中的各成分，將各成分混合均勻后，置于電熱鼓風(fēng)干燥箱中進(jìn)行干燥，控制干燥溫度為110℃，干燥時(shí)間為4小時(shí)，制得第二組分。3、制備第三組分將第三組分中的氯化膽堿、肌醇、D-泛酸鈣、亞硒酸鈉、煙酰胺、對氨基苯甲酸、鹽酸吡哆醛和鹽酸吡哆醇溶于超純水中，攪拌混勻，制得第一溶液；將第三組分中的胰島素溶于濃度為10％的鹽酸溶液中，攪拌混勻，制得第二溶液；將第三組分中的其余成分溶于濃度為20％的氫氧化鈉溶液中，攪拌混勻，制得第三溶液；分別將第一溶液、第二溶液和第三溶液按照上述重量份配比混合形成第一混合溶液，向第一混合溶液中加入甘露醇(賦形劑)，其中控制第三組分中各成分在第一混合溶液中的總質(zhì)量含量為10％，甘露醇在第一混合溶液中的質(zhì)量含量為90％，攪拌混勻后，采用冷凍干燥機(jī)進(jìn)行真空冷凍干燥，制得第三組分。4、制備第四組分將第四組分中的二氧化鍺溶于濃度為15％的氫氧化鈉容這種，攪拌混勻，制得第四溶液；將第四組分中的其余成分溶于超純水中，攪拌混勻，制得第五溶液；分別將第四溶液、第五溶液按照上述重量份配比混合形成第二混合溶液，向第二混合溶液中加入甘露醇，其中控制第四組分中各成分在第二混合溶液中的總質(zhì)量含量為10％，甘露醇在第二混合溶液中的質(zhì)量含量為90％，攪拌混勻后，采用冷凍干燥機(jī)進(jìn)行真空冷凍干燥，制得第四組分。5、制備MARC-145細(xì)胞低血清培養(yǎng)基按照上述重量份將第一組分、第二組分、第三組分、第四組分和植物蛋白水解物混合均勻后，采用球磨機(jī)球磨3小時(shí)左右，制得平均粒度為120目以上的MARC-145細(xì)胞低血清培養(yǎng)基。實(shí)施例2實(shí)施例2中公開了一種PK細(xì)胞低血清培養(yǎng)基，由第一組分、第二組分、第三組分、第四組分和植物水解蛋白組成，其中植物水解蛋白由2重量份的大豆蛋白水解物、小麥蛋白水解物、土豆蛋白水解物和豌豆蛋白水解物中的一種或多種組成。其中：第一組分由如表5中的成分組成：表5實(shí)施例2中第一組分表第二組分包括如表6中所示。表6實(shí)施例2中第二組分表第三組分包括如表7中所示。表7實(shí)施例2中的第三組分表第四組分包括如表8中所示。表8實(shí)施例2中第四組分表上述MARC-145細(xì)胞低血清培養(yǎng)基可通過如下方法制備得到：1、制備第一組分按照上述重量份配比分別稱取第一組分中的各成分，將各成分混合均勻后，置于電熱鼓風(fēng)干燥箱中進(jìn)行干燥，控制干燥溫度為70℃，干燥時(shí)間為3小時(shí)，制得第一組分。2、制備第二組分按照上述重量份配比分別稱取第二組分中的各成分，將各成分混合均勻后，置于電熱鼓風(fēng)干燥箱中進(jìn)行干燥，控制干燥溫度為105℃，干燥時(shí)間為5小時(shí)，制得第二組分。3、制備第三組分將第三組分中的氯化膽堿、肌醇、D-泛酸鈣、亞硒酸鈉、煙酰胺、對氨基苯甲酸、鹽酸吡哆醛和鹽酸吡哆醇溶于超純水中，攪拌混勻，制得第一溶液；將第三組分中的胰島素溶于濃度為5％的鹽酸溶液中，攪拌混勻，制得第二溶液；將第三組分中的其余成分溶于濃度為10％的氫氧化鈉溶液中，攪拌混勻，制得第三溶液；分別將第一溶液、第二溶液和第三溶液按照上述重量份配比混合形成第一混合溶液，向第一混合溶液中加入甘露醇(賦形劑)，其中控制第三組分中各成分在第一混合溶液中的總質(zhì)量含量為5％，甘露醇在第一混合溶液中的質(zhì)量含量為90％，攪拌混勻后，采用冷凍干燥機(jī)進(jìn)行真空冷凍干燥，制得第三組分。4、制備第四組分將第四組分中的二氧化鍺溶于濃度為10％的氫氧化鈉容這種，攪拌混勻，制得第四溶液；將第四組分中的其余成分溶于超純水中，攪拌混勻，制得第五溶液；分別將第四溶液、第五溶液按照上述重量份配比混合形成第二混合溶液，向第二混合溶液中加入甘露醇，其中控制第四組分中各成分在第二混合溶液中的總質(zhì)量含量為5％，甘露醇在第二混合溶液中的質(zhì)量含量為90％，攪拌混勻后，采用冷凍干燥機(jī)進(jìn)行真空冷凍干燥，制得第四組分。5、制備MARC-145細(xì)胞低血清培養(yǎng)基按照上述重量份將第一組分、第二組分、第三組分、第四組分和植物蛋白水解物混合均勻后，采用球磨機(jī)球磨2小時(shí)左右，制得平均粒度為120目以上的MARC-145細(xì)胞低血清培養(yǎng)基。實(shí)施例3實(shí)施例3中公開了一種PK細(xì)胞低血清培養(yǎng)基，由第一組分、第二組分、第三組分、第四組分和植物水解蛋白組成，其中植物水解蛋白由3重量份的大豆蛋白水解物、小麥蛋白水解物、土豆蛋白水解物和豌豆蛋白水解物中的一種或多種組成。其中：第一組分由如表9中的成分組成：表9實(shí)施例3中第一組分表第二組分包括如表10中所示。表10實(shí)施例3中第二組分表第三組分包括如表11中所示。表11實(shí)施例3中的第三組分表第四組分包括如表12中所示。表12實(shí)施例3中第四組分表上述MARC-145細(xì)胞低血清培養(yǎng)基可通過如下方法制備得到：1、制備第一組分按照上述重量份配比分別稱取第一組分中的各成分，將各成分混合均勻后，置于電熱鼓風(fēng)干燥箱中進(jìn)行干燥，控制干燥溫度為90℃，干燥時(shí)間為2小時(shí)，制得第一組分。2、制備第二組分按照上述重量份配比分別稱取第二組分中的各成分，將各成分混合均勻后，置于電熱鼓風(fēng)干燥箱中進(jìn)行干燥，控制干燥溫度為120℃，干燥時(shí)間為3小時(shí)，制得第二組分。3、制備第三組分將第三組分中的氯化膽堿、肌醇、D-泛酸鈣、亞硒酸鈉、煙酰胺、對氨基苯甲酸、鹽酸吡哆醛和鹽酸吡哆醇溶于超純水中，攪拌混勻，制得第一溶液；將第三組分中的胰島素溶于濃度為30％的鹽酸溶液中，攪拌混勻，制得第二溶液；將第三組分中的其余成分溶于濃度為50％的氫氧化鈉溶液中，攪拌混勻，制得第三溶液；分別將第一溶液、第二溶液和第三溶液按照上述重量份配比混合形成第一混合溶液，向第一混合溶液中加入甘露醇(賦形劑)，其中控制第三組分中各成分在第一混合溶液中的總質(zhì)量含量為15％，甘露醇在第一混合溶液中的質(zhì)量含量為90％，攪拌混勻后，采用冷凍干燥機(jī)進(jìn)行真空冷凍干燥，制得第三組分。4、制備第四組分將第四組分中的二氧化鍺溶于濃度為50％的氫氧化鈉容這種，攪拌混勻，制得第四溶液；將第四組分中的其余成分溶于超純水中，攪拌混勻，制得第五溶液；分別將第四溶液、第五溶液按照上述重量份配比混合形成第二混合溶液，向第二混合溶液中加入甘露醇，其中控制第四組分中各成分在第二混合溶液中的總質(zhì)量含量為15％，甘露醇在第二混合溶液中的質(zhì)量含量為90％，攪拌混勻后，采用冷凍干燥機(jī)進(jìn)行真空冷凍干燥，制得第四組分。5、制備MARC-145細(xì)胞低血清培養(yǎng)基按照上述重量份將第一組分、第二組分、第三組分、第四組分和植物蛋白水解物混合均勻后，采用球磨機(jī)球磨4小時(shí)左右，制得平均粒度為120目以上的MARC-145細(xì)胞低血清培養(yǎng)基。實(shí)施例4采用實(shí)施例1的方法制備三批實(shí)施例1的MARC-145細(xì)胞低血清培養(yǎng)基，分別記為培養(yǎng)基1～培養(yǎng)基3。分別將2g各培養(yǎng)基溶于100ml超純水中，攪拌混勻后，加入2g碳酸氫鈉，攪拌混勻后，加入2％血清，制得各培養(yǎng)液；將培養(yǎng)基1～培養(yǎng)基3制成的培養(yǎng)液分別記作低血清培養(yǎng)液1～低血清培養(yǎng)液3。同時(shí)，分別將2g的國內(nèi)S公司MARC-145細(xì)胞培養(yǎng)基、國內(nèi)T公司MARC-145細(xì)胞培養(yǎng)基溶于100ml超純水中，攪拌混勻后，加入10％血清，制得含血清培養(yǎng)液；將S公司MARC-145細(xì)胞培養(yǎng)基制得含血清培養(yǎng)液記作含血清培養(yǎng)液1，將T公司MARC-145細(xì)胞培養(yǎng)基制得含血清培養(yǎng)液記作含血清培養(yǎng)液2。在無菌條件下，用已滅菌移液器分別將50ml的低血清培養(yǎng)液1～低血清培養(yǎng)液3及含血清培養(yǎng)液1～含血清培養(yǎng)液2轉(zhuǎn)移到T75細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，向各細(xì)胞培養(yǎng)瓶分別接種MARC-145細(xì)胞懸液，接種密度為1×105個(gè)細(xì)胞/cm2，在37℃溫度、5％CO2條件下進(jìn)行貼壁培養(yǎng)。培養(yǎng)48小時(shí)后，在顯微鏡下觀察細(xì)胞，顯微結(jié)果表明：低血清培養(yǎng)液1～低血清培養(yǎng)液3培養(yǎng)的MARC-145細(xì)胞均形態(tài)飽滿，輪廓清晰，生長狀態(tài)良好。使用胰酶消化制成細(xì)胞懸液，采用貝克曼細(xì)胞計(jì)數(shù)儀進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)并測定細(xì)胞活力(細(xì)胞活力為總細(xì)胞中活細(xì)胞所占的百分比)，結(jié)果見表13。表13各培養(yǎng)液培養(yǎng)后的細(xì)胞計(jì)數(shù)及細(xì)胞活力結(jié)果由表13可知：1、上述MARC-145細(xì)胞低血清培養(yǎng)基能夠較好地培養(yǎng)MARC-145細(xì)胞，細(xì)胞生長狀態(tài)良好，細(xì)胞增殖倍數(shù)高，并且可達(dá)到常規(guī)含血清培養(yǎng)基的培養(yǎng)水平。2、上述各批次MARC-145細(xì)胞低血清培養(yǎng)基在對MARC-145細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)的培養(yǎng)穩(wěn)定性良好，所培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)差異較小，說明本發(fā)明的MARC-145細(xì)胞低血清培養(yǎng)基質(zhì)量穩(wěn)定。對照例1以僅由實(shí)施例1中第一組分、第二組分、第三組分和植物蛋白水解物組成的MARC-145細(xì)胞低血清培養(yǎng)基作為對照培養(yǎng)基1(即不含有實(shí)施例1中的第四組分)。將2g對照培養(yǎng)基1溶于100ml超純水中，攪拌混勻后，加入2g碳酸氫鈉，攪拌混勻，加入2％血清，制得對照培養(yǎng)液1。在無菌條件下，用已滅菌移液器將50ml的對照培養(yǎng)液1轉(zhuǎn)移到T75細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，向細(xì)胞培養(yǎng)瓶接種MARC-145細(xì)胞懸液，接種密度為1×105個(gè)細(xì)胞/cm2，在37℃溫度、5％CO2條件下進(jìn)行貼壁培養(yǎng)。培養(yǎng)48小時(shí)后的細(xì)胞計(jì)數(shù)及細(xì)胞活力結(jié)果見表14。對照例2除第四組分中不含有偏釩酸鈉、亞硒酸、六水合氯化鋁和氟化鈉之外，其它成分與實(shí)施例1的MARC-145細(xì)胞低血清培養(yǎng)基相同，以該培養(yǎng)基作為對照培養(yǎng)基2。將2g對照培養(yǎng)基2溶于100ml超純水中，攪拌混勻后，加入2g碳酸氫鈉，攪拌混勻，加入2％血清，制得對照培養(yǎng)液2。在無菌條件下，用已滅菌移液器將50ml的對照培養(yǎng)液2轉(zhuǎn)移到T75細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，向細(xì)胞培養(yǎng)瓶接種MARC-145細(xì)胞懸液，接種密度為1×105個(gè)細(xì)胞/cm2，在37℃溫度、5％CO2條件下進(jìn)行貼壁培養(yǎng)。培養(yǎng)48小時(shí)后的細(xì)胞計(jì)數(shù)及細(xì)胞活力結(jié)果見表14。對照例3除第四組分中不含有二氧化鍺、氯化銣、六水合三氯化鉻和八水氧氯化鋯之外，其它成分與實(shí)施例1的MARC-145細(xì)胞低血清培養(yǎng)基相同，以該培養(yǎng)基作為對照培養(yǎng)基3。將2g對照培養(yǎng)基3溶于100ml超純水中，攪拌混勻后，加入2g碳酸氫鈉，攪拌混勻，加入2％血清，制得對照培養(yǎng)液3。在無菌條件下，用已滅菌移液器將50ml的對照培養(yǎng)液3轉(zhuǎn)移到T75細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，向細(xì)胞培養(yǎng)瓶接種MARC-145細(xì)胞懸液，接種密度為1×105個(gè)細(xì)胞/cm2，在37℃溫度、5％CO2條件下進(jìn)行貼壁培養(yǎng)。培養(yǎng)48小時(shí)后的細(xì)胞計(jì)數(shù)及細(xì)胞活力結(jié)果見表14。對照例4除第四組分中不含有四水合二氯化錳、氯化鎘、硫酸鎳和氯化鋰之外，其它成分與實(shí)施例1的MARC-145細(xì)胞低血清培養(yǎng)基相同，以該培養(yǎng)基作為對照培養(yǎng)基4。分別將1g對照培養(yǎng)基4溶于100ml超純水中，攪拌混勻后，加入2g碳酸氫鈉，攪拌混勻，加入2％血清，制得對照培養(yǎng)液4。在無菌條件下，用已滅菌移液器將50ml的對照培養(yǎng)液4轉(zhuǎn)移到T75細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，向細(xì)胞培養(yǎng)瓶接種MARC-145細(xì)胞懸液，接種密度為1×105個(gè)細(xì)胞/cm2，在37℃溫度、5％CO2條件下進(jìn)行貼壁培養(yǎng)。培養(yǎng)48小時(shí)后的細(xì)胞計(jì)數(shù)及細(xì)胞活力結(jié)果見表14。對照例5除第四組分中不含有二氧化鍺、偏釩酸銨、四水合鉬酸銨、二水合氯化銅和六水合氯化鈷之外，其它成分與實(shí)施例1的MARC-145細(xì)胞低血清培養(yǎng)基相同，以該培養(yǎng)基作為對照培養(yǎng)基5。分別將3g對照培養(yǎng)基5溶于100ml超純水中，攪拌混勻后，加入3g碳酸氫鈉，攪拌混勻，加入2％血清，制得對照培養(yǎng)液5。在無菌條件下，用已滅菌移液器將50ml的對照培養(yǎng)液5轉(zhuǎn)移到T75細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，向細(xì)胞培養(yǎng)瓶接種MARC-145細(xì)胞懸液，接種密度為1×105個(gè)細(xì)胞/cm2，在37℃溫度、5％CO2條件下進(jìn)行貼壁培養(yǎng)。培養(yǎng)48小時(shí)后的細(xì)胞計(jì)數(shù)及細(xì)胞活力結(jié)果見表14。表14各對照培養(yǎng)液培養(yǎng)后的細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果由表14可知：缺少本發(fā)明MARC-145細(xì)胞低血清培養(yǎng)基中的第四組分或第四組分中的幾種成分的培養(yǎng)基在用于培養(yǎng)MARC-145細(xì)胞時(shí)細(xì)胞的密度和活力明顯下降。由此說明，上述第四組分中的各成分在本發(fā)明的動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基中均是不可或缺的，其對MARC-145細(xì)胞的培養(yǎng)均具有顯著作用。對所公開的實(shí)施例的上述說明，使本領(lǐng)域?qū)I(yè)技術(shù)人員能夠?qū)崿F(xiàn)或使用本發(fā)明。對這些實(shí)施例的多種修改對本領(lǐng)域的專業(yè)技術(shù)人員來說將是顯而易見的，本文中所定義的一般原理可以在不脫離本發(fā)明的精神或范圍的情況下，在其它實(shí)施例中實(shí)現(xiàn)。因此，本發(fā)明將不會(huì)被限制于本文所示的這些實(shí)施例，而是要符合與本文所公開的原理和新穎特點(diǎn)相一致的最寬的范圍。當(dāng)前第1頁1 2 3