一種分離獲得羊膜上皮細(xì)胞的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種分離獲得羊膜上皮細(xì)胞的方法，該方法包括：將羊膜組織加入膠原酶溶液孵育；然后將羊膜組織加入胰蛋白酶溶液進(jìn)行消化；將上清液離心后獲得羊膜上皮細(xì)胞。本發(fā)明操作簡(jiǎn)單，且能保持細(xì)胞原有活性及生長(zhǎng)狀態(tài)，提高羊膜上皮細(xì)胞的得率。
【專利說(shuō)明】一種分離獲得羊膜上皮細(xì)胞的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體的說(shuō)涉及一種分離獲得羊膜上皮細(xì)胞的方法。

【背景技術(shù)】
[0002]羊膜上皮細(xì)胞(amn1tic epithelial cells, AECs)在受精后第8天由外胚層細(xì)胞發(fā)育而來(lái)，使其可能維持原腸胚形成胚胎干細(xì)胞的可塑性。人羊膜上皮細(xì)胞不表達(dá)HLA-A，B，C或DR抗原，移植后不易引起免疫排斥反應(yīng)。在一定條件下，羊膜上皮細(xì)胞可分化為成熟的神經(jīng)元細(xì)胞，毛囊和皮膚上皮細(xì)胞，羊膜上皮細(xì)胞理論上可以分化成為各種組織細(xì)胞。因此，對(duì)羊膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)方法的探索及對(duì)羊膜上皮的生長(zhǎng)特性的研究具有重要意義，可為將來(lái)的組織工程應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。
[0003]人羊膜組織由來(lái)源于外胚層的羊膜上皮細(xì)胞和中胚層的羊膜間質(zhì)細(xì)胞組成。人羊膜上皮細(xì)胞源于外胚層羊膜細(xì)胞，保持著早期外胚層細(xì)胞的多潛能特性。從正常分娩的胎盤羊膜中，新分離的人羊膜上皮細(xì)胞具有干細(xì)胞某些表面抗原標(biāo)志。如SSEA-3，SSEA-4，TRA-1-60, TRA-1-81, S0X-2，F(xiàn)GF-4 和 Rex-1，部分人羊膜上皮細(xì)胞表達(dá) c_kit 和 Thy-1，所以可以用這些抗原的抗體進(jìn)行ACEs的檢測(cè)。
[0004]目前，AECs已被證實(shí)具有肝細(xì)胞的某些特性和功能。采用肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子和地塞米松等為誘導(dǎo)劑對(duì)人AECs進(jìn)行原代培養(yǎng)，RT-PCR檢測(cè)到肝細(xì)胞部分相關(guān)基因的表達(dá)，提示人ACEs具有分化為成熟肝細(xì)胞的潛能。
[0005]EGF是由53個(gè)氨基酸組成的相對(duì)分子質(zhì)量較低的單鏈多肽，具有多種生物活性，能刺激體內(nèi)多種類型的組織細(xì)胞分裂和增生。在最初分離的hAECs的存活率不是很高，并且貼壁效果也不是很好，而在添加了 EGF后就能有利于hAECs的長(zhǎng)期培養(yǎng)，同時(shí)抑制了其他類型細(xì)胞的生長(zhǎng)。
[0006]羊膜上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)的關(guān)鍵在于原代培養(yǎng)，原代培養(yǎng)能否成功很大程度取決于能否獲得足夠數(shù)量活力好的上皮細(xì)胞。原代培養(yǎng)分為組織塊培養(yǎng)和酶消化法培養(yǎng)，組織塊培養(yǎng)由于不是每個(gè)組織塊都能培養(yǎng)成功，且容易混雜有成纖維細(xì)胞污染，培養(yǎng)形成單胚層的時(shí)間較長(zhǎng)，不利于快速大量獲取細(xì)胞，難以滿足組織工程的需要。國(guó)外有采用胰蛋白酶分步多次消化，步驟繁瑣，而且單純的用胰蛋白酶很難獲得足夠的上皮細(xì)胞，且胰蛋白酶消化對(duì)細(xì)胞的損傷大，消化下來(lái)的細(xì)胞不易貼壁生長(zhǎng)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的內(nèi)容在于克服以上技術(shù)不足，提供了一種分離獲得羊膜上皮細(xì)胞的方法，該方法為:
[0008]將羊膜組織加入膠原酶溶液孵育；
[0009]然后將羊膜組織加入胰蛋白酶溶液進(jìn)行消化；
[0010]終止消化并過(guò)濾；
[0011]將濾液離心后獲得羊膜上皮細(xì)胞。
[0012]其中所述的膠原酶為IV膠原酶或II膠原酶；
[0013]其中膠原酶溶液是將Ig膠原酶溶解在500ml基礎(chǔ)平衡鹽溶液中得到的；
[0014]其中基礎(chǔ)平衡鹽溶液的制備是用0.4g的KC1、0.06g的KH2P04、a 132g的Na2HPO4.12H20、8g 的 NaCl、0.35g 的 NaHC03、1.0g 的 D-葡萄糖、0.1Og-0.20g 的鏈霉素(優(yōu)選 0.20g)、0.06g-0.12g的青霉素(優(yōu)選0.12g)，用水定容為IL得到的。
[0015]其中胰蛋白酶溶液是將0.5g胰蛋白酶和0.04g EDTA溶解在200ml基礎(chǔ)平衡鹽溶液中而成。
[0016]具體的說(shuō)，本發(fā)明的一種分離獲得羊膜上皮細(xì)胞的方法，包括如下步驟:
[0017]從胎盤上分離得到羊膜組織，用基礎(chǔ)平衡鹽溶液或PBS溶液沖洗后剪碎；
[0018]將羊膜組織中加入膠原酶溶液，37°C下孵育1-2小時(shí)(優(yōu)選2小時(shí))；
[0019]然后將混合了膠原酶的組織塊在200g下離心5分鐘，棄掉上清液；
[0020]再加入胰蛋白酶溶液，在37°C振蕩消化10-20分鐘(優(yōu)選20分鐘)，用含10%胎牛血清的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基終止消化；
[0021]將消化后的組織塊經(jīng)200目濾網(wǎng)過(guò)濾；
[0022]將濾液在200g下離心5分鐘，棄上清，使用含10%胎牛血清的完全培養(yǎng)基重新懸浮均勻細(xì)胞，獲得羊膜上皮細(xì)胞；
[0023]其中所述的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基，是900ml DMEM培養(yǎng)基中加入丙酮酸鈉0.1lOOg, L-谷氨酰胺0.1461g、β -巰基乙醇3.8574g、10mM非必需氨基酸1ml ;所述的10mM非必需氨基酸配方為L(zhǎng)-丙氨酸1500mg/L、L-天門冬酰胺890mg/L、L-天冬氨酸1330mg/L、L-谷氨酸1470mg/L、甘氨酸 750mg/L、L-脯氨酸 1150mg/L 和 L-絲氨酸 1050mg/L ；
[0024]其中所述的完全培養(yǎng)基，是標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基中添加胎牛血清和EGF配制而成；添加后胎牛血清的體積濃度為10%，EGF添加后的濃度為10ng/ml。
[0025]本發(fā)明的分離獲得羊膜上皮細(xì)胞的方法為膠原酶一胰蛋白酶聯(lián)合消化法。先用膠原酶處理韌性較強(qiáng)的羊膜組織，消化分解間質(zhì)細(xì)胞，獲得較純的成片上皮細(xì)胞，再用胰蛋白酶消化稍稍分離細(xì)胞片，得到的上皮細(xì)胞比較多且活力好，容易貼壁生長(zhǎng)。
[0026]EGF (表皮生長(zhǎng)因子)是由53個(gè)氨基酸組成的相對(duì)分子質(zhì)量較低的單鏈多肽，具有多種生物活性，能刺激體內(nèi)多種類型的組織細(xì)胞分裂和增生。在胚胎干細(xì)胞或間充質(zhì)細(xì)胞等的分化研究中，經(jīng)常將這種生長(zhǎng)因子添加到培養(yǎng)液中，本發(fā)明使用了 10ng/ml的EGF促進(jìn)了 AECs的體外擴(kuò)增中可能發(fā)揮著重要作用。
[0027]與現(xiàn)有的分離羊膜上皮細(xì)胞的方法相比，本方法的優(yōu)點(diǎn)為:操作簡(jiǎn)單快捷，克服了組織塊法獲取細(xì)胞時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、細(xì)胞量過(guò)少及易摻雜大量成纖維細(xì)胞和單純胰蛋白酶分步多次消化法步驟繁瑣、對(duì)細(xì)胞損傷大的不足。本發(fā)明中，羊膜被剪成小塊，使得每小塊羊膜在相同的條件下，獲得的AECs均衡一致，利用本發(fā)明的方法，每張羊膜可分離得到的羊膜上皮細(xì)胞量在17?108，細(xì)胞活率在90%以上，并能夠長(zhǎng)時(shí)間的保存而不失其活性，解決了此類資源得不到高效利用的現(xiàn)狀，保證了臨床應(yīng)用中干細(xì)胞的數(shù)量和質(zhì)量。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0028]圖1為實(shí)施例3獲得的原代羊膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)三天后的AECs的細(xì)胞動(dòng)態(tài)圖；
[0029]圖2為實(shí)施例3獲得的原代羊膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)五天后的AECs的細(xì)胞動(dòng)態(tài)圖；
[0030]圖3為實(shí)施例3獲得的AECs傳代培養(yǎng)三天后的細(xì)胞動(dòng)態(tài)圖；
[0031]圖4為實(shí)施例3獲得的AECs傳代培養(yǎng)后的SSEA-4的流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果圖；
[0032]圖5為實(shí)施例3獲得的AECs傳代培養(yǎng)后的HLA-DR的流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果圖。

【具體實(shí)施方式】
[0033]為更近一步闡述本發(fā)明為達(dá)成預(yù)定目的所采取的技術(shù)手段及功效，以下結(jié)合附圖及較佳實(shí)施例，對(duì)依據(jù)本發(fā)明提出的一種人羊膜上皮細(xì)胞分離的方法，其【具體實(shí)施方式】、特征及其功效，說(shuō)明如下。
[0034]標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基:是900ml DMEM培養(yǎng)基中加入丙酮酸鈉0.llOOg、L-谷氨酰胺0.1461g、β -巰基乙醇3.8574g、10mM非必需氨基酸1ml ;所述的10mM非必需氨基酸配方為L(zhǎng)-丙氨酸1500mg/L、L-天門冬酰胺890mg/L、L-天冬氨酸1330mg/L、L_谷氨酸1470mg/L、甘氨酸 750mg/L、L-脯氨酸 1150mg/L 和 L-絲氨酸 1050mg/L ；
[0035]完全培養(yǎng)基:是在上述標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基中添加胎牛血清和EGF ;添加后胎牛血清的體積濃度為10%，EGF的濃度為10ng/ml。
[0036]實(shí)施例1:
[0037]首先取經(jīng)家屬同意的且HIV、甲肝、乙肝以及梅毒等血清學(xué)反應(yīng)顯示為陰性的剖宮產(chǎn)分娩產(chǎn)婦的新鮮胎盤一個(gè)，由0.4g的KCl、0.06g的ΚΗ2Ρ04、0.132g的Na2HPO4.12H20、8g的NaCl、0.35g的NaHCO3U.0g的D-葡萄糖、0.1Og的鏈霉素、0.06g的青霉素用水定容為IL的方法制作而成基礎(chǔ)平衡鹽溶液反復(fù)沖洗干凈，去除胎盤表面殘留的血液；從胎盤上分離羊膜，并將其放入基礎(chǔ)平衡鹽溶液中反復(fù)漂洗，并重復(fù)兩次；將干凈的羊膜組織剪碎，獲得直徑為Imm的羊膜組織塊；在剪碎的組織塊中加入30ml0.2%IV膠原酶(gibco，批號(hào):1177238)，并置于37°C下孵育2小時(shí)；接著將混合了膠原酶的組織塊在200g下離心5分鐘，吸出膠原酶消化液；再加入15ml0.25%胰蛋白酶(sigma，批號(hào):110M7362V) /0.02%EDTA消化液，在37°C振蕩消化20分鐘后，用含10%胎牛血清(Hyclone，批號(hào):DUK0355) 30ml標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基終止消化；將消化后的組織塊經(jīng)200目濾網(wǎng)過(guò)濾；將濾液在200g下離心5分鐘，棄上清，使用3ml含10%胎牛血清完全培養(yǎng)基重新懸浮均勻細(xì)胞，獲得羊膜上皮細(xì)胞。一張羊膜獲得的上皮細(xì)胞數(shù)為17?108。按16?107cell/ml的細(xì)胞密度進(jìn)行接種，并置于5%C02、37°C培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)；48小時(shí)后換液，然后在5%C02 , 37°C培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)，等到細(xì)胞增生到90%融合后收集細(xì)胞并鑒定。
[0038]實(shí)施例2:
[0039]首先取經(jīng)家屬同意的且HIV、甲肝、乙肝以及梅毒等血清學(xué)反應(yīng)顯示為陰性的剖宮產(chǎn)分娩產(chǎn)婦的新鮮胎盤一個(gè)，用PBS溶液反復(fù)沖洗干凈，去除胎盤表面殘留的血液；從胎盤上分離羊膜，并將其放入PBS中反復(fù)漂洗，并重復(fù)兩次；將干凈的羊膜組織剪碎，獲得直徑為Imm的羊膜組織塊；在剪碎的組織塊中加入30ml0.2%IV膠原酶(gibco，批號(hào):1177238),并置于37°C下孵育2小時(shí)；接著將混合了膠原酶的組織塊在200g下離心5分鐘，吸出膠原酶消化液；再加入15ml0.25%胰蛋白酶(sigma，批號(hào):110M7362V) /0.02%EDTA消化液，在37°C振蕩消化20分鐘后，用含10%胎牛血清(Hyclone，批號(hào):DUK0355)的30ml標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基終止消化；將消化后的組織塊經(jīng)200目濾網(wǎng)過(guò)濾；將濾液在200g下離心5分鐘，棄上清，使用3ml含10%胎牛血清的完全培養(yǎng)基重新懸浮均勻細(xì)胞，獲得羊膜上皮細(xì)胞。一張羊膜獲得的上皮細(xì)胞數(shù)為17?108。按16?107cell/ml的細(xì)胞密度進(jìn)行接種，并置于5%C02、37°C培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)；48小時(shí)后換液，然后在5%C02、37°C培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)，等到細(xì)胞增生到90%融合后收集細(xì)胞并鑒定。
[0040]實(shí)施例3:
[0041]首先取經(jīng)家屬同意的且HIV、甲肝、乙肝以及梅毒等血清學(xué)反應(yīng)顯示為陰性的剖宮產(chǎn)分娩產(chǎn)婦的新鮮胎盤一個(gè)，由0.4g的KC1、0.06g的ΚΗ2Ρ04、0.132g的Na2HPO4.12H20、8g的NaCl,0.35g的NaHCO3U.0g的D-葡萄糖、0.20g的鏈霉素、0.12g的青霉素用水定容為IL的方法制作而成基礎(chǔ)平衡鹽反復(fù)沖洗干凈，去除胎盤表面殘留的血液；從胎盤上分離羊膜，并將其放入基礎(chǔ)平衡鹽溶液中反復(fù)漂洗，并重復(fù)兩次；將干凈的羊膜組織剪碎，獲得直徑為Imm的羊膜組織塊；在剪碎的組織塊中加入30ml0.2%IV膠原酶(gibco，批號(hào):1177238),并置于37°C下孵育2小時(shí)；接著將混合了膠原酶的組織塊在200g下離心5分鐘，吸出膠原酶消化液；再加入15ml0.25%胰蛋白酶(sigma，批號(hào):110M7362V)/0.0296EDTA消化液，在37°C振蕩消化20分鐘后，用含10%胎牛血清(Hyclone，批號(hào):DUK0355) 30ml標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基終止消化；將消化后的組織塊經(jīng)200目濾網(wǎng)過(guò)濾；將濾液在200g下離心5分鐘，棄上清，使用3ml含10%胎牛血清完全培養(yǎng)基重新懸浮均勻細(xì)胞，獲得羊膜上皮細(xì)胞。一張羊膜獲得的上皮細(xì)胞數(shù)為17?108。按16?107cell/ml的細(xì)胞密度進(jìn)行接種，并置于5%C02、37°C培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)；48小時(shí)后換液，然后在5%C02、37°C培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)，等到細(xì)胞增生到90%融合后收集細(xì)胞并鑒定。
[0042]實(shí)施例4:
[0043]實(shí)施例3獲得的羊膜上皮細(xì)胞按1:3傳代，并置于5%C02、37°C培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)；五天后，等到細(xì)胞增生到90%融合后，即將分離出的羊膜上皮細(xì)胞按1:3傳代進(jìn)行擴(kuò)增。連續(xù)傳代5代，細(xì)胞形態(tài)無(wú)明顯改變。
[0044]細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察:實(shí)施例3分離的原代羊膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)24小時(shí)后大部分細(xì)胞貼壁，剛貼壁的細(xì)胞呈橢圓形，遮光性強(qiáng)，隨后細(xì)胞胞質(zhì)逐漸展開，折光性減弱。細(xì)胞貼壁3天后生長(zhǎng)迅速，增殖明顯，細(xì)胞數(shù)量明顯增多，細(xì)胞進(jìn)入指數(shù)生長(zhǎng)期，如圖1。5天左右形成單層，細(xì)胞融合成片，呈膜狀生長(zhǎng)。細(xì)胞呈扁平不規(guī)程多角形，輪廓清晰，胞漿豐富，細(xì)胞呈圓形卵圓形，如圖2。傳代培養(yǎng)8小時(shí)左右細(xì)胞貼壁，3天即可形成良好的單層，如圖3。
[0045]實(shí)施例5:
[0046]用0.25%胰蛋白酶(sigma，批號(hào):110M7362V) /0.02%EDTA消化液消化貼壁的AECs，用無(wú)鈣鎂PBS洗2兩次后，取I X 16個(gè)/ml，加入FCM管中。加入待檢測(cè)的單克隆抗體SSEA-4 (BD，批號(hào):23713) 5μ 1，4°C避光孵育30分鐘，每隔10分鐘搖晃一次，使細(xì)胞與抗體充分接觸。用PBS洗2次，并重懸在400 μ I的PBS中，上流式細(xì)胞儀檢測(cè)。圖4為流式結(jié)果圖。從圖中可以看出本次實(shí)驗(yàn)得到SSEA-4陽(yáng)性細(xì)胞達(dá)到了 90.53%。
[0047]實(shí)施例6:
[0048]用0.25%胰蛋白酶(sigma，批號(hào):110M7362V) /0.02%EDTA消化液消化貼壁的AECs，用無(wú)鈣鎂PBS洗2兩次后，取I X 16個(gè)/ml，加入FCM管中。加入待檢測(cè)的單克隆抗體HLA-DR (BD，批號(hào):01742) 5 μ 1，4°C避光孵育30分鐘，每隔10分鐘搖晃一次，使細(xì)胞與抗體充分接觸。用PBS洗2次，并重懸在400 μ I的PBS中，上流式細(xì)胞儀檢測(cè)。圖5為流式結(jié)果圖。從圖中可以看出本次實(shí)驗(yàn)得到HLA-DR陽(yáng)性細(xì)胞只有9.49%，而我們知道AECs本身不表達(dá)HLA-DR，結(jié)合實(shí)施例5的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，最終證實(shí)本發(fā)明的方法可以得到高純度的羊膜上皮細(xì)胞。
[0049]在此說(shuō)明書中，本發(fā)明已參照其特定的實(shí)施例作了描述，但是，很顯然仍可以做出修改和變換而不背離本發(fā)明的精神和范圍。因此，本發(fā)明的說(shuō)明書和附圖被認(rèn)為是說(shuō)明性的而非限制性的。
【權(quán)利要求】
1.一種分離獲得羊膜上皮細(xì)胞的方法，其特征在于該方法為: 將羊膜組織加入膠原酶溶液孵育； 然后將羊膜組織加入胰蛋白酶溶液進(jìn)行消化； 終止消化并過(guò)濾； 將濾液離心后獲得羊膜上皮細(xì)胞。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離獲得羊膜上皮細(xì)胞的方法，其特征在于: 其中所述的膠原酶為IV膠原酶或II膠原酶； 其中膠原酶溶液是將Ig膠原酶溶解在500ml基礎(chǔ)平衡鹽溶液中得到的； 其中基礎(chǔ)平衡鹽溶液的制備是用0.4g的KC1、0.06g的ΚΗ2Ρ04、0.132g的Na2HPO4.12H20、8g 的 NaCl、0.35g 的 NaHC03、l.0g 的 D-葡萄糖、0.lOg-0.20g 的鏈霉素、0.06g-0.12g 的青霉素，用水定容為IL得到的； 其中胰蛋白酶溶液是將0.5g胰蛋白酶和0.04g EDTA溶解在200ml基礎(chǔ)平衡鹽溶液中--? 。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的分離獲得羊膜上皮細(xì)胞的方法，其特征在于包括如下步驟: 從胎盤上分離得到羊膜組織，用基礎(chǔ)平衡鹽溶液或PBS溶液沖洗后剪碎； 將羊膜組織中加入膠原酶溶液，37°C下孵育1-2小時(shí)； 然后將混合了膠原酶的組織塊在200g下離心5分鐘，棄掉上清液； 再加入胰蛋白酶溶液，在37°C振蕩消化10-20分鐘，用含10%胎牛血清的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基終止消化； 將消化后的組織塊經(jīng)200目濾網(wǎng)過(guò)濾； 將濾液在200g下離心5分鐘，棄上清，使用含10%胎牛血清的完全培養(yǎng)基重新懸浮均勻細(xì)胞，獲得羊膜上皮細(xì)胞。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的分離獲得羊膜上皮細(xì)胞的方法，其特征在于: 其中所述的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基，是900ml DMEM培養(yǎng)基中加入丙酮酸鈉0.1lOOg, L-谷氨酰胺.0.1461g、β -巰基乙醇3.8574g、10mM非必需氨基酸1ml ;所述的10mM非必需氨基酸配方為L(zhǎng)-丙氨酸1500mg/L、L-天門冬酰胺890mg/L、L-天冬氨酸1330mg/L、L_谷氨酸1470mg/L、甘氨酸 750mg/L、L-脯氨酸 1150mg/L 和 L-絲氨酸 1050mg/L ； 其中所述的完全培養(yǎng)基，是標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基中添加10%胎牛血清和EGF配制而成，添加后的胎牛血清的體積濃度為10%，EGF濃度為10ng/ml。
【文檔編號(hào)】C12N5/073GK104371971SQ201310357351
【公開日】2015年2月25日 申請(qǐng)日期:2013年8月15日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月15日
【發(fā)明者】吳明遠(yuǎn), 劉洋, 李建有, 胡少青, 張麗麗, 趙靜, 葉萌, 王浩鵬, 葉健, 孫迎秋, 袁文杰 申請(qǐng)人:協(xié)和華東干細(xì)胞基因工程有限公司