本發(fā)明屬藥物合成技術(shù)領(lǐng)域，涉及一類結(jié)構(gòu)新穎的6-氨基-4(3H)-喹唑啉酮衍生物以及其合成方法和在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用。

技術(shù)背景

阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)又稱早老性癡呆癥，目前已成為老年人群最為常見的癡呆類型，其在解剖與臨床事件中所占的比例達(dá)到50％-56％，也是目前在世界范圍內(nèi)導(dǎo)致老年人死亡的一大重要原因。阿爾茨海默病是一種神經(jīng)退行性疾病，目前已超過3500萬人口罹患該病，到2050年時(shí)預(yù)估全球每85人就有一人罹患本病，這些病人在確診后3到9年的時(shí)間內(nèi)會(huì)發(fā)生死亡。年齡增長(zhǎng)是導(dǎo)致患病最主要的因素，65歲以上的老年人每增長(zhǎng)5歲，其發(fā)病率增大一倍，85歲以上的老年人發(fā)病率高達(dá)1/3(Querfurth H W，LaFerla F M.NEnglJMed，2010，362：329.)。

目前，除了1％～5％的病患可以找到基因差異，大部分病患罹患阿爾茨海默病的原因仍然不明，現(xiàn)有幾種不同的假說試圖解釋阿爾茨海默病的病因，其中包括β-樣淀粉蛋白沉積說、膽堿能假說、自由基損傷假說、Tau蛋白過度磷酸化假說、Ca²⁺離子失衡假說、基因錯(cuò)義突變假說等?；谏鲜黾僬f，目前成功開發(fā)了兩類藥物：乙酰膽堿酯酶抑制劑與NMDA受體拮抗劑。乙酰膽堿酯酶抑制劑主要有包括他克林(tacrine，)(Davis K L，Powchick P.The Lancet，1995，345：625.)、多奈哌齊(donepezil，)(Kawakami Y，Inoue A，Kawai T，Wakita M，Sugimoto H，Hopfinger A.J Bioorg Med Chem 1996，4：1429)、利伐斯的明(rivastigmine，)(Enz A，Boddeke H，Gray J，Spiegel R，Prclin R.Ann NYAcad Sci，1991，640：272)和加蘭他敏(galanthamine，)(Greenblatt，H.M.，Kryger，G.，Lewis，T.，Silman，I.，&Sussman，J.L.Febs Letters，1999，463：321.)。NMDA受體拮抗劑主要是美金剛(memantine，)。石杉?jí)A甲(huperzineA，哈伯因)(Cheng D H，Ren H，Tang X C.Neuroreport，1996，8：97.)是由中國(guó)政府批準(zhǔn)的抗AD藥物，除了有乙酰膽堿酯酶抑制作用還有一定的拮抗NMDA受體的能力。乙酰膽堿酯酶抑制劑主要用于治療輕、中度AD，其中多奈哌齊還能治療重度AD。但由于上述乙酰膽堿酯酶只能減輕AD癥狀，且持續(xù)單一用藥會(huì)帶來療效下降及副作用增加的后果，所以迫切需要繼續(xù)發(fā)現(xiàn)和開發(fā)新型高效低毒的乙酰膽堿酯酶抑制劑(Bullock R.Br JPsychiatry，2002，180：135.)。

2003年，WO 2004/054985A1公開了4(3H)-喹唑啉酮衍生物的合成方法以及作為單胺氧化酶選擇性抑制劑的用途。2006年，中國(guó)專利CN1720238A公開了一種神經(jīng)活性化合物及其制備方法和作為藥物或獸藥的用途，其中公開了8-羥基-4(3H)-喹唑啉酮，并進(jìn)行了治療AD的I期臨床試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)能夠降低血漿中的Aβ。2009年，姜勇等(CN101357905A)公開了4-[3-氯-4-(3-氟-芐氧基)-苯胺基]-6-取代氨基-喹唑啉衍生物的制備方法。上述三篇相關(guān)性較強(qiáng)的專利中雖然公開了4(3H)-喹唑啉酮衍生物或喹唑啉衍生物，但并未涉及6-氨基-4(3H)-喹唑啉酮類衍生物，也會(huì)涉及其乙酰膽堿酯酶的抑制活性。

本發(fā)明公開了一類結(jié)構(gòu)新穎的6-氨基-4(3H)-喹唑啉酮類衍生物以及其合成方法和用途。通過在4(3H)-喹唑啉酮的6位引入氨基，可方便的衍生出多樣性結(jié)構(gòu)的化合物，具有三段式結(jié)構(gòu)特征，其中兩端分別與AChE的PAS位點(diǎn)及CAS位點(diǎn)有良好的相互作用力，中間的喹唑啉酮結(jié)構(gòu)能與AChE的活性口袋峽谷通道有良好的相互作用力，因而對(duì)AChE具有良好的抑制活性，可進(jìn)一步開發(fā)為同時(shí)作用于乙酰膽堿酯酶催化位點(diǎn)和外周陰離子位點(diǎn)的高效抗AD藥物。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一系列具有良好的乙酰膽堿酯酶抑制活性的新型6-氨基-4(3H)-喹唑啉酮衍生物，具體是三段式芳香結(jié)構(gòu)的6-氨基-4(3H)-喹唑啉酮衍生物。

本發(fā)明的另一目的為提供上述具有三段式結(jié)構(gòu)特點(diǎn)的6-氨基-4(3H)-喹唑啉酮衍生物的制備方法。

本發(fā)明的三段式芳香結(jié)構(gòu)的6-氨基-4(3H)-喹唑啉酮衍生物，具有通式(I)的結(jié)構(gòu)。

X為(CH₂)_n-1，n＝1-10；

R₁為CH₃(CH₂)_n-1CO，n＝1-10、Y-苯甲?；-苯乙?；?、Y-3-苯基丙?；?；

R₂為CH₃(CH₂)_n-1O，n＝1-10、Y-PhO、Y-PhNH、Y-C₅H₁₀N、(CH₃(CH₂)_n-1)₂N，n＝1-10、CH₃(CH₂)_n-1NH，1n＝1-10；

R₃為H、CH₃(CH₂)_n-1，n＝1-10、Y-Ph、Y-PhCH₂；

Y是各自獨(dú)立的選自H、F、Cl、Br、I、CN、NO₂、CF₃、OCF₃、SCF₃、OH、SH、NH₂、C_1-5-烷基、O-C_1-5-烷基、S-C_1-5-烷基、NHC_1-5烷基、N(C_1-5-烷基)₂、OCOC_0-5-烷基、SCOC_0-5-烷基、NHCOC_0-5-烷基。

式(I)中的各類基團(tuán)可以用生物電子等排體或者同系列基團(tuán)進(jìn)行替換。

具體反應(yīng)步驟如下：

本發(fā)明所涉及的新型化合物通過初步藥效學(xué)研究，結(jié)果顯示所述化合物具有良好的乙酰膽堿酯酶抑制活性，可進(jìn)一步研制開發(fā)成為治療阿爾茨海默病的新型藥物。

具體實(shí)施方法

以下實(shí)施例旨在說明本發(fā)明而不是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步限定。

實(shí)施例1

2-(6-苯甲酰胺基-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)乙酸乙酯(I₁)的制備

(1)5-硝基靛紅(III)的制備

-5℃的條件下，稱取5.9g靛紅(II)分批溶于裝有26mL的冷濃硫酸之中，緩慢滴加2mL發(fā)煙硝酸與3mL濃硫酸的混合液，并控制反應(yīng)溫度始終在0℃附近，滴加完畢后繼續(xù)反應(yīng)3h。反應(yīng)結(jié)束后倒入盛有100g碎冰的燒杯中，抽濾、冰水洗滌至中性，濾餅干燥后可得到6.4g橙紅色產(chǎn)物(III)，產(chǎn)率83.4％，熔點(diǎn)為250-251℃。

(2)2-氨基-5-硝基苯甲酸(IV)的制備

10℃的條件下，稱取3.3g 5-硝基靛紅(III，0.017mol)，緩慢加入到100mL(1mol/L)氫氧化鈉溶液中，攪 拌溶解完全后，控制反應(yīng)溫度10℃左右，緩慢滴加3％過氧化氫100mL(0.026mol)，滴加完后繼續(xù)攪拌3h，用冰乙酸調(diào)節(jié)pH＝3～4，抽濾得粗產(chǎn)物，少量水洗，干燥后得到黃色產(chǎn)物(IV)2.4g，產(chǎn)率76.7％，熔點(diǎn)為267-268℃。

(3)6-硝基-4(3H)-喹唑啉酮(Va)的制備

將2.55g(0.014mol)2-氨基-5-硝基苯甲酸(IV)加入15mL甲酰胺，于90℃攪拌至溶解，控制溫度在90-95℃，在劇烈攪拌下緩慢滴加5mL三氯氧磷。滴加完成后繼續(xù)攪拌20min，冷卻至室溫，倒入冷水中。待沉淀完全析出后，過濾，真空干燥，得到目標(biāo)化合物(Va)，產(chǎn)率55％，m.p.275-276℃。

(4)2-(6-硝基-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)乙酸乙酯(VIa)的制備

0℃條件下，將382mg(2mmol)6-硝基-4(3H)-喹唑啉酮(Va)溶解于10mL DMF中，緩慢加入NaH(2.4mmol)，在此溫度下繼續(xù)攪拌45min。隨后加入氯乙酸乙酯(2mmol)，緩慢升至室溫繼續(xù)反應(yīng)4h。反應(yīng)完成后，將反應(yīng)液倒入50mL冰水中，過濾，少量水洗滌，干燥，得產(chǎn)物(VIa)，產(chǎn)率55％，熔點(diǎn)為172-174℃。

(5)2-(6-氨基-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)乙酸乙酯(VIIa)的制備

稱取300mg VIa溶于6mL水和10mL乙醇的混合液中，室溫?cái)嚢柘录尤?.8g鐵粉，然后緩慢滴加0.6mL濃鹽酸。室溫下繼續(xù)攪拌反應(yīng)2.5h，反應(yīng)完成后用堿液調(diào)節(jié)pH至9，抽濾，濾液減壓濃縮，乙酸乙酯溶液萃取，用飽和的NaCl溶液洗滌3次，無水硫酸鈉干燥，得到210mg還原產(chǎn)物(VIIa)，產(chǎn)率62％。

(6)2-(6-苯甲酰胺基-4(3H)-喹唑啉酮3-基)乙酸乙酯(I₁)的制備

稱取210mg 2-(6-氨基-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)乙酸乙酯(VIIa)溶于15mL無水三氯甲烷中，室溫下，加0.55g碳酸鉀，然后滴加含有111μl苯甲酰氯溶于15mL三氯甲烷的溶液，室溫下繼續(xù)攪拌反應(yīng)5h。加入等體積26％氨水淬滅反應(yīng)。分相，水相用三氯甲烷(2×40mL)萃取，合并三氯甲烷相，飽和食鹽水水洗至中性。有機(jī)相經(jīng)干燥、過濾后，蒸干溶劑，殘留物經(jīng)柱層析過柱，用2∶1乙酸乙酯/環(huán)己烷洗脫，得到120mg產(chǎn)物(I₁)，產(chǎn)率為40％，熔點(diǎn)為187-189℃。

實(shí)施例2

2-(6-(3-甲基苯甲酰)氨基-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)乙酸乙酯(I₂)的制備

室溫下，稱取210mg 2-(6-氨基-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)乙酸乙酯(VIIa)溶于15mL無水三氯甲烷中，加0.55g碳酸鉀，將126μl間甲基苯甲酰氯溶于5mL三氯甲烷中，并經(jīng)滴液漏斗滴加至反應(yīng)體系中。按I₁制備方法，得到140mg產(chǎn)物(I₂)，產(chǎn)率為45％，熔點(diǎn)為170-172℃。

實(shí)施例3

2-(6-(3-氯苯甲酰)氨基-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)乙酸乙酯(I₃)的制備

室溫下，取的稱取210mg 2-(6-氨基-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)乙酸乙酯(VIIa)溶于15mL無水三氯甲烷中，加入0.55g(4mmol)K₂CO₃。將135μl間氯苯甲酰氯溶于5mL三氯甲烷中，并經(jīng)滴液漏斗滴加至反應(yīng)體系中。按I₁制備方法，得到110mg產(chǎn)物(I₃)，產(chǎn)率為34％，熔點(diǎn)為101-103℃。

實(shí)施例4

2-(6-(2-甲氧基苯甲酰)氨基-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)乙酸乙酯(I₄)的制備

于室溫條件下，稱取210mg 2-(6-氨基-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)乙酸乙酯(VIIa)溶于15mL無水三氯甲烷中，加入0.55g(4mmol)K₂CO₃。將150μl鄰甲氧基苯甲酰氯溶于5mL三氯甲烷中，并經(jīng)滴液漏斗滴加至反應(yīng)體系中。按I₁制備方法，得到135mg產(chǎn)物(I₄)，產(chǎn)率為41％，熔點(diǎn)為171-173℃。

實(shí)施例5

2-(6-苯乙酰氨基-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)乙酸乙酯(I₅)的制備

冰水浴中，稱取210mg 2-(6-氨基-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)乙酸乙酯(VIIa)溶于5mL無水DMF中，加入0.1mL DMAP，然后加入135μl苯乙酰氯，緩慢升溫至室溫，繼續(xù)攪拌反應(yīng)10h。反應(yīng)結(jié)束時(shí)，加入50mL水淬滅。用二氯甲烷(3×30mL)萃取，合并有機(jī)相，并用飽和食鹽水洗滌(2×80mL)。有機(jī)相用無水硫酸鎂干燥、蒸干溶劑，殘留物經(jīng)柱層析過柱，用2∶1乙酸乙酯/環(huán)己烷洗脫，得到100mg產(chǎn)物(I₅)，產(chǎn)率32％，熔點(diǎn)為151-153℃。

實(shí)施例6

2-(6-(2-氯苯乙酰氨基)-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)乙酸乙酯(I₆)的制備

冰水浴中，稱取210mg 2-(6-氨基-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)乙酸乙酯(VIIa)溶于5mL無水DMF中，加入0.1mL DMAP，然后加入鄰氯苯乙酰氯，緩慢升溫至室溫，繼續(xù)攪拌反應(yīng)10h。反應(yīng)結(jié)束時(shí)，加入50mL水淬滅。用二氯甲烷(3×30mL)萃取，合并有機(jī)相，并用飽和食鹽水洗滌(2×80mL)。有機(jī)相用無水硫酸鎂干燥、蒸干溶劑，殘留物經(jīng)柱層析過柱，用2∶1乙酸乙酯/環(huán)己烷洗脫，得到110mg產(chǎn)物(I₆)，產(chǎn)率為32％，熔點(diǎn)為167-168℃

實(shí)施例7

2-(6-((4-甲氧基苯乙?；?氨基)-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)乙酸乙酯(I₇)的制備

冰水浴中，稱取210mg 2-(6-氨基-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)乙酸乙酯(VIIa)溶于5mL無水DMF中，加0.1mL DMAP，然后加入150μl對(duì)甲氧基苯乙酰氯，緩慢升溫至室溫，繼續(xù)攪拌反應(yīng)10h。反應(yīng)結(jié)束時(shí)，加入50mL水淬滅。用二氯甲烷(3×30mL)萃取，合并有機(jī)相，并用飽和食鹽水洗滌(2×80mL)。有機(jī)相用無水硫酸鎂干燥、蒸干溶劑，殘留物經(jīng)柱層析過柱，用2∶1乙酸乙酯/環(huán)己烷洗脫，得到80mg產(chǎn)物(I₇)，產(chǎn)率為25％，熔點(diǎn)為144-146℃。

實(shí)施例8

2-(6-((3-苯丙?；?氨基)-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)乙酸乙酯(I₈)的制備

冰水浴中，稱取210mg 2-(6-氨基-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)乙酸乙酯(VIIa)溶于5mL無水DMF中，加0.1mL DMAP，然后加入145μl 3-苯基丙酰氯，緩慢升溫至室溫，繼續(xù)攪拌反應(yīng)10h。反應(yīng)結(jié)束時(shí)，加入50mL水淬滅。用二氯甲烷(3×30mL)萃取，合并有機(jī)相，并用飽和食鹽水洗滌(2×80mL)。有機(jī)相用無水硫酸鎂干燥。最后采用乙酸乙酯過柱，純化得到120mg產(chǎn)物(I₈)，產(chǎn)率為38％，熔點(diǎn)127-129℃。

實(shí)施例9

2-[2-甲基-6-苯甲?；?4(3H)-喹唑啉酮-3-基)乙酸乙酯(I₉)的制備

(1)2-甲基-6-硝基-4(3H)-喹唑啉酮(Vb)的制備

稱量2.6g 2-氨基-5-硝基苯甲酸(IV)溶于15mL醋酐中，于125℃油浴中攪拌反應(yīng)4h，冷卻，蒸干溶劑，加入氨水(28％，30mL)繼續(xù)回流反應(yīng)5h。反應(yīng)結(jié)束后，冷卻至室溫，過濾并用少量乙醇和水洗滌，干燥得到淺黃色固體(Vb)，產(chǎn)率45％，m.p.298-299℃。

(2)2-[2-甲基-6-苯甲酰基-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)乙酸乙酯(I₉)的制備

同實(shí)施例1，室溫條件下，加入200mg 2-甲基-6-硝基-4(3H)-喹唑啉酮(Vb)，按I₁制備方法，得到95mg產(chǎn)物(I₉)，產(chǎn)率為34％，熔點(diǎn)102-105℃。

實(shí)施例10

2-(2-甲基-6-((3-甲基苯甲酰基)氨基)-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)乙酸乙酯(I₁₀)的制備

同實(shí)施例2，室溫條件下，加入200mg 2-甲基-6-硝基-4(3H)-喹唑啉酮(Vb)，按I₁制備方法，得到105mg產(chǎn)物(I₁₀)，產(chǎn)率為36％，熔點(diǎn)80-83℃。

實(shí)施例11

2-(2-甲基-6-((3-氯苯甲?；?氨基)-4(3H)-喹唑啉酮3-基)乙酸乙酯(I₁₁)的制備

同實(shí)施例3，室溫條件下，加入200mg 2-甲基-6-硝基-4(3H)-喹唑啉酮(Vb)，按I₁制備方法，得到85mg產(chǎn)物(I₁₁)，產(chǎn)率為36％，熔點(diǎn)94-96℃。

實(shí)施例12

2-(2-甲基-6-((2-甲氧基苯甲?；?氨基)-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)乙酸乙酯(I₁₂)的制備

同實(shí)施例4，室溫條件下，加入200mg 2-甲基-6-硝基-4(3H)-喹唑啉酮(Vb)，按I₁制備方法，得到112mg產(chǎn)物(I₁₂)，產(chǎn)率為35％，熔點(diǎn)182-184℃。

實(shí)施例13

2-(2-甲基-6-((苯乙?；?氨基)-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)乙酸乙酯(I₁₃)的制備

制備方法同實(shí)施例5，室溫條件下，加入200mg 2-甲基-6-硝基-4(3H)-喹唑啉酮(Vb)，按I₁制備方法，得到116mg產(chǎn)物(I₁₃)，產(chǎn)率為40％，熔點(diǎn)163-165℃。

實(shí)施例14

2-(2-甲基-6-((2-氯苯乙?；?氨基]-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)乙酸乙酯(I₁₄)的制備

制備方法同實(shí)施例5，室溫條件下，加入200mg 2-甲基-6-硝基-4(3H)-喹唑啉酮(Vb)，按I₁制備方法，得到121mg產(chǎn)物(I₁₄)，產(chǎn)率為36％，熔點(diǎn)183-185℃。

實(shí)施例15

2-(2-甲基-6-(4-甲氧基-苯乙?；?氨基]-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)乙酸乙酯(I₁₅)的制備

制備方法同實(shí)施例5，室溫條件下，加入200mg 2-甲基-6-硝基-4(3H)-喹唑啉酮(Vb)，按I₁制備方法，得到130mg產(chǎn)物(I₁₅)，產(chǎn)率為41％，熔點(diǎn)146-148℃。

實(shí)施例16

2-(2-甲基-6-((3-苯丙?；?氨基]-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)乙酸乙酯(I₁₆)的制備

制備方法同實(shí)施例5，室溫條件下，加入200mg 2-甲基-6-硝基-4(3H)-喹唑啉酮(Vb)，按I₁制備方法，得到100mg產(chǎn)物(I₁₆)，產(chǎn)率為32％，熔點(diǎn)166-169℃。

實(shí)施例17

2-(6-(苯甲?；?氨基]-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)-N-苯基乙酰胺(I₁₇)的制備

(1)N-苯基-2-氯乙酰胺(X)的制備

將0.18mL(2mmol)苯胺溶于5mL二氯甲烷中，再加入0.33mL(4mmol)三乙胺，在低溫(5℃)下攪拌5min，再慢慢加入0.18mL(2.4mmol)氯乙酰氯，在5℃下繼續(xù)攪拌反應(yīng)1h，將混合液濃縮至干，得粗品，而后加入冷水，抽濾，水洗滌，可得白色N-苯基-2-氯乙酰胺固體。產(chǎn)物用乙醇重結(jié)晶，得白色片狀晶體(X)。

(2)2-(6-硝基-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)-N-苯基乙酰胺(VIII)的制備

稱取0.48g 6-硝基-4(3H)-喹唑啉酮(Va)，溶于30mLDMF溶液中，并加入0.69g(5mmol)K₂CO₃，110℃油浴條件下，攪拌30min，稍冷加入0.46g N-苯基-2氯乙酰胺繼續(xù)反應(yīng)2h。反應(yīng)結(jié)束時(shí)，冷卻至室溫，加入200mL冷水，過濾，固體依次用少量水和乙醇洗滌。干燥得到0.65g產(chǎn)物(VIII)。產(chǎn)率為80％，熔點(diǎn)271-273℃。

(3)2-(6-氨基-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)-N-苯基乙酰胺(IX)的制備

將400mg 2-(6-氨基-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)-N-苯基乙酰胺(IX)溶于6mL水和20mL乙醇的混合液中，室溫?cái)嚢柘录尤?_g鐵粉，然后緩慢滴加1.0mL濃鹽酸。室溫下繼續(xù)攪拌反應(yīng)2.5h，反應(yīng)完成后加入一定量的堿液調(diào)節(jié)pH至10，抽濾，濾液減壓濃縮，乙酸乙酯溶液萃取，用飽和的NaCl溶液洗滌2次，無水硫酸鈉干燥，得到240mg還原產(chǎn)物(IX)，產(chǎn)率為61％，熔點(diǎn)235-238℃。

(4)I₁₇的制備

于室溫條件下，取120mg 2-(6-氨基-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)-N-苯基乙酰胺(IX)溶于5mLDMF溶液中，加入0.1mL DMAP和55μl苯甲酰氯，繼續(xù)攪拌反應(yīng)6h。反應(yīng)完成后，加入40mL冰水以淬滅反應(yīng)，再用二氯甲烷(3×30mL)萃取，合并有機(jī)相，用少量26％氨水洗滌有機(jī)相，水洗至中性。有機(jī)相經(jīng)干燥、過濾后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去三氯甲烷，殘留物經(jīng)柱層析過柱，用乙酸乙酯洗脫，得到30mg產(chǎn)物(I₁₇)，產(chǎn)率為20％，熔點(diǎn)281-283℃。

實(shí)施例18

2-(6-(3-氯苯甲酰基)氨基)-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)-N-苯基乙酰胺(I₁₈)的制備

于室溫條件下，取120mg 2-(6-氨基-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)-N-苯基乙酰胺(IX)溶于5mL DMF溶液中，加入0.1mL DMAP和60μl間氯苯甲酰氯，繼續(xù)攪拌反應(yīng)6h。按I₁₇制備方法，得到35mg產(chǎn)物(I₁₈)，產(chǎn)率為23％，熔點(diǎn)270-272℃

實(shí)施例19

2-(6-(2-甲氧基苯甲?；?氨基)-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)-N-苯基乙酰胺(I₁₉)的制備

于室溫條件下，取120mg 2-(6-氨基-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)-N-苯基乙酰胺(IX)溶于5mL DMF溶液中，加入0.1mL DMAP和70μl鄰甲氧基苯甲酰氯，繼續(xù)攪拌反應(yīng)6h。按I₁₇制備方法，得40mg產(chǎn)物(I₁₉)，產(chǎn)率為25％，熔點(diǎn)99-100℃。

實(shí)施例20

2-(6-苯乙酰氨基]-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)-N-苯基乙酰胺(I₂₀)的制備

于室溫條件下，取120mg 2-(6-氨基-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)-N-苯基乙酰胺(IX)溶于5mL DMF溶液中，加入0.1mL DMAP和80μl苯乙酰氯，繼續(xù)攪拌反應(yīng)6h。按I₁₇制備方法，得到36mg產(chǎn)物(I₂₀)，25％，熔點(diǎn)281-283℃。

實(shí)施例21

2-(6-(4-甲氧基苯乙?；?氨基)-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)-N-苯基乙酰胺(I₂₁)的制備

于室溫條件下，取120mg 2-(6-氨基-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)-N-苯基乙酰胺(IX)溶于5mL DMF溶液中，加入0.1mLDMAP和85μl對(duì)甲氧基苯乙酰氯，繼續(xù)攪拌反應(yīng)6h。按I₁₇制備方法，得到41mg產(chǎn)物(I₂₁)，產(chǎn)率為47％，熔點(diǎn)213-217℃。

實(shí)施例22

2-(6-苯丙酰氨基]-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)-N-苯基乙酰胺(I₂₂)的制備

于室溫條件下，取120mg2-(6-氨基-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)-N-苯基乙酰胺(IX)溶于5mLDMF溶液中，加入0.1mL DMAP和66μl 3-苯基丙酰氯，繼續(xù)攪拌反應(yīng)6h。按I₁₇制備方法，得到31mg產(chǎn)物(I₂₂)，產(chǎn)率為37％，熔點(diǎn)209-211℃。

實(shí)施例23

2-(6-乙酰氨基)-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)-N-苯基乙酰胺(I₂₃)的制備

于室溫條件下，取120mg 2-(6-氨基-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)-N-苯基乙酰胺(IX)溶于5mL DMF溶液中，加入0.1mL DMAP和100μl乙酰氯，繼續(xù)攪拌反應(yīng)6h。按I₁₇制備方法，得到42mg產(chǎn)物(I₂₃)，產(chǎn)率為40％，熔點(diǎn)＞290℃

實(shí)施例24

N，N-二乙基-2-(6(3甲基苯甲酰基)氨基)4(3H)-喹唑啉酮-3-基)乙酰胺(I₂₄)的制備

(1)N，N-二乙基-2-氯乙酰胺的制備

將0.18mL(2mmol)的二乙胺溶于5mL二氯甲烷中，再加入0.55g(4mmol)K₂CO₃，在低溫(5℃)下攪拌5min，再慢慢加入0.18mL(2.4mmol)氯乙酰氯，在5℃下繼續(xù)攪拌反應(yīng)1h，過濾，將混合液濃縮至干，得N，N-二乙基-2-氯乙酰胺溶液。

(2)N，N二乙基-2-(6-硝基-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)乙酰胺

稱取0.48g(2.5mmol)6-硝基-4(3H)-喹唑啉酮，溶于30mL DMF溶液中，并加入0.69g(5mmol)K₂CO₃，于110℃油浴中攪拌30min，稍冷后加入N，N-二乙基-2-氯乙酰胺(5mmol)繼續(xù)反應(yīng)7h。冷卻至室溫，加入200mL冷水，過濾固體，用少量水洗滌，干燥得到0.4g產(chǎn)物，產(chǎn)率76％，熔點(diǎn)157-159℃。

(3)N，N-二乙基-2-(6-氨基-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)乙酰胺

稱取420mg N，N-二乙基-2-(6-硝基-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)乙酰胺溶于6mL水和20mL乙醇的混合液中，室溫?cái)嚢柘录尤?g鐵粉，然后緩慢滴加1.0mL濃鹽酸。室溫下繼續(xù)攪拌反應(yīng)2.5h，反應(yīng)完成后加入用堿液調(diào)節(jié)pH至10，抽濾，濾液減壓濃縮，乙酸乙酯溶液萃取，用飽和NaCl溶液洗滌2次，無水硫酸鈉干燥，得到250mg還原產(chǎn)物，熔點(diǎn)為232-235℃。

(4)I₂₄的制備

于室溫條件下，取120mg N，N-二乙基-2-(6-氨基-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)乙酰溶于5mL DMF，加入0.1mL DMAP和90μl間甲基苯甲酰氯，繼續(xù)攪拌反應(yīng)6h。加入40mL冰水以淬滅反應(yīng)，再用二氯甲烷(3×30mL)萃取，合并有機(jī)相，用少量26％氨水洗滌有機(jī)相，水洗至中性。有機(jī)相經(jīng)干燥、過濾后，蒸干二氯甲烷，殘留物經(jīng)柱層析過柱，用乙酸乙酯洗脫，得到35mg產(chǎn)物(I₂₄)，產(chǎn)率為20％，熔點(diǎn)241-243℃。

實(shí)施例25

N，N-二乙基-2-(6-(2-甲氧基苯甲?；?氨基)-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)乙酰胺(I₂₅)的制備

于室溫條件下，取120mg N，N-二乙基-2-(6-氨基-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)乙酰溶于5mL DMF，加入0.1mL DMAP和71μl鄰甲氧基苯甲酰氯，繼續(xù)攪拌反應(yīng)6h。制備方法同I₂₄，得到38mg產(chǎn)物(I₂₅)，產(chǎn)率為21％，熔點(diǎn)216-219℃。

實(shí)施例26

3-[2-氧代-2-(1-哌啶基)乙基]-6-(3-甲基苯甲?；?氨基-4(3H)-喹唑啉酮(I₂₆)的制備

(1)2-氯-1-(1-哌啶基)乙酮的制備

將0.18mL(2mmol)的哌啶溶于5mL二氯甲烷中，加入0.55g(4mmol)K₂CO₃，在低溫(5℃)下攪拌5min，再慢慢加入0.18mL(2.4mmol)氯乙酰氯，在5℃下繼續(xù)攪拌反應(yīng)1h，過濾，將混合液濃縮至干，得2-氯-1-(1-哌啶基)乙酮溶液。

(2)3-[2-氧代-2-(1-哌啶基)乙基]-6-硝基-4(3H)-喹唑啉酮

稱取0.48g(2.5mmol)6-硝基-4(3H)-喹唑啉酮，溶于30mL DMF溶液中，并加入0.69g(5mmol)的K₂CO₃，在110℃油浴中攪拌30min，稍冷后加入2-氯-1-(1-哌啶基)乙酮(5mmol)繼續(xù)反應(yīng)7h。冷卻至室溫，加入200mL冷水，過濾，用少量水洗滌，干燥，得到0.6g產(chǎn)物，產(chǎn)率為75％，熔點(diǎn)244-246℃。

(3)3-[2-氧代-2-(1-哌啶基)乙基]-6-氨基-4(3H)喹唑啉酮

稱取450mg 3-[2-氧代-2-(1-哌啶基)乙基]-6-硝基-4(3H)-喹唑啉酮溶于6mL水和20mL乙醇的混合液中，室溫?cái)嚢柘录尤?g鐵粉，然后緩慢滴加1.0mL濃鹽酸。室溫下繼續(xù)攪拌反應(yīng)2.5h，反應(yīng)完成后用堿液調(diào)節(jié)pH至10，抽濾，濾液減壓濃縮，乙酸乙酯溶液萃取，用飽和的NaCl溶液洗滌2次，無水硫酸鈉干燥，得到290mg還原產(chǎn)物，熔點(diǎn)為230-233℃。

(4)I₂₆的制備

于室溫條件下，取上120mg 3-[2-氧代-2-(1-哌啶基)乙基]-6-氨基-4(3H)喹唑啉酮溶于5mL DMF，加入0.1mL DMAP和76μl間甲基苯甲酰氯，繼續(xù)攪拌反應(yīng)6h，用40mL冰水以淬滅反應(yīng)，再用二氯甲烷(3×30mL)萃取，合并有機(jī)相，用少量26％氨水洗滌有機(jī)相，水洗至中性。有機(jī)相經(jīng)干燥、過濾后，蒸干二氯甲烷，殘留物經(jīng)柱層析過柱，用乙酸乙酯洗脫，得到45mg產(chǎn)物(I₂₆)，產(chǎn)率為27％，熔點(diǎn)217-220℃。

實(shí)施例27

3-[2-氧代-2-(1-哌啶基)乙基]-6-(2-甲氧基苯甲?；?氨基-4(3H)-喹唑啉酮(I₂₇)的制備

于室溫條件下，取上120mg 3-[2-氧代-2-(1-哌啶基)乙基]-6-氨基-4(3H)喹唑啉酮溶于5mL DMF，加入0.1mLDMAP和86μl鄰甲氧基苯甲酰氯，繼續(xù)攪拌反應(yīng)6h。制備方法同實(shí)施例I₂₆得到43mg產(chǎn)物(I₂₇)，產(chǎn)率為24％，熔點(diǎn)228-230℃。

實(shí)施例28

N-丙基-2-(6-(3-甲基苯甲?；?氨基)-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)乙酰胺(I₂₈)的制備

(1)N-丙基-2-氯乙酰胺的制備

將0.18mL(2mmol)的丙胺溶于5mL二氯甲烷中，加入0.55g(4mmol)K₂CO₃，在低溫(5℃)下攪拌5min，再慢慢加入0.18mL(2.4mmol)氯乙酰氯，在5℃下繼續(xù)攪拌反應(yīng)1h，過濾，將混合液濃縮至干，可得N-丙基-2-氯乙酰胺溶液。

(2)N-丙基-2-(6-硝基-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)乙酰胺的制備

稱取0.48g(2.5mmol)6-硝基-4(3H)-喹唑啉酮，溶于30mL DMF中，并加入0.69g(5mmol)的K₂CO₃，于110℃油浴中攪拌30min，稍冷后加入N-丙基-2-氯乙酰胺(5mmol)繼續(xù)反應(yīng)7h。冷卻至室溫，加入200mL冷水，過濾，再用少量水洗滌，干燥，得到0.42g產(chǎn)物，產(chǎn)率為34％，熔點(diǎn)251-253℃。

(3)N-丙基-2-(6-氨基-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)乙酰胺的制備

往配有機(jī)械攪拌裝置的100mL三頸燒瓶中，稱取390mg N-丙基-2-(6-硝基-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)乙酰胺溶于6mL水和20mL乙醇的混合液中，室溫?cái)嚢柘录尤?g鐵粉，然后緩慢滴加1.0mL濃鹽酸。室溫下繼續(xù)攪拌反應(yīng)2.5h，反應(yīng)完成后用堿液調(diào)節(jié)pH至10，抽濾，濾液減壓濃縮，乙酸乙酯溶液萃取，用飽和的NaCl溶液洗滌2次，無水硫酸鈉干燥，得到230mg還原產(chǎn)物，熔點(diǎn)225-228℃。

(4)I₂₈的制備

于室溫條件下，取100mgN-丙基-2-(6-氨基-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)乙酰胺溶于5mLDMF，加入0.1mL DMAP和96μl間甲基苯甲酰氯，繼續(xù)攪拌反應(yīng)6h。用40mL冰水以淬滅反應(yīng)，再用二氯甲烷(3×30mL)萃取，合并有機(jī)相，用少量26％氨水洗滌有機(jī)相，水洗至中性。有機(jī)相經(jīng)干燥、過濾后，蒸干二氯甲烷，殘留物經(jīng)柱層析過柱，用乙酸乙酯洗脫，得到45mg產(chǎn)物(I₂₈)，產(chǎn)率為31％，熔點(diǎn)170-173℃。

實(shí)施例29

N-丙基-2-(6-(2-甲氧基苯甲酰基)氨基)-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)乙酰胺(I₂₉)的制備

于室溫條件下，取100mgN-丙基-2-(6-氨基-4(3H)-喹唑啉酮-3-基)乙酰胺溶于5mLDMF，加入0.1mLDMAP和100μl間甲基苯甲酰氯，繼續(xù)攪拌反應(yīng)6h。制備方法同實(shí)施例I₂₈，得到41mg產(chǎn)物(I₂₉)，產(chǎn)率為27％，熔點(diǎn)231-234℃?；衔锘钚詼y(cè)試結(jié)果

乙酰膽堿酯酶抑制活性的測(cè)試方法是采用常規(guī)Ellman法(Ellman G L，Courtney K D，F(xiàn)eatherstone R M.Biochemical pharmacology，1961，7：88)。Ellman法主要依據(jù)的原理如下：真性乙酰膽堿酯酶可以水解硫代乙酰膽堿生成硫代膽堿與乙酸。硫代膽堿可以與5，5-二巰基-雙(2-硝基苯甲酸)(巰基顯色劑)反應(yīng)生成對(duì)稱三硝基苯(TNB)黃色化合物?？梢砸罁?jù)生成的對(duì)稱三硝基苯顏色的深淺來比色定量硫代膽堿，從而反映出乙酰膽堿酶活力。乙酰膽堿酯酶抑制活性所采用的T-CHE測(cè)試盒(50T/24樣)由南京建成生物工程研究所提供；果蠅真性乙酰膽堿酯酶酶源(220U/g)，由山東京蓬生物藥物有限公司提供；陽性對(duì)照物鹽酸多奈哌齊(M＝415.95)由大連美侖生物技術(shù)有限公司提供。

本發(fā)明中化合物的乙酰膽堿酯酶抑制活性結(jié)果如下表(以鹽酸多奈哌齊為陽性對(duì)照，單位：nM)。