本發(fā)明涉及異喹啉酮(isoquinolinone)衍生物，特別是其作為藥物尤其是在治療癌癥中的用途，用于制備它們的合成方法，和含有這種化合物的藥物組合物。
背景技術(shù)：
受體酪氨酸激酶中的突變?cè)谠S多癌癥的發(fā)病機(jī)理中占據(jù)非常核心的作用。例如，在急性骨髓性白血病中FLT3經(jīng)常突變(約30％的患者)(AML:Gilliland等人Blood 2002,100,1532-1542)。這些突變促進(jìn)相應(yīng)的酶的酶活性，所述酶恰好是腫瘤細(xì)胞增殖和存活的關(guān)鍵驅(qū)動(dòng)子。由于這些原因，在腫瘤學(xué)中這些突變的蛋白質(zhì)代表經(jīng)驗(yàn)證的靶點(diǎn)。
現(xiàn)在已知AML有三種主要的FLT3活化突變：在約20％的患者中的FLT3-ITD(內(nèi)部串聯(lián)重復(fù))，在約6至8％的患者中的FLT3-TKD(酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域)，和罕見的在近膜區(qū)(juxtamembrane)和細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域中的精確突變(punctual mutation)(2％:Kayser等人Leukemia&Lymphoma 2014,55,243-255)。
最新一代FLT3抑制劑的近期的臨床評(píng)價(jià)已經(jīng)在FLT3突變的AML中顯示出有前途的結(jié)果。雖然令人鼓舞，但這些應(yīng)答仍然不完全、短暫以及與高復(fù)發(fā)率有關(guān)(Kayser等人Leukemia&Lymphoma 2014,55,243-255)。
復(fù)發(fā)是由多種機(jī)制引起的。FLT3受體內(nèi)的繼發(fā)突變產(chǎn)生對(duì)所施用的抑制劑的耐受和替代的(alternate)信號(hào)傳導(dǎo)通路的活化，所述信號(hào)傳導(dǎo)通路繞過(by-pass)被抑制的激酶，并重新激活FLT3的下游效應(yīng)子。
此外，鑒于自由循環(huán)的白血病細(xì)胞可能對(duì)TKI(酪氨酸激酶抑制劑)相對(duì)敏感，位于患者骨髓中的細(xì)胞，特別是白血病干細(xì)胞(LSC)可以從有利的生存基質(zhì)微環(huán)境中獲益，這使得它們對(duì)治療較不敏感，且更易于復(fù)發(fā)(Weisberg等人Leukemia 2012,26,2233-2244)。在骨髓保護(hù)區(qū)(sanctuary)中存在的存活因子中，IL-6/JAK/STAT通路已經(jīng)被提出作為與突變的FLT3相關(guān)的AML中目前TKI的復(fù)發(fā)率的主要貢獻(xiàn)者(Bhatia等人Blood 2014,123,2826-2837)。
JAK和FLT3抑制劑的藥物組合已經(jīng)顯示出協(xié)同作用，以及克服基質(zhì)誘導(dǎo)的耐受建立的能力(Weisberg等人Leukemia 2012,26,2233-2244)；從實(shí)驗(yàn)上強(qiáng)調(diào)了FLT3-JAK雙重抑制劑的增加的醫(yī)療益處的建議。
為了使副作用最小化并增加耐受性，相比于目前的較小選擇性的藥物，預(yù)計(jì)對(duì)野生型FLT3同種型具有最小活性同時(shí)對(duì)突變的同種型具有最大功效的藥物可呈現(xiàn)出改進(jìn)。
綜合地，這些數(shù)據(jù)表明新的且更有效的FLT3-JAK雙重抑制劑可以證明為具有高風(fēng)險(xiǎn)AML的患者提供更好的結(jié)果。
因此，本發(fā)明提供具有作為JAK抑制劑和FLT3抑制劑的雙重活性的化合物。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
因此，本發(fā)明涉及一種下式(I)的化合物：
或其藥學(xué)上可接受的鹽和/或溶劑化物，
其中：
-X選自O(shè)、NH和S，
-R0為H、鹵素(F、Cl、Br或I)、(C1-C6)烷基、(C1-C6)鹵代烷基、(C1-C6)烷氧基或(C1-C6)鹵代烷氧基，
-R1選自H和(C1-C3)烷基，
-R2、R3、R5、R7、R8和R9彼此獨(dú)立地選自H、鹵素(F、Cl、Br或I)、硝基(NO2)、氰基(CN)、R10、OR11、SR12、S(O)R13、SO2R14、NR15R16、C(O)R17、CO2R18、OC(O)R19、C(O)NR20R21、NR22C(O)R23、和3至7元飽和的或不飽和的雜環(huán)，所述雜環(huán)包含一至三個(gè)選自O(shè)、N和S的雜原子，任選被選自鹵素(F、Cl、Br或I)、硝基(NO2)、氰基(CN)、氧代(＝O)、(C1-C6)烷基、OH、CO2H、(C1-C6)烷氧基、CO2-(C1-C6)烷基和NR24R25的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代，
-R4和R6彼此獨(dú)立地選自H、鹵素(F、Cl、Br或I)、硝基(NO2)、氰基(CN)、R10、OR11、SR12、S(O)R13、SO2R14、NR15R16、C(O)R17、CO2R18、OC(O)R19、C(O)NR20R21、NR22C(O)R23、和3至7元飽和的或不飽和的雜環(huán)，所述雜環(huán)包含一至三個(gè)選自O(shè)、N和S的雜原子，任選被選自鹵素(F、Cl、Br或I)、硝基(NO2)、氰基(CN)、氧代(＝O)、(C1-C6)烷基、OH、CO2H、(C1-C6)烷氧基、CO2-(C1-C6)烷基和NR24R25的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代，或者
R4和R6一起形成包含4至10個(gè)碳原子的烴鏈，其任選被選自鹵素(F、Cl、Br或I)和(C1-C6)烷基的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代，其中飽和烴鏈的一個(gè)或多個(gè)，尤其是一個(gè)至五個(gè)不相鄰的碳原子任選被O、S或NR30替代，優(yōu)選被O替代，
-R10、R11、R12、R13、R14、R17、R18、R19、R22、R23和R30彼此獨(dú)立地為H或任選被選自鹵素(F、Cl、Br或I)、硝基(NO2)、氰基(CN)、OH、CO2H、(C1-C6)烷氧基、CO2-(C1-C6)烷基和NR26R27的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代的(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基或(C2-C6)炔基，
-R15、R16、R20和R21彼此獨(dú)立地為H或任選被選自鹵素(F、Cl、Br或I)、硝基(NO2)、氰基(CN)、OH、CO2H、(C1-C6)烷氧基、CO2-(C1-C6)烷基和NR26R27的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代的(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基或(C2-C6)炔基，或者
R15和R16和/或R20和R21連同攜帶它們的氮原子一起形成3至7元飽和的或不飽和的雜環(huán)，所述雜環(huán)除氮原子以外任選包含一個(gè)或兩個(gè)選自O(shè)、N和S的雜原子，任選被選自鹵素(F、Cl、Br或I)、硝基(NO2)、氰基(CN)、氧代(＝O)、(C1-C6)烷基、OH、CO2H、(C1-C6)烷氧基、CO2-(C1-C6)烷基和NR28R29的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代，和
-R24、R25、R26、R27、R28和R29彼此獨(dú)立地為H或(C1-C6)烷基，或者
R24和R25和/或R26和R27和/或R28和R29連同攜帶它們的氮原子一起形成3至7元飽和的或不飽和的雜環(huán)，所述雜環(huán)除氮原子以外任選包含一個(gè)或兩個(gè)選自O(shè)、N和S的雜原子，任選被選自鹵素(F、Cl、Br或I)、氧代(＝O)和(C1-C6)烷基的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代。
對(duì)于本發(fā)明的目的，術(shù)語“藥學(xué)上可接受的”是指可用于制備藥物組合物的，并且對(duì)于藥物用途通常是安全且無毒的。
在本發(fā)明的框架內(nèi)，術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽和/或溶劑化物”是指化合物的鹽和/或溶劑化物，其是如上面所定義的藥學(xué)上可接受的，并且其具有相應(yīng)化合物的藥理活性。
藥學(xué)上可接受的鹽包含：
(1)與無機(jī)酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸和磷酸等形成的酸加成鹽；或者與有機(jī)酸如乙酸、苯磺酸、富馬酸、葡庚糖酸(glucoheptonic)、葡萄糖酸、谷氨酸、乙醇酸、羥基萘甲酸、2-羥基乙磺酸、乳酸、馬來酸、蘋果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘康酸(muconic)、2-萘磺酸、丙酸、琥珀酸、二苯甲?；?L-酒石酸、酒石酸、對(duì)甲苯磺酸、三甲基乙酸和三氟乙酸等形成的酸加成鹽，和
(2)當(dāng)化合物中存在的酸質(zhì)子被金屬離子如堿金屬離子、堿土金屬離子或鋁離子替代時(shí)形成的鹽，或者與有機(jī)堿或無機(jī)堿配位時(shí)形成的鹽?？山邮艿挠袡C(jī)堿包含二乙醇胺、乙醇胺、N-甲基葡糖胺、三乙醇胺、氨基丁三醇等?？山邮艿臒o機(jī)堿包含氫氧化鋁、氫氧化鈣、氫氧化鉀、碳酸鈉和氫氧化鈉。
用于本發(fā)明化合物的治療用途的可接受的溶劑化物包括常規(guī)的溶劑化物，如由于溶劑的存在，而在本發(fā)明化合物的制備的最后步驟期間形成的那些。作為示例，可以提及由于水(這些溶劑化物也被稱作水合物)或乙醇的存在而形成的溶劑化物。
如本發(fā)明所使用，術(shù)語“鹵素”是指溴、氯、碘或氟。
如本發(fā)明所使用，術(shù)語“(C1-C3)烷基”是指含有1至3個(gè)碳原子的直鏈或支鏈飽和烴鏈，因此包括甲基、乙基、正丙基和異丙基。
如本發(fā)明所使用，術(shù)語“(C1-C6)烷基”是指含有1至6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈飽和烴鏈，包括但不限于甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、正己基等。
如本發(fā)明所使用，術(shù)語“(C1-C6)鹵代烷基”是指被一個(gè)或多個(gè)鹵原子，特別是一個(gè)或多個(gè)氟原子取代的如上面所定義的(C1-C6)烷基。其可以特別地為三氟甲基。
如本發(fā)明所使用，術(shù)語“(C2-C6)烯基”是指含有2至6個(gè)碳原子且包含至少一個(gè)雙鍵的直鏈或支鏈不飽和烴鏈，包括但不限于乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基等。
如本發(fā)明所使用，術(shù)語“(C2-C6)炔基”是指含有2至6個(gè)碳原子且包含至少一個(gè)三鍵的直鏈或支鏈不飽和烴鏈，包括但不限于乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基等。
如本發(fā)明所使用，術(shù)語“(C1-C6)烷氧基”是指經(jīng)由氧原子與分子結(jié)合的如上面所定義的(C1-C6)烷基，包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、正己氧基等。
如本發(fā)明所使用，術(shù)語“(C1-C6)鹵代烷氧基”是指被一個(gè)或多個(gè)鹵原子，特別是一個(gè)或多個(gè)氟原子取代的如上面所定義的(C1-C6)烷氧基。其可以特別地為三氟甲氧基。
如本發(fā)明所使用，術(shù)語“(C1-C6)烷基氨基”是指式-NHAlk的基團(tuán)，其中Alk表示如上面所定義的(C1-C6)烷基。其可以為例如甲基氨基、乙基氨基、正丙基氨基、異丙基氨基、正丁基氨基、異丁基氨基、仲丁基氨基、叔丁基氨基、正戊基氨基、正己基氨基等。
如本發(fā)明所使用，術(shù)語“二(C1-C6)烷基氨基”是指式-NHAlk1Alk2的基團(tuán)，其中Alk1和Alk2彼此獨(dú)立地表示如上面所定義的(C1-C6)烷基。其可以為例如二甲基氨基、二乙基氨基、乙基甲基氨基、正丙基甲基氨基、異丙基甲基氨基、正丁基甲基氨基、異丁基甲基氨基、仲丁基甲基氨基、叔丁基甲基氨基、正戊基甲基氨基、正己基甲基氨基等。
如本發(fā)明所使用，術(shù)語“((C1-C6)烷基)-羰基氧基”是指式-OCOAlk的基團(tuán)，其中Alk表示如上面所定義的(C1-C6)烷基。其可以為例如甲基羰基氧基(乙酰氧基)、乙基羰基氧基、正丙基羰基氧基、異丙基羰基氧基、正丁基羰基氧基、異丁基羰基氧基、仲丁基羰基氧基、叔丁基羰基氧基、正戊基羰基氧基、正己基羰基氧基等。
如本發(fā)明所使用，術(shù)語“((C1-C6)烷基)-羰基氨基”是指式-NHCOAlk的基團(tuán)，其中Alk表示如上面所定義的(C1-C6)烷基。其可以為例如甲基羰基氨基、乙基羰基氨基、正丙基羰基氨基、異丙基羰基氨基、正丁基羰基氨基、異丁基羰基氨基、仲丁基羰基氨基、叔丁基羰基氨基、正戊基羰基氨基、正己基羰基氨基等。
如本發(fā)明所使用，術(shù)語“((C1-C6)烷基)-羰基((C1-C6)烷基)氨基)”是指式-NAlk1COAlk2的基團(tuán)，其中Alk1和Alk2彼此獨(dú)立地表示如上面所定義的(C1-C6)烷基。其可以為例如(甲基羰基)甲基氨基，(甲基羰基)乙基氨基，(乙基羰基)甲基氨基，(乙基羰基)乙基氨基，正丙基羰基甲基氨基，異丙基羰基甲基氨基，正丁基羰基甲基氨基，異丁基羰基甲基氨基，仲丁基羰基甲基氨基，叔丁基羰基甲基氨基，正戊基羰基甲基氨基，正己基羰基甲基氨基等。
如本發(fā)明所使用，術(shù)語“芳基”是指優(yōu)選包含6至10個(gè)碳原子且包含一個(gè)或多個(gè)稠環(huán)的芳香族烴基如，例如苯基或萘基。有利地，其將為苯基。
如本發(fā)明所使用，術(shù)語“芳基-(C1-C6)烷基”是指經(jīng)由如上面所定義的(C1-C6)烷基與分子結(jié)合的如上面所定義的芳基。特別地，其為芐基。
如本發(fā)明所使用，術(shù)語“(C1-C6)烷基-芳基”是指經(jīng)由如上面所定義的芳基與分子結(jié)合的如上面所定義的(C1-C6)烷基。特別地，其可以為甲苯基(CH3Ph)。
如本發(fā)明所使用，術(shù)語“3至7元雜環(huán)”是指3至7元烴環(huán)，其中一個(gè)至三個(gè)，優(yōu)選一個(gè)或兩個(gè)碳原子已被選自O(shè)、N和S，優(yōu)選選自O(shè)和N的雜原子替代。其尤其包括以下環(huán)：氮丙啶、氮雜環(huán)丁烷、氧雜環(huán)丁烷、硫氧雜環(huán)丁烷(thiooxetane)、吡咯烷、吡咯啉、四氫呋喃、二氫呋喃、四氫噻吩、二氫噻吩、哌啶、二氫吡啶、四氫吡啶、吡喃、二氫吡喃、四氫吡喃、噻喃(thiopyrane)、二氫噻喃(dihydrothiopyrane)、四氫噻喃(tetrahydrothiopyrane)、嗎啉、硫代嗎啉、哌嗪、氮雜環(huán)庚烷(azepane)、二氮雜環(huán)庚烷(diazepane)、咪唑、咪唑啉、吡咯、吡唑、吡啶、吡嗪、噠嗪、六氫噠嗪(piperidazine)和嘧啶。
如本發(fā)明所使用，術(shù)語“不飽和的”雜環(huán)是指包含一個(gè)或多個(gè)雙鍵但無芳香性的雜環(huán)。
有利地，X為氧原子或硫原子，優(yōu)選氧原子。
R0更特別地為H或鹵素，尤其為H。
R1更特別地為氫原子或甲基。
當(dāng)R4和R6一起形成鏈時(shí)，該鏈為烴鏈，優(yōu)選為飽和的，包含任選被選自鹵素(F、Cl、Br或I)和(C1-C6)烷基的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代的4至10個(gè)碳原子，其中飽和烴鏈的一個(gè)或多個(gè)，尤其是一個(gè)至五個(gè)不相鄰的碳原子任選被O、S或NR30替代，優(yōu)選被O替代。
有利地，該鏈包含4至10個(gè)碳原子，其中飽和烴鏈的一個(gè)或多個(gè)，尤其是一個(gè)至五個(gè)不相鄰的碳原子任選被O、S或NR30替代，優(yōu)選被O替代。該鏈可以更特別地為直鏈。
由R4和R6一起形成的這種鏈可以尤其為式-X1-A-X2-的鏈，其中：
-X1和X2彼此獨(dú)立地為O、S或NR30，且優(yōu)選為O，和
-A為烴鏈，優(yōu)選為飽和的，其包含任選被選自鹵素(F、Cl、Br或I)和(C1-C6)烷基的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代的2至8個(gè)碳原子，其中飽和烴鏈的一個(gè)或多個(gè)，尤其是一個(gè)至五個(gè)不相鄰的碳原子任選被O、S或NR30替代，優(yōu)選被O替代。
特別地，A可以為包含2至8個(gè)碳原子的飽和烴鏈，其中飽和烴鏈的一個(gè)或多個(gè)，尤其是一個(gè)至五個(gè)不相鄰的碳原子任選被O、S或NR30替代，優(yōu)選被O替代。該鏈更特別地為直鏈。
優(yōu)選地，由R4和R6一起形成的鏈為式-(OCH2CH2)nO-的鏈，其中n表示1至3之間的整數(shù)，且更特別地n＝2。
在第一實(shí)施方案中，R2、R3、R5、R7、R8和R9彼此獨(dú)立地選自H、鹵素(F、Cl、Br或I)、硝基(NO2)、氰基(CN)、R10、OR11、SR12、S(O)R13、SO2R14、NR15R16、C(O)R17、CO2R18、OC(O)R19、C(O)NR20R21、NR22C(O)R23、和3至7元飽和的或不飽和的(尤其是5或6元飽和的)雜環(huán)，所述雜環(huán)包含一至三個(gè)選自O(shè)、N和S的雜原子，任選被選自鹵素(F、Cl、Br或I)、硝基(NO2)、氰基(CN)、氧代(＝O)、(C1-C6)烷基、OH、CO2H、(C1-C6)烷氧基、CO2-(C1-C6)烷基和NR24R25的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代，和
R4和R6彼此獨(dú)立地選自H、鹵素(F、Cl、Br或I)、硝基(NO2)、氰基(CN)、R10、OR11、SR12、S(O)R13、SO2R14、NR15R16、C(O)R17、CO2R18、OC(O)R19、C(O)NR20R21、NR22C(O)R23、和3至7元飽和的或不飽和的(尤其是5或6元飽和的)雜環(huán)，所述雜環(huán)包含一至三個(gè)選自O(shè)、N和S的雜原子，任選被選自鹵素(F、Cl、Br或I)、硝基(NO2)、氰基(CN)、氧代(＝O)、(C1-C6)烷基、OH、CO2H、(C1-C6)烷氧基、CO2-(C1-C6)烷基和NR24R25的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代，或者
R4和R6一起形成如前面所定義的鏈，如式-X1-A-X2-或-(OCH2CH2)nO-的鏈。
在第二個(gè)實(shí)施方案中，R2、R3、R5、R7、R8和R9彼此獨(dú)立地選自H、鹵素(F、Cl、Br或I)、硝基(NO2)、氰基(CN)、R10、OR11、NR15R16、C(O)R17、CO2R18、OC(O)R19、C(O)NR20R21、NR22C(O)R23、和3至7元飽和的或不飽和的(尤其是5或6元飽和的)雜環(huán)，所述雜環(huán)包含一至三個(gè)選自O(shè)和N的雜原子，任選被選自鹵素(F、Cl、Br或I)、硝基(NO2)、氰基(CN)、氧代(＝O)、(C1-C6)烷基、OH、CO2H、(C1-C6)烷氧基、CO2-(C1-C6)烷基和NR24R25的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代，和
R4和R6彼此獨(dú)立地選自H、鹵素(F、Cl、Br或I)、硝基(NO2)、氰基(CN)、R10、OR11、NR15R16、C(O)R17、CO2R18、OC(O)R19、C(O)NR20R21、NR22C(O)R23、和3至7元飽和的或不飽和的(尤其是5或6元飽和的)雜環(huán)，所述雜環(huán)包含一至三個(gè)選自O(shè)和N的雜原子，任選被選自鹵素(F、Cl、Br或I)、硝基(NO2)、氰基(CN)、氧代(＝O)、(C1-C6)烷基、OH、CO2H、(C1-C6)烷氧基、CO2-(C1-C6)烷基和NR24R25的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代，或者
R4和R6一起形成如前面所定義的鏈，如式-X1-A-X2-或-(OCH2CH2)nO-的鏈。
在第三個(gè)實(shí)施方案中，R2、R3、R5、R7、R8和R9彼此獨(dú)立地選自H、鹵素(F、Cl、Br或I)、硝基(NO2)、氰基(CN)、R10、OR11、NR15R16、OC(O)R19、NR22C(O)R23、和3至7元飽和的或不飽和的(尤其是5或6元飽和的)雜環(huán)，所述雜環(huán)包含一至三個(gè)選自O(shè)和N的雜原子，任選被選自鹵素(F、Cl、Br或I)、硝基(NO2)、氰基(CN)、氧代(＝O)、(C1-C6)烷基、OH、(C1-C6)烷氧基和NR24R25的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代，和
R4和R6彼此獨(dú)立地選自H、鹵素(F、Cl、Br或I)、硝基(NO2)、氰基(CN)、R10、OR11、NR15R16、OC(O)R19、NR22C(O)R23、和3至7元飽和的或不飽和的(尤其是5或6元飽和的)雜環(huán)，所述雜環(huán)包含一至三個(gè)選自O(shè)和N的雜原子，任選被選自鹵素(F、Cl、Br或I)、硝基(NO2)、氰基(CN)、氧代(＝O)、(C1-C6)烷基、OH、(C1-C6)烷氧基和NR24R25的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代，或者
R4和R6一起形成如前面所定義的鏈，如式-X1-A-X2-或-(OCH2CH2)nO-的鏈。
在上面提及的實(shí)施方案中，R5可以更特別地為H、鹵素(F、Cl、Br或I)、(C1-C6)烷基或(C1-C6)烷氧基；優(yōu)選為H或鹵素(F、Cl、Br或I)，如H或F。
在上面提及的實(shí)施方案中，R2、R3、R4、R6和R9可以彼此獨(dú)立地為H、鹵素(F、Cl、Br或I)、(C1-C6)烷基、OH、(C1-C6)烷氧基、((C1-C6)烷基)-羰基氧基、NO2、NH2、(C1-C6)烷基氨基、二(C1-C6)烷基氨基、((C1-C6)烷基)-羰基氨基或((C1-C6)烷基)-羰基((C1-C6)烷基氨基)；特別地為H、鹵素(F、Cl、Br或I)、OH、(C1-C6)烷氧基、NO2、NH2、(C1-C6)烷基氨基、二(C1-C6)烷基氨基、((C1-C6)烷基)-羰基氨基或((C1-C6)烷基)-羰基((C1-C6)烷基氨基)。更特別地，R6和R9彼此獨(dú)立地表示H、鹵素(F、Cl、Br或I)、OH、(C1-C6)烷氧基、NH2、(C1-C6)烷基氨基或二(C1-C6)烷基氨基，R2、R3和R4彼此獨(dú)立地表示H、鹵素(F、Cl、Br或I)、(C1-C6)烷基、OH、(C1-C6)烷氧基、((C1-C6)烷基)-羰基氧基、NO2、NH2、(C1-C6)烷基氨基、二(C1-C6)烷基氨基、((C1-C6)烷基)-羰基氨基或((C1-C6)烷基)-羰基((C1-C6)烷基氨基)；特別地表示H、鹵素(F、Cl、Br或I)、OH、(C1-C6)烷氧基、((C1-C6)烷基)-羰基氧基、NO2、NH2、(C1-C6)烷基氨基、二(C1-C6)烷基氨基、((C1-C6)烷基)-羰基氨基或((C1-C6)烷基)-羰基((C1-C6)烷基氨基)；尤其表示H、OH、(C1-C6)烷氧基、((C1-C6)烷基)-羰基氧基、NO2、NH2、(C1-C6)烷基氨基、二(C1-C6)烷基氨基、((C1-C6)烷基)-羰基氨基或((C1-C6)烷基)-羰基((C1-C6)烷基氨基)。更特別地，R2表示H，R3表示H、NO2、NH2、(C1-C6)烷基氨基、二(C1-C6)烷基氨基、((C1-C6)烷基)-羰基氨基或((C1-C6)烷基)-羰基((C1-C6)烷基氨基)，和R4表示H、OH、(C1-C6)烷氧基或((C1-C6)烷基)-羰基氧基；尤其表示H、OH或(C1-C6)烷氧基；如H或(C1-C6)烷氧基。
在上面的實(shí)施方案中，R7和R8可以彼此獨(dú)立地為H、鹵素(F、Cl、Br或I)、硝基(NO2)、氰基(CN)、R10、OR11、NR15R16、OC(O)R19、NR22C(O)R23、或5或6元飽和的或不飽和的(尤其是飽和的)雜環(huán)，所述雜環(huán)包含一個(gè)或兩個(gè)選自O(shè)和N的雜原子，任選被選自鹵素(F、Cl、Br或I)、氧代(＝O)、(C1-C6)烷基、OH、(C1-C6)烷氧基、NH2、(C1-C6)烷基氨基和二(C1-C6)烷基氨基的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代；尤其為H、鹵素(F、Cl、Br或I)、氰基(CN)、R10、OR11、NR15R16、或5或6元飽和的雜環(huán)，所述雜環(huán)包含一個(gè)或兩個(gè)選自O(shè)和N的雜原子，任選被選自鹵素(F、Cl、Br或I)、氧代(＝O)、(C1-C6)烷基、OH、(C1-C6)烷氧基、NH2、(C1-C6)烷基氨基和二(C1-C6)烷基氨基的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代；其中：
R10、R11、R19、R22和R23有利地彼此獨(dú)立地表示H或任選被選自鹵素(F、Cl、Br或I)、OH、(C1-C6)烷氧基和NR26R27的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代的(C1-C6)烷基，和
R15和R16有利地彼此獨(dú)立地表示H或任選被選自鹵素(F、Cl、Br或I)、OH、(C1-C6)烷氧基和NR26R27的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代的(C1-C6)烷基，或者
R15和R16連同攜帶它們的氮原子一起形成5或6元飽和的或不飽和的(優(yōu)選飽和的)雜環(huán)，所述雜環(huán)除攜帶R15和R16基團(tuán)的氮原子以外任選包含一個(gè)選自O(shè)和N的雜原子，任選被選自鹵素(F、Cl、Br或I)、氧代(＝O)、(C1-C6)烷基、OH、(C1-C6)烷氧基和NR28R29的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代。
在上面提及的對(duì)于R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9的實(shí)施方案中，所述雜環(huán)可以為3至7元飽和的或不飽和的雜環(huán)，其包含一個(gè)至三個(gè)，尤其是一個(gè)或兩個(gè)選自O(shè)、N和S，優(yōu)選選自O(shè)和N的雜原子。特別地，其為5至7元(尤其是5或6元)飽和的或不飽和的(優(yōu)選飽和的)雜環(huán)，其包含一個(gè)或兩個(gè)選自O(shè)和N的雜原子。所述雜環(huán)可以選自氮雜環(huán)丁烷、氧雜環(huán)丁烷、硫氧雜環(huán)丁烷、吡咯烷、吡咯啉、四氫呋喃、二氫呋喃、四氫噻吩、二氫噻吩、哌啶、二氫吡啶、四氫吡啶、吡喃、二氫吡喃、四氫吡喃、噻喃、二氫噻喃、四氫噻喃、嗎啉、硫代嗎啉、哌嗪、氮雜環(huán)庚烷、二氮雜環(huán)庚烷、咪唑、咪唑啉、吡咯、吡唑、吡啶、吡嗪、噠嗪、六氫噠嗪和嘧啶。特別地，所述雜環(huán)選自吡咯烷、吡咯啉、四氫呋喃、二氫呋喃、哌啶、二氫吡啶、四氫吡啶、吡喃、二氫吡喃、四氫吡喃、嗎啉、哌嗪、氮雜環(huán)庚烷、二氮雜環(huán)庚烷、咪唑、咪唑啉、吡咯、吡唑、吡啶、吡嗪、噠嗪、六氫噠嗪和嘧啶。所述雜環(huán)尤其可以選自吡咯烷、四氫呋喃、哌啶、四氫吡喃、嗎啉、哌嗪、氮雜環(huán)庚烷和二氮雜環(huán)庚烷。特別地，所述雜環(huán)選自吡咯烷、哌啶、嗎啉和哌嗪。
在上面提及的對(duì)于R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9的實(shí)施方案中，R10、R11、R12、R13、R14、R17、R18、R19、R22、R23和R30基團(tuán)如前面所定義，并且有利地彼此獨(dú)立地為H或(C1-C6)烷基，所述(C1-C6)烷基任選被選自鹵素(F、Cl、Br或I)、硝基(NO2)、氰基(CN)、OH、CO2H、(C1-C6)烷氧基、CO2-(C1-C6)烷基和NR26R27的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代，尤其被選自鹵素(F、Cl、Br或I)、硝基(NO2)、氰基(CN)、OH、(C1-C6)烷氧基和NR26R27的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代，特別地被選自鹵素(F、Cl、Br或I)、OH、(C1-C6)烷氧基和NR26R27的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代，和
R15、R16、R20和R21基團(tuán)如前面所定義，并且有利地彼此獨(dú)立地為H或(C1-C6)烷基，所述(C1-C6)烷基任選被選自鹵素(F、Cl、Br或I)、硝基(NO2)、氰基(CN)、OH、CO2H、(C1-C6)烷氧基、CO2-(C1-C6)烷基和NR26R27的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代，尤其被選自鹵素(F、Cl、Br或I)、硝基(NO2)、氰基(CN)、OH、(C1-C6)烷氧基和NR26R27的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代，特別地被選自鹵素(F、Cl、Br或I)、OH、(C1-C6)烷氧基和NR26R27的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代，或者
R15和R16和/或R20和R21連同攜帶它們的氮原子一起形成5至7元，尤其是5或6元飽和的或不飽和的(優(yōu)選飽和的)雜環(huán)，所述雜環(huán)除氮原子以外任選包含一個(gè)選自O(shè)和N的雜原子，任選被選自鹵素(F、Cl、Br或I)、硝基(NO2)、氰基(CN)、氧代(＝O)、(C1-C6)烷基、OH、CO2H、(C1-C6)烷氧基、CO2-(C1-C6)烷基和NR28R29的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代，尤其被選自鹵素(F、Cl、Br或I)、硝基(NO2)、氰基(CN)、氧代(＝O)、(C1-C6)烷基、OH、(C1-C6)烷氧基和NR28R29的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代，特別地被選自鹵素(F、Cl、Br或I)、氧代(＝O)、(C1-C6)烷基、OH、(C1-C6)烷氧基和NR28R29的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代。
當(dāng)R15和R16和/或R20和R21連同攜帶它們的氮原子一起形成雜環(huán)時(shí)，所述雜環(huán)可以選自氮雜環(huán)丁烷、吡咯烷、吡咯啉、哌啶、二氫吡啶、四氫吡啶、嗎啉、硫代嗎啉、哌嗪、氮雜環(huán)庚烷、二氮雜環(huán)庚烷、咪唑、咪唑啉、吡咯、吡唑和六氫噠嗪。特別地，所述雜環(huán)選自吡咯烷、吡咯啉、哌啶、二氫吡啶、四氫吡啶、嗎啉、哌嗪、氮雜環(huán)庚烷和二氮雜環(huán)庚烷。所述雜環(huán)尤其可以選自吡咯烷、哌啶、嗎啉、哌嗪、氮雜環(huán)庚烷和二氮雜環(huán)庚烷。特別地，所述雜環(huán)選自吡咯烷、哌啶、嗎啉和哌嗪。
在上面提及的對(duì)于R10至R23和R30的實(shí)施方案中，R24、R25、R26、R27、R28和R29基團(tuán)如前面所定義，并且有利地彼此獨(dú)立地為H或(C1-C6)烷基，或者
R24和R25和/或R26和R27和/或R28和R29連同攜帶它們的氮原子一起形成3至7元飽和的或不飽和的雜環(huán)，所述雜環(huán)除氮原子以外任選包含一個(gè)或兩個(gè)選自O(shè)、N和S的雜原子，任選被選自鹵素(F、Cl、Br或I)、氧代(＝O)和(C1-C6)烷基的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代；特別地形成5或6元飽和的雜環(huán)，所述雜環(huán)除氮原子以外任選包含一個(gè)選自O(shè)和N的雜原子，任選被選自鹵素(F、Cl、Br或I)、氧代(＝O)和(C1-C6)烷基的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代。
當(dāng)R24和R25和/或R26和R27和/或R28和R29連同攜帶它們的氮原子一起形成雜環(huán)時(shí)，所述雜環(huán)可以選自氮雜環(huán)丁烷、吡咯烷、吡咯啉、哌啶、二氫吡啶、四氫吡啶、嗎啉、硫代嗎啉、哌嗪、氮雜環(huán)庚烷、二氮雜環(huán)庚烷、咪唑、咪唑啉、吡咯、吡唑和六氫噠嗪。特別地，所述雜環(huán)選自吡咯烷、吡咯啉、哌啶、二氫吡啶、四氫吡啶、嗎啉、哌嗪、氮雜環(huán)庚烷和二氮雜環(huán)庚烷。所述雜環(huán)尤其可以選自吡咯烷、哌啶、嗎啉、哌嗪、氮雜環(huán)庚烷和二氮雜環(huán)庚烷。特別地，所述雜環(huán)選自吡咯烷、哌啶、嗎啉和哌嗪。
R30可以特別地表示H或(C1-C6)烷基。
根據(jù)第一個(gè)實(shí)施方案，R4和R6不一起形成如前面所定義的鏈。特別地，R4和R6彼此獨(dú)立地選自H、鹵素、硝基(NO2)、氰基(CN)、R10、OR11、NR15R16、OC(O)R19、NR22C(O)R23、和5至7元飽和的或不飽和的雜環(huán)，所述雜環(huán)包含一個(gè)或兩個(gè)選自O(shè)和N的雜原子，任選被選自鹵素、硝基(NO2)、氰基(CN)、氧代(＝O)、(C1-C6)烷基、OH、(C1-C6)烷氧基和NR24R25的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代。R4和R6更特別地選自H、鹵素(F、Cl、Br或I)、OR11和NR15R16；優(yōu)選選自H、鹵素(F、Cl、Br或I)、OH、(C1-C6)烷氧基、NH2、(C1-C6)烷基氨基和二(C1-C6)烷基氨基。
根據(jù)第二個(gè)實(shí)施方案，R4和R6一起形成如前面所定義的鏈，如式-X1-A-X2-的鏈，特別是如前面所定義的式-(OCH2CH2)nO-的鏈。
根據(jù)本發(fā)明的化合物可以特別地選自以下實(shí)施例的化合物C1至C47及其藥學(xué)上可接受的鹽和溶劑化物。
本發(fā)明還涉及一種如前面所定義的式(I)的化合物，其作為藥物，尤其是旨在用于治療癌癥的藥物的用途。
本發(fā)明還涉及如前面所定義的式(I)的化合物用于制備藥物，尤其是旨在用于治療癌癥的藥物的用途。
本發(fā)明還涉及一種用于治療癌癥的方法，其包括向需要其的人施用有效量的如前面所定義的式(I)的化合物。
在這種情況下，癌癥可以更特別地為結(jié)腸癌、乳腺癌、腎癌、肝癌、胰腺癌、前列腺癌、肺癌、卵巢癌、頭頸癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、淋巴瘤、白血病、炎性肌纖維母細(xì)胞瘤、骨髓增生異常綜合征或骨髓纖維變性。
本發(fā)明還涉及一種藥物組合物，其包含至少一種如前面所定義的式(I)的化合物，和至少一種藥學(xué)上可接受的賦形劑。
可以將活性成分與常規(guī)藥物載體混合以單一劑型施用至動(dòng)物和人。
根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物更特別地旨在被口服或腸胃外(例如靜脈內(nèi))施用，尤其是施用至包括人類的哺乳動(dòng)物。
用于施用的合適的單位劑型包括用于口服施用的形式，如片劑、明膠膠囊、粉劑、顆粒劑和口服溶液或混懸劑。
當(dāng)以片劑形式制備固體組合物時(shí)，將主要活性成分與藥物載體混合，所述藥物載體如明膠、淀粉、乳糖、硬脂酸鎂、滑石粉、阿拉伯樹膠等?？梢杂谜崽腔蛴闷渌线m的材料將片劑包衣，或者可以以這樣的方式處理它們，即使它們具有延長(zhǎng)的或延遲的活性和使它們連續(xù)釋放預(yù)定量的活性成分。
通過將活性成分與稀釋劑混合，并將獲得的混合物倒入軟或硬明膠膠囊中，來獲得明膠膠囊中的制劑。
糖漿或酏劑形式的制劑可以含有活性成分以及甜味劑、防腐劑或味道增強(qiáng)劑或合適的著色劑。
水分散性粉末劑或顆粒劑可以含有活性成分，所述活性成分與分散劑或潤(rùn)濕劑，或懸浮劑，和矯味劑或甜味劑混合。
對(duì)于腸胃外施用，使用含有藥理學(xué)相容的分散劑和/或潤(rùn)濕劑的水性混懸劑、等滲鹽水溶液或無菌且可注射溶液。
還可以將活性成分任選與一種或多種載體添加劑配制為微膠囊的形式。
可以以每天0.01mg至1000mg的劑量在藥物組合物中使用本發(fā)明的化合物，每天僅施用一劑或一天內(nèi)施用多劑，例如每天兩次。每日施用劑量有利地包含5mg至500mg，更有利地10mg至200mg。然而，可能需要使用在這些范圍之外的劑量，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以注意到該劑量。
根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物可以進(jìn)一步包含至少另一種活性成分，如抗癌劑。
本發(fā)明還涉及一種藥物組合物，其包含：
(i)至少一種如前面所定義的式(I)的化合物，和
(ii)至少另一種活性成分，如抗癌劑，
作為用于同時(shí)、分開或順序使用的組合產(chǎn)品。
本發(fā)明還涉及一種如前面所定義的藥物組合物，其用于治療癌癥的用途。
本發(fā)明還涉及一種用于治療癌癥的方法，其包括向需要其的人施用有效量的根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物。
本發(fā)明還涉及制備如前面所定義的式(I)的化合物的第一方法，其包括：
-下式(A)的化合物：
其中X、R0、R1、R2、R3和R4如前面所定義，R2、R3和R4基團(tuán)任選為受保護(hù)
的形式，且Hal為鹵素原子如Br，和
-下式(B)的化合物：
其中R5、R6、R7、R8和R9如前面所定義，所述R5至R9基團(tuán)任選為受保護(hù)的形式，
在堿的存在下的偶聯(lián)反應(yīng)，
然后當(dāng)R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和/或R9基團(tuán)為受保護(hù)的形式時(shí)，將它們脫保護(hù)。
在偶聯(lián)反應(yīng)中使用的堿可以特別地為無機(jī)堿，如K2CO3、Cs2CO3或Na2CO3。
該反應(yīng)可以尤其在室溫至150℃的溫度，尤其在50至120℃的溫度，典型地在約90℃的溫度進(jìn)行。
可以使用溶劑如ACN(乙腈)、DMA(二甲基乙酰胺)、DMF(二甲基甲酰胺)、丙酮或其混合物。其可以特別地為DMF。
在典型的實(shí)驗(yàn)中，使式(A)的化合物與過量的式(B)的化合物反應(yīng)。
在該反應(yīng)中，必須保護(hù)在式(A)和(B)的化合物之間的偶聯(lián)反應(yīng)條件下可以反應(yīng)的任何R2至R9基團(tuán)。通常尤其是以NO2基團(tuán)的形式保護(hù)NH2基團(tuán)。在這種情況下，脫保護(hù)步驟可以通過還原NO2基團(tuán)進(jìn)行，尤其是通過使用雷尼鎳或Pd/C在氫氣氛下在甲醇中的催化氫化；在NaSH的存在下在DMSO中；或在鐵粉的存在下在熱乙酸中。然而，可以使用任何其他的保護(hù)基，保護(hù)基和脫保護(hù)條件是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。
尤其可以通過下面所描述的方法1A至3A之一合成式(A)的中間體。
·方法1A：
主要在R1不為氫時(shí)使用該方法，其改編自在WO 2012/102985中所描述的方法。主要的改變涉及由脫鹵素的內(nèi)酯中間體和脫鹵素的內(nèi)酰胺逐步合成鹵代內(nèi)酰胺衍生物，所述脫鹵素的內(nèi)酰胺在單獨(dú)的后續(xù)反應(yīng)中被鹵化。最初，在報(bào)道中在一個(gè)一步反應(yīng)中進(jìn)行環(huán)化和鹵化。
因此，經(jīng)典地經(jīng)由如下所示例的Sonogashira反應(yīng)實(shí)現(xiàn)第一步。
典型地，在酸性催化劑如TFA(三氟乙酸)的存在下，在高沸點(diǎn)溶劑如甲苯中，通過加熱取代炔丙醇實(shí)現(xiàn)環(huán)化的第二步。
通過在催化劑如pTSA(對(duì)甲苯磺酸)的存在下，在加熱下內(nèi)酯與過量的對(duì)應(yīng)胺的反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)內(nèi)酯向內(nèi)酰胺的轉(zhuǎn)化。
在常規(guī)鹵化劑的存在下實(shí)現(xiàn)鹵化。溴化反應(yīng)的情況下，可以使用與離子機(jī)理相容的條件，用NBS(N-溴-琥珀酰亞胺)進(jìn)行反應(yīng)。
最后，可以使用熟知的氧化方法實(shí)現(xiàn)醇向醛的轉(zhuǎn)化。尤其可以在PCC(氯鉻酸吡啶鎓)的存在下在熱的二氯甲烷中進(jìn)行該反應(yīng)。
·方法2A：
可選地，可以如下列方案所報(bào)道，合成中間體(A)，其中Hal＝Br(中間體(A-i))。
●方法3A：
當(dāng)R1為氫時(shí)，優(yōu)選的合成路線為下面方案中所描述的路線。
最好地，在酸性催化劑如pTSA的存在下，在室溫使用氨飽和的THF(四氫呋喃)溶液進(jìn)行內(nèi)酯向內(nèi)酰胺的轉(zhuǎn)化。
在常規(guī)鹵化劑的存在下實(shí)現(xiàn)鹵化。當(dāng)Hal＝Br時(shí)，溴化優(yōu)選為不催化的，并用NBS在THF中進(jìn)行。
優(yōu)選在THF中使用戴斯-馬丁高碘烷進(jìn)行氧化步驟。
尤其可以通過下面所描述的方法1B和2B之一合成式(B)的中間體。
·方法1B：
如尤其在下面實(shí)施例中所描述，在熱的乙醇中將官能化的苯胺與氰胺和化學(xué)計(jì)量的(stoechiometric)硝酸反應(yīng)。
·方法2B：
可選地，通過對(duì)應(yīng)的苯胺與(Z)-(((叔丁氧羰基)亞氨基)(1H-吡唑-1-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯或另一種活化的脒試劑反應(yīng)，然后通過使用常規(guī)方法如在二氯甲烷中用三氟乙酸的脫保護(hù)步驟，可以逐步合成胍。
本發(fā)明還涉及制備如前面所定義的式(I)的化合物的第二方法，所述化合物中R4和R6一起形成如上面所定義的式-X1-A-X2-的鏈，所述方法包括：
-下式(II)的化合物：
其中X1、X2、R0、R1、R2、R3、R5、R7、R8和R9如前面所定義，和
-下式(III)的化合物：
LG1-A-LG2 (III)
其中A如前面所定義，且LG1和LG2彼此獨(dú)立地為離去基，
在堿的存在下的偶聯(lián)反應(yīng)。
如本發(fā)明所使用，術(shù)語“離去基”是指在親核取代反應(yīng)期間可以容易地被親核試劑替代的化學(xué)基團(tuán)，在本發(fā)明的情況中親核試劑為醇(即攜帶基團(tuán)OH的分子)、硫醇(即攜帶基團(tuán)SH的分子)或胺(即攜帶基團(tuán)NH的分子)。這種離去基可以特別地為鹵素原子或磺酸酯?；撬狨ヌ貏e地為–OSO2-R31基團(tuán)，其中R31表示(C1-C6)烷基、芳基、芳基-(C1-C6)烷基或(C1-C6)烷基-芳基，所述基團(tuán)任選被一個(gè)或多個(gè)鹵素原子如氟原子取代?；撬狨ビ绕淇梢詾榧谆撬狨?CH3-S(O2)O-)、三氟甲磺酸酯(CF3-S(O)2O-)或?qū)妆交撬狨?p-Me-C6H4-S(O)2O-)。
有利地，LG1和LG2彼此獨(dú)立地為鹵素原子如Br。
在偶聯(lián)反應(yīng)中使用的堿可以特別地為K2CO3、Cs2CO3或Na2CO3。
尤其可以通過前面所描述的方法制備式(II)的化合物，并且可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法制備式(III)的化合物。
在上面所描述的兩種方法中，可以進(jìn)行另外的保護(hù)/脫保護(hù)步驟或官能化步驟，這些步驟和它們的反應(yīng)條件是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。
可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法，如通過萃取、蒸發(fā)溶劑或通過沉淀或結(jié)晶(然后過濾)，將所獲得的化合物從反應(yīng)介質(zhì)中分離。
如果需要，還可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法，如通過重結(jié)晶、通過蒸餾、通過硅膠柱色譜法或通過高效液相色譜法(HPLC)純化化合物。
通過以下非限制性實(shí)施例闡明本發(fā)明。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例：
1、根據(jù)本發(fā)明的化合物的合成：
在以下實(shí)施例中使用以下縮寫：
Boc ＝ 叔丁氧羰基
br ＝ 寬峰
d ＝ 雙峰
DMF ＝ N,N-二甲基甲酰胺
DMSO ＝ N,N-二甲基亞砜
g ＝ 克
h或hr ＝ 小時(shí)
HPLC ＝ 高效液相色譜
Hz ＝ 赫茲
J ＝ 偶合常數(shù)
LCMS ＝ 液相色譜-質(zhì)譜
m ＝ 多重峰
M ＝ 摩爾
M+H+ ＝ 母質(zhì)譜峰加H+
mg ＝ 毫克
mL ＝ 毫升
mM ＝ 毫摩爾
mmol ＝ 毫摩爾
MS ＝ 質(zhì)譜
NBS ＝ N-溴-琥珀酰亞胺
nM ＝ 納摩爾
NMR ＝ 核磁共振
PCC ＝ 氯鉻酸吡啶鎓
Pd/C ＝ 鈀炭
ppm ＝ 百萬分之一
RT ＝ 室溫
s ＝ 單峰
sat. ＝ 飽和的
t ＝ 三重峰
TBS ＝ 叔丁基-二甲基-甲硅烷基
TEA ＝ 三乙胺
TFA ＝ 三氟乙酸
TLC ＝ 薄層色譜法
μL ＝ 微升
μM ＝ 微摩爾
1.1.中間體化合物的合成：
化合物A1:4-溴-2-甲基-7-硝基-1-氧代-1,2-二氫異喹啉-3-甲醛
步驟1:2-(3-羥基丙-1-炔-1-基)-5-硝基苯甲酸甲酯
向2-溴-5-硝基苯甲酸甲酯(30克，0.1162摩爾)的乙腈(300ml)溶液中加入丙-2-烯-1-醇(9.72克，0.1735摩爾)和TEA(23.48克，0.2325摩爾)。反應(yīng)混合物在氬氣下脫氣30分鐘。在氬氣下加入雙(三苯基膦)二氯化鈀(II)(2.4克，0.0034摩爾)和碘化銅(0.438克，0.0022摩爾)，并加熱至60℃保持2小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，加入水(150ml)，將固體過濾并用水(50ml×3)洗滌。將固體真空干燥以得到標(biāo)題化合物(25克，產(chǎn)率：92.14％)。
1H NMR(400MHz,MeOD):δ8.72(s,1H),8.39(dd,1J＝2.4Hz,8.8Hz,1H),7.81(d,J＝8.8Hz,1H),4.50(s,2H),3.99(s,3H),3.33-3.32(m,1H)ppm。
步驟2:3-(羥甲基)-7-硝基-1H-異色烯-1-酮
向2-(3-羥基丙-1-炔-1-基)-5-硝基苯甲酸甲酯(11.9克，0.050摩爾)的甲苯(120ml)溶液中加入TFA(4ml)，并將混合物加熱過夜回流。蒸發(fā)溶劑，并且將粗物質(zhì)通過柱色譜法(乙酸乙酯：己烷)純化以得到標(biāo)題化合物(7.5克，產(chǎn)率：83.32％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.77(s,1H),8.59(dd,1J＝2.4Hz,8.8Hz 1H),7.93(d,J＝8.8Hz,1H),6.96(s,1H),5.81(t,J＝6Hz,1H),4.35(d,J＝5.6Hz,2H)ppm。
步驟3:3-(羥甲基)-2-甲基-7-硝基異喹啉-1(2H)-酮
將3-(羥甲基)-7-硝基-1H-異色烯-1-酮(8.5克，0.038摩爾)在2M的甲胺的THF(60ml)溶液中的溶液于室溫?cái)嚢?小時(shí)。加入對(duì)甲苯磺酸(1g)，并將混合物于50℃攪拌2小時(shí)。真空蒸發(fā)溶劑，并加入水(80ml)。將固體過濾，用水(25ml×3)洗滌并真空干燥以得到標(biāo)題化合物(7.5，產(chǎn)率：83.32％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.92(s,1H),8.43(d,1J＝7.2Hz,1H),7.91(d,J＝9.2Hz,1H),6.90(s,1H),5.80(s,1H),4.59(s,2H),3.55(s,3H)ppm。
步驟4:4-溴-3-(羥甲基)-2-甲基-7-硝基異喹啉-1(2H)-酮
于0℃向3-(羥甲基)-2-甲基-7-硝基異喹啉-1(2H)-酮(7.4克，0.031摩爾)的THF(100ml)溶液中加入NBS(5.6克，0.0316摩爾)。將反應(yīng)混合物于50℃攪拌2小時(shí)。加入對(duì)甲苯磺酸(1.5g)，并于50℃攪拌2小時(shí)。真空蒸發(fā)溶劑，加入水(50ml)，將固體過濾并用水(25ml×3)洗滌。將固體物質(zhì)真空干燥以得到標(biāo)題化合物(7.0克，產(chǎn)率：70.76％)。
步驟5:化合物A1
于室溫向4-溴-3-(羥甲基)-2-甲基-7-硝基異喹啉-1(2H)-酮(7克，0.022摩爾)的二氯甲烷(100ml)溶液中加入PCC(7.2克，0.033摩爾)。將反應(yīng)混合物于40℃攪拌3小時(shí)，過濾，將固體用二氯甲烷(30ml×3)洗滌。將合并的濾液用水(25ml×3)和鹽水(25ml×2)洗滌。有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥并蒸發(fā)至干。將所得粗物質(zhì)通過柱色譜法(乙酸乙酯：己烷)純化以得到純的標(biāo)題A1化合物(1.5克，產(chǎn)率：21.57％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.20(s,1H),8.95(d,J＝2.4Hz,1H),8.66(dd,J＝2.4Hz,8.8Hz,1H),8.31(d,J＝9.2Hz,1H)3.61(s,3H)ppm。
化合物A2:4-溴-6-甲氧基-2-甲基-7-硝基-1-氧代-1,2-二氫異喹啉-3-甲醛
步驟1:2-溴-4,5-二硝基苯甲酸甲酯
于0℃將硝酸(15ml)滴加到2-溴-4-硝基苯甲酸甲酯(10克，0.03846摩爾)的硫酸(30ml)溶液中。將反應(yīng)混合物于50℃加熱1小時(shí)，冷卻并倒入冰冷的水(300ml)中。將固體過濾，用水(50ml×3)洗滌并真空干燥以得到標(biāo)題化合物(10克，產(chǎn)率：85.25％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.74(s,1H),8.63(s,1H),3.94(s,3H)ppm。
步驟2:2-溴-4-甲氧基-5-硝基苯甲酸甲酯
于0℃向2-溴-4,5-二硝基苯甲酸甲酯(10克，0.0327摩爾)的甲醇(80ml)溶液中滴加KOH(3.68克，0.0655摩爾)的甲醇(20ml)溶液。將反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。將溶劑蒸發(fā)至干，加入水(300ml)，將固體過濾并用水(50ml×3)洗滌。將固體真空干燥以得到標(biāo)題化合物(7克，產(chǎn)率：73.61％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.39(s,1H),7.76(s,1H),4.04(s,3H),3.86(s,3H)ppm。
步驟3:2-(3-羥基丙-1-炔-1-基)-4-甲氧基-5-硝基苯甲酸甲酯
向2-溴-4-甲氧基-5-硝基苯甲酸甲酯(4.7克，0.01482摩爾)的乙腈(50ml)溶液中加入丙-2-烯-1-醇(1.2克，0.0224摩爾)和TEA(2.9克，0.029摩爾)。將反應(yīng)混合物脫氣30分鐘并置于氬氣下。然后加入雙(三苯基膦)二氯化鈀(II)(0.31克，0.00044摩爾)和碘化銅(0.056克，0.00029摩爾)，將混合物加熱至90℃保持2小時(shí)。蒸發(fā)溶劑并加入水(150ml)。將固體過濾并用水(50ml×3)洗滌。將固體真空干燥以得到標(biāo)題化合物(3.7克，產(chǎn)率：94.11％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.55(s,1H),7.24(s,1H),4.61(d,J＝4.8Hz,2H),4.04(s,3H),3.94(s,3H),2.22(s,1H)ppm。
步驟4:3-(羥甲基)-6-甲氧基-7-硝基-1H-異色烯-1-酮
向2-(3-羥基丙-1-炔-1-基)-4-甲氧基-5-硝基苯甲酸甲酯(3.7克，0.0013摩爾)甲苯(50ml)溶液中加入TFA(2ml)，并且將混合物加熱至回流過夜。將溶劑蒸發(fā)至干，并且將所得粗物質(zhì)通過柱色譜法(乙酸乙酯：己烷)純化以得到標(biāo)題化合物(3.3克，產(chǎn)率：94.17％)。
LCMS:95.90％ESI-MS(m/z):249.9[M-1]-。
步驟5:3-(羥甲基)-6-甲氧基-2-甲基-7-硝基異喹啉-1(2H)-酮
向攪拌的3-(羥甲基)-6-甲氧基-7-硝基-1H-異色烯-1-酮(3.3克，0.015摩爾)在2M的甲胺的THF(30ml)溶液中的溶液中加入對(duì)甲苯磺酸(1g)。將混合物于50℃攪拌2小時(shí)。將溶劑在干燥下蒸發(fā)，加入水(50ml)，將由此得到的固體過濾并用水(25ml×3)洗滌。將固體真空干燥以得到標(biāo)題化合物(2.8克，產(chǎn)率：80.66％)。
步驟6:4-溴-3-(羥甲基)-6-甲氧基-2-甲基-7-硝基異喹啉-1(2H)-酮
于0℃向3-(羥甲基)-6-甲氧基-2-甲基-7-硝基異喹啉-1(2H)-酮(2.8克，0.0106摩爾)的THF(30ml)溶液中加入NBS(1.8克，0.0106摩爾)。將反應(yīng)混合物于50℃攪拌2小時(shí)。加入對(duì)甲苯磺酸(1.5g)，將混合物于50℃攪拌2小時(shí)。真空蒸發(fā)溶劑并加入水(50ml)。將固體過濾，用水(25ml×3)洗滌，并真空干燥以得到標(biāo)題化合物(2.5克，產(chǎn)率：68.76％)。
LCMS:84.33％ESI-MS(m/z):242.9[M+1]+。
步驟7:化合物A2
向4-溴-3-(羥甲基)-6-甲氧基-2-甲基-7-硝基異喹啉-1(2H)-酮(2.5克，0.0025摩爾)的THF(100ml)中的溶液中加入戴斯-馬丁高碘烷(5.9克，0.05摩爾)。將反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)，過濾并將殘余物用二氯甲烷(30ml×3)洗滌。將合并的濾液用飽和NaHCO3水溶液(25ml×3)和鹽水(25ml×2)洗滌。將合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥并在真空下蒸發(fā)以得到粗物質(zhì)。將由此得到的粗物質(zhì)通過柱色譜法(乙酸乙酯：己烷)純化以得到純的標(biāo)題化合物(1.7克，產(chǎn)率：68.40％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.18(s,1H),8.72(s,1H),7.66(s,1H),5.76(s,1H),4.14(s,3H),3.57(s,3H)ppm。
化合物A3:4-溴-2-甲基-1-氧代-1,2-二氫異喹啉-3-甲醛
步驟1:2-(3-羥基丙-1-炔-1-基)苯甲酸甲酯
向2-溴苯甲酸甲酯(30克，0.14摩爾)的乙腈(300ml)溶液中加入丙-2-烯-1-醇(11.72克，0.21摩爾)和TEA(58mL,0.417摩爾)。將反應(yīng)混合物在氬氣下脫氣30分鐘。在氬氣下加入雙(三苯基膦)二氯化鈀(II)(2.9克，0.00417摩爾)和碘化銅(0.52克，0.00278摩爾)，并加熱至60℃保持4小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，加入水(500ml)，并且產(chǎn)物用乙酸乙酯(300ml×3)萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水(300ml×3)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥并蒸發(fā)至干。將所得粗物質(zhì)通過柱色譜法(乙酸乙酯：己烷)純化以得到純的標(biāo)題化合物(10克，產(chǎn)率：37.69％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.84(d,J＝0.8Hz,1H),7.61-7.55(m,2H),7.50-7.46(m,1H),5.36(t,J＝6,1H),4.33(d,J＝6Hz,2H),3.86(s,3H)ppm。
步驟2:4-溴-3-(羥甲基)-1H-異色烯-1-酮
向攪拌的2-(3-羥基丙-1-炔-1-基)苯甲酸甲酯(5克，0.0263摩爾)的1,2-二氯乙烷(50ml)溶液中加入二環(huán)己基胺(0.56克，0.00263摩爾)和溴化銅(II)(8.8克，0.0394摩爾)。將反應(yīng)混合物加熱至回流3小時(shí)。蒸發(fā)溶劑以得到粗物質(zhì)，將其通過柱色譜法(乙酸乙酯：己烷)純化以得到標(biāo)題化合物(2.5克，產(chǎn)率：37.28％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.21(d,J＝8Hz 1H),8.00(t,J＝7.2Hz,1H),7.85(d,J＝8Hz 1H)7.72(t,J＝7.2Hz,1H),5.75(t,J＝6Hz,1H),4.54(d,J＝6Hz,2H)ppm。
步驟3:4-溴-3-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-1H-異色烯-1-酮
向4-溴-3-(羥甲基)-1H-異色烯-1-酮(1.8克，7.06毫摩爾)的二氯甲烷(20ml)溶液中加入TBSCl(1.06克，7.06毫摩爾)和咪唑(0.9克，14.12毫摩爾)。將反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。加入水(200ml)，并用乙酸乙酯(100ml×3)萃取產(chǎn)物。將有機(jī)層用鹽水(30ml×3)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，真空蒸發(fā)以得到純的標(biāo)題化合物(2.2克，產(chǎn)率：84.41％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.33(d,J＝8.4Hz 1H),7.89-7.82(m,1H),7.63-7.59(m,1H),4.79(s,2H),0.95(s,9H),0.19(s,6H)ppm。
步驟4:4-溴-3-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)異喹啉-1(2H)-酮
向4-溴-3-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-1H-異色烯-1-酮(2.2克，5.96毫摩爾)的攪拌溶液中加入乙醇氨(30ml)。將混合物攪拌2小時(shí)，然后加入對(duì)甲苯磺酸(250毫克)，并且將混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。將溶劑蒸發(fā)至干，加入3N HCl的乙酸乙酯(30ml)溶液。將有機(jī)層用鹽水溶液(20ml×3)洗滌并經(jīng)無水硫酸鈉干燥。在真空下蒸發(fā)溶劑以得到純的標(biāo)題化合物(1.5克，產(chǎn)率：68.36％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.15(bs,1H),8.44(d,J＝8Hz,1H),7.90(d,J＝8.4Hz,1H),7.77(t,J＝8Hz,1H),7.55(t,J＝7.2Hz,1H),4.79(s,2H),1.00(s,9H),0.22(s,6H)ppm。
步驟5:4-溴-3-(羥甲基)-2-甲基異喹啉-1(2H)-酮
于室溫向4-溴-3-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)異喹啉-1(2H)-酮(1.5克，4.07毫摩爾)的甲醇(15ml)加入K2CO3(1.66克，6.52毫摩爾)和硫酸二甲酯(2.57克，0.0203摩爾)。將反應(yīng)混合物于60℃攪拌3小時(shí)。加入水(200ml)，并且粗產(chǎn)物用乙酸乙酯(20ml×3)萃取。將有機(jī)層合并，用鹽水溶液(20ml×3)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，并真空蒸發(fā)以得到純的標(biāo)題化合物(0.9克，產(chǎn)率：82.43％)。
步驟6:化合物A3
于室溫向4-溴-3-(羥甲基)-2-甲基異喹啉-1(2H)-酮(0.9克，0.0036摩爾)的二氯甲烷(30ml)溶液中加入戴斯-馬丁高碘烷(2.1克，0.0056摩爾)。將反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)，過濾并用二氯甲烷(30ml×3)洗滌。將濾液用飽和NaHCO3溶液(20ml×3)和鹽水(25ml×2)洗滌。將合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥并在真空下蒸發(fā)以得到粗物質(zhì)。將所得粗物質(zhì)通過柱色譜法(乙酸乙酯：己烷)純化以得到純的標(biāo)題化合物(0.8克，產(chǎn)率：89.56％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.25(s,1H),8.35(d,J＝7.2Hz,1H),8.14(d,J＝8Hz 1H),7.98(t,J＝7.2Hz,1H),7.81(t,J＝7.2Hz,1H),3.61(s,3H)ppm。
化合物A4:4-溴-7-硝基-1-氧代-1,2-二氫異喹啉-3-甲醛
步驟1:3-(羥甲基)-7-硝基異喹啉-1(2H)-酮
將3-(羥甲基)-7-硝基-1H-異色烯-1-酮(3克，0.0135摩爾)在2M氨的THF(60ml)溶液中的溶液于室溫?cái)嚢?小時(shí)。加入對(duì)甲苯磺酸(1g)，并且將混合物于50℃攪拌2小時(shí)。真空蒸發(fā)溶劑并加入水(80ml)。將固體過濾，用水(50ml×3)洗滌，并真空干燥以得到標(biāo)題化合物(2.8克，產(chǎn)率：93.75％)。
LCMS:97.41％ESI-MS(m/z):220.9[M-1]-。
步驟2:4-溴-3-(羥甲基)-7-硝基異喹啉-1(2H)-酮
于0℃向3-(羥甲基)-7-硝基異喹啉-1(2H)-酮(1克，0.0044摩爾)的THF(10ml)溶液中加入NBS(0.8克，0.0044摩爾)。將反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。真空蒸發(fā)溶劑并加入水(50ml)。將固體過濾，用水(25ml×3)洗滌，并真空干燥以得到標(biāo)題化合物(0.9克，產(chǎn)率：66.26％)。
LCMS:99.38％ESI-MS(m/z):296.9[M-1]-。
步驟3:化合物A4
在室溫(10ml)下向4-溴-3-(羥甲基)-7-硝基異喹啉-1(2H)-酮(0.9克，3.03毫摩爾)的THF溶液中加入戴斯-馬丁高碘烷(2.5克，6.1毫摩爾)。將反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。將反應(yīng)粗產(chǎn)物過濾，并且將固體用乙酸乙酯(30ml×3)洗滌。將濾液合并，用飽和NaHCO3溶液(100ml×3)和鹽水(100ml×2)洗滌。將合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥并蒸發(fā)至干。將所得粗物質(zhì)通過柱色譜法(乙酸乙酯：己烷)純化以得到純的標(biāo)題化合物(0.5克，產(chǎn)率：55.93％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.12(s,1H),8.94(d,J＝2.4Hz,1H),8.69(dd,J＝2.4Hz,8.8Hz,1H),8.39(d,J＝8.8Hz,1H)ppm。
化合物B1:1-(3-氨基苯基)胍
方法1)
步驟1:1-(3-硝基苯基)胍
向攪拌的3-硝基苯胺(1克，7.24毫摩爾)的乙醇(10ml)溶液中加入氨腈(0.35克，8.33毫摩爾)和70％硝酸(0.65ml，7.24毫摩爾)。將反應(yīng)混合物加熱回流過夜。通過TLC(二氯甲烷：甲醇9:1)監(jiān)測(cè)反應(yīng)，冷卻至室溫并濃縮溶劑。將反應(yīng)混合物倒入乙醚中，將所得沉淀物過濾并干燥以得到為灰色固體的標(biāo)題化合物(0.9克，產(chǎn)率：69％)。LCMS:98.3％ESI-MS(m/z):180.91[M+1]+。
步驟2:化合物B1
向攪拌的Pd/C(400毫克)的甲醇(30ml)懸浮液中加入1-(3-硝基苯基)胍(4.2克，23.3毫摩爾)。氫氣吹掃2小時(shí)。將反應(yīng)物料通過床過濾，并用甲醇(3×20ml)洗滌。將濾液真空蒸發(fā)以得到標(biāo)題化合物(3.5克，產(chǎn)率：99.97％)。
LCMS:84.55％ESI-MS(m/z):151.10[M+1]+。
方法2)
步驟1:2-(3-硝基苯基)-1,3-二Boc-胍
向攪拌的3-硝基苯胺(1克，7.24毫摩爾)的DMF(10ml)溶液中加入(Z)-(((叔丁氧羰基)亞氨基)(1H-吡唑-1-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(2.25克，7.24毫摩爾)。將反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢柽^夜。加入水(15ml)，將固體過濾，用水(3×15ml)洗滌，并真空干燥以得到標(biāo)題化合物(2.1克，產(chǎn)率：76.25％)。
步驟2:2-(3-氨基苯基)-1,3-二Boc-胍
向Pd/C(200毫克)的甲醇(20ml)懸浮液中加入2-(3-硝基苯基)-1,3-二Boc-胍(2.1克，5.52毫摩爾)，并且氫氣吹掃2小時(shí)。將反應(yīng)物料通過床過濾，并用甲醇(3×20ml)洗滌。將濾液在真空下蒸發(fā)以得到標(biāo)題化合物(1.8克，產(chǎn)率：93.05％)。
LCMS:100％ESI-MS(m/z):351.23[M+1]+。
步驟3:化合物B1
向攪拌的2-(3-氨基苯基)-1,3-二Boc-胍(1.8克，5.14毫摩爾)的二氯甲烷(25ml)溶液中加入TFA(5ml)，并且將混合物于室溫?cái)嚢柽^夜。蒸發(fā)溶劑，將殘余物用乙酸乙酯研磨，過濾并真空干燥以得到標(biāo)題化合物的TFA鹽，其按原樣使用(1.8克，產(chǎn)率：100％)。
化合物B2:1-(3-氨基-5-甲氧基苯基)胍
步驟1:2-(3-硝基苯基)-1,3-二Boc-胍
向攪拌的3-甲氧基-5-硝基苯胺(1克，5.95毫摩爾)的DMF(10ml)溶液中加入(Z)-(((叔丁氧羰基)亞氨基)(1H-吡唑-1-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(1.8克，5.95毫摩爾)。將反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢?8小時(shí)。加入水(15ml)，將固體過濾，并用水(3×15ml)洗滌。將分離的固體真空干燥以得到標(biāo)題化合物(500毫克，產(chǎn)率：20.49％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ11.60(s,1H),10.59(s,1H),8.03(t,J＝2Hz,1H),7.80(t,J＝2Hz,1H),7.51(t,J＝2Hz,1H),3.91(s,3H),1.55(s,18H)ppm。
步驟2:1-(3-氨基-5-甲氧基苯基)-2,3-二Boc-胍
向Pd/C(200毫克)的甲醇(20ml)懸浮液中加入2-(3-硝基苯基)-1,3-二Boc-胍(500毫克，1.22毫摩爾)。氫氣吹掃2小時(shí)。將反應(yīng)物料通過床過濾，并用甲醇(3×20ml)洗滌。真空蒸發(fā)濾液以得到標(biāo)題化合物(400毫克，產(chǎn)率：86.30％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ11.62(s,1H),10.24(s,1H),6.76(s,1H),6.57(s,1H),6.03(t,J＝2Hz,1H),3.77(s,3H),1.53(s,18H)ppm。
步驟3:化合物B2
向攪拌的1-(3-氨基-5-甲氧基苯基)-2,3-二Boc-胍(400毫克，1.05毫摩爾)的二氯甲烷(10ml)溶液中加入TFA(3ml)，并且將由此得到的混合物于室溫?cái)嚢柽^夜。蒸發(fā)溶劑，并且將固體用乙酸乙酯研磨，真空干燥以得到標(biāo)題化合物的TFA鹽，其原樣使用(300毫克，產(chǎn)率：100％)。
化合物B3:1-(5-氨基-2-氟苯基)胍
步驟1:1-(2-氟-5-硝基苯基)-2,3-二Boc-胍
向攪拌的2-氟-5-硝基苯胺(1克，6.41毫摩爾)的DMF(10ml)溶液中加入Z)-(((叔丁氧羰基)亞氨基)(1H-吡唑-1-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(2克，6.41毫摩爾)。將反應(yīng)混合物于50℃攪拌48小時(shí)，加入水(15ml)，并且將粗產(chǎn)物用乙酸乙酯(20ml×3)萃取。將合并的有機(jī)層用水(20ml×3)和鹽水(20ml×3)洗滌，并經(jīng)硫酸鈉干燥。將有機(jī)級(jí)分真空蒸發(fā)以得到粗物質(zhì)，其通過用乙酸乙酯和己烷研磨純化以得到純的標(biāo)題化合物(860毫克，產(chǎn)率：33.70％)。
LCMS:85.92％ESI-MS(m/z):399[M+1]+。
步驟2:1-(5-氨基-2-氟苯基)-2,3-二Boc-胍
向攪拌的Pd/C(100毫克)的甲醇(20ml)懸浮液中加入1-(2-氟-5-硝基苯基)-2,3-二Boc-胍(860毫克，2.16毫摩爾)。氫氣吹掃2小時(shí)。將反應(yīng)物料通過床過濾，并用甲醇(3×20ml)洗滌。在真空下蒸發(fā)濾液以得到標(biāo)題化合物(750毫克，產(chǎn)率：94.33％)。
LCMS:87.59％ESI-MS(m/z):369.1[M+1]+。
步驟3:化合物B3
向攪拌的1-(5-氨基-2-氟苯基)-2,3-二Boc-胍(750毫克，2.03毫摩爾)的二氯甲烷(10ml)溶液中加入TFA(2ml)，并且將混合物在室溫?cái)嚢柽^夜。蒸發(fā)溶劑，將粗混合物用乙酸乙酯研磨，過濾并在真空下干燥以得到標(biāo)題化合物的TFA鹽(500毫克，產(chǎn)率：定量)。
化合物B4:1-(3-氨基-5-氟苯基)胍
步驟1:1-(3-氟-5-硝基苯基)-2,3-二Boc-胍
向3-氟-5-硝基苯胺(1克，6.41毫摩爾)的DMF(10ml)溶液中加入((Z)-(((叔丁氧羰基)亞氨基)(1H-吡唑-1-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(2克，6.41毫摩爾)。將反應(yīng)混合物于50℃攪拌48小時(shí)。加入水(15ml)，并且將粗產(chǎn)物用乙酸乙酯(20ml×3)萃取。將合并的有機(jī)層用水(20ml×3)和鹽水(20ml×3)洗滌。將乙酸乙酯層經(jīng)硫酸鈉干燥，并真空蒸發(fā)以得到粗物質(zhì)。將所得粗物質(zhì)通過柱色譜法純化以得到純的標(biāo)題化合物(590毫克，產(chǎn)率：23.13％)。
LCMS:89.45％ESI-MS(m/z):399.1[M+1]+。
步驟2:1-(3-氨基-5-氟苯基)-2,3-二Boc-胍
向Pd/C(100毫克)的甲醇(20ml)懸浮液中加入1-(3-氟-5-硝基苯基)-2,3-二Boc-胍(590毫克，1.48毫摩爾)，并且氫氣吹掃2小時(shí)。將反應(yīng)物料通過床過濾，并用甲醇(20ml×3)洗滌。在真空下蒸發(fā)濾液以得到標(biāo)題化合物(520毫克，產(chǎn)率：95.41％)。
LCMS:93.21％ESI-MS(m/z):369.3[M+1]+。
步驟3:化合物B4
于室溫向攪拌的1-(3-氨基-5-氟苯基)-2,3-二Boc-胍(520毫克，1.41毫摩爾)的二氯甲烷(10ml)溶液中加入TFA(2ml)。將反應(yīng)混合物攪拌過夜。蒸發(fā)溶劑，將殘余物用乙酸乙酯研磨，過濾，真空干燥以得到標(biāo)題化合物的TFA鹽(500毫克，產(chǎn)率：定量)。
化合物B5:1-(3-氨基-4-氟苯基)胍
步驟1:1-(4-氟-3-硝基苯基)-2,3-二Boc-胍
向4-氟-3-硝基苯胺(1克，6.41毫摩爾)的DMF(10ml)溶液中加入(Z)-(((叔丁氧羰基)亞氨基)(1H-吡唑-1-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(2克，6.41毫摩爾)。將反應(yīng)混合物于50℃攪拌48小時(shí)。加入水(15ml)，并用乙酸乙酯(20ml×3)萃取預(yù)期產(chǎn)物。將合并的有機(jī)層用水(20ml×3)和鹽水(20ml×3)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并蒸發(fā)至干。將所得粗產(chǎn)物通過用乙酸乙酯和己烷研磨純化以得到純的標(biāo)題化合物(930毫克，產(chǎn)率：36.40％)。
LCMS:88.16％ESI-MS(m/z):399.2[M+1]+。
步驟2:1-(3-氨基-4-氟苯基)-2,3-二Boc-胍
向攪拌的Pd/C(100毫克)的甲醇(20ml)懸浮液中加入1-(4-氟-3-硝基苯基)-2,3-二Boc-胍(930毫克，2.33毫摩爾)。氫氣吹掃混合物2小時(shí)。將反應(yīng)物料通過過濾并用甲醇(20ml×3)洗滌。將濾液合并，并蒸發(fā)至干以得到標(biāo)題化合物(850毫克，產(chǎn)率：98.83％)。
LCMS:91.67％ESI-MS(m/z):369.1[M+1]+。
步驟3:化合物B5
向攪拌的1-(3-氨基-4-氟苯基)-2,3-二Boc-胍(850毫克，2.30毫摩爾)的二氯甲烷(10ml)溶液中加入TFA(2ml)。將反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢柽^夜。將溶劑濃縮，將沉淀物用乙酸乙酯研磨，過濾，在真空下干燥以得到標(biāo)題化合物的TFA鹽(530毫克，產(chǎn)率：定量)。
化合物B6:1-(4-氰基苯基)胍
步驟1:1-(4-氰基苯基)-2,3-二Boc-胍
向攪拌的4-氨基芐腈(980毫克，8.29毫摩爾)的DMF(10ml)溶液中加入(Z)-(((叔丁氧羰基)亞氨基)(1H-吡唑-1-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(2.5克，8.29毫摩爾)。將反應(yīng)混合物于50℃攪拌48小時(shí)。加入水(15ml)，并用乙酸乙酯(20ml×3)萃取粗產(chǎn)物。將合并的有機(jī)層用水(20ml×3)和鹽水(20ml×3)洗滌，濃縮至干，經(jīng)硫酸鈉干燥并真空濃縮以得到粗物質(zhì)。將所得固體通過柱色譜法純化(400毫克，產(chǎn)率：13.37％)。
LCMS:99.65％ESI-MS(m/z):361[M+1]+。
步驟2:化合物B6
向攪拌的1-(4-氰基苯基)-2,3-二Boc-胍(400毫克，1.10毫摩爾)的二氯甲烷(10ml)溶液中加入TFA(2ml)。將反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢柽^夜。將溶劑濃縮至干，并且將固體殘余物用乙酸乙酯研磨，過濾，在真空下干燥以得到標(biāo)題化合物的TFA鹽(350毫克，產(chǎn)率：定量)。
化合物B7:1-(3-氰基苯基)胍
步驟1:1-(3-氰基苯基)-2,3-二Boc-胍
向攪拌的4-氨基芐腈(950毫克，8.04毫摩爾)的DMF(10ml)溶液中加入(Z)-(((叔丁氧羰基)亞氨基)(1H-吡唑-1-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(2.5克，8.04毫摩爾)。將反應(yīng)混合物于50℃攪拌36小時(shí)。加入水(15ml)，并用乙酸乙酯(20ml×3)萃取預(yù)期產(chǎn)物。將合并的有機(jī)層用水(20ml×3)和鹽水(20ml×3)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并真空濃縮以得到粗物質(zhì)。將所得粗物質(zhì)通過柱色譜法純化以得到純的標(biāo)題化合物(980毫克，產(chǎn)率：33.91％)。
LCMS:84.39％ESI-MS(m/z):361.1[M+1]+。
步驟2:化合物B7
向攪拌的1-(3-氰基苯基)-2,3-二Boc-胍(980毫克，2.72毫摩爾)的二氯甲烷(10ml)溶液中加入TFA(2ml)。將反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢柽^夜。濃縮溶劑，并且將殘余物用乙酸乙酯研磨，過濾，真空干燥以得到標(biāo)題化合物的TFA鹽(820毫克，產(chǎn)率：定量)。
化合物B8:1-(4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)胍
步驟1:1-(2-(4-硝基苯氧基)乙基)吡咯烷
向攪拌的1-氟-4-硝基苯(10克，0.0708摩爾)的DMF(40ml)溶液中加入Cs2CO3(34.6克，0.1063摩爾)。加入2-(吡咯烷-1-基)乙-1-醇(9.79gm,0.0850摩爾)，并于90℃攪拌3小時(shí)。加入水(40ml)，并用乙酸乙酯(150ml×3)萃取預(yù)期產(chǎn)物。將合并的有機(jī)層用鹽水(150ml×3)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并真空濃縮以得到粗物質(zhì)。將所得粗物質(zhì)通過柱色譜法純化以得到純的標(biāo)題化合物(10克，產(chǎn)率：59.77％)。
LCMS:99.43％ESI-MS(m/z):237.05[M+1]+。
步驟2:4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯胺
50℃向攪拌的Pd/C(220毫克)的甲醇懸浮液中加入1-(2-(4-硝基苯氧基)乙基)吡咯烷(2.2克，0.0093摩爾)。將氫氣沖洗反應(yīng)混合物3小時(shí)。將反應(yīng)物料通過過濾，并用甲醇(3×15ml)洗滌。將濾液合并，并真空蒸發(fā)以得到標(biāo)題化合物(1.8克，產(chǎn)率：93.71％)。
LCMS:97.52％ESI-MS(m/z):206.87[M+1]+。
步驟3:1-(4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)-2,3-二Boc-胍
向攪拌的4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯胺(4克，0.0165摩爾)的DMF(20ml)溶液中加入(Z)-(((叔丁氧羰基)亞氨基)(1H-吡唑-1-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(5.12克，0.0165摩爾)。將反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢柽^夜。加入水(50ml)，過濾由此得到的固體，用水(3x20ml)洗滌，并真空干燥以得到標(biāo)題化合物(6.5克，產(chǎn)率：74.73％)。
LCMS:86.41％,ESI-MS(m/z):449.3[M+1]+。
步驟4:化合物B8
向1-(4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)-2,3-二Boc-胍(600毫克，1.33毫摩爾)的二氯甲烷(10ml)溶液中加入TFA(5ml)，并且將混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。將溶劑濃縮并用乙酸乙酯研磨。將過濾的固體真空干燥以得到標(biāo)題化合物的TFA鹽(500毫克，產(chǎn)率：定量)。
化合物B9:1-(3-甲氧基-4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)胍
步驟1:1-(2-(2-甲氧基-4-硝基苯氧基)乙基)吡咯烷
向攪拌的1-氟-2-甲氧基-4-硝基苯(1克，5.84毫摩爾)的DMF(10ml)溶液中加入Cs2CO3(2.85克，8.76毫摩爾)和2-(吡咯烷-1-基)乙-1-醇(807毫克，7.012毫摩爾)。將反應(yīng)混合物在90℃下攪拌2小時(shí)。加入水(25ml)，并且將粗產(chǎn)物用乙酸乙酯(25ml×3)萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水(25ml×3)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并真空蒸發(fā)以得到粗物質(zhì)。將所得粗物質(zhì)通過快速色譜法純化以得到純的標(biāo)題化合物(840毫克，產(chǎn)率：54.19％)。
LCMS:99.65％ESI-MS(m/z):266.97[M+1]+。
步驟2:3-甲氧基-4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯胺
向攪拌的Pd/C(100毫克)的甲醇(10ml)懸浮液中加入1-(2-(2-甲氧基-4-硝基苯氧基)乙基)吡咯烷(840毫克，3.15毫摩爾)。在50℃下氫氣吹掃反應(yīng)混合物3小時(shí)。將反應(yīng)物料通過過濾，并用甲醇(10mlx3)洗滌。將濾液合并，真空蒸發(fā)以得到標(biāo)題化合物(710毫克，產(chǎn)率：95.30％)。
LCMS:100％,ESI-MS(m/z):237.08[M+1]+。
步驟3:1-(3-甲氧基-4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)-2,3-二Boc-胍
向攪拌的3-甲氧基-4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯胺(710毫克，3.008毫摩爾)的DMF(10ml)溶液中加入(Z)-(((叔丁氧羰基)亞氨基)(1H-吡唑-1-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(932毫克，3.008毫摩爾)。將反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢柽^夜。加入水(20ml)，并用乙酸乙酯(20ml×3)萃取預(yù)期產(chǎn)物。將合并的有機(jī)層用鹽水(25ml×3)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，真空蒸發(fā)以得到粗物質(zhì)。將所得粗物質(zhì)通過快速色譜法純化以得到純的標(biāo)題化合物(800毫克，產(chǎn)率：55.94％)。
LCMS:98.16％,ESI-MS(m/z):479.46[M+1]+。
步驟4:化合物B9
向攪拌的1-(3-甲氧基-4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)-2,3-二Boc-胍(800毫克，1.67毫摩爾)的二氯甲烷(20ml)中加入TFA(3ml)。將反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，將殘余物用乙酸乙酯研磨，過濾并真空干燥以得到標(biāo)題化合物的TFA鹽(750毫克，產(chǎn)率：定量)。
化合物B10:1-(2-甲氧基-4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)胍
步驟1:1-(2-(3-甲氧基-4-硝基苯氧基)乙基)吡咯烷
向攪拌的4-氟-2-甲氧基-1-硝基苯(5克，0.0292摩爾)的DMF(20ml)溶液中加入Cs2CO3(14.3克，0.0438摩爾)和2-(吡咯烷-1-基)乙-1-醇(4gm,0.0351摩爾)。將混合物在90℃下攪拌2小時(shí)。將溶劑蒸發(fā)至干，并加入水(50ml)。用乙酸乙酯(50ml×3)萃取由此得到的粗沉淀物。將合并的有機(jī)層用鹽水(50ml×3)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并真空蒸發(fā)。將所得粗產(chǎn)物通過柱色譜法純化(3.92克，產(chǎn)率：51％)。
LCMS:99.58％ESI-MS(m/z):267.48[M+1]+。
步驟2:2-甲氧基-4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯胺
向攪拌的Pd/C(390毫克)的甲醇(30ml)懸浮液中加入1-(2-(3-甲氧基-4-硝基苯氧基)乙基)吡咯烷(3.9克，0.0146摩爾)。在50℃下氫氣吹掃反應(yīng)混合物3小時(shí)。將反應(yīng)物料通過過濾，并用甲醇(15ml×3)洗滌。將合并的濾液在真空下蒸發(fā)以得到標(biāo)題化合物(3.2克，產(chǎn)率：92.21％)。
步驟3:1-(2-甲氧基-4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)-2,3-二Boc-胍
向2-甲氧基-4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯胺(4.4克，0.0186摩爾)的DMF(30ml)溶液中加入(Z)-(((叔丁氧羰基)亞氨基)(1H-吡唑-1-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(5.77克，0.0186摩爾)。將反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢柽^夜。然后加入水(100ml)，并用乙酸乙酯(100ml×3)萃取粗產(chǎn)物。將合并的有機(jī)層用鹽水(100ml×3)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，并真空蒸發(fā)以得到標(biāo)題化合物(6克，產(chǎn)率：67.34％)。
LCMS:88.62％ESI-MS(m/z):479[M+1]+。
步驟4:化合物B10
向攪拌的1-(2-甲氧基-4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)-2,3-二Boc-胍(500毫克，0.0010摩爾)的二氯甲烷(5ml)溶液中加入TFA(1ml)。將反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，殘余物用乙酸乙酯研磨，過濾并真空干燥以得到標(biāo)題化合物的TFA鹽(500克，產(chǎn)率：定量)。
化合物B11:1-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)胍
步驟1:1-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-2,3二Boc-胍
向攪拌的4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.7克，3.66毫摩爾)的DMF(20ml)溶液中加入(Z)-(((叔丁氧羰基)亞氨基)(1H-吡唑-1-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(0.90克，2.9毫摩爾)。將反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢柽^夜。然后加入水(50ml)，將固體殘余物過濾，并用水(20ml×3)洗滌。將固體真空干燥以得到標(biāo)題化合物(1克，產(chǎn)率：63.03％)。
LCMS:98.31％ESI-MS(m/z):434.3[M+1]+。
步驟2:化合物B11
向攪拌的1-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-2,3-二Boc-胍(1克，0.0022摩爾)的二氯甲烷(10ml)溶液中加入TFA(5ml)。然后將混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，將固體用乙酸乙酯研磨，過濾并在真空下干燥以得到標(biāo)題化合物的TFA鹽(700毫克，產(chǎn)率：定量)。
化合物B12:1-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)胍
步驟1:1-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-2,3-二Boc-胍
向攪拌的3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.7克，3.66毫摩爾)的DMF(20ml)溶液中加入(Z)-(((叔丁氧羰基)亞氨基)(1H-吡唑-1-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(0.90克，2.9毫摩爾)。將反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢柽^夜。然后加入水(50ml)，將由此得到的固體過濾，并用水(20ml×3)洗滌。將固體真空干燥以得到標(biāo)題化合物(1克，產(chǎn)率：63.03％)。
LCMS:100％ESI-MS(m/z):434.2[M+1]+。
步驟2:化合物B12
向攪拌的1-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-2,3-二Boc-胍(1克，0.22毫摩爾)的二氯甲烷(10ml)溶液中加入TFA(5ml)。然后將反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。然后蒸發(fā)溶劑，將殘余物用乙酸乙酯研磨，過濾并在真空下干燥以得到標(biāo)題化合物的TFA鹽(700毫克，產(chǎn)率：定量)。
1.2.本發(fā)明化合物的合成：
化合物C1:2-((3-氨基苯基)氨基)-5-甲基-8-硝基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮
向攪拌的4-溴-2-甲基-7-硝基-1-氧代-1,2-二氫異喹啉-3-甲醛(A1)(1.5克，0.0048摩爾)的DMF(10mL)溶液加入1-(3-氨基苯基)胍(B1)(1.09克，0.0072摩爾)。然后加入K2CO3(1.31克，0.0096摩爾)，并且將反應(yīng)混合物在90℃加熱2小時(shí)。加入水，將固體過濾，用水(25ml×3)洗滌，研磨到己烷中，并真空干燥以得到粗產(chǎn)物(1.35克，產(chǎn)率：77.27％)。
LCMS:77.91％ESI-MS(m/z):363.12[M+1]+。
化合物C2:8-氨基-2-((3-氨基苯基)氨基)-5-甲基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮
向攪拌的2-((3-氨基苯基)氨基)-5-甲基-8-硝基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮(C1)(1.35gm,0.0037摩爾)的DMSO溶液中加入NaSH(1.04gm,0.0186摩爾)。將反應(yīng)混合物在80℃加熱1小時(shí)。然后加入水，并用乙酸乙酯(100ml×2)萃取粗產(chǎn)物。將合并的有機(jī)層用鹽水(50ml×2)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，并真空蒸發(fā)。將所得粗物質(zhì)研磨到乙醚中，并過濾以得到純的標(biāo)題化合物(642毫克，產(chǎn)率：51.85％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.23(s,1H),8.66(s,1H),8.45-8.43(d,J＝8.4Hz,1H)7.47-7.46(d,J＝2.4Hz,1H),7.31(s,1H),7.15-7.13(dd,J＝2.4,8.8Hz,1H),6.25(s,2H),6.20-6.18(d,J＝7.6Hz,1H),5.02(s,2H),3.68(s,3H)ppm。
LCMS:92.39％ESI-MS(m/z):333.16[M+1]+。HPLC:90.38％。
化合物C3:5-甲基-2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-8-硝基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮
向攪拌的4-溴-2-甲基-7-硝基-1-氧代-1,2-二氫異喹啉-3-甲醛(A1)(150毫克，0.482毫摩爾)的DMF(1ml)溶液中加入1-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)胍(B11)(225毫克，0.964毫摩爾)。然后加入K2CO3(199毫克，1.4毫摩爾)，并且將反應(yīng)混合物在90℃下加熱2小時(shí)。加入水(10ml)，將由此得到的固體過濾，用水(10ml×3)洗滌，并真空干燥以得到粗物質(zhì)。將該粗物質(zhì)懸浮并研磨到己烷中，過濾并干燥以得到標(biāo)題化合物(150毫克，產(chǎn)率：46.55％)。
LCMS:100％ESI-MS(m/z):446.15[M+1]+。
化合物C4:8-氨基-5-甲基-2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮
向攪拌的5-甲基-2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-8-硝基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮(C3)(150毫克，0.336毫摩爾)的乙酸(5ml)溶液中加入鐵粉(94毫克，1.68毫摩爾)，并且將混合物在90℃加熱2小時(shí)。然后加入乙酸乙酯(10ml)，并過濾固體。濾液用飽和NaHCO3溶液(10ml×3)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，并真空蒸發(fā)以得到粗物質(zhì)，將其用己烷研磨，并過濾以得到標(biāo)題化合物(100毫克，產(chǎn)率：71.48％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.29(s,1H),8.65(s,1H),8.38(d,J＝8.8Hz,1H),7.72(d,J＝8.8Hz,2H),7.46(d,J＝2Hz,1H),7.12(d,J＝8.4Hz,1H),6.94(d,J＝8.8Hz,2H),6.26(s,2H),3.67(s,3H),3.08(s,4H),2.47(s,4H),2.23(s,3H)ppm。
LCMS:99.52％ESI-MS(m/z):416.45[M+1]+。HPLC:98.99％。
化合物C5:5-甲基-2-((3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-8-硝基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮
向攪拌的4-溴-2-甲基-7-硝基-1-氧代-1,2-二氫異喹啉-3-甲醛(A1)(150毫克，0.482毫摩爾)的DMF(1ml)溶液中加入1-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)胍(B12)(225毫克，0.964毫摩爾)。然后加入K2CO3(199毫克，1.4毫摩爾)，并且將混合物在90℃加熱2小時(shí)。加入水(10ml)，將由此得到的固體過濾，用水(10ml×3)洗滌，干燥并用己烷研磨以得到標(biāo)題化合物(150毫克，產(chǎn)率：46.55％)。
LCMS:97.72％ESI-MS(m/z):446.15[M+1]+。
化合物C6:8-氨基-5-甲基-2-((3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮
向攪拌的5-甲基-2-((3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-8-硝基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮(C5)(150毫克，0.336毫摩爾)的乙酸(5ml)溶液中加入鐵粉(94毫克，1.68毫摩爾)，并且將混合物在90℃加熱2小時(shí)。加入乙酸乙酯(10ml)，并過濾固體。濾液用飽和NaHCO3溶液(10ml×3)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，并真空蒸發(fā)以得到粗物質(zhì)，將其用己烷和乙酸乙酯研磨以得到標(biāo)題化合物(100毫克，產(chǎn)率：71.48％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.40(s,1H),8.69(s,1H),8.41(d,J＝8.8Hz,1H),7.74(s,1H),7.47(d,J＝2Hz,1H),7.23(d,J＝8Hz,1H),7.16-7.10(m,2H),6.55(d,J＝7.2Hz,1H),6.28(s,2H),3.68(s,3H),3.19(s,4H),2.47(s,4H),2.26(s,3H)ppm。
LCMS:98.13％ESI-MS(m/z):416.19[M+1]+。HPLC:97.11％。
化合物C7:2-((3-氨基苯基)氨基)-9-甲氧基-5-甲基-8-硝基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮
向攪拌的4-溴-6-甲氧基-2-甲基-7-硝基-1-氧代-1,2-二氫異喹啉-3-甲醛(A2)(150毫克，0.439毫摩爾)的DMF(1ml)溶液中加入1-(3-氨基苯基)胍(B1)(132毫克，0.879毫摩爾)。加入K2CO3(182毫克，1.32毫摩爾)，并且將混合物在90℃加熱2小時(shí)。加入水(10ml)，并過濾固體。將固體用水(10ml×3)洗滌，真空干燥，并用己烷研磨以得到標(biāo)題化合物(80毫克，產(chǎn)率：46.37％)。
LCMS:81.89％ESI-MS(m/z):393.14[M+1]+。
化合物C8:8-氨基-2-((3-氨基苯基)氨基)-9-甲氧基-5-甲基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮
向攪拌的2-((3-氨基苯基)氨基)-9-甲氧基-5-甲基-8-硝基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮(C7)(80毫克，0.203毫摩爾)的乙酸(5ml)溶液中加入鐵粉(56.93毫克，1.02毫摩爾)，并且將混合物在90℃加熱2小時(shí)。加入乙酸乙酯(10ml)，并過濾固體。將濾液合并，用飽和NaHCO3溶液(10ml×3)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，并真空蒸發(fā)以得到粗物質(zhì)，將其通過制備型HPLC純化(水：乙腈，用TFA作為改性劑：15毫克，產(chǎn)率：20.30％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.30(s,1H),8.68(s,1H),8.00(s,1H),7.53(s,1H),7.30(s,1H),6.97-6.91(q,J＝7.6Hz,15.6Hz,2H),6.19(d,J＝7.2Hz,1H),5.93(s,2H),4.96(s,2H),4.05(s,3H),3.68(s,3H)ppm。
LCMS:97.80％ESI-MS(m/z):363.13[M+1]+。HPLC:97.87％。
化合物C9:9-甲氧基-5-甲基-2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-8-硝基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮
向攪拌的4-溴-6-甲氧基-2-甲基-7-硝基-1-氧代-1,2-二氫異喹啉-3-甲醛(A2)(150毫克，0.439毫摩爾)的DMF(1ml)溶液中加入1-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)胍(B11)(205毫克，0.879毫摩爾)。然后加入K2CO3(182毫克，1.32毫摩爾)，并且將混合物在90℃下加熱2小時(shí)。加入水(10ml)，將固體過濾，用水(10ml×3)洗滌，并真空干燥以得到粗物質(zhì)，將其用己烷研磨以得到標(biāo)題化合物(90毫克，產(chǎn)率：43.04％)。
LCMS:97.29％ESI-MS(m/z):476.36[M+1]+。
化合物C10:8-氨基-9-甲氧基-5-甲基-2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮
向攪拌的9-甲氧基-5-甲基-2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-8-硝基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮(C9)(90毫克，0.189毫摩爾)的乙酸(5ml)溶液中加入鐵粉(52毫克，0.946毫摩爾)，并且將混合物在90℃加熱2小時(shí)。加入乙酸乙酯(10ml)，并過濾固體。將合并的濾液用飽和NaHCO3溶液(10ml×3)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，并真空蒸發(fā)以得到粗物質(zhì)，將其用己烷和乙酸乙酯研磨以得到標(biāo)題化合物(40毫克，產(chǎn)率：47.44％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.31(s,1H),8.66(s,1H),7.96(s,1H),7.73(d,J＝9.2Hz,2H),7.53(s,1H),6.93(d,J＝8.8Hz,2H),5.91(s,2H),4.03(s,3H),3.67(s,3H),3.07(t,J＝5.2Hz,4H),2.47(t,J＝5.2Hz,4H),2.23(s,3H)ppm。
LCMS:97.56％ESI-MS(m/z):446.20[M+1]+。HPLC:98.29％。
化合物C11:9-甲氧基-5-甲基-2-((3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-8-硝基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮
向攪拌的4-溴-6-甲氧基-2-甲基-7-硝基-1-氧代-1,2-二氫異喹啉-3-甲醛(A2)(150毫克，0.439毫摩爾)的DMF(1ml)溶液中加入1-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)胍(B12)(205毫克，0.879毫摩爾)。然后加入K2CO3(182毫克，1.32毫摩爾)，并且將混合物在90℃下加熱2小時(shí)。加入水(10ml)，將固體過濾，用水(10ml×3)洗滌，真空干燥以得到粗物質(zhì)，將其用己烷研磨以得到標(biāo)題化合物(90毫克，產(chǎn)率：43.04％)。
LCMS:96.82％ESI-MS(m/z):476.31[M+1]+。
化合物C12:8-氨基-9-甲氧基-5-甲基-2-((3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮
向攪拌的9-甲氧基-5-甲基-2-((3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-8-硝基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮(C11)(90毫克，0.189毫摩爾)的乙酸(5ml)溶液中加入鐵粉(52毫克，0.946毫摩爾)，并且將混合物在90℃加熱2小時(shí)。加入乙酸乙酯(10ml)，并過濾固體。將合并的濾液用飽和NaHCO3溶液(10ml×3)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，并真空蒸發(fā)以得到粗物質(zhì)，將其用己烷和乙酸乙酯研磨以得到標(biāo)題化合物(40毫克，產(chǎn)率：47.44％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.38(s,1H),8.71(s,1H),7.96(s,1H),7.54(s,1H),7.45(d,J＝7.2Hz,1H),7.38(s,1H),7.15(t,J＝8Hz,1H),6.56(d,J＝7.6Hz,1H),5.96(s,2H),4.01(s,3H),3.68(s,3H),3.13(s,4H),2.33(s,4H),2.23(s,3H)ppm。
LCMS:97.01％ESI-MS(m/z):446.30[M+1]+。HPLC:95.62％。
化合物C13:2-((3-氨基-5-甲氧基苯基)氨基)-5-甲基-8-硝基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮
向攪拌的4-溴-2-甲基-7-硝基-1-氧代-1,2-二氫異喹啉-3-甲醛(A1)(150毫克，0.485毫摩爾)的DMF(3ml)溶液中加入1-(3-氨基-5-甲氧基苯基)胍(B2)(250毫克，0.481毫摩爾)和K2CO3(230毫克，1.66毫摩爾)。將反應(yīng)混合物在90℃下加熱2小時(shí)。然后加入水，將固體過濾，用水(10ml×3)洗滌，并真空干燥。將粗產(chǎn)物用己烷研磨并干燥以得到標(biāo)題化合物(160毫克，產(chǎn)率：84.21％)。
LCMS:89.47％ESI-MS(m/z):393.24[M+1]+。
化合物C14:8-氨基-2-((3-氨基-5-甲氧基苯基)氨基)-5-甲基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮
向攪拌的2-((3-氨基-5-甲氧基苯基)氨基)-5-甲基-8-硝基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮(C13)(160毫克，0.407毫摩爾)的DMSO(2ml)溶液中加入NaSH(68.4毫克,1.22毫摩爾)。將反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。然后加入水(10ml)，并用乙酸乙酯(10ml×2)萃取粗混合物。將合并的有機(jī)層用鹽水(10ml×2)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并真空蒸發(fā)以得到粗物質(zhì)。將所得粗物質(zhì)通過柱色譜法純化(8毫克，產(chǎn)率：5.4％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.22(s,1H),8.66(s,1H),8.43(d,J＝8.4Hz,1H),7.47(d,J＝2.4Hz,1H),7.14(dd,J＝8.4Hz,2.4Hz 1H),6.80(d,J＝9.6Hz,2H)6.25(s,2H),5.81(s,1H),5.04(s,2H),3.70(s,3H),3.68(s,3H)ppm。
LCMS:98.48％ESI-MS(m/z):363.33[M+1]+。HPLC:98.47％。
化合物C15:2-((3-氨基-5-甲氧基苯基)氨基)-9-甲氧基-5-甲基-8-硝基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮
向攪拌的4-溴-6-甲氧基-2-甲基-7-硝基-1-氧代-1,2-二氫異喹啉-3-甲醛(A2)(150毫克，0.439摩爾)的DMF(2ml)溶液中加入1-(3-氨基-5-甲氧基苯基)胍(B2)(158毫克，0.879毫摩爾)和K2CO3(182mg，1.32毫摩爾)。將反應(yīng)混合物在90℃加熱2小時(shí)。加入水(10ml)，將由此得到的固體過濾，用水(10ml×3)洗滌，并真空干燥以得到粗物質(zhì)，將其用己烷研磨以得到標(biāo)題化合物(80毫克，產(chǎn)率：43.07％)。
LCMS:90.25％ESI-MS(m/z):423.3.[M+1]+。
化合物C16:8-氨基-2-((3-氨基-5-甲氧基苯基)氨基)-9-甲氧基-5-甲基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮
向攪拌的2-((3-氨基-5-甲氧基苯基)氨基)-9-甲氧基-5-甲基-8-硝基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮(C15)(80毫克，0.189毫摩爾)的DMSO(5ml)溶液中加入NaSH(53.08毫克，0.94毫摩爾)，并且將反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。然后加入水(10ml)，用乙酸乙酯(20ml×3)萃取粗產(chǎn)物。將有機(jī)層用鹽水(20ml×3)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并減壓蒸發(fā)以得到粗物質(zhì)，將其通過柱色譜法純化(15毫克，產(chǎn)率：20.18％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.27(s,1H),8.68(s,1H),8.00(s,1H),7.53(s,1H),6.81(d,J＝2Hz,2H),5.93(s,2H),5.83(d,J＝2Hz,1H),4.98(s,2H),4.04(s,3H),3.68(s,3H),3.67(s,3H)ppm。
LCMS:99.32％ESI-MS(m/z):393.49[M+1]+。HPLC:98.91％。
化合物C17:2-((5-氨基-2-氟苯基)氨基)-5-甲基-8-硝基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮
向攪拌的4-溴-2-甲基-7-硝基-1-氧代-1,2-二氫異喹啉-3-甲醛(A1)(120毫克，0.387毫摩爾)的DMF(2ml)溶液中加入1-(5-氨基-2-氟苯基)胍(B3)(77毫克，0.464毫摩爾)和K2CO3(106毫克，0.774毫摩爾)。將反應(yīng)混合物在90℃下加熱2小時(shí)。然后加入水(5ml)，將由此得到的固體過濾，用水(10ml×3)洗滌，并真空干燥。將粗產(chǎn)物用己烷研磨以得到標(biāo)題化合物(50毫克，產(chǎn)率：34.08％)。
化合物C18:8-氨基-2-((5-氨基-2-氟苯基)氨基)-5-甲基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮
向攪拌的2-((5-氨基-2-氟苯基)氨基)-5-甲基-8-硝基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮(C17)(50毫克，0.131毫摩爾)的DMSO(1ml)溶液中加入NaSH(36毫克，0.657毫摩爾)。將反應(yīng)混合物攪拌1小時(shí)。加入水(2ml)，并用乙酸乙酯(10ml×2)萃取粗產(chǎn)物。將合并的有機(jī)層用鹽水(10ml×2)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并真空蒸發(fā)以得到粗物質(zhì)，將其通過柱色譜法純化(12毫克，產(chǎn)率：26.05％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.63(s,1H),8.51(s,1H),8.35(d,J＝8.8Hz,1H),7.45(d,J＝2.4Hz,1H),7.28(dd,J＝8.4Hz,2.4Hz 1H),7.09(dd,J＝8.4Hz,2.4HZ,1H)6.91-6.83(m,1H),6.27(s,2H),4.99(s,2H),3.67(s,3H)ppm。
LCMS:97.26％ESI-MS(m/z):351.33[M+1]+。HPLC:97.01％。
化合物C19:2-((3-氨基-5-氟苯基)氨基)-5-甲基-8-硝基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮
向攪拌的4-溴-2-甲基-7-硝基-1-氧代-1,2-二氫異喹啉-3-甲醛(A1)(100毫克，0.322毫摩爾)的DMF(2ml)溶液中加入1-(3-氨基-5-氟苯基)胍(B4)(77毫克，0.387摩爾)和K2CO3(88毫克，0.645毫摩爾)。將反應(yīng)混合物在90℃加熱2小時(shí)，加入水(3ml)，并過濾由此得到的沉淀。將固體用水(10ml×3)洗滌，真空干燥，并用己烷(80毫克，產(chǎn)率：65.43％)研磨。
化合物C20:8-氨基-2-((3-氨基-5-氟苯基)氨基)-5-甲基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮
向攪拌的2-((3-氨基-5-氟苯基)氨基)-5-甲基-8-硝基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮(C19)(80毫克，0.21毫摩爾)的DMSO(1ml)溶液中加入NaSH(59毫克，1.05毫摩爾)。將反應(yīng)混合物攪拌1小時(shí)。加入水，并用乙酸乙酯(20ml×2)萃取粗混合物。將合并的有機(jī)層用鹽水(20ml×2)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并真空蒸發(fā)以得到粗物質(zhì)，將其通過柱色譜法純化(12毫克，產(chǎn)率：26.05％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.47(s,1H)8.69(s,1H),8.40(d,J＝8.4Hz,1H),7.47(d,J＝2.4Hz,1H),7.14(dd,J＝8.4Hz,2.4Hz 1H),6.97-6.93(m,2H),6.29(s,2H),5.95(d,J＝11.2Hz,1H),5.37(s,2H),3.68(s,3H)ppm。
LCMS:99.42％ESI-MS(m/z):351.07[M+1]+。HPLC:98.85％。
化合物C21:2-((3-氨基-4-氟苯基)氨基)-5-甲基-8-硝基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮
向攪拌的4-溴-2-甲基-7-硝基-1-氧代-1,2-二氫異喹啉-3-甲醛(A1)(80毫克，0.258毫摩爾)的DMF(1ml)溶液中加入1-(3-氨基-4-氟苯基)胍(B5)(52毫克，0.309毫摩爾)和K2CO3(71.2毫克，0.516毫摩爾)。將混合物在90℃加熱2小時(shí)。加入水(5ml)，將由此得到的固體過濾，用水(10ml×3)洗滌，并真空干燥。將粗產(chǎn)物用己烷研磨以得到標(biāo)題化合物(75毫克，產(chǎn)率：76.53％)。
化合物C22:8-氨基-2-((3-氨基-4-氟苯基)氨基)-5-甲基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮
向攪拌的2-((3-氨基-4-氟苯基)氨基)-5-甲基-8-硝基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮(C21)(75毫克，0.197毫摩爾)的DMSO(1ml)溶液中加入NaSH(55.26毫克，0.986毫摩爾)。將反應(yīng)混合物攪拌1小時(shí)。加入水(3ml)，并用乙酸乙酯(20ml×3)萃取粗產(chǎn)物。將合并的有機(jī)層用鹽水(20ml×3)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并真空蒸發(fā)以得到粗物質(zhì)，將其用乙酸乙酯和己烷研磨以得到純的預(yù)期化合物(35毫克，產(chǎn)率：50.72％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.29(s,1H),8.65(s,1H),8.43(d,J＝8.4Hz,1H),7.47(d,J＝2.4Hz,1H),7.38(dd,J＝8Hz,2.4Hz 1H),7.13(dd,J＝8.4Hz,2.4HZ,1H)6.96-6.89(m,2H),6.26(s,2H),5.11(s,2H),3.69(s,3H)ppm。
LCMS:91.06％ESI-MS(m/z):351.13[M+1]+。HPLC:91.33％。
化合物C23:2-((5-氨基-2-氟苯基)氨基)-9-甲氧基-5-甲基-8-硝基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮
向攪拌的4-溴-6-甲氧基-2-甲基-7-硝基-1-氧代-1,2-二氫異喹啉-3-甲醛(A2)(150毫克，0.439毫摩爾)的DMF(1ml)溶液中加入1-(5-氨基-2-氟苯基)胍(B3)(147毫克，0.879毫摩爾)和K2CO3(182毫克，1.32毫摩爾)。將混合物在90℃加熱2小時(shí)。加入水(10ml)，將固體過濾，用水(10ml×3)洗滌，真空干燥以得到粗物質(zhì)，將其用己烷研磨以得到預(yù)期化合物(80毫克，產(chǎn)率：46.37％)。
化合物C24:8-氨基-2-((5-氨基-2-氟苯基)氨基)-9-甲氧基-5-甲基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮
向攪拌的2-((5-氨基-2-氟苯基)氨基)-9-甲氧基-5-甲基-8-硝基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮(C23)(80毫克，0.194毫摩爾)的DMSO(5ml)溶液中加入NaSH(56.93毫克，1.02毫摩爾)，并且將混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。然后加入水(20ml)，并用乙酸乙酯(20ml×3)萃取粗產(chǎn)物。將合并的有機(jī)層用鹽水(20ml×3)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并減壓蒸發(fā)以得到粗物質(zhì)，將其通過柱色譜法純化以得到預(yù)期化合物(15毫克，產(chǎn)率：20.30％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.66(d,J＝9.6Hz,2H),7.95(s,1H),7.52(s,1H),7.40(dd,J＝2.8Hz,7.2Hz,1H),6.87(dd,J＝8.8Hz,11.2Hz,1H),6.26-6.22(m,1H),5.93(s,2H),4.93(s,2H),4.01(s,3H),3.67(s,3H)ppm。
LCMS:97.25％ESI-MS(m/z):381.28[M+1]+。HPLC:97.19％。
化合物C25:2-((3-氨基-5-氟苯基)氨基)-9-甲氧基-5-甲基-8-硝基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮
向攪拌的4-溴-6-甲氧基-2-甲基-7-硝基-1-氧代-1,2-二氫異喹啉-3-甲醛(A2)(150毫克，0.439毫摩爾)的DMF(1ml)溶液中加入1-(3-氨基-5-氟苯基)胍(B4)(147毫克，0.879毫摩爾)和K2CO3(182毫克，1.32毫摩爾)。將混合物在90℃加熱2小時(shí)，加入水(10ml)，將由此得到的固體過濾，用水(10ml×3)洗滌，真空干燥以得到粗物質(zhì)，將其用己烷研磨，得到預(yù)期的化合物(80毫克，產(chǎn)率：46.37％)。
LCMS:88.18％ESI-MS(m/z):411.15[M+1]+。
化合物C26:8-氨基-2-((3-氨基-5-氟苯基)氨基)-9-甲氧基-5-甲基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮
向攪拌的2-((3-氨基-5-氟苯基)氨基)-9-甲氧基-5-甲基-8-硝基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮(C25)(80毫克，0.194毫摩爾)的DMSO(5ml)溶液中加入NaSH(56.93毫克，1.02毫摩爾)，并且將混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。然后加入水(10ml)，并用乙酸乙酯(20ml×3)萃取粗產(chǎn)物。將合并的有機(jī)層用鹽水(20ml×3)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并減壓濃縮以得到粗物質(zhì)，將其通過快速色譜法純化(30毫克，產(chǎn)率：40.60％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.53(s,1H),8.71(s,1H),7.98(s,1H),7.53(s,1H),7.12(d,J＝12Hz,1H),6.88(s,1H),5.96(s,2H),5.30(s,2H),4.04(s,3H),3.68(s,3H)ppm。
LCMS:98.58％ESI-MS(m/z):381.19[M+1]+。HPLC:95.92％。
化合物C27:2-((3-氨基-4-氟苯基)氨基)-9-甲氧基-5-甲基-8-硝基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮
向攪拌的4-溴-6-甲氧基-2-甲基-7-硝基-1-氧代-1,2-二氫異喹啉-3-甲醛(A2)(150毫克，0.439毫摩爾)的DMF(1ml)溶液中加入1-(3-氨基-4-氟苯基)胍(B5)(147毫克，0.879毫摩爾)和K2CO3(182毫克，1.32毫摩爾)。將反應(yīng)混合物在90℃加熱2小時(shí)。然后加入水(10ml)，將固體過濾，用水(10ml×3)洗滌，并真空干燥。將粗物質(zhì)用己烷研磨以得到預(yù)期的化合物(80毫克，產(chǎn)率：46.37％)。
化合物C28:8-氨基-2-((3-氨基-4-氟苯基)氨基)-9-甲氧基-5-甲基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮
向攪拌的2-((3-氨基-4-氟苯基)氨基)-9-甲氧基-5-甲基-8-硝基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮(C27)(80毫克，0.194毫摩爾)的DMSO(5ml)溶液中加入NaSH(56.93毫克，1.02毫摩爾)，并且將反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。然后加入水(20ml)，并用乙酸乙酯(20ml×3)萃取所得粗產(chǎn)物。將合并的有機(jī)層用鹽水(20ml×3)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并減壓蒸發(fā)以得到粗物質(zhì)，將其通過快速色譜法純化(15毫克，產(chǎn)率：20.30％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.34(s,1H),8.67(s,1H),7.99(s,1H),7.53(s,1H),7.44(d,J＝7.6Hz,1H),6.93-6.91(m,2H),5.93(s,2H),5.05(s,2H),4.05(s,3H),3.67(s,3H)ppm。
LCMS:99.39％ESI-MS(m/z):381.09[M+1]+。HPLC:98.61％。
化合物C29:3-((9-甲氧基-5-甲基-8-硝基-6-氧代-5,6-二氫嘧啶并[5,4-c]異喹啉-2-基)氨基)苯甲腈
向攪拌的4-溴-6-甲氧基-2-甲基-7-硝基-1-氧代-1,2-二氫異喹啉-3-甲醛(A2)(150毫克，0.439毫摩爾)的DMF(2ml)溶液中加入1-(3-氰基苯基)胍(B7)(140毫克，0.879毫摩爾)和K2CO3(180毫克，1.31毫摩爾)。將反應(yīng)混合物在90℃下加熱2小時(shí)。然后加入水(3ml)，將由此得到的固體過濾，用水(10ml×3)洗滌，真空干燥以得到粗產(chǎn)物，將其用己烷研磨以得到純的預(yù)期化合物(80毫克，產(chǎn)率：45.21％)。
LCMS:68.27％ESI-MS(m/z):401.20[M-1]-。
化合物C30:8-氨基-2-((3-(氨基甲基)苯基)氨基)-9-甲氧基-5-甲基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮
向攪拌的雷尼鎳(30毫克)的甲醇(2ml)懸浮液中加入甲醇氨(10ml)中的3-((9-甲氧基-5-甲基-8-硝基-6-氧代-5,6-二氫嘧啶并[5,4-c]異喹啉-2-基)氨基)苯甲腈(C29)(80毫克，0.206毫摩爾)。將反應(yīng)混合物于室溫在50psi H2氣體下攪拌過夜。將反應(yīng)混合物通過過濾，并用甲醇(20ml×3)洗滌。將合并的濾液在真空下蒸發(fā)以得到粗物質(zhì)，將其通過快速色譜法純化(20毫克，產(chǎn)率：25.79％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.77(s,1H)8.74(s,1H),8.20(s,1H),8.00(s,1H),7.73(m,3H),7.55(s,1H),7.37(s,1H),7.09(s,1H),5.99(s,2H),4.07(s,3H),3.99(s,2H),3.69(s,3H)ppm。
LCMS:96.33％ESI-MS(m/z):377.19[M+1]+。HPLC:95.18％。
化合物C31:2-((3-氨基苯基)氨基)-8-硝基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮
向攪拌的4-溴-7-硝基-1-氧代-1,2-二氫異喹啉-3-甲醛(A4)(0.15克，0.54毫摩爾)的DMF(10ml)溶液中加入1-(3-氨基苯基)胍(B1)(0.151克，1.1毫摩爾)和K2CO3(0.209克，1.51毫摩爾)。將反應(yīng)混合物在90℃下加熱2小時(shí)。然后加入水(10ml)，并過濾固體。然后將固體用水(15ml×3)洗滌，真空干燥，并用己烷研磨以得到預(yù)期化合物(0.08克，產(chǎn)率：45.48％)。
LCMS:67.08％ESI-MS(m/z):347.12[M-1]-。
化合物C32:8-氨基-2-((3-氨基苯基)氨基)嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮
向攪拌的2-((3-氨基苯基)氨基)-8-硝基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮(C32)(80毫克，0.22毫摩爾)的DMSO(1ml)溶液中加入NaSH(61毫克，1.1毫摩爾)。將反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。然后加入水(8ml)，并用乙酸乙酯(10ml×2)萃取由此得到的懸浮液。將合并的有機(jī)層用鹽水(10ml×2)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并真空蒸發(fā)以得到粗物質(zhì)，將其通過快速色譜法純化(15毫克，產(chǎn)率：20.40％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.35(s,1H),9.19(s,1H),8.40(t,J＝8.4Hz,2H),7.41(s,1H),7.24(s,1H),7.15(d,J＝9.2Hz,1H),6.97-9.93(m,2H),6.24(s,2H),6.17(d,J＝6Hz,1H),5.03(s,2H)ppm。
LCMS:98.25％ESI-MS(m/z):319[M+1]+。HPLC:97.08％。
化合物C33:5-甲基-8-硝基-2-((4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)氨基)嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮
向攪拌的4-溴-2-甲基-7-硝基-1-氧代-1,2-二氫異喹啉-3-甲醛(A1)(800毫克，2.58毫摩爾)的DMF(10ml)溶液中加入1-(4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)胍(B8)(830毫克，3.36毫摩爾)和K2CO3(1.06gm,7.74毫摩爾)。將反應(yīng)混合物在90℃下加熱2小時(shí)。然后加入水，將固體過濾，用水(25ml×3)洗滌，真空干燥，并用己烷研磨以得到預(yù)期化合物(550毫克，產(chǎn)率：46.21％)。
化合物C34:8-氨基-5-甲基-2-((4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)氨基)嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮
向攪拌的5-甲基-8-硝基-2-((4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)氨基)嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮(C33)(400毫克，0.86毫摩爾)的乙酸(5ml)溶液中加入鐵粉(200毫克，4.34毫摩爾)。將反應(yīng)混合物在90℃下攪拌1小時(shí)。然后加入乙酸乙酯，將固體過濾，并用乙酸乙酯(ml×3)洗滌。將合并的濾液在真空下蒸發(fā)，將所得固體用乙酸乙酯和己烷研磨以得到純的預(yù)期化合物(300毫克，產(chǎn)率：80.42％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.36(s,1H),8.66(s,1H),8.38(d,J＝8.4Hz,1H),7.76(d,J＝9.2Hz,2H),7.47(d,J＝2.4Hz,1H),7.12(dd,J＝2.4,8.8Hz,1H),6.95(d,J＝9.2Hz,2H),6.26(s,2H),4.05(t,J＝5.6Hz,2H),3.72(s,3H),2.79(t,J＝4.8Hz,2H),2.54(s,4H),1.69(s,4H)ppm。
LCMS:98.09％ESI-MS(m/z):431.45[M+1]+。HPLC:97.53％。
化合物C35:N-(5-甲基-6-氧代-2-((4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)氨基)-5,6二氫嘧啶并[5,4-c]異喹啉-8-基)乙酰胺
將攪拌的8-氨基-5-甲基-2-((4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)氨基)嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮(C34)(150毫克，0.348毫摩爾)的乙酸酐(2ml)溶液在90℃下加熱2小時(shí)。真空除去溶劑，并且將粗物質(zhì)用己烷和乙酸乙酯研磨以得到預(yù)期化合物(40毫克，產(chǎn)率：24.29％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.54(s,1H),9.55(s,1H),8.82(s,1H),8.63(d,J＝8Hz 2H),8.19(d,J＝8.8Hz,1H),7.78(d,J＝8.8Hz,2H),6.96(d,J＝8.8Hz,2H),4.06(t,J＝5.6Hz,2H),3.71(s,3H),2.83(s,2H),2.57(s,4H),2.14(s,4H)ppm。
LCMS:96.03％ESI-MS(m/z):473.21[M+1]+。HPLC:95.80％。
化合物C36:5-甲基-2-((4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)氨基)嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮(C37)
向攪拌的4-溴-2-甲基-1-氧代-1,2-二氫異喹啉-3-甲醛(A3)(0.15克，0.566毫摩爾)的DMF(10ml)溶液中加入1-(4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)胍(B8)(0.28克，1.13毫摩爾)和Cs2CO3(0.55gm,1.69毫摩爾)。將反應(yīng)混合物在90℃下加熱2小時(shí)。然后加入水，將由此得到的固體過濾，用水(25ml×3)洗滌，真空干燥，并用己烷和乙酸乙酯研磨以得到預(yù)期化合物(0.03克，產(chǎn)率：12.80％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.87(s,1H),9.44(s,1H),8.45(d,J＝7.2Hz 1H),8.28(d,J＝8.4Hz 1H),7.82(t,J＝8Hz,1H),7.72(d,J＝8.4Hz,2H),7.54(t,J＝6.8Hz,1H),6.95(d,J＝8.4Hz,2H),4.05(s,2H),3.70(s,3H),2.76(s,4H),1.99(s,4H),1.70(s,4H)ppm。
LCMS:91.48％ESI-MS(m/z):461.19[M+1]+。HPLC:92.36％。
化合物C37:9-甲氧基-2-((3-甲氧基-4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)氨基)-5-甲基-8-硝基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮
向攪拌的4-溴-6-甲氧基-2-甲基-7-硝基-1-氧代-1,2-二氫異喹啉-3-甲醛(A2)(200毫克，0.586毫摩爾)的DMF(2ml)溶液中加入1-(3-甲氧基-4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)胍(B9)(326毫克，1.17毫摩爾)和K2CO3(243毫克，1.76毫摩爾)。將反應(yīng)混合物在90℃加熱2小時(shí)。加入水(10ml)，將由此得到的固體過濾，用水(10ml×3)洗滌，并真空干燥以得到粗混合物，將用己烷研磨以得到預(yù)期化合物(150毫克，產(chǎn)率：49.15％)。
LCMS:77.14％ESI-MS(m/z):521.29[M+1]+。
化合物C38:8-氨基-9-甲氧基-2-((3-甲氧基-4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)氨基)-5-甲基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮
向攪拌的9-甲氧基-2-((3-甲氧基-4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)氨基)-5-甲基-8-硝基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮(C38)(150毫克，0.288毫摩爾)的乙酸(5ml)溶液中加入鐵粉(80毫克，1.44毫摩爾)。將反應(yīng)混合物在90℃加熱2小時(shí)。加入乙酸乙酯(10ml)，并過濾固體。將合并的濾液用飽和NaHCO3溶液(10ml×3)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，并真空蒸發(fā)以得到粗產(chǎn)物，將其通過制備型HPLC純化(15毫克，產(chǎn)率：10.16％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.38(s,1H),8.70(s,1H),7.95(s,1H),7.54(d,J＝6.4Hz,2H),7.44(d,J＝8.4Hz,1H),6.94(d,J＝8.8Hz,1H),5.95(s,2H),4.01(s,4H),3.79(s,3H),3.68(s,3H),2.77(s,4H),1.72(s,4H)ppm。
LCMS:100％ESI-MS(m/z):491.62[M+1]+。HPLC:100％。
化合物C39:9-甲氧基-2-((2-甲氧基-4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)氨基)-5-甲基-8-硝基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮
向攪拌的4-溴-6-甲氧基-2-甲基-7-硝基-1-氧代-1,2-二氫異喹啉-3-甲醛(A2)(200毫克，0.586毫摩爾)的DMF(2ml)溶液中加入1-(2-甲氧基-4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)胍(B10)(326毫克，1.17毫摩爾)和K2CO3(243毫克，1.76毫摩爾)。將反應(yīng)在90℃加熱2小時(shí)。然后加入水(15ml)，將固體過濾，用水(10ml×3)洗滌，并真空干燥以得到粗物質(zhì)，將其用己烷研磨(150毫克，產(chǎn)率：49.15％)。
LCMS:80.43％ESI-MS(m/z):521.19[M+1]+。
化合物C40:8-氨基-9-甲氧基-2-((2-甲氧基-4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)氨基)-5-甲基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮
向攪拌的9-甲氧基-2-((2-甲氧基-4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)氨基)-5-甲基-8-硝基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮(C39)(150毫克，0.288毫摩爾)的乙酸(5ml)中的溶液中加入鐵粉(80毫克，1.44毫摩爾)。將反應(yīng)混合物在90℃加熱2小時(shí)。然后加入乙酸乙酯(10ml)，將固體過濾，并用飽和NaHCO3溶液(10ml×3)洗滌。將合并的有機(jī)層經(jīng)無水硫酸鈉干燥，并真空蒸發(fā)以得到粗物質(zhì)，將其通過制備型HPLC純化(15毫克，產(chǎn)率：10.16％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.64(s,1H),8.18(d,J＝8.4Hz,1H),7.93(s,2H),7.53(s,1H),6.75(s,1H),6.67(t,J＝7.6Hz,1H),5.95(s,2H),4.30(s,2H),4.02(s,3H),3.88(s,3H),3.66(s,3H),3.57-3.51(m,4H),1.93(s,4H)ppm。
LCMS:100％ESI-MS(m/z):491.33[M+1]+。HPLC:99.42％。
化合物C41:9-甲氧基-5-甲基-8-硝基-2-((4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)氨基)嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮
向攪拌的4-溴-6-甲氧基-2-甲基-7-硝基-1-氧代-1,2-二氫異喹啉-3-甲醛(A2)(100毫克，0.294毫摩爾)的DMF(2ml)溶液中加入1-(4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)胍(B8)(87.5毫克，0.352毫摩爾)和K2CO3(81.1毫克，0.588毫摩爾)。將反應(yīng)混合物在90℃加熱2小時(shí)。然后加入水(10ml)，將固體過濾，用水(10ml×3)洗滌，并真空干燥以得到粗產(chǎn)物，將其用己烷研磨以得到預(yù)期化合物(75毫克，產(chǎn)率：52.16％)。
LCMS:92.90％ESI-MS(m/z):491.47[M+1]+。
化合物C42:8-氨基-9-甲氧基-5-甲基-2-((4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)氨基)嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮
向攪拌的9-甲氧基-5-甲基-8-硝基-2-((4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)氨基)嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮(C41)(75毫克，0.153毫摩爾)的乙酸(5ml)溶液中加入鐵粉(42.7毫克，0.765毫摩爾)。將反應(yīng)混合物在90℃加熱1小時(shí)。加入乙酸乙酯(10ml)，將固體過濾并用乙酸乙酯(10ml×3)洗滌。將合并的濾液在真空下蒸發(fā)以得到粗產(chǎn)物，將其用乙酸乙酯和己烷研磨以得到純的預(yù)期化合物(35毫克，產(chǎn)率：50％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.48(s,1H),8.69(s,1H),7.96(s,1H),7.84(d,J＝8.8Hz,2H),7.54(s,1H),7.01(d,J＝8.8Hz,2H),5.97(s,2H),4.31(t,J＝4.4Hz,2H),4.03(s,3H),3.68(s,3H),3.58(br,4H),3.17-3.13(m,2H),2.03(Br,2H),1.91(Br,2H)ppm。
LCMS:89.90％ESI-MS(m/z):461.61[M+1]+。HPLC:89.33％。
化合物C43:2-((3-甲氧基-4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)氨基)-5-甲基-8-硝基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮
向4-溴-2-甲基-7-硝基-1-氧代-1,2-二氫異喹啉-3-甲醛(A1)(200毫克，0.6451毫摩爾)的DMF(1ml)溶液中加入1-(3-甲氧基-4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)胍(B9)(270毫克，0.9676毫摩爾)。加入K2CO3(176毫克，1.29毫摩爾)，并在90℃下加熱2小時(shí)。加入水，將固體過濾，用水(10ml×3)洗滌固體，并真空干燥以得到粗產(chǎn)物，將其用己烷研磨以得到標(biāo)題化合物。(100毫克產(chǎn)率：31.71％)。
化合物C44:8-氨基-2-((3-甲氧基-4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)氨基)-5-甲基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮
向攪拌的2-((3-甲氧基-4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)氨基)-5-甲基-8-硝基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮(C43)(100毫克，0.2040毫摩爾)的乙酸(5ml)溶液中加入鐵粉(100毫克，2.040毫摩爾)。將反應(yīng)混合物在90℃下加熱并攪拌1小時(shí)。然后加入乙酸乙酯(10ml)，將固體過濾并用乙酸乙酯(10ml×3)洗滌。將合并的濾液在真空下蒸發(fā)以得到粗產(chǎn)物，將其通過制備型HPLC純化(60毫克，產(chǎn)率：63.61％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.47(s,1H),8.69(s,1H),8.40(d,J＝8.4Hz,1H),7.74(s,1H),7.47(s,1H),7.39(d,J＝7.6Hz,1H),7.12-7.05(m,2H),4.20(s,2H),3.93(s,3H),3.54(s,3H),3.49-3.40(m,2H),3.15(s,4H),2.05(s,2H),1.91(s,2H)ppm。
LCMS:97.23％ESI-MS(m/z):461.26[M+1]+。HPLC:96.33％。
化合物C45:2-((2-甲氧基-4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)氨基)-5-甲基-8-硝基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮
向攪拌的4-溴-2-甲基-7-硝基-1-氧代-1,2-二氫異喹啉-3-甲醛(A1)(100毫克，0.3225毫摩爾)的DMF(1ml)溶液中加入1-(2-甲氧基-4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)胍(B10)(134毫克，0.4838毫摩爾)和K2CO3(88毫克，0.6451毫摩爾)。將反應(yīng)混合物在90℃下加熱2小時(shí)。然后加入水，將固體過濾，用另外的水(10ml×3)洗滌，并真空干燥以得到粗產(chǎn)物，將其用己烷研磨(107毫克，產(chǎn)率：67.86％)。
化合物C46:8-氨基-2-((3-甲氧基-4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)氨基)-5-甲基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮
向攪拌的2-((2-甲氧基-4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)氨基)-5-甲基-8-硝基嘧啶并[5,4-c]異喹啉-6(5H)-酮(C45)(100毫克，0.2040毫摩爾)的乙酸(5ml)溶液中加入鐵粉(100毫克，2.040毫摩爾)。將反應(yīng)混合物在90℃下加熱1小時(shí)。加入乙酸乙酯(10ml)，將固體過濾并用乙酸乙酯(10ml×3)洗滌。將合并的濾液在真空下蒸發(fā)以得到粗產(chǎn)物，將其用甲醇研磨以得到純的預(yù)期化合物(18毫克，產(chǎn)率：17.92％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.76(s,1H),8.63(s,1H),8.34(d,J＝8.8Hz,1H),8.18(d,J＝8.8Hz,1H),7.91(s,1H),7.47(d,J＝2.4Hz,1H),7.10(dd,J＝2.4Hz,8.8Hz,1H),6.75-6.69(m,2H),4.32(t,J＝4.8Hz,2H),3.87(s,3H),3.66(s,2H),3.65-3.59(m,2H),3.18-3.13(m,2H),2.08(s,2H),1.91(s,2H)ppm。
LCMS:99.43％ESI-MS(m/z):461.26[M+1]+。HPLC:98.01％。
2、根據(jù)本發(fā)明的化合物的生物活性：
在以下實(shí)施例中使用以下縮寫：
EC50 ＝ 觀測(cè)到50％其最大效果的化合物的濃度
FCS ＝ 胎牛血清
IC50 ＝ 產(chǎn)生50％抑制的化合物濃度
IMDM ＝ Iscove氏改良的Dulbecco氏培養(yǎng)基
PSFG ＝ 青霉素鏈霉素兩性霉素
RPMI ＝ 羅斯威爾公園紀(jì)念所培養(yǎng)基
2.1.酶法測(cè)定
重組FLT3(#PV3182)，JAK2(#PV4210)和JAK3(#PV3855)酶購(gòu)自LifeTechnologies。FLT3-ITD(#0778-0000-1)和FLT3D835Y(#14-610)分別購(gòu)自Proquinase和Merck Millipore。
基于Life TechnologiesTR-FRET方法在384孔板中進(jìn)行測(cè)定。
FLT3-ITD或FLT3D835Y測(cè)定：將15nM的FLT3-ITD或FLT3D835Y，3nM的236激酶跟蹤器(Life Technologies#PV5592)和6nM的銪標(biāo)記的抗GST抗體混合到15μL總體積的反應(yīng)混合物。
FLT3測(cè)定：將15nM的FLT3，3nM的236激酶跟蹤器(Life Technologies#PV5592)和6nM的銪標(biāo)記的抗His抗體混合到15μL總體積的反應(yīng)混合物中。
JAK2測(cè)定：將15nM JAK2，150nM的236激酶跟蹤器(Life Technologies#PV5592)和6nM的銪標(biāo)記的抗GST抗體混合到15μL總體積的反應(yīng)混合物中。
JAK3測(cè)定：將15nM JAK2，3nM的236激酶跟蹤器(Life Technologies#PV5592)和6nM的銪標(biāo)記的抗GST抗體混合到15μL總體積的反應(yīng)混合物中。
使用10mM化合物儲(chǔ)備溶液至純DMSO(Sigma#D8418)，從跨越>1000倍濃度范圍的8點(diǎn)的劑量-反應(yīng)曲線確定IC50。測(cè)試溶液的總DMSO濃度為1％。在25℃下進(jìn)行1小時(shí)反應(yīng)，并根據(jù)Life Technologies推薦用Perkin Elmer Envision光譜儀顯示反應(yīng)。
使用軟件Prism(Graphpad)生成IC50。結(jié)果存在于表1中。
表1：IC50<25nM:A；25nM≤IC50<100nM:B；100nM≤IC50<1μM:C；IC50≥1μM:D。
2.2.抗增殖活性測(cè)定
細(xì)胞系MV4-11和MOLM-13根據(jù)提供者推薦在表2中描述的條件生長(zhǎng)。
表2：生長(zhǎng)條件
測(cè)定在96孔板中進(jìn)行。細(xì)胞在第0天傳代，在第1天接種，并加入漸增量的化合物以評(píng)價(jià)。將板在37℃，5％CO 2氣氛下孵育72小時(shí)。
進(jìn)行化合物儲(chǔ)備溶液在DMSO(Sigma#D8414)中的半對(duì)數(shù)稀釋，以獲得0.1％DMSO溶液。
在第4天用ATPLite(Perkin Elmer#6016947)試劑盒測(cè)量細(xì)胞活力。
使用內(nèi)部開發(fā)的曲線擬合軟件計(jì)算EC50，并呈現(xiàn)在表3中。
表3 EC50<25nM:A；25nM≤EC50<100nM:B；100nM≤EC50<1μM:C；EC50≥1μM:D。