本發(fā)明涉及藥物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種喹唑啉衍生物及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
表皮生長因子受體(Epidermal growth factor receptor，EGFR)是ErbB蛋白家族成員，其它三個(gè)亞型分別是HER2(Neu，ErbB2)，HER3(ErbB3)和HER4(ErbB4)，它們?cè)诩?xì)胞的增殖和分化過程中發(fā)揮著重要作用，也是目前被研究最為深入的酪氨酸受體蛋白之一。EGFR廣泛存在于皮膚、毛囊和胃腸道等正常表皮組織中，對(duì)維持正常生理活動(dòng)發(fā)揮著重要作用。然而，EGFR的過度表達(dá)或持續(xù)激活會(huì)引發(fā)眾多癌癥，在包括結(jié)直腸癌、肺癌、乳腺癌和頭頸部癌等在內(nèi)的癌癥中都有EGFR異常情況的出現(xiàn)。
在2003～2004年，EGFR小分子抑制劑Gefitinib和Erlotinib先后被美國FDA批準(zhǔn)上市用于治療非小細(xì)胞肺癌患者，這些藥物尤其對(duì)攜帶活化突變的EGFR基因型(占該癌癥患者總數(shù)的10～20％)的非小細(xì)胞肺癌患者有效。不幸的是，高敏感型患者在服用藥物大約一年后，往往會(huì)形成獲得性耐藥。在獲得性耐藥機(jī)制中，最普遍(占耐藥患者總數(shù)的50％)的一種是EGFR的二次突變T790M，即第790位上的蘇氨酸突變?yōu)榧琢虬彼?，它能夠增加EGFR與ATP的結(jié)合能力，從而使Gefitinib這些藥物分子難以競(jìng)爭(zhēng)過ATP與EGFR的結(jié)合，從而失去藥效。
大量的研究表明，發(fā)展靶向性EGFR和HER2酪氨酸激酶的雙重抑制劑具有以下優(yōu)勢(shì)：1.同時(shí)抑制EGFR和HER2兩種酪氨酸激酶，更易于克服在使用單一酪氨酸激酶抑制劑時(shí)EGFR家族其他成員上調(diào)引起的細(xì)胞生長信號(hào)冗余從而產(chǎn)生的抗藥性；2.由于EGFR和HER2異源二聚體活性最高，EGFR和HER2酪氨酸激酶的雙重抑制劑對(duì)更多數(shù)的癌癥患者有效。3.與單一抑制劑相比，雙重抑制劑對(duì)腫瘤細(xì)胞抑制效果具有疊加效應(yīng)。體外和體內(nèi)試驗(yàn)也表明，對(duì)EGFR和HER2酪氨酸激酶雙重抑制的抗癌效果大于對(duì)單一受體的抑制。另外與同時(shí)使用兩個(gè)分別作用于單一靶點(diǎn)的藥物相比，作用于兩個(gè)靶點(diǎn)的藥物患者使用起來比較方便，還可以避免藥物與藥物的相互作用。
綜上所述，開發(fā)靶向EGFR和HER2酪氨酸激酶的雙重不可逆抑制劑是理性的選擇。
目前，進(jìn)入臨床研究的不可逆雙重酪氨酸激酶抑制劑有Afatinib,HKI-272和PF299804，臨床實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明這類抑制劑具有很好的開發(fā)前景。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
基于此，有必要提供一種新結(jié)構(gòu)的喹唑啉衍生物，該類新結(jié)構(gòu)的喹唑啉衍生物，對(duì)EGFR及HER2兩種酪氨酸激酶同時(shí)具有抑制作用，并且對(duì)多種癌細(xì)胞具有很好的抑制活性。
一種式I所示的喹唑啉衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽：
其中，
R1任選自：苯基，取代的苯基，含有并環(huán)類的芳基，雜芳基；
R2任選自：C1-C6鏈狀烷基，C3-C8環(huán)狀烷基，含有O、N、S、P雜原子的C1-C6鏈狀雜烷基，含有O、N、S、P雜原子的C3-C8環(huán)狀雜烷基；
R5任選自：氫，鹵素，氰基，C1-C6鏈狀烷基，C3-C8環(huán)狀烷基；
R6任選自：氫，C1-C6鏈狀烷基，C3-C8環(huán)狀烷基；
R7任選自：氫，鹵素，氰基，C1-C6鏈狀烷基，C3-C8環(huán)狀烷基，含有O、N、S、P雜原子的C1-C6鏈狀雜烷基，含有O、N、S、P雜原子的C3-C8環(huán)狀雜烷基；
并且，R5，R6，R7中任意兩個(gè)取代基可成環(huán)；
X選自：C,S＝O；
Y選自：C-CN,N；
W選自如下基團(tuán)：
其中：R3任選自：氫，C1-C3鏈狀烷基；
R4任選自：氫，C1-C3鏈狀烷基。
上述喹唑啉衍生物的研發(fā)，是為了克服藥物抗性以及早期可逆抑制劑給藥量大的缺點(diǎn)，所進(jìn)行的不可逆抑制劑的研究。利用EGFR和HER2激酶ATP結(jié)合區(qū)邊緣的Cys773和Cys805氨基酸殘基上巰基具有較強(qiáng)的親核性的特點(diǎn)，在藥物分子中引入一個(gè)Michael加成受體，使藥物分子能夠與激酶形成共價(jià)鍵結(jié)合，達(dá)到不可逆抑制的目的。
在其中一些實(shí)施例中，R1選自如下基團(tuán)：
其中，R8任選自：氫，C1-C6烷基，C6-C10取代芳烷基，鹵素，CF3，CHF2，CH2F，OR9，NR9R10，CN，CO2R9，CON R9R10，SO2R9，SO2N R9R10，NO2，NCON R9R10，NCO2R9，OCONR9R10，CSN R9R10，NCSN R9R10；
R9、R10各自任選自：氫、C1-C6烷基，含有O、N、S、P雜原子的C1-C6鏈狀雜烷基；
Z選自：C,N,O。
在其中一些實(shí)施例中，R1選自如下基團(tuán)：
其中：R8選自：氫，C1-C6烷基，鹵素。
在其中一些實(shí)施例中，R2選自如下基團(tuán)：
其中：
R11，R12各自任選自：氫，C1-C6鏈狀烷基，含有O、N、S、P雜原子的C1-C6鏈狀雜烷基；
并且，R11和R12兩個(gè)取代基可以成環(huán)；
N選自：1-6。
在其中一些實(shí)施例中，R7選自如下基團(tuán)：
其中：
R11，R12各自任選為：氫，C1-C6鏈狀烷基，含有O、N、S、P雜原子的C1-C6鏈狀雜烷基；
并且，R11和R12兩個(gè)取代基可以成環(huán)；
m選自：1-6。
在其中一些實(shí)施例中，R1選自如下基團(tuán)：
其中：R8選自：氫，C1-C6烷基，鹵素；
R2選自如下基團(tuán)：
其中：
R11，R12各自任選自：氫，C1-C6鏈狀烷基；
n選自：1-2；
R5選自：氫，氰基；
R6選自：氫；
R7選自如下基團(tuán)：
其中：
R11，R12各自任選為：氫，C1-C6鏈狀烷基，含有O、N、S、P雜原子的C1-C6鏈狀雜烷基；
并且，R11和R12兩個(gè)取代基可以成環(huán)；
m選自：1-2；
X選自：C,S＝O；
Y選自：C-CN,N；
W選自如下基團(tuán)：
其中：R3任選自：氫；
R4任選自：氫。
在其中一些實(shí)施例中，該喹唑啉衍生物選自如下化合物之一：
N-(4-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-(2-(二甲氨基)乙氧基)喹唑啉-6-基)-2-甲基丁基-3-炔-2-基)丙烯酰胺；
N-(3-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-(2-嗎啉基乙氧基)喹唑啉-6-基)丙基-2-炔-1-基)丙烯酰胺；
N-(3-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-(2-(二甲氨基)乙氧基)喹唑啉-6-基)丙基-2-炔-1-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(3-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-6-基)丙基-2-炔-1-基)丁基-2-烯基酰胺；
N-(3-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-乙氧基喹唑啉-6-基)丙基-2-炔-1-基)丙烯酰胺；
N-(3-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-6-基)丙基-2-炔-1-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(4-(4-((3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基)氨基)-7-乙氧基喹唑啉-6-基)-2-甲基丁基-3-炔-2-基)-4-(二甲基氨基)丁基-2-烯基酰胺；
N-(4-(4-((3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基)氨基)-7-乙氧基喹唑啉-6-基)-2-甲基丁基-3-炔-2-基)丙烯酰胺；
N-(3-(4-((3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基)氨基)-7-乙氧基喹唑啉-6-基)丙基-2-炔-1-基)丙烯酰胺；
N-(3-(4-((3-氯-4-((3-氟芐基)氧基)苯基)氨基)-7-乙氧基喹唑啉-6-基)丙基-2-炔-1-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(3-(4-((3-氯-4-((3-氟芐基)氧基)苯基)氨基)-7-乙氧基喹唑啉-6-基)丙基-2-炔-1-基)丁基-2-烯基酰胺；
N-(3-(4-((3-氯-4-((3-氟芐基)氧基)苯基)氨基)-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-6-基)丙基-2-炔-1-基)丙烯酰胺；
N-(3-(4-((3-氯-4-((3-氟芐基)氧基)苯基)氨基)-7-乙氧基喹唑啉-6-基)丙基-2-炔-1-基)乙烯磺酰胺；
N-(4-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)-2-甲基丁基-3-炔-2-基)丙烯酰胺；
N-(3-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)-丙基-2-炔-1-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(3-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)丙基-2-炔-1-基)-4-(二甲基氨基)丁基-2-烯酰胺；
(E)-N-(4-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)-2-甲基丁基-3-炔-2-基)-4-嗎啉代丁基-2-烯酰胺；
(E)-N-(3-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)丙基-2-炔-1-基)-4-嗎啉代丁基-2烯酰胺；
N-((4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-6-基)甲基)丙烯酰胺；
N-丙烯酰-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-6-甲酰胺；
N-(4-(4-((3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基)氨基)-7-乙氧基喹唑啉-6-基)-2-甲基丁基-3-炔-2-基)-2-氰基-2-烯酰胺；
N-(4-(4-((3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基)氨基)-3-氰基-7-乙氧基喹唑啉-6-基)-2-甲基丁基-3-炔-2-基)丙烯酰胺。
本發(fā)明還公開了上述的喹唑啉衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽的制備方法，采用以下路線合成：
或采用以下路線合成：
或采用以下路線合成：
本發(fā)明還公開了上述的喹唑啉衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
在其中一些實(shí)施例中，所述腫瘤包括血管瘤、子宮內(nèi)膜異位癥、胃腸間腫瘤、組織細(xì)胞性淋巴癌、非小細(xì)胞肺癌、小細(xì)胞肺癌、肺腺癌、肺鱗癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、肝 癌、皮膚癌、上皮細(xì)胞癌、鼻咽癌、白血病中的至少一種。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：
本發(fā)明的喹唑啉衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽，對(duì)酪氨酸激酶具有不可逆的抑制作用，且該類化合物能夠同時(shí)抑制EGFR和HER2兩種酪氨酸激酶，更易克服在使用單一酪氨酸激酶不可逆抑制劑時(shí)EGFR家族其它成員上調(diào)引起的抗藥性。并且，當(dāng)在喹唑啉的7位引入取代基后，該類化合物雖然對(duì)酶活性與陽性對(duì)照藥相當(dāng)，但是其對(duì)多種癌癥細(xì)胞系具有優(yōu)于陽性對(duì)照藥的效果，這可能與藥物分子的代謝以及進(jìn)入細(xì)胞的生物利用度有關(guān)。
具體實(shí)施方式
以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說明，但并不對(duì)本發(fā)明造成任何限制。
本發(fā)明的化合物及其鹽也可以通過已知用于制備化學(xué)相關(guān)化合物的方法制備，在實(shí)施例中涉及的原料均可通過現(xiàn)有技術(shù)的類似方法獲得。
“取代的”是指用指定取代基的基團(tuán)置換特定結(jié)構(gòu)中的氫基。當(dāng)任何特定結(jié)構(gòu)中的一個(gè)以上位置可經(jīng)一個(gè)以上選自指定群組的取代基取代時(shí)，所述取代基可在每一位置相同或不同。如本文中所使用，術(shù)語“取代”預(yù)期包括有機(jī)化合物的所有可允許取代基。在一廣泛方面，所述可允許取代基包括有機(jī)化合物的非環(huán)狀和環(huán)狀、分支和未分支、碳環(huán)和雜環(huán)、芳香族和非芳香族取代基。諸如氮等雜原子可具有氫取代基和/或本文所述的有機(jī)化合物的任何可允許取代基，所述取代基滿足雜原子的價(jià)數(shù)。
“雜芳基”是指含有5-14元單環(huán)或多環(huán)(例如，雙環(huán)或三環(huán))的4n+2芳香環(huán)系統(tǒng)(例如，在環(huán)狀軌道共享6，10或14個(gè)π電子)，并且芳環(huán)體系具有環(huán)碳原子和1-4個(gè)環(huán)雜原子，，其中每個(gè)環(huán)雜原子獨(dú)立地選自氮，氧和硫(“5-14元雜芳基”)。包含一個(gè)或多個(gè)氮原子的雜芳基，連接點(diǎn)可以是碳或氮原子，如果過化學(xué)價(jià)允許。雜芳基的多環(huán)系統(tǒng)的一個(gè)環(huán)或者兩個(gè)環(huán)可以包括在一個(gè)或多個(gè)雜原子?！半s芳基”還包括如上定義所述的雜芳基環(huán)系統(tǒng)，稠合有一個(gè)或多個(gè)碳環(huán)或雜環(huán)基團(tuán)，其中連接點(diǎn)是雜芳基環(huán)上，并且在這種情況下，環(huán)成員的數(shù)量只包括雜芳基環(huán)體系上成員的數(shù)目。“雜芳基”還包括如上定義所述的雜芳基環(huán)系統(tǒng)，稠合有一個(gè)或多個(gè)芳基基團(tuán)，其中連接點(diǎn)可以是芳基或雜芳基環(huán)上，并且在這種情況下，環(huán)成員的數(shù)量只包括在稠合多環(huán)(芳基/雜芳基)環(huán)體系中的環(huán)成員數(shù)目。多環(huán)雜芳基，其中一個(gè)不含有雜原子的環(huán)(例如，吲哚基，喹啉基，咔唑基，以及類似物)，其連接點(diǎn)可以是在任意一環(huán)上，也就是說，可以是在包含雜原子的環(huán)上(例如，2-吲哚基)或在不含有雜原子的環(huán)上(例如，5-吲哚基)。含2個(gè)雜原子的示例性5元雜芳基包括但不限于，咪唑，吡唑，惡唑，異惡唑基，噻唑基，和異噻唑。含有1個(gè)雜原子的示例性6元雜芳基包括但不限于，吡啶基。含2個(gè)雜 原子的示例性6元雜芳基包括但不限于，噠嗪基，嘧啶基，和吡嗪基。
“烷基”是指飽和烴基或不飽和烷基，“鏈狀烷基”是指直鏈或支鏈的烷基，如C1-C6鏈狀烷基是指具有1至6個(gè)碳原子的飽和或不飽和、直鏈或支鏈的烷基，其中飽和直鏈烷基的示例包括但不限于乙基，正丙基等，飽和支鏈烷基的示例包括但不限于異丙基，叔丁基等，不飽和直鏈烷基的示例包括但不限于乙烯基、丙烯基等，不飽和支鏈烷基的示例包括但不限于2-甲基丙烯基等；“環(huán)狀烷基”是指具有環(huán)狀結(jié)構(gòu)的烷基，如C3-C8環(huán)狀烷基指具有3至8個(gè)碳原子的飽和或不飽和的具有環(huán)狀結(jié)構(gòu)的烷基，其中飽和環(huán)狀烷基的示例包括但不限于環(huán)丙基，環(huán)戊基、乙基取代環(huán)己基等，不飽和環(huán)狀烷基的示例包括但不限于環(huán)戊烯等。除非另外指明，烷基可以是未被取代的(即“未取代的烷基”)或被一個(gè)或多個(gè)取代基取代的(即“取代的烷基”)。
“雜烷基”是指如本文所定義的烷基，其中主鏈還包括1個(gè)或多個(gè)雜原子(如氧，硫，氮，硼，硅，磷)。
實(shí)施例1
化合物7-1，N-(4-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-(2-(二甲氨基)乙氧基)喹唑啉-6-基)-2-甲基丁基-3-炔-2-基)丙烯酰胺的制備。
按照以下線路合成：
步驟(1)制備化合物2(即2-胺基-4-氟-5-碘苯甲酸甲酯)，方法如下：
取一250mL潔凈兩口圓底燒瓶，依次加入50g原料1(322.58mmol),100mL叔丁醇和50mL水，攪拌下分批加入44.g(161.29mmol)單質(zhì)碘，然后緩慢滴加40mL 30％的雙氧水，于油浴中加熱至50℃保溫2h。TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后，體系冷卻至室溫，加入 50mL飽和亞硫酸氫鈉水溶液，讓后用150mL乙酸乙酯萃取三次，合并有機(jī)相，用50mL飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，重結(jié)晶，即得到目標(biāo)化合物2(59.61g，產(chǎn)率66％)。步驟(2)制備化合物3，方法如下：
取一50mL潔凈單口圓底燒瓶，依次加入1.8g化合物2,原甲酸甲酯1.36g，乙酸銨0.988g，乙腈20mL。加熱至回流，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后，體系冷卻至室溫，加入5mL水，攪拌，抽濾，濾餅用5mL水洗滌兩次，抽干，然后用5mL乙醚洗滌兩次，真空干燥，得乳白色固體，即為化合物3(1.58g，產(chǎn)率86％)。
步驟(3)制備化合物4-1，方法如下：
取一潔凈二口瓶中加入干燥的DMF 50mL和NaH(60％)(692mg，34.6mmol)130mg，體系在室溫下攪拌均勻后滴加2-二甲基乙醇胺(1.3mL,26mmol)，體系攪拌30分鐘后加入5g化合物3(17.3mmol)，90℃下反應(yīng)，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)，反應(yīng)完全后冷卻至0℃，滴加水有沉淀析出，過濾烘干得褐色固體，即為化合物4-1(5.35g，產(chǎn)率98％)。
步驟(4)制備化合物5-1，方法如下：
取一潔凈二口瓶中加入化合物4-1(3.15g，10mmol)，甲苯20mL和POCl3(5mL)，體系攪拌均勻后往體系中緩慢滴加Et3N(2.69mL)，加完后加熱至75℃攪拌4小時(shí)，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)，原料反應(yīng)完全后往體系中滴加10mL溶解有原料8-1(1.6g)的乙腈溶液，繼續(xù)在75℃下攪拌2小時(shí)，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)，完全反應(yīng)完后冷卻至室溫，過濾，濾餅加入到裝有75毫升1.2M的氫氧化鈉水溶液中，體系攪拌2小時(shí)后過濾，濾餅用10毫升水洗滌2次后烘干得黃色固體，即為化合物5-1(4.01g，91％)。
步驟(5)制備化合物7-1，方法如下：
取一潔凈兩口瓶，加入50mg化合物5-1、Pd(Ph3)2Cl28mg、CuI 2.3mg和5mL N,N-二甲基甲酰胺，用氮?dú)庵脫Q體系三次后滴加187mg的DIPEA(N，N-二異丙基乙胺)，體系攪拌均勻后滴加24mg的化合物6-1，反應(yīng)體系在室溫下攪拌,TLC監(jiān)測(cè)(DCM:MeOH＝10:1)，反應(yīng)完全后，加水有沉淀析出，過濾，濾餅烘干后過柱純化得白色固體，即為化合物7-1(30mg，65％)。
該目標(biāo)化合物的表征數(shù)據(jù)為：1H-NMR(400MHz，DMSO-d6):δ9.89(brs,1H),8.54(s,1H),8.29(s,1H),8.18-8.20(m,1H),7.81-7.85(m,1H),7.40-7.54(m,1H),7.21(s,1H),6.30(dd,J＝16Hz,8Hz,1H),6.11(dd,J＝12Hz,3Hz,1H),5.59(dd,J＝8Hz,3Hz,1H),4.24(t,J＝8Hz,1H),2.78(t,J＝8Hz,2H),2.25(s,6H),1.67(s,6H).
實(shí)施例2
化合物7-2，N-(3-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-(2-嗎啉基乙氧基)喹唑啉-6-基)丙基-2-炔-1-基)丙烯酰胺的制備。
參照實(shí)施例1的方法制備，僅是在步驟(3)中選用N-(2-羥乙基)嗎啉為原料，操作方法如實(shí)施例1，步驟5)采用6-2為原料，制備得到目標(biāo)化合物7-2。
該目標(biāo)化合物的表征數(shù)據(jù)為：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.84(s,1H),8.69(t,J＝5.6Hz,1H),8.63(s,1H),8.56(s,1H),8.19(dd,J＝6.9,2.6Hz,1H),7.82(ddd,J＝9.0,4.3,2.7Hz,1H),7.42(t,J＝9.1Hz,1H),7.23(s,1H),6.27(dd,J＝17.1,10.0Hz,1H),6.16(dd,J＝17.1,2.3Hz,1H),5.66(dd,J＝10.0,2.4Hz,1H),4.26-4.31(m,4H),3.60(q,J＝4.7Hz,4H),2.79-2.83(m,2H),2.57-2.62(m,4H).
實(shí)施例3
化合物7-3，N-(3-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-(2-(二甲氨基)乙氧基)喹唑啉-6-基)丙基-2-炔-1-基)丙烯酰胺的制備。
參照實(shí)施例1的方法制備，僅是在步驟5)采用化合物6-2為原料，制備得到目標(biāo)化合物7-3。
該目標(biāo)化合物的表征數(shù)據(jù)為：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.93(s,1H),8.78(t,J＝5.8Hz,1H),8.69(s,1H),8.56(s,1H),8.21(dd,J＝7.0,2.6Hz,1H),7.84(dt,J＝7.5,3.4Hz,1H),
7.42(t,J＝9.1Hz,1H),7.22(s,1H),6.29(dd,J＝17.1,10.1Hz,1H),6.16(d,J＝16.9Hz,1H),
5.66(dd,J＝10.0,2.4Hz,1H),4.21-4.29(m,4H),2.77(t,J＝5.4Hz,2H),2.31(s,6H).
實(shí)施例4
化合物7-4，(E)-N-(3-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-6-基)丙基-2-炔-1-基)丁基-2-烯基酰胺的制備。
參照實(shí)施例1的方法制備，僅是在步驟(3)中選用2-甲氧基乙醇為原料，操作方法如實(shí)施例1，步驟5)采用6-3為原料，制備得到目標(biāo)化合物7-4。
該目標(biāo)化合物的表征數(shù)據(jù)為：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.86(s,1H),8.69-8.71(m,1H),8.64(s,1H),8.57(s,1H),8.19-8.20(m,1H),7.80-7.84(m,1H),7.44(t,J＝9.1Hz,1H),7.21(s,1H),6.27(dd,J＝16Hz,8Hz,1H),6.15(dd,J＝12Hz,3Hz,1H),5.65(dd,J＝8Hz,3Hz,1H),4.22-4.31(m,4H),1.41(t,J＝6.9Hz,3H).
實(shí)施例5
化合物7-5，N-(3-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-乙氧基喹唑啉-6-基)丙基-2-炔-1-基)丙烯酰胺的制備。
參照實(shí)施例1的方法制備，僅是在步驟(3)中選用乙醇為原料，操作方法如實(shí)施例1，步驟5)采用6-2為原料，制備得到目標(biāo)化合物7-5。
該目標(biāo)化合物的表征數(shù)據(jù)為：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.86(s,1H),8.69-8.71(m,1H),8.64(s,1H),8.57(s,1H),8.19-8.20(m,1H),7.80-7.84(m,1H),7.44(t,J＝9.1Hz,1H),7.21(s,1H),6.27(dd,J＝16Hz,8Hz,1H),6.15(dd,J＝12Hz,3Hz,1H),5.65(dd,J＝8Hz,3Hz,1H),4.22-4.31(m,4H),1.41(t,J＝6.9Hz,3H).
實(shí)施例6
化合物7-6，N-(3-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-6-基)丙基-2-炔-1-基)丙烯酰胺的制備。
參照實(shí)施例1的方法制備，僅是在步驟(3)中選用2-甲氧基乙醇為原料，操作方法如實(shí)施例1，步驟5)采用6-2為原料，制備得到目標(biāo)化合物7-6。
該目標(biāo)化合物的表征數(shù)據(jù)為：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.86(s,1H),8.69-8.71(m,1H),8.64(s,1H),8.57(s,1H),8.19-8.20(m,1H),7.80-7.84(m,1H),7.44(t,J＝9.1Hz,1H),7.24(s,1H),6.27(dd,J＝16Hz,8Hz,1H),6.15(dd,J＝12Hz,3Hz,1H),5.65(dd,J＝8Hz,3Hz,1H),4.23-4.33(m,4H),3.75-3.82(m,2H),3.38(s,3H).
實(shí)施例7
化合物7-7，(E)-N-(4-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-6-基)-2-甲基丁基-3-炔-2-基)-4-(二甲基氨基)丁基-2-烯基酰胺的制備。
參照實(shí)施例1的方法制備，僅是在步驟(3)中選用2-甲氧基乙醇為原料，操作方法如實(shí)施例1，步驟5)采用6-4為原料，制備得到目標(biāo)化合物7-7。
該目標(biāo)化合物的表征數(shù)據(jù)為：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.91(s,1H),8.56-8.57(m,2H),8.19-8.21(m,2H),7.83-7.85(m,1H),7.44(t,J＝9.1Hz,1H),7.20(s,1H),6.60(dt,J＝15.4,6.1Hz,1H),6.13(d,J＝15.5Hz,1H),4.28(dd,J＝5.6,3.2Hz,2H),3.77(dd,J＝5.3,3.2Hz,2H),3.34(s,3H),2.99(dd,J＝6.1,1.6Hz,2H),2.15(s,6H),1.67(s,6H).
實(shí)施例8
化合物7-8，(E)-N-(4-(4-((3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基)氨基)-7-乙氧基喹唑啉-6-基)-2-甲基丁基-3-炔-2-基)-4-(二甲基氨基)丁基-2-烯基酰胺的制備。
參照實(shí)施例1的方法制備，僅是在步驟(3)中選用乙醇為原料，操作方法如實(shí)施例1，步驟5)采用6-5為原料，制備得到目標(biāo)化合物7-8。
該目標(biāo)化合物的表征數(shù)據(jù)為：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.78(s,1H),8.61(dd,J＝5.0,1.6Hz,1H),8.53(d,J＝9.3Hz,2H),8.31(s,1H),8.05(d,J＝2.6Hz,1H),7.89(td,J＝7.7,1.8Hz,1H),7.80–7.66(m,2H),7.60(d,J＝7.8Hz,1H),7.38(dd,J＝7.5,4.9Hz,1H),7.26(d,J＝9.1Hz,1H),7.15(s,1H),6.61(dt,J＝15.5,6.4Hz,1H),6.19(d,J＝15.3Hz,1H),5.30(s,2H),4.30–4.14(m,2H),3.27-3.29(m,2H),2.35(s,6H),1.68(s,6H),1.42(t,J＝6.9Hz,3H).
實(shí)施例9
化合物7-9，N-(4-(4-((3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基)氨基)-7-乙氧基喹唑啉-6-基)-2-甲基 丁基-3-炔-2-基)丙烯酰胺的制備。
參照實(shí)施例1的方法制備，僅是在步驟3)選用乙醇為原料，操作方法如實(shí)施例1，步驟4)采用8-2為原料，制備得到目標(biāo)化合物7-9。
該目標(biāo)化合物的表征數(shù)據(jù)為：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.76(s,1H),8.59(d,J＝4.3Hz,1H),8.52(s,1H),8.50(s,1H),8.29(s,1H),8.04(d,J＝2.6Hz,0H),7.88(td,J＝7.7,1.8Hz,1H),7.71(dd,J＝9.0,2.6Hz,1H),7.58(d,J＝7.9Hz,1H),7.48–7.30(m,1H),7.25(d,J＝9.0Hz,1H),7.14(s,1H),6.28(dd,J＝10.1Hz,2.3Hz,1H),5.59(dd,J＝10.1,2.3Hz,1H),5.60(dd,J＝8Hz,3Hz,1H),5.28(s,2H),4.19(q,J＝6.8Hz,2H),1.68(s,6H),1.41(t,J＝6.9Hz,3H).
實(shí)施例10
化合物7-10，N-(3-(4-((3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基)氨基)-7-乙氧基喹唑啉-6-基)丙基-2-炔-1-基)丙烯酰胺的制備。
參照實(shí)施例1的方法制備，僅是在步驟3)選用乙醇為原料，操作方法如實(shí)施例1，步驟4)采用化合物8-2為原料，步驟5)采用6-2為原料，制備得到目標(biāo)化合物7-10。
該目標(biāo)化合物的表征數(shù)據(jù)為：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.74(s,1H),8.70(t,J＝5.6Hz,1H),8.61(s,1H),8.59(d,J＝4.8Hz,1H),8.51(s,1H),8.04(d,J＝2.6Hz,1H),7.93–7.81(m,1H),7.70(dd,J＝8.9,2.6Hz,1H),7.58(d,J＝7.8Hz,1H),7.43–7.30(m,1H),7.25(d,J＝9.1Hz,1H),7.17(s,1H),6.27(dd,J＝17.1,10.0Hz,1H),6.15(dd,J＝17.1,2.3Hz,1H),5.66(dd,J＝10.0,2.3Hz,1H),5.28(s,2H),4.29(d,J＝5.6Hz,2H),4.24(q,J＝7.0Hz,2H),1.40(t,J＝7.0Hz,3H).
實(shí)施例11
化合物7-11，N-(3-(4-((3-氯-4-((3-氟芐基)氧基)苯基)氨基)-7-乙氧基喹唑啉-6-基)丙基-2-炔-1-基)丙烯酰胺的制備。
參照實(shí)施例1的方法制備，僅是在步驟3)選用乙醇為原料，操作方法如實(shí)施例1，步驟4)采用化合物8-3為原料，步驟5)采用6-2為原料，制備得到目標(biāo)化合物7-11。
該目標(biāo)化合物的表征數(shù)據(jù)為：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.74(s,1H),8.71(t,J＝5.6Hz,1H),8.62(s,1H),8.51(s,1H),8.03(d,J＝2.6Hz,1H),7.71(dd,J＝8.9,2.6Hz,1H),7.55–7.40(m,1H),7.29-7.33(m,2H),7.25(d,J＝9.0Hz,1H),7.22–7.10(m,2H),6.37–6.21(m,1H),6.16(dd,J＝17.1,2.3Hz,1H),5.66(dd,J＝10.0,2.3Hz,1H),5.24(s,2H),4.30(d,J＝5.6Hz,2H),4.24(q,J＝7.0Hz,2H),1.41(t,J＝7.0Hz,3H).
實(shí)施例12
化合物7-12，(E)-N-(3-(4-((3-氯-4-((3-氟芐基)氧基)苯基)氨基)-7-乙氧基喹唑啉-6-基)丙基-2-炔-1-基)丁基-2-烯基酰胺的制備。
參照實(shí)施例1的方法制備，僅是在步驟3)選用乙醇為原料，操作方法如實(shí)施例1，步驟4)采用化合物8-3為原料，步驟5)采用6-3為原料，制備得到目標(biāo)化合物7-12。
該化合物的表征數(shù)據(jù)為：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.74(s,1H),8.61(s,1H),8.51(s,1H),8.48(t,J＝5.7Hz,1H),8.03(d,J＝2.6Hz,1H),7.71(dd,J＝9.0,2.6Hz,1H),7.55–7.41(m,1H), 7.37–7.12(m,5H),6.69(dd,J＝15.2,6.9Hz,1H),5.95(dd,J＝15.3,1.8Hz,1H),5.24(s,2H),4.26(d,J＝5.5Hz,2H),4.10(q,J＝5.3Hz,2H),1.78-1.82(m,3H),1.41(t,J＝6.9Hz,3H).
實(shí)施例13
化合物7-13，N-(3-(4-((3-氯-4-((3-氟芐基)氧基)苯基)氨基)-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-6-基)丙基-2-炔-1-基)丙烯酰胺的制備。
參照實(shí)施例1的方法制備，僅是在步驟3)選用2-甲氧基乙醇為原料，操作方法如實(shí)施例1，步驟4)采用化合物8-3為原料，步驟5)采用6-2為原料，制備得到目標(biāo)化合物7-13。
該目標(biāo)化合物的表征數(shù)據(jù)為：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.76(s,1H),8.72(t,J＝5.6Hz,1H),8.64(s,1H),8.53(s,1H),8.05(d,J＝2.6Hz,1H),7.73(dd,J＝9.0,2.6Hz,1H),7.48(td,J＝8.1,6.1Hz,1H),7.40–7.11(m,5H),6.28(dd,J＝17.1,9.9Hz,1H),6.17(dd,J＝17.1,2.4Hz,1H),5.68(dd,J＝10.0,2.4Hz,1H),5.26(s,2H),4.30-4.33(m,4H),3.77(dd,J＝5.3,3.5Hz,2H),3.39(s,3H).
實(shí)施例14
化合物7-14，N-(3-(4-((3-氯-4-((3-氟芐基)氧基)苯基)氨基)-7-乙氧基喹唑啉-6-基)丙基-2-炔-1-基)乙烯磺酰胺的制備。
參照實(shí)施例1的方法制備，僅是在步驟3)選用乙醇為原料，操作方法如實(shí)施例1，步驟4)采用化合物8-3為原料，步驟5)采用6-6為原料，制備得到目標(biāo)化合物7-14。
該目標(biāo)化合物的表征數(shù)據(jù)為：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.75(s,1H),8.62(s,1H), 8.52(s,1H),8.05–7.95(m,2H),7.71(dd,J＝8.9,2.6Hz,1H),7.50–7.42(m,1H),7.36–7.15(m,5H),6.86(dd,J＝16.5,10.0Hz,1H),6.14(d,J＝16.5Hz,1H),6.02(d,J＝10.0Hz,1H),5.25(s,2H),4.25(d,J＝6.9Hz,2H),4.05(q,7.0Hz,2H),1.42(t,J＝7.0Hz,3H).
實(shí)施例15
化合物7-15，N-(4-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)-2-甲基丁基-3-炔-2-基)丙烯酰胺的制備。
參照實(shí)施例1的方法制備，僅是在步驟3)選用甲醇為原料，操作方法如實(shí)施例1，制備得到目標(biāo)化合物7-15。
該目標(biāo)化合物的表征數(shù)據(jù)為：1H NMR(400MHz，DMSO-d6):δ9.91(s，1H)，8.56(d，J＝8.8Hz,1H),8.30(s,1H),8.17-8.22(m,1H),7.75-7.90(m,3H),7.43(t,J＝9.2Hz,1H),6.22-6.35(m,1H),6.05-6.15(m,1H),5.60(dd,J＝10,2Hz,1H),3.96(s,3H),1.69(s,6H).
實(shí)施例16
化合物7-16，N-(3-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)-丙基-2-炔-1-基)丙烯酰胺的制備。
參照實(shí)施例1的方法制備，僅是在步驟3)選用甲醇為原料，操作方法如實(shí)施例1，步驟5)采用6-2為原料，制備得到目標(biāo)化合物7-16。
該化合物的表征數(shù)據(jù)為：1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.86(s,1H),8.65-8.8(m,1H),8.65(s,1H),8.58(s,1H),8.30(s,1H),8.16-8.25(m,1H),7.75-7.90(m,1H),7.43(t,J＝9.2Hz, 1H),6.22-6.35(m,1H),6.12-6.20(m,1H),5.65(dd,J＝10,1.2Hz,1H),4.31(d,J＝5.2Hz,2H),3.97(s,3H).
實(shí)施例17
化合物7-17，(E)-N-(3-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)丙基-2-炔-1-基)-4-(二甲基氨基)丁基-2-烯酰胺的制備。
參照實(shí)施例1的方法制備，僅是在步驟3)選用甲醇為原料，操作方法如實(shí)施例1，步驟5)采用6-4為原料，制備得到目標(biāo)化合物7-17。
該目標(biāo)化合物的表征數(shù)據(jù)為：1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.87(s,1H),8.65-8.8(m,1H),8.65(s,1H),8.58(s,1H),8.16-8.25(m,1H),7.74-7.90(m,1H),7.43(t,J＝9.2Hz,1H),7.23(s,1H),6.60-6.70(m,1H),6.14(d,J＝15.2Hz,1H),4.30(d,J＝5.6Hz,2H),3.97(s,3H),3.21(d,J＝5.6Hz,2H),2.29(s,6H).
實(shí)施例18
化合物7-18，(E)-N-(4-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)-2-甲基丁基-3-炔-2-基)-4-嗎啉代丁基-2-烯酰胺的制備。
參照實(shí)施例1的方法制備，僅是在步驟3)選用甲醇為原料，操作方法如實(shí)施例1，步驟5)采用6-7為原料，制備得到目標(biāo)化合物7-18。
該目標(biāo)化合物的表征數(shù)據(jù)為：1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.91(s,1H),8.64(s,1H),8.57(s,1H),8.21(s,1H),7.85-8.21(m,1H),7.78-7.86(m,1H),7.44(t,J＝9.2Hz,1H),7.21(s,1H),6.50-6.63(m,1H),6.14(d,J＝15.6Hz,1H),3.95(s,3H),3.58(m,4H),3.05(d,J＝5.6Hz,2H),2.36(m,4H),1.24(s,6H).
實(shí)施例19
化合物7-19，(E)-N-(3-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)丙基-2-炔-1-基)-4-嗎啉代丁基-2烯酰胺的制備。
參照實(shí)施例1的方法制備，僅是在步驟3)選用甲醇為原料，操作方法如實(shí)施例1，步驟5)采用6-8為原料，制備得到目標(biāo)化合物7-19。
該目標(biāo)化合物的表征數(shù)據(jù)為：1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.86(s,1H),8.58-8.65(m,2H),8.578(s,1H),8.15-8.25(m,1H),7.75-7.90(m,1H),7.44(t,J＝9.2Hz,1H),7.21(s,1H),6.55-6.68(m,1H),6.10(d,J＝15.6Hz,1H),4.28(d,J＝5.6Hz,1H),3.59(m,4H),3.07(d,J＝5.6Hz,2H),2.36(m,4H).
實(shí)施例20
化合物20，N-丙烯酰-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-6-甲酰胺的制備。
按照以下線路合成：
步驟(1)制備化合物10，方法如下：
取一干燥潔凈的500mL單口圓底燒瓶，依次加入9.9g丙二氰，37.4mL原甲酸三乙酯，35.4mL乙酸酐，升溫至140℃反應(yīng)6h。反應(yīng)完后，加入少量活性炭繼續(xù)30min，停止反應(yīng)趁熱過濾(加硅藻土)，用乙醇洗，濾液旋干(先用水泵旋干，再用油泵抽干)，得化合物10。
步驟(2)制備化合物11，方法如下：
取一500mL單口圓底燒瓶，加入300mL乙醇置于0℃，稱取1.9g鈉(剪碎)加入，加完升至10℃攪拌直至鈉完全溶解(或者加入2.218g C2H5ONa代替)，然后加入5.1mL乙酰乙酸乙酯于室溫下攪拌半小時(shí)，再加入2g化合物10于80℃反應(yīng)半小時(shí)，冷卻至室溫。反應(yīng)完后，旋干，加入100mL水于0℃下滴加濃鹽酸(調(diào)pH為1-2)，析出大量固體，過濾干燥(如果干燥不完全，會(huì)抑制下一步的反應(yīng)進(jìn)行)，得化合物11。
步驟(3)制備化合物12，方法如下：
取一干燥潔凈的100mL單口燒瓶，依次加入2.06g化合物11，2mL N,N-二甲基甲酰胺二甲縮醛,50mL甲苯，加熱至105℃，反應(yīng)5h左右(反應(yīng)會(huì)產(chǎn)生水，加分水器分水)。反應(yīng)完后，旋干，加入乙醚旋干固化，再加乙醚攪拌過濾，得化合物12。
步驟(4)制備化合物13，方法如下：
取一干燥潔凈的50mL單口圓底燒瓶，依次加入1.42g化合物12,0.831g 3-氯-4-氟苯胺,10mL乙酸，加熱至125℃回流反應(yīng)1.5h。反應(yīng)完后，溶液倒入100mL水中析出大量固體過濾，用大量水洗，乙醇洗干燥得化合物13。
步驟(5)制備化合物14，方法如下：
取一干燥潔凈25ml圓底燒瓶，將K2CO3(6mmol)加入5mL DMF中，然后加入化合物13(2.0mmol)以及2-溴乙基甲醚(3.3mmol)，在60℃油浴溫度下攪拌過夜，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)。當(dāng)原料反應(yīng)完全后，加入20ml的水淬滅反應(yīng)。反應(yīng)液用乙酸乙酯萃取三次(3×10mL)，合并有機(jī)相，食鹽水洗一次(20ml)，然后用Na2SO4干燥。過濾蒸除溶劑即得化合物14。
步驟(6)制備化合物15，方法如下：
取一潔凈干燥圓底燒瓶，將化合物14(1mmol)溶于DMF(4mL)中，加入0.14mL甲酰胺(3.5mmol)。將反應(yīng)體系加熱至100℃，往反應(yīng)體系中滴加NaOMe(30％)的甲醇溶液(0.33ml,1.8mmol)并在30分鐘內(nèi)滴加完畢。TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)，原料消耗完全后將反應(yīng)體系冷卻至室溫并往反應(yīng)體系中加入CH2Cl2(30ml)。反應(yīng)體系用硅藻土過濾后得濾液。旋除溶劑即得粗品。過硅膠柱后得純品化合物15。
步驟(7)制備化合物20，方法如下：
將化合物15(0.2mmol)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下溶于3mL干燥的THF中。將反應(yīng)體系冷卻至0℃。將NaH(60％)(0.4mmol)分批加入反應(yīng)體系中。反應(yīng)體系在0℃下攪拌10分鐘，然后升至室溫?cái)嚢?5分鐘。將反應(yīng)體系冷卻至0℃下，將溶解有丙烯酰氯(0.22mmol)的1mL干燥THF滴加入反應(yīng)體系。滴加完畢后反應(yīng)體系在0℃攪拌10分鐘然后在室溫下攪拌4小時(shí)。TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)，反應(yīng)完全后加1.5M的鹽酸淬滅反應(yīng)，加乙酸乙酯萃取。有機(jī)相分別用飽和的碳酸銫溶液，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥。蒸除溶劑硅膠過柱純化即得純品化合物20。
該目標(biāo)化合物的表征數(shù)據(jù)為：1H NMR(400MHz,CDCl3)9.13(s,1H),8.84(s,1H),7.92(brs,1H),7.47(s,1H),7.42(d,J＝6.0Hz,1H),7.32(t,J＝9.2Hz,1H),7.21(t,J＝8.6Hz,1H),6.57(d,J＝16.4Hz,1H),6.19(dd,J＝16.4,10.4Hz),5.85(br s,1H),5.79(d,J＝10.4Hz,1H),4.44(t,J＝4.2Hz,2H),4.44(t,J＝4.2Hz,2H),3.88(t,J＝4.4Hz,2H),3.47(s,3H).
實(shí)施例21
化合物21，N-((4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-6-基)甲基)丙烯酰胺的制備。
按照以下線路合成：
將LiAlH4(0.5mmol)加入到25ml干燥的THF中，冷卻至0℃。往反應(yīng)體系中緩慢滴加溶解有化合物15(78mg,0.2mmol)的干燥THF溶液。滴加完全后在0℃下攪拌10分鐘，然后加熱至回流。待反應(yīng)完全后，用飽和硫酸鈉溶液淬滅反應(yīng)。用THF萃取兩次，合并有機(jī)相，無水硫酸鈉干燥，蒸除溶劑后即得產(chǎn)物15-1。
將化合物15-1(0.14mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，于0℃下加入三乙胺(0.14mmol)后緩慢滴加丙烯酰氯(0.17mmol)。滴加完畢后緩慢升至室溫，于室溫下攪拌兩小時(shí)。反應(yīng)完全后，加入飽和NaHCO3水溶液淬滅反應(yīng)。用二氯甲烷萃取三次，合并有機(jī)相，食鹽水洗后無水硫酸鎂干燥，過柱純化即得純品化合物21。
該目標(biāo)化合物的表征數(shù)據(jù)為：1H NMR(400MHz,CDCl3)8.68(s,1H),7.90(d,J＝6.4Hz,1H),7.87(s,1H),7.54-7.51(m,2H),7.23(s,1H),7.16(t,J＝8.6Hz,1H),6.48(d,J＝17.2Hz,1H),6.20(dd,J＝17.2,10.4Hz),5.89(d,J＝10.4Hz,1H),5.41(s,2H),4.29(t,J＝4Hz,2H),3.83(t,4Hz,2H),3.46(s,3H).
實(shí)施例22
化合物22，N-(4-(4-((3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基)氨基)-7-乙氧基喹唑啉-6-基)-2-甲基丁基-3-炔-2-基)-2-氰基-2-烯酰胺的制備。
參照實(shí)施例1的方法制備，僅是在步驟3)選用乙醇為原料，操作方法如實(shí)施例1，步驟4)采用6-9為原料，制備得到目標(biāo)化合物22。
該目標(biāo)化合物的表征數(shù)據(jù)為：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.76(s,1H),8.59(d,J＝4.3Hz,1H),8.52(s,1H),8.50(s,1H),8.29(s,1H),8.04(d,J＝2.6Hz,0H),7.88(td,J＝7.7,1.8Hz,1H),7.71(dd,J＝9.0,2.6Hz,1H),7.58(d,J＝7.9Hz,1H),7.48–7.30(m,2H),7.25(d,J＝9.0Hz,1H),7.14(s,1H),5.60(dd,J＝8Hz,3Hz,1H),5.28(s,2H),4.19(q,J＝6.8Hz,2H),4.23(d,J＝7.9Hz,3H),1.68(s,6H),1.41(t,J＝6.9Hz,3H).
實(shí)施例23
化合物23，N-(4-(4-((3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基)氨基)-3-氰基-7-乙氧基喹唑啉-6-基)-2-甲基丁基-3-炔-2-基)丙烯酰胺的制備。按照以下線路合成：
二口瓶中加入0.5克市售購得的原料23-1、15毫升乙腈、15毫升水和15毫升醋酸，體系在零度下緩慢滴加0.8毫升的硫酸，攪拌30分鐘溶液變澄清時(shí)加入0.11克的亞硝酸鈉，升溫至室溫?cái)嚢?0分鐘后滴加0.70克碘化鉀的15毫升水溶液。加完后升至50度攪拌30分鐘。冷卻體系，有沉淀析出，過濾，濾餅用冰水洗滌后烘干得褐色固體，即為化合物23-2(0.41克，66％)。
取一潔凈兩口瓶，加入原料23-280mg、Pd(Ph3)2Cl28mg、CuI 2.3mg和5mL N,N-二甲基甲酰胺，用氮?dú)庵脫Q體系三次后滴加187mg的DIPEA，體系攪拌均勻后滴加24mg的原 料6-1，反應(yīng)體系在室溫下攪拌,TLC監(jiān)測(cè)(DCM:MeOH＝10:1)，反應(yīng)完全后，加水有沉淀析出，過濾，濾餅烘干后過柱純化得白色固體，即為化合物23(58mg，65％)。
該目標(biāo)化合物的表征數(shù)據(jù)為：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.81(s,1H),8.60(d,J＝4.8Hz,1H),8.47(d,J＝3.1Hz,1H),8.30(s,1H),7.88(t,J＝7.7Hz,1H),7.59(d,J＝7.8Hz,1H),7.44(d,J＝2.2Hz,1H),7.38(dd,J＝7.5,4.9Hz,1H),7.34–7.19(m,2H),6.29(dd,J＝17.2,10.1Hz,1H),6.10(dd,J＝17.1,2.3Hz,1H),5.58(dd,J＝10.1,2.3Hz,1H),5.30(s,2H),4.21(q,J＝7.0Hz,2H),1.67(s,4H),1.42(t,J＝6.7Hz,3H).
對(duì)比例
參照文獻(xiàn)：PCT Int.Appl.(2014),WO 2014063631A120140501和Nature Chemical Biology(2014),10(9),760-767的方法制備以下化合物：
實(shí)驗(yàn)例
一、體外酶抑制活性
用酶聯(lián)免疫法測(cè)定酶的抑制活性。
將上述實(shí)施例制備得到的化合物進(jìn)行酶抑制活性的測(cè)定，對(duì)EGFR和HER2酶抑制活性測(cè)定采用Z′-LYTETM激酶測(cè)試盒(invitrogenTM,Z′-LYTETMKinase assay kit-TYR6peptide,參考文獻(xiàn)：Nature,373,pp.536-9(1995))進(jìn)行測(cè)試。
具體方法如下：按照Z′-LYTETM激酶測(cè)試盒使用說明書進(jìn)行試劑配置；先把酶和化合物分別按照一定的配比加于384孔板，混勻，放置30min；然后加入ATP，混勻，放置2h；加5μL Development Regent，混勻，于室溫下，放置15min，30min，1h用酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測(cè)；1h后加入5μL的Stop regent，混勻后用酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測(cè)。計(jì)算相應(yīng)的磷酸化比例，根據(jù)藥物的濃度與對(duì)應(yīng)的激酶抑制率作圖，得到劑量反應(yīng)曲線，從中求得藥物的半數(shù)抑制濃度(IC50)。結(jié)果如下：
表1.體外酶抑制活性
注：a為0.1-10nM,b為10-100nM，c為100-1000nM。
由上述數(shù)據(jù)可知，本發(fā)明所提供的酪氨酸激酶不可逆抑制劑對(duì)EGFR及HER2兩種酪氨酸激酶同時(shí)具有抑制作用，其半數(shù)抑制濃度與陽性對(duì)照物WZ4002和Afatinib相比，或優(yōu)于陽性對(duì)照物，或至少于陽性對(duì)照物相當(dāng)，特別是化合物7-15和化合物7-16，其對(duì)EGFR及 HER2兩種酪氨酸激酶的半數(shù)抑制濃度均與陽性對(duì)照物相當(dāng)，具有很好的酶抑制活性。
二、體外細(xì)胞抑制活性
上述化合物對(duì)EGFR和HER2酪氨酸激酶顯示出較高抑制活性，以下進(jìn)一步測(cè)試它們對(duì)EGFR和HER2相關(guān)的腫瘤細(xì)胞的抑制活性。
我們采用了MTT(噻唑藍(lán))法測(cè)定目標(biāo)化合物對(duì)人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系(Del19)Hcc827，表皮癌細(xì)胞系A(chǔ)431，人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系H1975，人乳腺癌細(xì)胞系SK-BR-3、BT474和MCF-7，人胃癌細(xì)胞系BCG-823的抑制活性。
以下采用MTT(噻唑藍(lán))法檢測(cè)樣品對(duì)腫瘤細(xì)胞抑制活性。腫瘤細(xì)胞有：表皮癌細(xì)胞系A(chǔ)431，EGFRWT過表達(dá)，人乳腺腺癌細(xì)胞SK-BR-3，HER2過表達(dá)；人乳腺癌細(xì)胞系BT-474，EGFR和HER2過表達(dá)；對(duì)照組人乳腺癌細(xì)胞MCF-7，EGFR和HER2低表達(dá)。
1.MTT(噻唑藍(lán))法實(shí)驗(yàn)原理。
活細(xì)胞中線粒體的NADPH相關(guān)脫氫酶類，可以將黃色的MTT還原為不溶于水的藍(lán)紫色的formazan，細(xì)胞死亡，該酶失去活性，MTT不被還原。在酶標(biāo)儀上于570nm波長處檢測(cè)光密度(OD)值。從而測(cè)出藥物作用下活性細(xì)胞和凋亡細(xì)胞的比例。
2.實(shí)驗(yàn)方法。
先對(duì)所有目標(biāo)化合物粗篩5μM的抑制率，然后選擇抑制率高的化合物進(jìn)一步測(cè)定IC50。
3.MTT藥物篩選實(shí)驗(yàn)流程。
(1).胰酶消化：按照胰酶消化細(xì)胞的流程進(jìn)行，消化后的細(xì)胞收集于離心管中。
(2).計(jì)算細(xì)胞濃度：按照細(xì)胞計(jì)數(shù)的流程進(jìn)行。
(3).用完全培養(yǎng)基稀釋細(xì)胞至細(xì)胞濃度大約為30000個(gè)/ml。每孔加入100μL的細(xì)胞工作液，空白對(duì)照孔加入100μL的完全培養(yǎng)基。
(4).加藥：受試藥物用DMSO溶解到10mM，-20℃保存?zhèn)溆?。?shí)驗(yàn)前解凍，細(xì)胞貼壁后，用完全培養(yǎng)基稀釋到100μM。藥物濃度設(shè)置：最高終濃度為100μM，1：5等比稀釋到20、4、0.8、0.16、0.032μM，共6個(gè)濃度梯度。最高濃度和次高濃度用完全培養(yǎng)基稀釋，其余四個(gè)濃度用含2‰DMSO的完全培養(yǎng)基稀釋。加入100μL的藥物濃度于對(duì)應(yīng)孔中，每個(gè)濃度做6個(gè)復(fù)孔。細(xì)胞對(duì)照孔只加入100μL含2‰DMSO的完全培養(yǎng)基。
(5).共培養(yǎng)：在37℃，5％CO2條件下共培養(yǎng)72h。
(6).加入MTT：小心吸去上清液，每孔加入100μL經(jīng)培養(yǎng)基稀釋的0.5mg/ml的MTT工作液，培養(yǎng)箱中共同孵育4～5h。
(7).吸光度測(cè)定：共同孵育后，小心吸去上清液，每孔加入100μL DMSO，置振蕩器上 振蕩溶解10min，在BioTeck酶標(biāo)儀上測(cè)定570nm處的吸光度。
(8).IC50計(jì)算：將OD數(shù)據(jù)導(dǎo)出到Excel，計(jì)算各濃度條件下細(xì)胞存活率，然后在GraphPadPrism 4軟件上計(jì)算IC50。
注：細(xì)胞對(duì)照孔——不加藥，不足體積用含2‰DMSO培養(yǎng)基補(bǔ)足，其余條件相同。
空白對(duì)照——只加200μL培養(yǎng)基。
4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
表2.體外酶抑制活性IC50
注：a為0.1-10nM,b為10-100nM，c為100-1000nM。NA指未進(jìn)行檢測(cè)。
從上述結(jié)果中可以看出，本發(fā)明的喹唑啉衍生物類化合物，對(duì)于多種癌細(xì)胞系均有抑制作用，且其至少對(duì)一類癌細(xì)胞系的IC50小于陽性對(duì)照物，特別是化合物7-9,化合物7-10,化合物7-13,化合物7-16，對(duì)三類癌細(xì)胞系的IC50在0.1-10nM之間，比陽性對(duì)照物的IC50小三個(gè)數(shù)量級(jí)，具有非常好的活性。
并且，從上述結(jié)果中可以看出，酶活性結(jié)果和細(xì)胞活性結(jié)果并不完全一致，這可能是由于細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)受藥物分子跨細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)、細(xì)胞中微環(huán)境的影響以及細(xì)胞內(nèi)代謝等原因?qū)е逻@一結(jié)果。
本發(fā)明通過設(shè)計(jì)并合成了大量化合物，并對(duì)其進(jìn)行篩選，得到了式I所示的喹唑啉衍生物，具有非常好的細(xì)胞抑制活性。
以上所述實(shí)施例的各技術(shù)特征可以進(jìn)行任意的組合，為使描述簡(jiǎn)潔，未對(duì)上述實(shí)施例中的各個(gè)技術(shù)特征所有可能的組合都進(jìn)行描述，然而，只要這些技術(shù)特征的組合不存在矛盾，都應(yīng)當(dāng)認(rèn)為是本說明書記載的范圍。
以上所述實(shí)施例僅表達(dá)了本發(fā)明的幾種實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對(duì)發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。