本發(fā)明涉及有機合成和藥物化學領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其用途。

背景技術(shù)：

炎癥發(fā)生在局部，同時也可影響全身。局部臨床特征是紅、熱、腫、痛和功能障礙。紅、熱是由于炎癥局部血管擴張、血流加快所致。腫是由于局部炎癥性充血、血流成分滲出引起。研發(fā)具有抗炎作用的藥物對于緩解驗證、減輕痛苦有重要意義。

炎癥的治療目前已有的藥物存在毒性大、安全性低的問題，從天然產(chǎn)物中尋找化合物或先導化合物并進行結(jié)構(gòu)修飾獲得其衍生物，從而得到高效低毒的潛在藥物有重要價值。

本發(fā)明涉及的化合物I是一個2011年發(fā)表(Fan-Yu Meng et al.,2011.Schiglautone A,a New Tricyclic Triterpenoid with a Unique 6/7/9-Fused Skeleton from the Stems of Schisandra glaucescens.Organic Letters 13(2011)1502–1505)的化合物，我們對化合物I進行了結(jié)構(gòu)修飾，獲得了兩個新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化合物III和化合物IV制備了組合物并對該組合物抗炎癥活性進行了評價，其具有抗炎癥活性。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明公開了一個新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物中化合物III和化合物IV的質(zhì)量百分數(shù)分別為35％和65％。

本發(fā)明公開的組合物可以制成藥學上可接受的鹽或藥學上可接受的載體。

本發(fā)明的目的是提供組合物在制備抗炎藥物中的應用。所述的炎癥為無菌性炎癥。

本發(fā)明組合物在制備抗炎藥物中應用的有益效果如下：

首先證明了本發(fā)明組合物具有有效抗炎作用。采用了經(jīng)典的二甲苯所致的小鼠耳腫脹模型以及大鼠瓊脂性足腫脹模型，觀察本發(fā)明組合物在一定時間內(nèi)對實 驗動物的抗炎作用。研究表明：

1、本發(fā)明組合物對二甲苯所致的小鼠耳腫脹有明顯抑制作用。

2、本發(fā)明組合物對大鼠瓊脂性足腫脹有明顯抑制作用。

以下通過實施例對本發(fā)明作進一步詳細的說明，但本發(fā)明的保護范圍不受具體實施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。

具體實施方式

實施例1化合物Schiglautone A的制備

化合物Schiglautone A(I)的制備方法參照Fan-Yu Meng等人發(fā)表的文獻(Fan-Yu Meng et al.,2011.Schiglautone A,a New Tricyclic Triterpenoid with a Unique 6/7/9-Fused Skeleton from the Stems of Schisandra glaucescens.Organic Letters 13(2011)1502–1505)的方法。

實施例2Schiglautone A的O-溴乙基衍生物(II)的合成

將化合物I(502mg，1.00mmol)溶于15mL苯，向溶液中加入四丁基溴化銨(TBAB)(0.08g)，1,2-二溴乙烷(7.520g，40.00mmol)和6mL的50％氫氧化鈉溶液?；旌衔镌?5攝氏度攪拌8h。8h之后將反應液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取兩次，合并有機相溶液。然后對有機相溶液依次用水和飽和食鹽水洗滌3次，再用無水硫酸鈉干燥，最后減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為：石油醚/丙酮＝100:1.0，v/v)，收集棕色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的棕色粉末(508mg，71％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ13.40(s,1H),6.10(s,1H),5.63(s,1H),5.53(s,1H),3.85(d,J＝11.2Hz,4H),3.52(d,J＝10.8Hz,4H),2.96(s,1H),2.20(s,1H),2.16(s,2H),2.00(s,1H),1.84(d,J＝13.9Hz,4H),1.69(s,1H),1.58(dd,J＝22.2,8.5Hz,4H),1.51(s,1H),1.47(s,1H),1.26(dd,J＝9.1,4.4Hz,4H),1.21(s,1H),1.08–0.98(m,4H),0.96-0.94(m,9H),0.94-0.85(m,6H).

¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ211.46(s),209.14(s),170.06(s),161.12(s),143.51(s),132.01(s),127.77(s),85.96(s),82.40(s),70.19(s),69.10(s),57.14(s),52.73(s),51.90(s),45.77(s),40.67(s),38.57(s),38.32(s),35.04(s),33.55(s),33.27(s),29.85(s),28.98(s),26.71(s),25.50(s),24.05(s),22.31(s),21.06(s),20.56(s),20.00(s),18.69(s),18.11(s),15.07(s).

HRMS(ESI)m/z[M-H]^-calcd for C₃₄H₅₁Br₂O₆:715.2032；found 715.2027.

實施例3Schiglautone A的O-(三唑基)乙基衍生物(III)的合成

將化合物II(358mg，0.5mmol)溶于10mL乙腈當中，向其中加入無水碳酸鉀(345mg，2.5mmol)，碘化鉀(84mg，0.5mmol)和1,2,3-三氮唑(2760mg，40mmol)，混合物加熱回流3h。反應結(jié)束后將反應液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取2次，合并有機相。依次用水和飽和食鹽水洗滌合并之后的有機相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為：石油醚/丙酮＝100:1.0，v/v)，收集淡黃色集中洗脫帶即得到化合物III的黃色膠狀固體(245.7mg,71％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ18.00(s,1H),7.96(d,J＝15.5Hz,2H),7.67(d,J＝20.5Hz,2H),6.10(s,1H),5.63(s,1H),5.33(s,1H),4.29(d,J＝19.8Hz,2H),4.08(d,J＝4.0Hz,2H),3.83(d,J＝4.8Hz,4H),3.47(s,1H),2.39(d,J＝2.9Hz,3H),2.16(s,1H),1.84(d,J＝0.5Hz,4H),1.68–1.61(m,3H),1.61–1.50(m,3H),1.46(s,1H),1.39(d,J＝11.0Hz,2H),1.30–1.21(m,2H),1.21(s,1H),1.05–0.70(m,19H).

¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ211.62(s),209.42(s),170.24(s),161.39(s),143.68(s),137.15(s),132.19(s),128.04(s),120.80(s),86.24(s),82.58(s),66.14(s),65.60(s),57.43(s),52.89(s),52.18(s),46.47(s),46.06(s),40.83(s),38.85(s),38.50(s),35.31(s),33.72(s),30.12(s),29.15(s),27.00(s),25.66(s),24.33(s),22.49(s),21.33(s),20.73(s),20.29(s),18.85(s),18.39(s),15.25(s).

HRMS(ESI):m/z[M+H]⁺calcd for C₃₈H₅₇N₆O₆:693.4340；found:693.4338。

實施例4Schiglautone A的O-(二(2-甲硫基乙基)胺基)乙基衍生物的合成

1、Schiglautone A的O-(二羥乙胺基)乙基衍生物的合成

將化合物II(358mg，0.5mmol)溶于15mL乙腈，加入無水碳酸鉀(0.345g，2.5mmol)，碘化鉀(0.084g，0.5mmol)和二乙醇胺(1.0514g，10mmol)，混合物加熱回流9h。反應結(jié)束后將反應液倒入冷水中，用二氯甲烷萃取三次，合并有機相，依次用水和飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑。產(chǎn)物用硅膠柱層析純化(石油醚/丙酮100:1，v/v)，得到Schiglautone A的O-(二羥乙胺基)乙基衍生物的淡黃色固體(0.199g,52％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ17.77(s,1H),6.00(s,1H),5.40(s,1H),5.20(s,1H),3.37(d,J＝17.8Hz,4H),3.28(s,8H),2.87(s,1H),2.51(d,J＝6.5Hz,4H),2.43(s,8H),2.24(s,2H),2.06(d,J＝12.7Hz,2H),1.76–1.68(m,5H),1.57(s,1H),1.53–1.39(m,8H),1.36(s,1H),1.24(s,1H),1.20–1.14(m,3H),1.11(s,1H),0.94–0.82(m,10H),0.80(s,3H),0.76(s,3H),0.72(d,J＝20.0Hz,3H).

¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ211.39(s),208.98(s),169.80(s),160.73(s),143.02(s),131.42(s),127.05(s),85.91(s),82.25(s),66.70(s),65.63(s),58.62(s),56.55(s),56.61(s),53.30(s),52.45(s),51.52(s),45.29(s),40.06(s),38.52(s),38.17(s),34.73(s),33.17(s),29.35(s),28.38(s),26.34(s),25.00(s),23.45(s),22.05(s),20.67(s),20.07(s),19.31(s),18.41(s),17.73(s),14.59(s).

HRMS(ESI):m/z[M+H]⁺calcd for C₄₂H₇₃N₂O₁₀:765.5265；found:765.5261。

2、Schiglautone A的O-(二氯乙胺基)乙基衍生物的合成

按照上述步驟制備1g的Schiglautone A的O-(二羥乙胺基)乙基衍生物，取Schiglautone A的O-(二羥乙胺基)乙基衍生物(382mg，0.5mmol)溶于8mL氯仿，逐滴加入氯化亞砜(0.238g，2mmol)，反應物加熱回流2h。將反應物冷卻至室溫，滴加甲醇分解過量的氯化亞砜，減壓濃縮除去溶劑。產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析純化(石油醚/丙酮100:1，v/v)，得到Schiglautone A的O-(二氯乙胺基)乙基衍生物的淡黃色膠狀固體(0.297g，71％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.87(s,1H),6.01(s,1H),5.50(d,J＝8.4Hz,2H),3.61(s,4H),3.55(s,4H),3.45(s,2H),3.40(s,2H),2.98(s,1H),2.73(d,J＝17.4Hz,4H),2.67–2.57(m,6H),2.54(s,2H),2.40(s,1H),2.10(s,1H),1.99(s,2H),1.78(s,1H),1.73(d,J＝16.9Hz,4H),1.58(d,J＝3.0Hz,2H),1.46(d,J＝3.0Hz,2H),1.43(s,1H),1.37(s,1H),1.22(s,1H),1.17(dd,J＝18.9,11.1Hz,4H),0.95–0.83(m,10H),0.80(d,J＝20.0Hz,3H),0.78(d,J＝20.0Hz,3H),0.73(d,J＝20.0Hz,3H).

¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ211.19(s),208.87(s),169.79(s),160.85(s),143.24(s),131.74(s),127.50(s),85.69(s),82.13(s),66.71(s),65.84(s),56.87(s),55.80(s),53.19(s),52.44(s),51.64(s),45.51(s),40.38(s),39.22(s),38.30(s),38.05(s),34.77(s),33.28(s),29.56(s),28.72(s),26.45(s),25.21(s),23.79(s),22.05(s),20.77(s),20.30(s),19.76(s),18.41(s),17.85(s),14.81(s).

HRMS(ESI):m/z[M+H]⁺calcd for C₄₂H₆₉Cl₄N₂O₆:839.3880；found:839.3881。

3、Schiglautone A的O-(二(2-甲硫基乙基)胺基)乙基衍生物(IV)的合成

按照上述步驟制備1g的Schiglautone A的O-(二氯乙胺基)乙基衍生物，將Schiglautone A的O-(二氯乙胺基)乙基衍生物(0.419g，0.5mmol)溶于15mL乙醇，室溫下加入甲硫醇鈉(0.21g，3mmol)，反應物加熱回流3h。減壓濃縮除去溶劑，所得產(chǎn)物用硅膠柱層析進行純化(石油醚/丙酮100:0.2，v/v)，得到黃色固體物，即化合物IV(0.296g，67％)。

¹H NMR(500MHz,Chloroform-d1)δ13.21(s,1H),6.02(s,1H),5.48(s,1H),5.44(s,1H),3.45(s,2H),3.38(s,2H),3.00(s,1H),2.57–2.48(m,20H),2.16–2.09(m,4H),1.96(s,12H),1.73(d,J＝15.4Hz,4H),1.55(s,1H),1.44(dd,J＝7.8,2.8Hz,4H),1.35(s,1H),1.29–1.14(m,6H),0.97–0.49(m,19H).

¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ211.72(s),209.42(s),170.36(s),161.38(s),143.79(s),132.31(s),128.03(s),86.24(s),82.70(s),67.24(s),66.39(s),57.44(s),53.73(s),53.00(s),52.69(s),52.17(s),46.06(s),40.95(s),38.84(s),38.61(s),35.32(s),33.82(s),32.41(s),30.13(s),29.25(s),27.00(s),25.77(s),24.34(s),22.59(s),21.33(s),20.85(s),20.28(s),18.96(s),18.40(s),15.35(s),15.03(s).

HRMS(ESI):m/z[M+H]⁺calcd for C₄₆H₈₁N₂O₆S₄⁺:885.4977；found:885.4979。

實施例5組合物抗炎藥效學研究

試驗材料

1.昆明(KM)種小鼠：雄性，6周，18.5-22.5g，由江蘇省實驗動物中心提供。

2.大鼠(Wistar)：雄性，體質(zhì)量140～160g，由江蘇省實驗動物中心提供。

3.組合物的制備：將研磨之后過200目網(wǎng)的35mg化合物III的粉末和研磨之后過200目網(wǎng)的65mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用渦輪攪拌儀混合即得到100mg組合物，使用時用水溶解這100mg的組合物即得到組合物的溶液。

試驗方法

1.灌胃組合物對小鼠耳部炎癥的作用：取體質(zhì)量18.5～22.5g健康雄性小鼠50只，隨機分成5組，每組10只。分組為：組合物2.5mg·kg^-1、化合物III 2.5mg·kg^-1、化合物IV 2.5mg·kg^-1、阿司匹林組(200mg·kg^-1)、空白對照組(生理鹽水)。各組分別灌胃給藥，連續(xù)7d，第七天灌胃后1h，3組小鼠均在小鼠右耳前、后面均勻涂二甲苯0.02mL，制備耳廓炎癥模型。1h后后頸脫臼處死小鼠，沿耳廓基線剪下兩耳，用直徑8mm打孔器分別在兩耳的同一部位打下圓耳片，稱重精確到0.0001g。立即用電子天平分別稱質(zhì)量，以左右兩耳質(zhì)量差作為腫脹度，并 計算其腫脹度。

腫脹度＝右耳片重—左耳片重

2.灌胃組合物對大鼠瓊脂性足腫脹的作用：取體質(zhì)量140～160g健康雄性Wistar大鼠40只，隨機分成5組。組合物2.5mg·kg^-1、化合物III 2.5mg·kg^-1、化合物IV 2.5mg·kg^-1、阿司匹林組(200mg·kg^-1)、空白對照組(生理鹽水)。分別灌胃給藥，連續(xù)7d，第七天灌胃后1h，大鼠的右后足跎皮下注射10g/L瓊脂0.1mL制備足腫急性炎癥模型，用大鼠足容量測量儀測其右后足正常容積。致炎后1、5、8h分別測量各鼠右后足容積，并計算腫脹度。

腫脹度＝右后足容積—左后足容積

試驗結(jié)果

1、組合物對小鼠耳部炎癥的影響

致炎后，各組小鼠右耳立刻出現(xiàn)高度紅腫現(xiàn)象。阿司匹林組和組合物組對二甲苯所致的小鼠耳腫脹均有顯著抑制作用，而化合物III和化合物IV則對二甲苯所致的小鼠耳腫脹沒有顯著抑制作用，結(jié)果見表1。

表1組合物對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響

與模型組比較*P<0.01

2、組合物對大鼠瓊脂性足腫脹的影響

注射瓊脂后，各組大鼠足爪均有一定程度的腫脹現(xiàn)象。在肉眼觀察下，模型 組腫脹發(fā)紅最明顯，阿司匹林組稍有腫脹無明顯發(fā)紅現(xiàn)象，組合物組有腫脹無明顯發(fā)紅現(xiàn)象。組合物對大鼠足腫有顯著抑制作用，而化合物III和化合物IV則對大鼠足腫無顯著抑制作用，見表2。

表2組合物對大鼠瓊脂性足趾腫脹度的影響

與模型組比較*P<0.05

結(jié)論：組合物對二甲苯所致的小鼠耳腫脹有明顯抑制作用；組合物對大鼠瓊脂性足腫脹有明顯抑制作用。而化合物III和化合物IV則對二甲苯所致的小鼠耳腫脹無明顯抑制作用；化合物III和化合物IV則對大鼠瓊脂性足腫脹無明顯抑制作用。組合物可以用于制備抗炎藥物，化合物III和化合物IV不能用于制備抗炎藥物。

實施例6本發(fā)明所涉及組合物片劑的制備

取2克組合物，加入制備片劑的常規(guī)輔料18克，混勻，常規(guī)壓片機制成100片。

實施例7本發(fā)明所涉及組合物膠囊的制備

取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100粒。