專利名稱：：二聯(lián)噻吩類(lèi)化合物,其藥物組合物和其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于具抗菌活性化合物領(lǐng)域，具體地，涉及一類(lèi)具抗菌活性的二聯(lián)噻吩類(lèi)化合物，其藥物組合物，其制備方法和在抗菌劑中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：天然噻吩類(lèi)化合物主要存在在菊科(Compositae)中，目前已經(jīng)從菊科植物中分離出一系列的單噻吩、二聯(lián)噻吩、三聯(lián)噻吩及其衍生物，這類(lèi)代謝產(chǎn)物具有廣泛的生物活性，諸如細(xì)胞毒作用、抗HIV、殺蟲(chóng)、抗菌。菊科植物中所含的這類(lèi)噻吩類(lèi)成分比較復(fù)雜，并且含量低，分離上有較大的難度，在開(kāi)發(fā)利用上有一定的限制，因此，對(duì)菊科植物的研究應(yīng)注重選擇活性好，且有效成分含量高的為研究對(duì)象，為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用打下良好的基礎(chǔ)。目前，現(xiàn)有技術(shù)中未見(jiàn)有具有抗菌活性二聯(lián)噻吩類(lèi)化合物的報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明基于目前對(duì)菊科藍(lán)剌頭屬(Echinops)中噻吩類(lèi)化合物及其抗菌活性研究現(xiàn)狀，目的在于提供一類(lèi)在植物體內(nèi)含量高，結(jié)構(gòu)新，高效價(jià)廉的噻吩類(lèi)化合物，同時(shí)提供該類(lèi)化合物的分離制備方法及其抗菌活性的應(yīng)用。本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的二聯(lián)噻吩類(lèi)化合物，具有通式(I)所示結(jié)構(gòu)式(I)其中，&=-H，-CHO，-COOH，_CH0HCH20H，_CH20H，-CH:HOOHR2=-H，-C三CCH3，_C三CCH2CH20H，_^~^o-o,-C三CCH0HCH20H，_C0CH2CH2CH20H。如下結(jié)構(gòu)式所示化合物1-10，410抗菌劑，含有有效量的本發(fā)明通式(i)化合物和抗菌學(xué)上可接受載體。上述化合物1-10的制備方法，取新疆藍(lán)剌頭全草，曬干粉碎，用95%的工業(yè)乙醇回流提取3次，每次4小時(shí)，提取液減壓濃縮后得浸膏，溶于水后先用石油醚萃取3次，再用乙酸乙酯萃取3次，減壓濃縮得浸膏，最后用水飽和的正丁醇萃取3次；乙酸乙酯部分用氯仿_甲醇溶劑系統(tǒng)梯度洗脫，得到Frl-Fr6六個(gè)餾分，F(xiàn)r2-Fr5四個(gè)餾分進(jìn)行反復(fù)的硅膠柱層析分離，用ioo:0-50:50的石油醚丙酮梯度洗脫，凝膠lh-20層析分離，然后用50:50的氯仿甲醇和反復(fù)的RP-i8反相硅膠柱層析分離，再用20:so-so:20的甲醇水梯度洗脫，得到化合物1-10。通式(i)化合物在制備抗菌劑中的應(yīng)用。抗菌組合物在制備抗菌劑中的應(yīng)用。本發(fā)明采用植物新疆藍(lán)剌頭(Echinopsritrol.)提取分離的通式(i)所示的二聯(lián)噻吩類(lèi)化合物在植物體內(nèi)含量高、抗菌活性好、結(jié)構(gòu)新，具有抗真菌和抗細(xì)菌的作用，從而可實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的。以上本發(fā)明的化合物用做藥物上時(shí)，可以直接使用，或者以藥物組合物的形式使用。上文所述的的藥物常規(guī)載體，例如稀釋劑、賦形劑如水等，填充劑如淀粉、蔗糖等；黏合劑如纖維素衍生物、藻酸鹽、明膠和聚乙烯吡咯烷酮；濕潤(rùn)劑如甘油；崩解劑如瓊脂、碳酸鈣和碳酸氫鈉；吸收促進(jìn)劑如季銨化合物；表面活性劑如十六烷醇；吸附載體如高嶺土和皂黏土；潤(rùn)滑劑如滑石粉、硬脂酸鈣和鎂、以及和聚乙二醇等。另外還可以在組合物5中加入其它輔劑如香味劑、甜味劑等。本發(fā)明化合物可以組合物的形式通過(guò)口服、鼻吸入、直腸或腸胃外給藥的方式施用于需要這種治療的患者。用于口服時(shí)，可將其制成常規(guī)的固體制劑如片劑、粉劑、粒劑、膠囊等，制成液體制劑如水或油懸浮劑或其他液體制劑如糖漿、酏劑等；用于腸胃外給藥時(shí)，可將其制成注射用的溶液、水或油性懸浮劑等。優(yōu)選的形式是片劑、膠囊和注射劑。本發(fā)明藥物組合物的各種劑型可以按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)生產(chǎn)方法制備。例如使活性成分與一種或多種載體混合，然后將其制成所需的劑型。本發(fā)明的藥物組合物優(yōu)選含有重量比為0.1%99.5%的活性成分，最優(yōu)選含有重量比為0.5%95%的活性成分。本發(fā)明化合物的施用量可根據(jù)用藥途徑、患者的年齡、體重、所治療的疾病的類(lèi)型和嚴(yán)重程度等變化，其日劑量可以是0.0110mg/kg體重，優(yōu)選0.15mg/kg體重?？梢砸淮位蚨啻问┯谩Ｏ旅嬗帽景l(fā)明通式(I)化合物的體外抑菌實(shí)驗(yàn)的試驗(yàn)例來(lái)證明本發(fā)明的藥理效果試驗(yàn)例1:材料與方法1、材料(1)培養(yǎng)基LB培養(yǎng)基(胰蛋白胨5g+酵母2.5g+氯化鈉5g)(2)微孔細(xì)胞培養(yǎng)板及微量移液器(昆明動(dòng)物研究所提供)(3)菌種A、大腸桿菌(ATCC25922);B、金色葡萄球菌(ATCC2592);C、白色念球菌(ATCC2002)。均由昆明動(dòng)物研究所提供。2、方法(1)樣品配制用適量的甲醇(MeOH)溶解樣品，用LB培養(yǎng)基稀釋，二聯(lián)噻吩原液濃度均為(1.Omg/ml)。(2)菌液配制將適量各菌種接種于LB培養(yǎng)基，振蕩混合后，在37t:培養(yǎng)24小時(shí)，取出比濁測(cè)濃度，稀釋為2Xl()S個(gè)/ml含菌量。(3)MIC試驗(yàn)采用微量稀釋法，用12X8的96孔微孔稀釋板進(jìn)行。每排12孔，每排的110孔各加入10ii1藥液用90iU帶菌LB液稀釋成一系列藥液，第11孔加入100ii1帶菌LB液作為空白對(duì)照，第12孔加入10iU甲醇90iU帶菌LB液作為溶劑對(duì)照。使第110孔中的藥液濃度倍比遞減(見(jiàn)表l)。操作完成，振蕩混合后，在37t:培養(yǎng)24小時(shí)，取出在黑色背景下觀察結(jié)果。無(wú)菌生長(zhǎng)孔中所含藥液最低的藥物濃度極為該樣品的MIC。表1十個(gè)活性二聯(lián)噻吩化合物在各微孔中的濃度(Pg/ml)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>3、結(jié)果如表2所示表2十種化合物對(duì)三種菌種的MIC(iig/ml)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>以上可以得出本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比所具有的優(yōu)益效果在于十種二聯(lián)噻吩均對(duì)金色葡萄球菌有很好的抗菌活性，MIC均《75g/ml。金色葡萄球菌的耐抗生素菌株日益增多，其中耐青霉素G的菌株比例已經(jīng)高達(dá)96%98%。本發(fā)明的抗菌活性試驗(yàn)表明優(yōu)選出的10個(gè)二聯(lián)噻吩類(lèi)對(duì)大腸桿菌，金色葡萄球菌都有不同程度的抗菌活性，MIC均《75g/ml。除了化合物3和4對(duì)白色念球菌沒(méi)有顯示抗菌活性外，另5個(gè)化合物對(duì)白色念球菌MIC均《75iig/ml。化合物8-10在100yg/ml濃度下沒(méi)有顯示出抗菌活性。下面所給出的優(yōu)選實(shí)施例，豈在進(jìn)一步闡明本發(fā)明的化合物，制備方法，而并非限定所舉例的化合物的范圍，即是說(shuō)通過(guò)這些實(shí)施例所述的方法可很容易地制得通式(I)化合物，對(duì)本發(fā)明的互換或改動(dòng)，以及使用類(lèi)似的溶劑，對(duì)本專業(yè)的普通技術(shù)人員是不需要?jiǎng)?chuàng)造性勞動(dòng)的。實(shí)施例1:化合物1-10的制備1、提取與分離新疆藍(lán)剌頭全草20kg，曬干粉碎，用95%的工業(yè)乙醇回流提取3次，每次4小時(shí)，提取液減壓濃縮后得浸膏，溶于水后先用石油醚萃取3次，再用乙酸乙酯萃取3次，減壓濃縮得浸膏，最后用水飽和的正丁醇萃取3次；乙酸乙酯部分用氯仿-甲醇溶劑系統(tǒng)梯度洗脫，得到Frl-Fr6六個(gè)餾分，F(xiàn)r2_Fr5四個(gè)餾分進(jìn)行反復(fù)的硅膠柱層析分離，洗脫劑為石油醚丙酮(ioo:o-50:50)梯度洗脫，凝膠lh-20層析分離，洗脫劑為氯仿甲醇(50:50)和反復(fù)的RP-i8反相硅膠柱層析分離，洗脫劑為甲醇水(20:so-so:20)梯度洗脫，得到通式(I)所示的化合物1-10，分別為1(30mg)、2(50mg)、3(100mg)、4(200mg)、5(10mg)、6(10mg)，7-10分別對(duì)應(yīng)4個(gè)新的二聯(lián)噻吩類(lèi)化合物，稱為EchinobithiopheneA(3mg)，EchinobithiopheneB(5mg)，EchinobithiopheneC(5mg)，EchinobithiopheneD(20mg)。2、二聯(lián)噻吩的結(jié)構(gòu)鑒定化合物1:淺黃色粉末，C12H802S2，EI-MSm/z:210[M]+，193，182，166，12169;IR(KBr)cm—1:1450,790;力-NMR(400MHz，CD30D，S，卯m):7.07(1H，dd，J=3.8Hz，J=5.0Hz，H-4)，7.22(1H，d，J=3.8Hz，H_3)，7.34(1H，d，J=3.8Hz，H_5)，7.56(1H，d，J=4.0Hz，H-3')，7.66(1H，d，J=4.0Hz，H_4');13C-NMR(100MHz，CD30D，S，卯m):165.5(C-C00H)，145.3(C-2')，137.5(C_5')，135.3(C_4')，132.6(C_5)，129.3(C_3)，127.3(C-3')，126.4(C_4)，125.1(C_2).化合物2(Arcticacid):淺黃色粉末，C9H602S2，mp220223°C，EI-MSm/z:248[M]+，247，203，159，95，69;IR(KBr)cm—1:1662，1437,790,H-畫(huà)R(500MHz，CD30D，S，卯m):2.10(3H，s，H-CH3)，7.16(1H，d，J=3.8Hz，H_4)，7.33(1H，d，J=4.0Hz，H—3')，7.34(1H，d，J=3.8Hz，H_3)，7.64(1H，d，J=4.OHz，H_4');13C_NMR(125MHz,CD30D，S，ppm):162.7(C-C00H)，142.l(C-2')，135.7(C_5')，134.4(C_4')，133.2(C_5)，132.8(C-3)，125.9(C-3')，125.3(C_4)，123.9(C_2)，93.4(C_2〃)，72.6(C_1〃)，4.3(C-3〃)化合物3:淺黃色粉末，C12H1(l0S2，EI-MSm/z:234[M]+，217，203，190，184，171，121,69;IR(KBr)cm—1:3340，1680，1447，790;力-NMR(500MHz，CD30D，S，卯m):6.85(1H，d，J=3.4Hz，H-4)，6.93(1H，d，J=3.8Hz，H-3')，6.97(1H，d，J=3.4Hz，H_3)，6.98(1H，d，J=3.8Hz，H-4');13C-NMR(125MHz，CD30D，S，卯m):143.4(C-2')，137.2(C_5')，137.0(C-4')，131.7(C-5)，126.0(C-3)，123.5(C-3')，123.1(C_4)，122.9(C_2)，91.2(C-2〃)，72.8(C-1〃)，59.9(C_CH20H)，4.6(C_3〃).化合物4:淺黃色粉末，C12H80S2，EI-MSm/z:232[M]+，221，203，171，159，149，115,69一H-NMR(500MHz,CD30D，S，卯m):7.01(1H，d，J=3.5Hz，H_4)，7.13(1H，d，J=4.0Hz，H-3')，7.18(1H，d，J=3.5Hz，H_3)，7.62(1H，d，J=3.8Hz，H-4')，9.82(1H，s，H-CHO);13C-NMR(125MHz，CD30D，S，卯m):182.4(C-CHO)，146.4(C_2')，141.7(C_5')，137.3(C—4')，135.6(C—5)，132.0(C—3)，125.7(C—3')，124.3(C—4)，124.0(C—2)，92.9(C-2〃)，72.5(C-1〃)，4.7(C_3〃)化合物5:淺黃色粉末，C12H1(l0S2，EI-MSm/z:234[M]+，217，203，190，184，171，158，127，115，95，69;IR(KBr)cm—1:3348,1447,790,H-NMR(500MHz，CD30D，S，卯m):6.98(1H，d，J=3.8Hz，J=5.OHz，H_4)，6.99(1H，d，J=3.8Hz，H-3')，7.OO(IH，d，J=3.4Hz，H-3)，7.14(1H，d，J=3.8Hz，H-4')，7.21(2H，d，J=5.0Hz，H-5)，3.81(2H，t，J=6.5Hz，H-4〃)，2.71(2H，t，J=6.5Hz，H-3〃)；13C_NMR(125MHz，CD30D，S，卯m):138.0(C-2')，136.7(C—5')，132.4(C—4')，127.9(C—5)，124.9(C—3)，124.1(C—3')，123.3(C—4)，122.0(C-2)，91.6(C-2〃)，75.5(C_1〃)，61.0(C_4")，24.2(C_3〃)化合物6:淺黃色粉末，C13H120S2，EI-MSm/z:248[M]+，230，224，217，207，193，179，135，97，69;IR(KBr)cm—1:3350，1680，1450,790;力-畫(huà)R(500MHz，CD3OD，S，ppm):6.73(1H，d，J=4.OHz，H_4)，7.02—7.05(3H，m，H_3'，3，4')，4.05(2H，t，J=6.5Hz，H-4")，3.70(2H，t，J=6.5Hz，H-3〃)；13C_NMR(125MHz,CD3OD，S，卯m):140.7(C-2')，138.7(C-5')，134.9(C-4')，133.1(C_5)，127.3(C_3)，125.0(C_3')，123.6(C_4)，122.8(C—2)，93.8(C—2〃)，74.8(C—1〃)，61.2(C—4〃)，24.6(C—3〃)，15.1(C—CH3)化合物7(EchinobithiopheneA):淺黃色粉末，C12H1204S2，[a]*=—126.6。(c0.0175，CHC13);HR-ESI-MS(m/z307.0079，[M+Na]+，calcd307.0074);IR(KBr)cm—1:3380，1680，1450,790一H-NMR(500MHz,CD30D，S，ppm):7.20(1H，d，J=5.OHz，H_5')，7.12(1H，d，J=3.5Hz，H-3')，7.03(1H，d，J=3.6Hz，H_3)，7.OO(IH，dd，J=3.5Hz，J=5.OHz，H-4')，6.95(1H，d，J=3.6Hz，H-4)，4.90(1H，d，J=7.0Hz，H-l〃)，4.40(lH，m，H_3〃)，4.32(1H，dd，J=5.OHz，J=10.lHz，H_4a〃)，4.IO(IH，dd，J=5.OHz，J=6.OHz，H-2")，3.93(1H，dd，J=3.8Hz，J=10.1Hz，H-4P〃)；13C-NMR(125MHz，CD3OD，S，ppm):142.0(C-5)，137.2(C-2')，137.2(C_2)，127.8(C_4')，125.4(C_4)，124.5(C_5')，123.7(C-3')，123.l(C-3)，80.l(C-l")，78.4(C_2〃)，73.4(C_4")，71.1(C_3〃)化合物8(EchinobithiopheneB):黃色針狀晶體，C13H1(l03S2，m.p.:135136。C，EI-MSm/z:278[M]+，260，247，218，190，158，145;HR-ESI—MS(pos.):279.0145(C13Hn03S2;calc.279.0149)一H-NMR(400MHz，CD30D，S，ppm):7.21(1H，d，J=3.2Hz，H_4)，7.37(1H，d，J=3.2Hz，H-3')，7.42(1H，d，J=3.2Hz，H-3)，7.85(1H，d，J=3.2Hz，H-4')，9.84(1H，s，H-CHO);13C-NMR(100MHz，CD30D，S，ppm):184.8(C—CHO)，146.9(C_2')，143.6(C_5')，139.5，(C-4')，138.2(C-5)，134.7(C-3)，127.3(C-3')，126.3(C_4)，125.4(C_2)，95.8(C-2〃)，78.2(C-1〃)，66.9(C_3〃)，68.3(C_4")化合物9(EchinobithiopheneC):黃色粉末，C13H1204S2，HR-ESI-MS(pos.):292.9958(C13H904S2;calc.292.9942);IR(KBr)cm—1:3350，1680，1450，790一H-畫(huà)R(500MHz，CD30D，S，ppm):7.18(3H，m，H-3'，3，4')，7.16(1H，d，J=3.5HzH_4)，4.40(1H，m，H-3")3.46(2H，t，J=6.5Hz，H-4");13C-NMR(125MHz，CD30D，S，ppm):164.3(C-COOH)，138.6(C-2')，135.7(C-5')，133.4(C_4')，128.5(C_5)，124.6(C_3)，123.7.0(C_3')，120.4(C-4)，120.4(C-2)，96.l(C-2〃)，76.7(C_1〃)，65.5(C_4")，63.1(C_3〃)化合物10(EchinobithiopheneD):黃色粉末，C13H1402S2，EI-MSm/z:266[M]+，248，222,207,207，193，179，135，97，69;IR(KBr)cm—1:3350，1680，1450,790,H-NMR(500MHz，CD30D，S，卯m):7.62(1H，d，J=4.OHz，H_4)，7.13(1H，d，J=4.OHz，H_3)，7.09(1H，d，J=3.6Hz，H-4')，6.71(1H，d，J=3.6Hz，H-3')，3.75(2H，t，J=6.5Hz，H_4〃)，3.04(2H，t，J=6.5Hz，H_2〃)，2.50(3H，s，H_CH3)，2.04(2H，t，J=6.5Hz，H_3〃)；13C-NMR(125MHz，CD30D，S，卯m):193.0(C_l〃)，146.3(C_2')，141.7(C_5')，141.3(C-4')，134.0(C-5)，133.0(C-3)，126.5(C-3')，125.7(C_4)，123.4(C_2)，62.3(C-4")，35.5(C-2〃)，27.3(C_3〃)，15.4(C_CH3)9實(shí)施例2片劑實(shí)施例1所得化合物110mg，乳糖180mmg，淀粉55mg，硬脂酸鎂5mg;制備方法將化合物1、乳糖和淀粉混合，用水均勻濕潤(rùn)，把濕潤(rùn)后的混合物過(guò)篩并干燥，再過(guò)篩，加入硬脂酸鎂，然后將混合物壓片，每片重250mg，化合物含量為10mg。實(shí)施例3安瓿劑實(shí)施例1所得化合物22mg，氯化鈉10mg;制備方法將化合物2和氯化鈉溶解于適量的注射用水中，過(guò)濾所得溶液，在無(wú)菌條件下裝入安瓿瓶中。實(shí)施例4:膠囊劑實(shí)施例1所得化合物510mg，乳糖187mg，硬脂酸鎂3mg;制備方法將化合物與助劑混合，過(guò)篩，均勻混合，把得到的混合物裝入硬明膠膠囊，每個(gè)膠囊重200mg，活性成分含量為10mg。實(shí)施例5:片劑實(shí)施例1所得化合物610mg，乳糖180mg，淀粉55mg，硬脂酸鎂5mg;制備方法將化合物4、乳糖和淀粉混合，用水均勻濕潤(rùn)，把濕潤(rùn)后的混合物過(guò)篩并干燥，再過(guò)篩，加入硬脂酸鎂，然后將混合物壓片，每片重250mg，化合物含量為10mg。實(shí)施例6:安瓿劑實(shí)施例1所得化合物72mg，氯化鈉10mg;制備方法將化合物2和氯化鈉溶解于適量的注射用水中，過(guò)濾所得溶液，在無(wú)菌條件下裝入安瓿瓶中。實(shí)施例7:膠囊劑實(shí)施例1所得化合物110mg，乳糖185mg，硬脂酸鎂5mg;制備方法將化合物與助劑混合，過(guò)篩，均勻混合，把得到的混合物裝入硬明膠膠囊，每個(gè)膠囊重200mg，活性成分含量為10mg。10權(quán)利要求二聯(lián)噻吩類(lèi)化合物，具有通式(I)所示結(jié)構(gòu)式其中，R1＝-H，-CHO，-COOH，-CHOHCH2OH，-CH2OH，-CH3R2＝-H，-C≡CCH3，-C≡CCH2CH2OH，-C≡CCHOHCH2OH，-COCH2CH2CH2OH。F200910218293XC00011.tif,F200910218293XC00012.tif2.如權(quán)利要求1所述的化合物，其為如下結(jié)構(gòu)式所示化合物1-10，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>3.抗菌組合物，含有有效量的權(quán)利要求1所述的化合物和抗菌學(xué)上可接受的載體。4.權(quán)利要求1-2所述化合物的制備方法，取新疆藍(lán)剌頭全草，曬干粉碎，用95%的工業(yè)乙醇回流提取3次，每次4小時(shí)，提取液減壓濃縮后得浸膏，溶于水后先用石油醚萃取3次，再用乙酸乙酯萃取3次，減壓濃縮得浸膏，最后用水飽和的正丁醇萃取3次；乙酸乙酯部分用氯仿_甲醇溶劑系統(tǒng)梯度洗脫，得到Frl-Fr6六個(gè)餾分，F(xiàn)r2-Fr5四個(gè)餾分進(jìn)行反復(fù)的硅膠柱層析分離，用ioo:o-50:50的石油醚丙酮梯度洗脫，凝膠lh-20層析分離，然后用50:50的氯仿甲醇和反復(fù)的RP-i8反相硅膠柱層析分離，再用20:so-so:20的甲醇水梯度洗脫，得合物1-10。5.權(quán)利要求l-2化合物在制備抗菌劑中的應(yīng)用。6.權(quán)利要求3抗菌組合物在制備抗菌劑中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明涉及通式(I)表示的噻吩類(lèi)化合物及其制備方法和應(yīng)用。其中，R1＝-H，-CHO，-COOH，-CHOHCH2OH，-CH2OH，-CH3R2＝-H，-C≡CCH3，-C≡CCH2CH2OH，-C≡CCHOHCH2OH，-COCH2CH2CH2OH。文檔編號(hào)A61K31/381GK101723940SQ20091021829公開(kāi)日2010年6月9日申請(qǐng)日期2009年12月7日優(yōu)先權(quán)日2009年12月7日發(fā)明者任潔,朱華結(jié),李良波申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所