一種化合物在制備治療骨關(guān)節(jié)炎藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，尤其涉及一種化合物的醫(yī)藥新用途，具體涉及化合物 PD0325901在制備治療骨關(guān)節(jié)炎藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 關(guān)節(jié)炎（osteoarthritis，OA)在我國的總發(fā)病率約為13%，其中以骨關(guān)節(jié)炎為 最常見，發(fā)病率隨年齡增加而上升。據(jù)最新數(shù)據(jù)統(tǒng)計，在60歲以上的人群中，X線上有表 現(xiàn)的骨關(guān)節(jié)炎女性發(fā)病率約42. 8%，男性約21. 5%，有癥狀的骨關(guān)節(jié)炎的女性發(fā)病率約為 15%，男性約為5. 6%。骨關(guān)節(jié)炎已成為中老年人功能病廢、生活質(zhì)量下降的主要原因之一。 由于社會的發(fā)展和醫(yī)療水平的提高，人口壽命的增加，中國將成為骨關(guān)節(jié)炎發(fā)病的大國，骨 關(guān)節(jié)炎所表現(xiàn)出的關(guān)節(jié)疼痛和僵硬嚴(yán)重影響中老年的生活質(zhì)量，同時也將帶來沉重的社會 負(fù)擔(dān)，因此對于關(guān)節(jié)炎的治療顯得尤為迫切和必要。
[0003] 目前臨床治療骨關(guān)節(jié)炎的藥物主要采用非留體類消炎藥（NSAIDs)和軟骨保護(hù)劑 及中成藥制劑。NSAIDs-直是全球處方量最大的藥物之一，此類藥物存在較明顯的胃腸道 反應(yīng)，進(jìn)一步限制其使用，C0X2選擇性抑制劑雖避免這類問題，但對心血管系統(tǒng)仍有一定的 風(fēng)險；軟骨保護(hù)劑如維固力，日常用藥費用在30元/日，起效時間長（> 3周），因其費用 和時間成本高，對其推廣有一定的限制。且到目前為止，以上藥物均為相關(guān)報道可以逆轉(zhuǎn)退 變的軟骨細(xì)胞。
[0004] 醫(yī)藥界一直在致力于開發(fā)較理想的治療骨關(guān)節(jié)病的藥物，尋找安全有效、服量較 少、價格適度的中藥新藥。
[0005] 化合物ro〇325901目前主要應(yīng)用在各種癌癥上的研宄，其抗癌活性已在各種人類 移植瘤中得到證實，在研宄的人類腫瘤模型中，有85%以上的腫瘤被ro0325901明顯抑 制。
[0006] 化合物H)0325901的結(jié)構(gòu)式（I)如下：
[0007]


【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供結(jié)構(gòu)式（I)化合物的新用途，即在制備治療骨關(guān) 節(jié)炎藥物中的新應(yīng)用。
[0009] 骨關(guān)節(jié)炎發(fā)生，主要是軟骨細(xì)胞發(fā)生退變，而軟骨細(xì)胞的退變主要表現(xiàn)為，促進(jìn)II 型膠原和糖胺多糖降解的基質(zhì)金屬蛋白酶MMP13(Matrixmetallopeptidase13)的表達(dá)上 調(diào)，而軟骨細(xì)胞特異性基因如II型膠原和糖胺多糖等表達(dá)丟失，如果藥物能阻止這些基因 的表達(dá)改變，可能成為骨關(guān)節(jié)炎的治療藥物。
[0010] 目前在實驗中，發(fā)現(xiàn)ro〇325901 (購自santacruz公司）化合物（即結(jié)構(gòu)式（I)化 合物）可以明顯抑制IL-I0和TNFa誘導(dǎo)的MMP13的表達(dá)，同時提高II型膠原和糖胺多糖 的表達(dá)。本發(fā)明通過常見的誘導(dǎo)骨關(guān)節(jié)炎因子如IL-I0和TNFa誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞退變，建立 骨關(guān)節(jié)炎的細(xì)胞模型，同時加入藥物（結(jié)構(gòu)式（I)化合物），觀察藥物的作用，從而確定結(jié) 構(gòu)式（I)化合物成為骨關(guān)節(jié)炎的潛在治療藥物，及將來應(yīng)用于動物和人體試驗奠定試驗基 礎(chǔ)。
[0011] 本發(fā)明提供了結(jié)構(gòu)式（I)化合物在制備治療骨關(guān)節(jié)炎藥物中的應(yīng)用
[0012]
[0013] 進(jìn)一步地，所述結(jié)構(gòu)式（I)化合物具有抑制IL-I0和TNFa誘導(dǎo)的MMP13的表達(dá)， 同時提高II型膠原和糖胺多糖表達(dá)的功能。
[0014] 進(jìn)一步地，所述治療骨關(guān)節(jié)炎藥物含有藥學(xué)上有效量的結(jié)構(gòu)式（I)化合物以及藥 學(xué)上可接受的載體。
[0015] 進(jìn)一步地，所述藥物被制成任何一種藥學(xué)上可接受的劑型，例如片劑、膠囊劑、顆 粒劑、口服液、注射劑等。
[0016] 利用本發(fā)明結(jié)構(gòu)式⑴化合物（在本發(fā)明中簡稱為ro〇325901)，通過各種常 規(guī)篩選方法，可篩選出與PD0325901發(fā)生相互作用的物質(zhì)，如受體、抑制劑或拮抗劑等。 PD0325901為信號通路MAPK-MEK的抑制劑，主要針對MEK分子的抑制劑。
[0017] 本發(fā)明H)0325901的給藥方式通常為口服，但其具有高滲透率，皮下注射也是一 種給藥方式。
[0018] 以本發(fā)明的H)0325901為例，可以將其與合適的藥學(xué)上可接受的載體聯(lián)用。這類 藥物組合物含有治療有效量的化合物和藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。這類載體包括（但 并不限于）：鹽水、緩沖液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其組合。藥物制劑應(yīng)與給藥方式相匹 配。本發(fā)明的H)0325901可以被制成注射劑形式，例如用生理鹽水或含有葡萄糖和其他輔 劑的水溶液通過常規(guī)方法進(jìn)行制備。諸如片劑和膠囊之類的藥物，可通過常規(guī)方法進(jìn)行制 備。藥物如注射劑、口服液、片劑和膠囊宜在無菌條件下制造?；钚猿煞值慕o藥量是治療有 效量，例如每天約1微克/千克體重-約5毫克/千克體重。此外，本發(fā)明的ro〇325901還 可與其他治療劑一起使用。
[0019] 當(dāng)本發(fā)明的H)0325901被用作藥物時，可將治療有效劑量的H)0325901施用于動 物腫瘤治療實驗時，其中該治療有效劑量通常至少約20微克/千克體重，而且在大多數(shù)情 況下不超過約25毫克/千克體重，在臨床I期腫瘤試驗時，給藥劑量在2毫克/天至大于 20毫克/天。當(dāng)然，對于此化合物的具有骨關(guān)節(jié)炎的治療作用，藥物劑量需要重新進(jìn)行臨床 試驗。具體劑量還應(yīng)考慮給藥途徑、病人健康狀況等因素，這些都是熟練醫(yī)師技能范圍之內(nèi) 的。
[0020] 和現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：PD0325901作為腫瘤的治療潛在藥 物，在軟骨細(xì)胞上測試，首次發(fā)現(xiàn)其具有逆轉(zhuǎn)軟骨退變的功效，對軟骨細(xì)胞退變的保護(hù)作 用。在IL-10和TNFa的作用下，軟骨細(xì)胞中的最主要的基質(zhì)成份如C〇12al和GAG，顯著降 解，而H)0325901可以逆轉(zhuǎn)炎性細(xì)胞因子的致退變作用，使退變的細(xì)胞恢復(fù)到正常細(xì)胞的 基因表達(dá)。在中醫(yī)藥的研宄中，至今未發(fā)現(xiàn)其它藥物有此效果，此藥物具有治療靶點明確， 成份單一，在劑量上易控制，若能用于骨關(guān)節(jié)炎的治療，將會產(chǎn)生巨大的經(jīng)濟(jì)效益，及提高 骨關(guān)節(jié)炎患者的生存質(zhì)量。
【附圖說明】
[0021] 圖1是本發(fā)明實施例1中蛋白定量檢測（Westernblot方法）的結(jié)果示意圖。
[0022] 圖2是本發(fā)明實施例1中糖胺多糖（GAG)的含量測定的結(jié)果示意圖。
[0023] 圖3是本發(fā)明實施例2中體外股骨頭軟骨組織培養(yǎng)實驗的結(jié)果示意圖。
【具體實施方式】
[0024] 下面結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明。以下實施例僅用于說明本 發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條 件，或按照制造廠商所建議的條件。
[0025] 實施例1
[0026] 1.取出生24h的SD大鼠四肢關(guān)節(jié)處軟骨，提取軟骨細(xì)胞。傳代后的第一代細(xì)胞進(jìn) 行研宄。
[0027] 2?細(xì)胞分為5組：分別為對照組，IL-I|3組（50ng/ml，peprotech公司）， IP0.1 組[IL-10+PDO3259Ol(O.lyM)]，IP0.25 組[IL-10+PDO3259Ol(O.25yM)]， IP0.5 組[IL-10+PDO3259Ol(O.5yM)]，TNFa組（50ng/ml，p印rotech公司），TP0. 1 組[TNFa+PD0325901 (0.1yM)]，TP0.25 組[TNFa+PD0325901 (0.25yM)]，TP0.5 組 [TNFa+PD0325901(0.5yM)]。其中，PD0325901 購自santacruz公司。分別加入以上藥物 濃度和細(xì)胞因子。24小時后，抽取細(xì)胞總蛋白，進(jìn)行蛋白定量檢測（Westernblot方法） MMP13(santacruz公司，貨號SC-30073)，Col2al(santacruz公司，貨號SC-52658)以及檢 測細(xì)胞中糖胺多糖的含量。
[0028] 3.蛋白定量檢測（Westernblot方法），結(jié)果見圖1，軟骨細(xì)胞在IL-I0和TNFa 作用24小時后，MMP13的表達(dá)量顯著提高，C〇12al的表達(dá)顯著降低，表明軟骨發(fā)生退變， 在IL-I0和TNFa分別和不同濃度的藥物協(xié)同作用后，MMP13的表達(dá)被抑制，而C〇12al的 表達(dá)將增加，這兩個蛋白的表達(dá)將恢復(fù)到正常的軟骨細(xì)胞的水平（對照組）。進(jìn)一步說明PD0325901藥物通過抑制MMP13的表達(dá)，從而保護(hù)軟骨基質(zhì)Col2al避免其降解。
[0029] 4?糖胺多糖（GAG)的含量測定根據(jù)試劑盒（Biocolor公司，英國）。取100, 000 個軟骨細(xì)胞測其GAG含量。軟骨細(xì)胞在IL-I0和TNFa作用24和48小時后，GAG的含量 下降，表明軟骨發(fā)生退變，在IL-I0和TNFa分別和不同濃度的藥物協(xié)同作用后，GAG的含 量得到提高，甚至GAG的水平超過對照組正常的軟骨細(xì)胞的水平，結(jié)果見圖2。#P〈0. 05和 *P〈0. 05分別和對照組及IL-I0組比較。
[0030] 實施例2
[0031] 取出生2周齡的SD大鼠股骨頭（此時股骨頭未鈣化，均為軟骨組織）。分 為 5 組：分別為對照組（con組），IL-I|3 組（50ng/ml，peprotech公司），IPO. 1 組[IL-10+PDO3259O1(O.lyM)]，TNFa組（50ng/ml，peprotech公司），TP0. 1 組 [TNFa+PD0325901(0.IyM)]。其中，PD0325901 購自santacruz公司。分別加入以上藥物 濃度和細(xì)胞因子。每48小時換液一次，至96小時，取出股骨頭，4%多聚甲醛固定24小時 以上，進(jìn)行脫鈣和脫水，組織包埋和石蠟切片。
[0032] 在體外股骨頭軟骨組織培養(yǎng)實驗中，發(fā)現(xiàn)在IL-I0組（50ng/ml，p印rotech公司） 和TNFa組（50ng/ml，peprotech公司）炎性因子作用4天，相較于對照組（con組）股骨 頭軟骨表面發(fā)生明顯的退化，甲苯胺藍(lán)和臧紅固綠均染色組織中糖胺多糖含量，臧紅固綠 染色，染色為紅色部分表示未退變的軟骨，染色為綠色的部分表示退變的軟骨，甲苯胺藍(lán)染 色，淡染的部分為退變的軟骨區(qū)域，兩種染色結(jié)果均一致。在加入藥物H)0325901和細(xì)胞因 子同時作用后，藥物H)0325901可完全阻止細(xì)胞因子的致退變作用（見圖3)。
【主權(quán)項】
1. 下述結(jié)構(gòu)式（I)化合物在制備治療骨關(guān)節(jié)炎藥物中的應(yīng)用2. 如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述結(jié)構(gòu)式（I)化合物具有抑制IL-1 0和 TNFa誘導(dǎo)的MMP13的表達(dá)，同時提高II型膠原和糖胺多糖表達(dá)的功能。3. 如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述治療骨關(guān)節(jié)炎藥物含有藥學(xué)上有效量 的結(jié)構(gòu)式（I)化合物以及藥學(xué)上可接受的載體。4. 如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物被制成任何一種藥學(xué)上可接受的 劑型。5. 如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述任何一種藥學(xué)上可接受的劑型包括片 劑、膠囊劑、顆粒劑、口服液、注射劑。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種結(jié)構(gòu)式(I)化合物在制備治療骨關(guān)節(jié)炎藥物中的應(yīng)用。經(jīng)實驗證實，本發(fā)明結(jié)構(gòu)式(I)化合物可以明顯抑制IL-1β和TNFa誘導(dǎo)的MMP13的表達(dá)，同時提高Ⅱ型膠原和糖胺多糖的表達(dá)，為治療骨關(guān)節(jié)炎提供了一種新的途徑和手段。此藥物具有治療靶點明確，成份單一，在劑量上易控制，能用于骨關(guān)節(jié)炎的治療及提高骨關(guān)節(jié)炎患者的生存質(zhì)量。
【IPC分類】A61K31/166, A61P29/00, A61P19/02
【公開號】CN104906081
【申請?zhí)枴緾N201510270396
【發(fā)明人】丁道芳, 鄭昱新, 李玲慧, 宋奕, 杜國慶, 龐堅, 趙詠芳, 曹月龍, 詹紅生
【申請人】上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院
【公開日】2015年9月16日
【申請日】2015年5月25日