一種吡噻菌胺殘留量的gc-ei-ms快速測定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種化嚷菌胺殘留量的GC-EI-MS快速測定方法，更具體地說是采用氣 相色譜-電子轟擊離子源-質(zhì)譜(GC-EI-MS)定性定量測定豬肉、牛肉、羊肉、雞肉等動物肌肉 及制品等脂肪含量高的動物源性食品中殘留的化嚷菌胺含量的方法，屬于農(nóng)藥殘留量的測 定技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 化嚷菌胺(Penthiopyrad)是日本Ξ井化學(xué)公司研發(fā)的新穎酷胺類殺菌劑，英文通 用名為 penthiopyrad，試驗(yàn)代號：MTF-753，商品名為 Afetofluapro XAS 登錄號：183675-82- 3,化學(xué)名稱為(RS)-N-[2-(l，3-二甲基下基)-3-嚷吩基]-甲基-3-(Ξ氣甲基)-lH-化挫-4- 甲酯胺，化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：
[0003] 化嚷菌胺與現(xiàn)有的簇酷胺類殺菌劑有不同的殺菌譜，除了與現(xiàn)有簇酷胺類殺菌劑 一樣對擔(dān)子菌有效外，其對子囊菌、不完全菌亦有效，現(xiàn)被推薦用于防治對其他殺菌劑具抗 性的灰霉病和白粉病。該藥劑通常使用的有效成分劑量為100~200g/hm2,其被廣泛應(yīng)用于 果樹、蔬菜、草坪等眾多作物，防治誘病、菌核病、灰霉病、霜霉病、蘋果黑星病和白粉病。 化nthiopyrad于2008年在日本獲得首次批準(zhǔn)，用于果樹、蔬菜和觀賞植物，后又于2011年11 月在加拿大獲準(zhǔn)登記。商標(biāo)名為Ve;rtisan和i^ntelis(均Wpenthiopyrad 200g/L為其活性 成分)和化6〇1'13(96111:11；[097'曰(1100邑/]^+油1〇1'〇1:11曰1〇]1；[1(百菌清)250邑/]^)的3個產(chǎn)品主要 用在果樹、蔬菜和田間作物上，在實(shí)際應(yīng)用發(fā)現(xiàn)化嚷菌胺具有很廣闊的應(yīng)用前景。
[0004] 隨著化嚷菌胺的登記、推廣和使用，作為我國主要出口市場的歐盟、加拿大和澳大 利亞等國家制定了其在蔬菜、水果、糧谷和畜產(chǎn)品等食品農(nóng)產(chǎn)品中的最大允許殘留量 (MRL)，加拿大規(guī)定化嚷菌胺在果蔬、堅(jiān)果、糧谷及畜產(chǎn)品等動物源性食品中的MI?L為0.01~ 30mg/kg;澳大利亞規(guī)定化嚷菌胺在果蔬、堅(jiān)果、糧谷及畜產(chǎn)品等動物源性食品中的脈L為 0.01~5mg/kg;歐盟規(guī)定化嚷菌胺在果蔬、堅(jiān)果、糧谷及畜產(chǎn)品等動物源性食品中的Μ化為 0.01~30mg/kg;歐盟、日本等國家規(guī)定若田間使用農(nóng)藥沒有在該國家登記，沒有制定相應(yīng) 的殘留限量標(biāo)準(zhǔn)時，出口至其國家的食品農(nóng)產(chǎn)品包括畜禽肉等動物源性食品中殘留限量均 實(shí)行O.Olmg/L的"一律標(biāo)準(zhǔn)"。
[0005] 現(xiàn)階段，對化嚷菌胺殘留量測定方法的研究較少，報(bào)道的檢測方法主要為蔬菜和 水果中化嚷菌胺殘留檢測方法，運(yùn)些檢測方法均采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜化C-MS/MS)測定蔬 菜和水果中化嚷菌胺殘留量的檢測方法，使用LC-MS/MSii定食品農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留具有快 速、簡便、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，但由于其價(jià)格較昂貴，很多檢測機(jī)構(gòu)、企業(yè)或科研院所未配置該 儀器或配置臺數(shù)較少，由于不同的化合物采用LC-MS/MS檢測時，需使用不同的流動相或色 譜柱，運(yùn)樣需要不斷更換色譜柱、流動相并耗費(fèi)比較長的時間對系統(tǒng)進(jìn)行平衡，運(yùn)一定程度 上制約了 LC-MS/MS的應(yīng)用。配備電子轟擊電離源的氣相色譜質(zhì)譜(GC-EI-MS)分析食品農(nóng)產(chǎn) 品中農(nóng)藥殘留具有很大優(yōu)勢，由于電子轟擊電離源質(zhì)譜為通用性檢測器，可實(shí)現(xiàn)幾百種農(nóng) 藥的多殘留分析，可同時定性和定量，價(jià)格適中，因此現(xiàn)各種檢測機(jī)構(gòu)和企業(yè)均配備氣相色 譜-電子轟擊離子源-質(zhì)譜儀(GC-EI-MS)對食品農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測，但迄今為止 未見食品農(nóng)產(chǎn)品中化嚷菌胺殘留量的GC-EI-MS檢測方法的報(bào)道。另外，眾所周知，如E化邸S 前處理技術(shù)已成為農(nóng)藥殘留分析中應(yīng)用最廣的樣品前處理方法，但如E化ERS方法主要適用 于低脂肪含量的高含水基質(zhì)，如大部分的水果蔬菜，在面對高脂肪含量基質(zhì)時能力有限，一 般需要增加正己燒除脂、冷凍樣品提取液去脂等步驟，但效果有限。近年來有些公司推出了 增強(qiáng)型脂質(zhì)去除專利產(chǎn)品-Enhanced Matrix Removal，EMR-lipid，主要用于去除具有直鏈 控類結(jié)構(gòu)的脂類干擾物，包括游離脂肪酸、膽固醇、甘油Ξ醋、憐脂等。該產(chǎn)品已被制成基質(zhì) 固相分散萃取劑，經(jīng)水活化后可直接通過分散固相萃取流程對提取液中的脂類雜質(zhì)進(jìn)行去 除，本發(fā)明應(yīng)用該前處理方法凈化動物源性食品時發(fā)現(xiàn)，該方法簡單高效、對脂類物質(zhì)去除 效果好，建立EMR基質(zhì)分散凈化、氣相色譜-電子轟擊離子源-質(zhì)譜(GC-EI-MS)定性和定量分 析動物源性食品中化嚷菌胺殘留量的檢測方法具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種化嚷菌胺殘留量的GC-EI-MS快速測定方法，主要用于測 定動物源性食品等脂肪含量高的食品農(nóng)產(chǎn)品中化嚷菌胺殘留量。
[0007] 為實(shí)現(xiàn)W上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：一種化嚷菌胺殘留量的GC-EI-MS 快速測定方法，包括如下步驟：
[000引（1)提取 稱取混勻樣品于具塞離屯、管中，加入適量水復(fù)蘇后，定量加入乙臘溶液均質(zhì)提取，然后 加入氯化鋼和無水硫酸儀，劇烈滿旋Imin后離屯、。
[0009] 凈化 將增強(qiáng)型脂質(zhì)去除產(chǎn)品EMR用水活化，移取樣品提取液于活化好的EMR凈化管中，滿旋 Imin后，700化/min離屯、5min，轉(zhuǎn)移全部上清液至裝有無水硫酸儀和氯化鋼的離屯、管中進(jìn)行 鹽析，滿旋離屯、后，移取一定體積的上清液，濃縮至干后，用體積比為1/1的丙酬/正己燒混 合溶劑溶解定容，過膜后，待氣相色譜-電子轟擊離子源-質(zhì)譜(GC-EI-MS)檢測。
[0010] (3)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制 將不含化嚷菌胺的同種類基質(zhì)空白樣品按上述步驟（1)、（2)處理，得樣品提取凈化殘 渣，加入適量溶劑和標(biāo)準(zhǔn)溶液，滿旋混勻，配制成至少3個濃度的化嚷菌胺系列標(biāo)準(zhǔn)工作液。
[0011] (4)測定和結(jié)果計(jì)算 將步驟(3)中的各濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行GC-EI-MS測定，W標(biāo)準(zhǔn)工作液的色譜峰 面積對其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線;在相同條件下將步驟(2)中凈化 后的樣品液注入GC-EI-MS進(jìn)行測定，測得樣品液中化嚷菌胺的色譜峰面積，代入基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn) 工作曲線，得到樣品液中化嚷菌胺含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質(zhì)量計(jì)算得到樣品 中化嚷菌胺殘留量;若上機(jī)溶液中化嚷菌胺殘留量超過線性范圍上限，需用定容溶劑將上 機(jī)溶液濃度稀釋至線性范圍之內(nèi)。
[0012] 步驟(1)中樣品若為動物肝臟等含水量較少的樣品，提取前須加適量水充分浸潤。
[0013] 步驟(4)中氣相色譜條件為:色譜柱:HP-5MS毛細(xì)管色譜柱，柱長30m，內(nèi)徑0.25mm， 膜厚0.25皿;進(jìn)樣口溫度250°C ;載氣：He，不分流模式進(jìn)樣，進(jìn)樣量：1化;恒流模式，流速 1.OmL/min;升溫程序:初溫60°C保持2min，W每分鐘20°C的速度升至200°C，然后W每分鐘2 °C的速度升至220°C，再W每分鐘20°C的速度升至280°C，保持lOmin;傳輸線溫度:280°C。
[0014] 步驟(4)中質(zhì)譜條件為:離子源溫度150°C;四極桿溫度150°C;電離模式：電子轟擊 電離，即EI模式，能量70eV;掃描方式：選擇離子監(jiān)測（SIM)模式，監(jiān)測的離子為：302.1、 177.0、359.1、166.1。
[0015] 步驟(4)中測定樣液和基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液時，若樣液中農(nóng)藥色譜峰保留時間與標(biāo) 準(zhǔn)溶液中相應(yīng)農(nóng)藥保留時間相一致，并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中，所選擇的離子均 出現(xiàn)，而且離子豐度比與標(biāo)準(zhǔn)溶液的離子豐度比相一致，則可判斷樣液中存在運(yùn)種農(nóng)藥;若 上述兩個條件不能同時滿足，則判斷不含該種農(nóng)藥。
[0016] 本發(fā)明的有益效果在于：
[0017] 本發(fā)明利用分散固相萃取技術(shù)，建立了簡便、快速并能有效避免樣品中基質(zhì)干擾 的樣品前處理方法，將此前處理方法結(jié)合GC-EI-MS應(yīng)用于糧谷、動物源性食品中化嚷菌胺 定性確證和定量檢測，平均回收率為92.7 %~93.4%，平均相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為4.9 %~ 7.6%，檢出限低于4.3祉g/kg，具有操作簡便、快速、準(zhǔn)確、靈敏度高及重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)。能 滿足美國、歐盟、日本等國家對相應(yīng)產(chǎn)品安全檢測的技術(shù)要求，為保障我國人民食品安全及 對外出口貿(mào)易健康發(fā)展提供有力的技術(shù)支撐。
【附圖說明】
[0018] 圖1為添加在空白豬肉基質(zhì)中的化嚷菌胺的GC-EI-MS選擇離子色譜圖。
[0019]圖2為不含郵嚷菌胺的豬肉空白樣品的GC-EI-MS選擇離子色譜圖。
[0020] 圖3為W不含化嚷菌胺的豬肉空白樣品為基質(zhì)配制的化嚷菌胺標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。
【具體實(shí)施方式】
[0021] 現(xiàn)下實(shí)施實(shí)例來說明本發(fā)明，但并不是限制本發(fā)明的范圍。
[0022] 實(shí)施例中使用的儀器與試劑 T18 Basic均質(zhì)器（11(4,60^11日117);〇?216虹離屯、機(jī)（日立，化9日11);153基本型旋滿混合 器（IKA，Germany);TurboVap LV型樣品自動濃縮儀（Caliper，USA);7890N氣相色譜-5