一種吡噻菌胺殘留量的gc-ms/ms快速測(cè)定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種吡噻菌胺殘留量的GC-MS/MS快速測(cè)定方法，更具體地說是采用氣 相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)定性定量測(cè)定豬肉、牛肉、羊肉、雞肉等動(dòng)物肌肉及制品等脂肪 含量高的動(dòng)物源性食品中殘留的吡噻菌胺含量的方法，屬于農(nóng)藥殘留量的測(cè)定技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]吡噻菌胺(Penthiopyrad)是日本三井化學(xué)公司研發(fā)的新穎酰胺類殺菌劑，英文通 用名為 penthiopyrad，試驗(yàn)代號(hào)：MTF-753，商品名為 Afetofluapro XAS 登錄號(hào)：183675-82-3,化學(xué)名稱為(RS)-N-[2-(l，3-二甲基丁基)-3-噻吩基]-甲基-3-(三氟甲基)-1Η-吡唑-4-甲酰胺，化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：
[0003] 吡噻菌胺與現(xiàn)有的羧酰胺類殺菌劑有不同的殺菌譜，除了與現(xiàn)有羧酰胺類殺菌劑 一樣對(duì)擔(dān)子菌有效外，其對(duì)子囊菌、不完全菌亦有效，現(xiàn)被推薦用于防治對(duì)其他殺菌劑具抗 性的灰霉病和白粉病。該藥劑通常使用的有效成分劑量為100~200g/hm 2,其被廣泛應(yīng)用于 果樹、蔬菜、草坪等眾多作物，防治銹病、菌核病、灰霉病、霜霉病、蘋果黑星病和白粉病。 Penthiopyrad于2008年在日本獲得首次批準(zhǔn)，用于果樹、蔬菜和觀賞植物，后又于2011年11 月在加拿大獲準(zhǔn)登記。商標(biāo)名為Vertisan和Fontelis(均以penthiopyrad 200g/L為其活性 成分）和Treoris (penthiopyrad 100g/L+chlorothalonil (百菌清）250g/L)的3個(gè)產(chǎn)品主要 用在果樹、蔬菜和田間作物上，在實(shí)際應(yīng)用發(fā)現(xiàn)吡噻菌胺具有很廣闊的應(yīng)用前景。
[0004] 隨著吡噻菌胺的登記、推廣和使用，作為我國主要出口市場(chǎng)的歐盟、加拿大和澳大 利亞等國家制定了其在蔬菜、水果、糧谷和畜產(chǎn)品等食品農(nóng)產(chǎn)品中的最大允許殘留量 (MRL)，加拿大規(guī)定吡噻菌胺在果蔬、堅(jiān)果、糧谷及畜產(chǎn)品等動(dòng)物源性食品中的MRL為0.01~ 30mg/kg;澳大利亞規(guī)定吡噻菌胺在果蔬、堅(jiān)果、糧谷及畜產(chǎn)品等動(dòng)物源性食品中的MRL為 0.01~5mg/kg;歐盟規(guī)定吡噻菌胺在果蔬、堅(jiān)果、糧谷及畜產(chǎn)品等動(dòng)物源性食品中的MRL為 0.01~30mg/kg;歐盟、日本等國家規(guī)定若田間使用農(nóng)藥沒有在該國家登記，沒有制定相應(yīng) 的殘留限量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，出口至其國家的食品農(nóng)產(chǎn)品包括畜禽肉等動(dòng)物源性食品中殘留限量均 實(shí)行0.01mg/L的"一律標(biāo)準(zhǔn)"。
[0005] 現(xiàn)階段，對(duì)吡噻菌胺殘留量測(cè)定方法的研究較少，報(bào)道的檢測(cè)方法主要為蔬菜和 水果中吡噻菌胺殘留檢測(cè)方法，這些檢測(cè)方法均采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)測(cè)定蔬 菜和水果中吡噻菌胺殘留量的檢測(cè)方法，使用LC-MS/MS測(cè)定食品農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留具有快 速、簡便、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，但由于其價(jià)格較昂貴，很多檢測(cè)機(jī)構(gòu)、企業(yè)或科研院所未配置該 儀器或配置臺(tái)數(shù)較少，由于不同的化合物采用LC-MS/MS檢測(cè)時(shí)，需使用不同的流動(dòng)相或色 譜柱，這樣需要不斷更換色譜柱、流動(dòng)相并耗費(fèi)比較長的時(shí)間對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行平衡，這一定程度 上制約了 LC-MS/MS的應(yīng)用。使用氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)分析食品農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留 具有快速、簡便、靈敏度高、選擇性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，可實(shí)現(xiàn)幾百種農(nóng)藥的多殘留分析，但迄今為止 未見食品農(nóng)產(chǎn)品中吡噻菌胺殘留量的GC-MS/MS檢測(cè)方法的報(bào)道，但迄今為止未見食品農(nóng)產(chǎn) 品中吡噻菌胺殘留量的GC-MS/MS檢測(cè)方法的報(bào)道。另外，眾所周知，QuEChERS前處理技術(shù)已 成為農(nóng)藥殘留分析中應(yīng)用最廣的樣品前處理方法，但QuEChERS方法主要適用于低脂肪含量 的高含水基質(zhì)，如大部分的水果蔬菜，在面對(duì)高脂肪含量基質(zhì)時(shí)能力有限，一般需要增加正 己烷除脂、冷凍樣品提取液去脂等步驟，但效果有限。近年來有些公司推出了增強(qiáng)型脂質(zhì)去 除專利產(chǎn)品-Enhanced Matrix Removal，EMR-lipid，主要用于去除具有直鏈經(jīng)類結(jié)構(gòu)的脂 類干擾物，包括游離脂肪酸、膽固醇、甘油三酯、磷脂等。該產(chǎn)品已被制成基質(zhì)固相分散萃取 劑，經(jīng)水活化后可直接通過分散固相萃取流程對(duì)提取液中的脂類雜質(zhì)進(jìn)行去除，本發(fā)明應(yīng) 用該前處理方法凈化動(dòng)物源性食品時(shí)發(fā)現(xiàn)，該方法簡單高效、對(duì)脂類物質(zhì)去除效果好，建立 EMR基質(zhì)分散凈化、氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)定性和定量分析動(dòng)物源性食品中吡噻菌 胺殘留量的檢測(cè)方法具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種吡噻菌胺殘留量的GC-MS/MS快速測(cè)定方法，主要用于測(cè) 定動(dòng)物源性食品等脂肪含量尚的食品農(nóng)廣品中啦_菌胺殘留量。
[0007] 為實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：一種吡噻菌胺殘留量的GC-MS/MS 快速測(cè)定方法，包括如下步驟：
[0008] (1)提取 稱取混勻樣品于具塞離心管中，加入適量水復(fù)蘇后，定量加入乙腈溶液均質(zhì)提取，然后 加入氯化鈉和無水硫酸鎂，劇烈渦旋lmin后離心。
[0009] 凈化 將增強(qiáng)型脂質(zhì)去除產(chǎn)品EMR用水活化，移取樣品提取液于活化好的EMR凈化管中，禍旋 lmin后，7000r/min離心5min，轉(zhuǎn)移全部上清液至裝有無水硫酸鎂和氯化鈉的離心管中進(jìn)行 鹽析，渦旋離心后，移取一定體積的上清液，濃縮至干后，用體積比為1/1的丙酮/正己烷混 合溶劑溶解定容，過膜后，待氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)檢測(cè)。
[0010] (3)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制 將不含吡噻菌胺的同種類基質(zhì)空白樣品按上述步驟（1)、（2)處理，得樣品提取凈化殘 渣，加入適量溶劑和標(biāo)準(zhǔn)溶液，渦旋混勻，配制成至少3個(gè)濃度的吡噻菌胺系列標(biāo)準(zhǔn)工作液。 [0011] (4)測(cè)定和結(jié)果計(jì)算 將步驟(3)中的各濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行GC-MS/MS測(cè)定，以標(biāo)準(zhǔn)工作液的色譜峰 面積對(duì)其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線;在相同條件下將步驟(2)中凈化 后的樣品液注入GC-MS/MS進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得樣品液中吡噻菌胺的色譜峰面積，代入基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn) 工作曲線，得到樣品液中吡噻菌胺含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質(zhì)量計(jì)算得到樣品 中吡噻菌胺殘留量;若上機(jī)溶液中吡噻菌胺殘留量超過線性范圍上限，需用定容溶劑將上 機(jī)溶液濃度稀釋至線性范圍之內(nèi)。
[0012]步驟(1)中樣品若為動(dòng)物肝臟等含水量較少的樣品，提取前須加適量水充分浸潤。
[0013] 步驟(4)中氣相色譜條件為:色譜柱:HP-5MS毛細(xì)管色譜柱，柱長30m，內(nèi)徑0.25mm， 膜厚Ο . 25μπι;進(jìn)樣口溫度250°C ;載氣：He，不分流模式進(jìn)樣，進(jìn)樣量：lyL;恒流模式，流速 1.2mL/min;升溫程序:初溫60°C保持2min，以每分鐘20°C的速度升至200°C，然后以每分鐘2 °C的速度升至220°C，再以每分鐘20°C的速度升至280°C，保持lOmin;傳輸線溫度:290°C。 [0014]步驟(4)中質(zhì)譜條件為：電離模式：電子轟擊電離(EI，70eV);離子源溫度280°C;碰 撞氣:氬氣;多反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描方式MRM，監(jiān)測(cè)參數(shù)為：
[0015] 步驟(4)中測(cè)定樣液和基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液時(shí)，若樣液中農(nóng)藥色譜峰保留時(shí)間與標(biāo) 準(zhǔn)溶液中相應(yīng)農(nóng)藥保留時(shí)間相一致，并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中，所選擇的離子均 出現(xiàn)，而且離子豐度比與標(biāo)準(zhǔn)溶液的離子豐度比相一致，則可判斷樣液中存在這種農(nóng)藥;若 上述兩個(gè)條件不能同時(shí)滿足，則判斷不含該種農(nóng)藥。
[0016] 本發(fā)明的有益效果在于：
[0017] 本發(fā)明利用分散固相萃取技術(shù)，建立了簡便、快速并能有效避免樣品中基質(zhì)干擾 的樣品前處理方法，將此前處理方法結(jié)合GC-MS/MS應(yīng)用于糧谷、動(dòng)物源性食品中吡噻菌胺 定性確證和定量檢測(cè)，平均回收率為96.7%~100.7%，平均相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為5.0%~ 6.1%，檢出限低于0.085yg/kg，具有操作簡便、快速、準(zhǔn)確、靈敏度高及重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)。能 滿足美國、歐盟、日本等國家對(duì)相應(yīng)產(chǎn)品安全檢測(cè)的技術(shù)要求，為保障我國人民食品安全及 對(duì)外出口貿(mào)易健康發(fā)展提供有力的技術(shù)支撐。
【附圖說明】
[0018] 圖1為添加在空白豬肉基質(zhì)中的吡噻菌胺標(biāo)液的GC-MS/MS選擇離子色譜圖。
[0019] 圖2為不含吡噻菌胺的豬肉空白樣品的GC-MS/MS選擇離子色譜圖。
[0020] 圖3為以不含吡噻菌胺的豬肉空白樣品為基質(zhì)配制的吡噻菌胺標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。
【具體實(shí)施方式】
[0021] 現(xiàn)以以下實(shí)施實(shí)例來說明本發(fā)明，但并不是限制本發(fā)明的范圍。
[0022] 實(shí)施例中使用的儀器與試劑 T18Basic均質(zhì)器（IKA，Germany) ;CR21GHI離心機(jī)（日立，Japan) ;MS3基本型旋禍混合器 (IKA，Germany) ;TurboVap LV型樣品自