一種吡噻菌胺殘留量的gc-ei-ms測定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種吡噻菌胺殘留量的GC-EI-MS測定方法，更具體地說是采用氣相色 譜-電子轟擊離子源-質(zhì)譜(GC-EI-MS)定性定量測定糧谷、豬肉、牛肉、羊肉、雞肉等動物肌 肉及制品等復(fù)雜基質(zhì)的動植物源性食品中殘留的吡噻菌胺含量的方法，屬于農(nóng)藥殘留量的 測定技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]吡噻菌胺(Penthiopyrad)是日本三井化學(xué)公司研發(fā)的新穎酰胺類殺菌劑，英文通 用名為 penthiopyrad，試驗(yàn)代號：MTF-753，商品名為 Afetofluapro XAS 登錄號：183675-82-3,化學(xué)名稱為(RS)-N-[2-(l，3-二甲基丁基)-3-噻吩基]-甲基-3-(三氟甲基)-1Η-吡唑-4-甲酰胺，化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：
[0003] 吡噻菌胺與現(xiàn)有的羧酰胺類殺菌劑有不同的殺菌譜，除了與現(xiàn)有羧酰胺類殺菌劑 一樣對擔(dān)子菌有效外，其對子囊菌、不完全菌亦有效，現(xiàn)被推薦用于防治對其他殺菌劑具抗 性的灰霉病和白粉病。該藥劑通常使用的有效成分劑量為100~200g/hm 2,其被廣泛應(yīng)用于 果樹、蔬菜、草坪等眾多作物，防治銹病、菌核病、灰霉病、霜霉病、蘋果黑星病和白粉病。 Penthiopyrad于2008年在日本獲得首次批準(zhǔn)，用于果樹、蔬菜和觀賞植物，后又于2011年11 月在加拿大獲準(zhǔn)登記。商標(biāo)名為Vertisan和Fontelis(均以penthiopyrad 200g/L為其活性 成分）和Treoris (penthiopyrad 100g/L+chlorothalonil (百菌清）250g/L)的3個(gè)產(chǎn)品主要 用在果樹、蔬菜和田間作物上，在實(shí)際應(yīng)用發(fā)現(xiàn)吡噻菌胺具有很廣闊的應(yīng)用前景。
[0004] 隨著吡噻菌胺的登記、推廣和使用，作為我國主要出口市場的歐盟、加拿大和澳大 利亞等國家制定了其在蔬菜、水果、糧谷和畜產(chǎn)品等食品農(nóng)產(chǎn)品中的最大允許殘留量 (MRL)，加拿大規(guī)定吡噻菌胺在果蔬、堅(jiān)果、糧谷及畜產(chǎn)品等動物源性食品中的MRL為0.01~ 30mg/kg;澳大利亞規(guī)定吡噻菌胺在果蔬、堅(jiān)果、糧谷及畜產(chǎn)品等動物源性食品中的MRL為 0.01~5mg/kg;歐盟規(guī)定吡噻菌胺在果蔬、堅(jiān)果、糧谷及畜產(chǎn)品等動物源性食品中的MRL為 0.01~30mg/kg;歐盟、日本等國家規(guī)定若田間使用農(nóng)藥沒有在該國家登記，沒有制定相應(yīng) 的殘留限量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，出口至其國家的食品農(nóng)產(chǎn)品包括畜禽肉等動物源性食品中殘留限量均 實(shí)行0.01mg/L的"一律標(biāo)準(zhǔn)"。
[0005] 現(xiàn)階段，對吡噻菌胺殘留量測定方法的研究較少，報(bào)道的檢測方法主要為蔬菜和 水果中吡噻菌胺殘留檢測方法，這些檢測方法均采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)測定蔬 菜和水果中吡噻菌胺殘留量的檢測方法，使用LC-MS/MS測定食品農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留具有快 速、簡便、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，但由于其價(jià)格較昂貴，很多檢測機(jī)構(gòu)、企業(yè)或科研院所未配置該 儀器或配置臺數(shù)較少，由于不同的化合物采用LC-MS/MS檢測時(shí)，需使用不同的流動相或色 譜柱，這樣需要不斷更換色譜柱、流動相并耗費(fèi)比較長的時(shí)間對系統(tǒng)進(jìn)行平衡，這一定程度 上制約了 LC-MS/MS的應(yīng)用。配備電子轟擊電離源的氣相色譜質(zhì)譜(GC-EI -MS)分析食品農(nóng)產(chǎn) 品中農(nóng)藥殘留具有很大優(yōu)勢，由于電子轟擊電離源質(zhì)譜為通用性檢測器，可實(shí)現(xiàn)幾百種農(nóng) 藥的多殘留分析，可同時(shí)定性和定量，價(jià)格適中，因此現(xiàn)各種檢測機(jī)構(gòu)和企業(yè)均配備氣相色 譜-電子轟擊離子源-質(zhì)譜儀(GC-EI-MS)對食品農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測，但迄今為止 未見食品農(nóng)產(chǎn)品中吡噻菌胺殘留量的GC-EI-MS檢測方法的報(bào)道，吡噻菌胺屬電負(fù)性化合 物，由于糧谷、動物源性食品等食品農(nóng)產(chǎn)品基質(zhì)比較復(fù)雜，須建立凈化效果良好的樣品前處 理方法和儀器分析條件才能滿足檢測要求，因此，建立氣相色譜-電子轟擊離子源-質(zhì)譜 (GC-EI-MS)定性和定量分析糧谷和動物源性食品中吡噻菌胺殘留量的檢測方法具有重要 意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種吡噻菌胺殘留量的GC-EI-MS測定方法，主要用于測定糧 谷、動物源性食品等復(fù)雜基質(zhì)食品農(nóng)產(chǎn)品中吡噻菌胺殘留量。
[0007] 為實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:一種吡噻菌胺殘留量的GC-EI-MS 測定方法，包括如下步驟：
[0008] (1)提取 稱取混勻樣品于具塞離心管中，加入適量水復(fù)蘇后，定量加入乙腈或含1 %乙酸的乙腈 溶液均質(zhì)或振蕩超聲提取，然后加入氯化鈉或乙酸鈉中的一種和無水硫酸鎂，劇烈渦旋 lmin后離心。
[0009] (2)凈化 移取一定體積樣品提取液，濃縮至lmL左右，經(jīng)C18/PSA固相萃取柱凈化，乙腈洗脫，收 集洗脫液，濃縮至干后，用體積比為1/1的丙酮/正己烷混合溶劑溶解定容，過膜后，待氣相 色譜-電子轟擊離子源-質(zhì)譜(GC-EI-MS)檢測。
[0010] (3)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制 將不含吡噻菌胺的同種類基質(zhì)空白樣品按上述步驟（1)、（2)處理時(shí)，得樣品提取凈化 殘?jiān)?，加入適量溶劑和標(biāo)準(zhǔn)溶液，渦旋混勻，配制成至少3個(gè)濃度的吡噻菌胺系列標(biāo)準(zhǔn)工作 液。
[0011] (4)氣相色譜-電子轟擊離子源-質(zhì)譜法(GC-EI-MS)測定 將步驟(3)中的各濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行GC-EI-MS測定，以標(biāo)準(zhǔn)工作液的色譜峰 面積對其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到標(biāo)準(zhǔn)工作曲線;在相同條件下將步驟(2)中凈化后的 樣品液注入GC-EI-MS進(jìn)行測定，測得樣品液中吡噻菌胺的色譜峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn)工作曲線， 得到樣品液中吡噻菌胺含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質(zhì)量計(jì)算得到樣品中吡噻菌胺 殘留量。若上機(jī)溶液中吡噻菌胺殘留量超過線性范圍上限，需用定容溶劑將上機(jī)溶液濃度 稀釋至線性范圍之內(nèi)。
[0012] 步驟（1)中樣品若為糧谷及動物肝臟等含水量較少的樣品，提取前須加適量水充 分浸潤。
[0013] 步驟（1)中采用乙腈提取時(shí)加入氯化鈉鹽析，采用含1%乙酸的乙腈溶液提取時(shí)加 入乙酸鈉鹽析。
[0014] 步驟(2)中進(jìn)行C18/PSA固相萃取凈化，乙腈洗脫時(shí)，洗脫體積為6~8mL。
[0015] 步驟(4)中氣相色譜條件為:色譜柱:HP-5MS毛細(xì)管色譜柱，柱長30m，內(nèi)徑0.25mm， 膜厚0.25μπι;進(jìn)樣口溫度250°C ;載氣：He，不分流模式進(jìn)樣，進(jìn)樣量：lyL;恒流模式，流速 1. OmL/min;升溫程序:初溫60°C保持2min，以每分鐘20°C的速度升至200°C，然后以每分鐘2 °C的速度升至220°C，再以每分鐘20°C的速度升至280°C，保持lOmin;傳輸線溫度:280°C。
[0016] 步驟(4)中質(zhì)譜條件為:離子源溫度150°C;四極桿溫度150°C;電離模式：電子轟擊 電離，即EI模式，能量70eV;掃描方式：選擇離子監(jiān)測（SIM)模式，監(jiān)測的離子為：302.1、 177.0、359.1、166.1。
[0017]步驟(4)中測定樣液和基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液時(shí)，若樣液中農(nóng)藥色譜峰保留時(shí)間與標(biāo) 準(zhǔn)溶液中相應(yīng)農(nóng)藥保留時(shí)間相一致，并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中，所選擇的離子均 出現(xiàn)，而且離子豐度比與標(biāo)準(zhǔn)溶液的離子豐度比相一致，則可判斷樣液中存在這種農(nóng)藥;若 上述兩個(gè)條件不能同時(shí)滿足，則判斷不含該種農(nóng)藥。
[0018] 本發(fā)明的有益效果在于：
[0019] 本發(fā)明利用分散固相萃取技術(shù)，建立了簡便、快速并能有效避免樣品中基質(zhì)干擾 的樣品前處理方法，將此前處理方法結(jié)合GC-EI-MS應(yīng)用于糧谷、動物源性食品中吡噻菌胺 定性確證和定量檢測，平均回收率為86.9 %~93.5 %，平均相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為4.5 %~ 7.0%，檢出限低于1.68yg/kg，具有操作簡便、快速、準(zhǔn)確、靈敏度高及重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)。能 滿足美國、歐盟、日本等國家對相應(yīng)產(chǎn)品安全檢測的技術(shù)要求，為保障我國人民食品安全及 對外出口貿(mào)易健康發(fā)展提供有力的技術(shù)支撐。
【附圖說明】
[0020] 圖1為添加在空白豬肉基質(zhì)中的吡噻菌胺的GC-EI-MS選擇離子色譜圖。
[0021] 圖2為不含吡噻菌胺的豬肉空白樣品的GC-EI-MS選擇離子色譜圖。
[0022] 圖3為以不含吡噻菌胺的豬肉空白樣品為基質(zhì)配制的吡噻菌胺標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。
【具體實(shí)施方式】
[0023]現(xiàn)以以下實(shí)施實(shí)例來說明本發(fā)明，但并不是限制本發(fā)明的范圍。
[0024]實(shí)施例中使用的儀器與試劑
[0025] T18 Basic均質(zhì)器（IKA，Germany) ;CR21GHI離心機(jī)（日立，Japan) ;MS3基本型旋禍 混合器（IKA，Germany) ;TurboVap LV型樣品自動濃縮儀（Caliper，USA) ;7890N氣相色譜-5977C質(zhì)譜儀(Agilent，USA);C18/PSA固相萃取柱(6mL，500mg/500mg)購于天津博納艾杰爾 科技有限公司。
[0026] 試劑
[0027] 乙腈、丙酮、正己燒（HPLC級，Merke，Germany);乙酸（HPLC級，CNW，Germany);無水 硫酸鎂、氯化鈉和乙酸鈉為分析純，均購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。
[0028] 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度99.5%，購自德國Dr.Ehrenstorfer公司。
[0029] 實(shí)施例1:小麥中吡噻菌胺殘留量的檢測
[0030] (1)樣品前處理
[0031] 提取 稱取經(jīng)充分混勾的5g小麥樣品（研磨成面粉)于50mL離心管中，加入20mL水復(fù)蘇30min 后，準(zhǔn)確加入20mL含1 %乙酸的乙腈溶液，振蕩提取20min，超聲提取5min，加入3g無水硫酸 鎂和2g乙酸鈉，禍旋lmin后，7000r/min離心5min。離心后，取8mL乙腈提取液于40°C旋蒸或 氮?dú)獯抵两桑尤雔mL乙腈渦旋后，待凈化。
[0032] 凈化 用5mL乙腈預(yù)洗C18/PSA固相萃取柱，當(dāng)液面到達(dá)吸附劑的頂部時(shí)，將上述提取溶液轉(zhuǎn) 入柱中，用2mL乙腈洗滌試管，并將洗滌液移入SPE柱中，待溶液達(dá)到吸附劑頂部時(shí)，加入4mL 乙腈至柱子上進(jìn)行洗脫，洗脫液全部接收到定量試管中，氮?dú)獯蹈珊笥皿w積比為1/1的丙 酮/正己烷混合溶劑定容至lmL，過0.22μπι濾膜后，待GC-EI-MS測定。
[0033] (2)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制 準(zhǔn)確稱取25 ± 0. lmg標(biāo)準(zhǔn)品于25mL容量瓶中，用乙腈溶解，定容得1000.0 yg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲 備液;移取l.OmL標(biāo)準(zhǔn)儲備液置于100mL容量瓶中，用用體積比為1/1的丙酮/正己烷混合溶 劑定容得到10.〇yg/m