專利名稱：：正十五烷基和rgd肽構(gòu)建的綴合物、它們的合成及在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及靶向陽離子藥質(zhì)體，尤其涉及正十五烷基鏈通過羰基、甲氨基及甲氧基與RGD肽的羧端或氨端綴合而得的靶向陽離子藥質(zhì)體，本發(fā)明還涉及該藥質(zhì)體的制備方法以及該藥質(zhì)體作為抗血栓劑、藥物載體或藥物靶向制劑材料的應(yīng)用，屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域。在未來的5年到10年基因治療會(huì)有可把基因傳送至細(xì)胞的理想載體。從生物制劑的立場(chǎng)看，基因轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)就是藥物釋放系統(tǒng)(DDS)。有多種化學(xué)合成的小分子構(gòu)建的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)受到關(guān)注,其中陽離子脂質(zhì)構(gòu)成的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)是關(guān)注熱點(diǎn)。陽離子脂質(zhì)在藥學(xué)領(lǐng)域遍用于構(gòu)建脂質(zhì)體運(yùn)載小分子(包括多肽)藥物。與在DDS中一樣，在基因轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)中陽離子脂質(zhì)體有明顯好處，例如可通過電荷吸附與DNA形成復(fù)合物并有效避免被細(xì)胞內(nèi)溶酶體降解、可將DNA高效導(dǎo)入細(xì)胞、對(duì)DNA的尺寸沒有限制、操作簡(jiǎn)便等。陽離子脂質(zhì)的基本構(gòu)造如下包括高級(jí)脂肪鏈構(gòu)成的疏水臂和親水的陽離子頭。細(xì)胞黏附在細(xì)胞黏附性疾病(癌轉(zhuǎn)移、血栓形成、化學(xué)致炎和骨質(zhì)疏松)的發(fā)展過程中起關(guān)鍵作用。調(diào)節(jié)性糖蛋白例如RGD肽與整合素受體有很強(qiáng)的結(jié)合能力，可參與細(xì)胞黏附過程。例如RGD肽與血小板、腫瘤細(xì)胞及骨基表面的GPIIb/IIIa受體特異性結(jié)合可干預(yù)血栓、癌轉(zhuǎn)移和骨質(zhì)疏松的發(fā)展過程。RGD肽的這種作用賦予了含RGD序列
背景技術(shù)：
陽離子脂質(zhì)的基木構(gòu)造的化合物一種重要性質(zhì)，即含RGD序列的化合物可以向血栓、癌轉(zhuǎn)移和骨質(zhì)疏松的患病部位富集。在這樣一個(gè)前提下，把RGD肽與高級(jí)脂肪鏈綴合，便可以獲得耙向藥質(zhì)體。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的之一是提供一類靶向陽離子藥質(zhì)體。這類靶向陽離子藥質(zhì)體，為通式CH3(CH2)14R,所示，其中R,選自CORGDS、CORGDV、CORGDF、RGDSOCH2、RGDVOCH2、RGDFOCH2、RGDSNHCH2、RGDVNHCH2或RGDFNHCH2;其中所述的R為精氨酸(Arg)的縮寫，G為甘氨酸(Gly)的縮寫，D為天冬氨酸(Asp)的縮寫，V為纈氨酸(Val)的縮寫，F(xiàn)為苯丙氨酸(Phe)的縮寫，S為絲氨酸(Ser)的縮寫。本發(fā)明結(jié)合了下述認(rèn)識(shí)或依據(jù)完成了上述技術(shù)方案。把基因傳送至細(xì)胞的理想載體(基因轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng))是基因治療的關(guān)鍵任務(wù)之一；從生物制劑的立場(chǎng)看基因轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)與藥物釋放系統(tǒng)(DDS)具有等同性；雖然有多種化學(xué)合成的小分子構(gòu)建的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)都受到關(guān)注但是陽離子脂質(zhì)構(gòu)成的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)應(yīng)格外給予關(guān)注；陽離子脂質(zhì)體可通過電荷吸附與DNA形成復(fù)合物并有效避免被細(xì)胞內(nèi)溶酶體降解；陽離子脂質(zhì)體可將DNA高效導(dǎo)入細(xì)胞、陽離子脂質(zhì)體對(duì)DNA的尺寸沒有限制；血小板、炎癥組織、癌細(xì)胞和骨基質(zhì)表明富含可識(shí)別RGD序列的細(xì)胞黏附受體，含RGD序列的化合物可以向血栓、炎癥、癌轉(zhuǎn)移和骨質(zhì)疏松的患病部位富集。本發(fā)明人基于上述認(rèn)識(shí)，把正十五烷基鏈通過羰基、甲氨基及甲氧基與RGD肽的羧端或氨端綴合，使制得的分子獲得四種性能，即依賴于正十五烷基鏈的疏水性、依賴于RGD肽的胍基和&氨基質(zhì)子化形成的陽離子性質(zhì)和親水性和依賴于RGD肽對(duì)GPIIb/nia受體特異親和作用獲得的靶向性。這樣一來，把RGD肽與正十五烷基鏈綴合制得的分子便成為靶向陽離子藥質(zhì)體。本發(fā)明的目的之一是提供一種制備通式CH3(CH2)14R,化合物的方法，其中R,選自-CORGDS、-CORGDV、-CORGDF、RGDSOCH2-、RGDVOCH2-、RGDFOCH2-、RGDSNHCH2-、RGDVNHCH2-&XRGDFNHCH2-。本發(fā)明的目的之一是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的(1)按照現(xiàn)有液相接肽技術(shù)分別合成RGDS、RGDV禾IRGDF;(2)將CH3(CH2)14COOH、CH3(CH2)14CH2OH和CH3(CH2)14CH2NH2分別與保護(hù)基保護(hù)的RGDS、RGDV和RGDF偶聯(lián)，脫去保護(hù)基，即得。在大鼠血栓形成模型上的評(píng)價(jià)表明，本發(fā)明靶向陽離子藥質(zhì)體具有優(yōu)秀的口服抗血栓活性，可作為抗血栓劑應(yīng)用；在水相和生物相檢測(cè)了這9種耙向陽離子藥質(zhì)體自組裝成為納米顆粒的性能，試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明靶向陽離子藥質(zhì)體具有優(yōu)秀的自組裝性能，可作為制備微乳、脂質(zhì)體等的制劑材料；因?yàn)檫@9種耙向陽離子藥質(zhì)體的口服抗血栓活性來自RGD肽對(duì)GPIIb,/IIIa受體特異親和作用，所以這種抗血栓活性又表征了9種靶向陽離子藥質(zhì)體的耙向性，所以本發(fā)明耙向陽離子藥質(zhì)體可作為耙向制劑材料。圖1RGD肽與高級(jí)脂肪鏈綴合制備靶向陽離子藥質(zhì)體的合成路線.I)DCC、HOBt、NMM禾tlHClGlyOMe;II)NaOH水溶液(2N);III)DCC、HOBt、NMM禾卩HClSer-OBzl或HCl'Val-OBzl或HCl'Phe-OBzl;IV)氯化氫/乙酸乙酯溶液(4N);V)DCC、HOBt、NMM;VI)5X鈀碳和氫氣(0.02Mba).其中AA=Phe，Val，Ser。圖2本發(fā)明化合物在水相組裝的納米球的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果。圖3本發(fā)明化合物在水相組裝的納米球的掃描電鏡圖。圖4本發(fā)明化合物在脂相組裝的納米球的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果。圖5本發(fā)明化合物在脂相組裝的納米球的掃描電鏡圖。為了進(jìn)一步闡述本發(fā)明，下面給出一系列實(shí)施例。這些實(shí)施例完全是例證性的，它們僅用來對(duì)本發(fā)明進(jìn)行具體描述，不應(yīng)當(dāng)理解為對(duì)本發(fā)明的限制。具體實(shí)施方式實(shí)施例1RGDS的制備l)Boc-Arg(N02)-Gly-OMe的制備將1.600g(5.0mmol)Boc-Arg(N()2)-OH溶于20ml無水DMF，冰浴F往得到的溶液中加入0.675g(5mmol)N-羥基苯并三氮唑(HOBt)，并使完全溶解。10分鐘后加入1.071g(6mmo1)二環(huán)己基羰二亞胺(DCC)。得到反應(yīng)液(1)，待用。冰浴下把0.627g(5.0mmol)HClGly-OMe(5mmol)懸浮于20ml無水DMF中，然后加入lmlN-甲基嗎啉(NMM)，調(diào)pH8-9。攪拌35分鐘，得到反應(yīng)液(11)，待用。冰浴下把反應(yīng)液(I)加入反應(yīng)液(n)中，先冰浴下攪拌lh，再室溫?cái)嚢?2h，TLC(氯仿/甲醇，10:1)顯示Boc-Arg(N02)-OH消失。濾除二環(huán)己基脲(DCU)，濾液吹去DMF。殘留物用50ml氯仿溶解。得到的溶液依次用飽和NaHC03水溶液洗、飽和NaCl水溶液洗、5%KHS04水溶液洗和飽和NaCl水溶液洗。氯仿層用無水Na2S04干燥、過濾、濾液減壓濃縮至干，得到3.80g(100%)標(biāo)題化合物，為米黃色固體。ESI-MS(m/z):392[M]+，[a]D20=-18.5657(c=l,CH3OH)。2)Boc-Arg(N02)-Gly-OH的制備將0.392g(1.0mmol)Boc-Arg(NO2)-Gly-OMe溶于10ml甲醇。冰浴下將得到的溶液用NaOH(2N)水溶液調(diào)pH12并攪拌2h,TLC(氯仿/甲醇，1:1)顯示Boc-Arg(N02)-Gly-OMe消失。反應(yīng)混合物用稀鹽酸(2N)調(diào)pH7，減壓濃縮除甲醇。殘留物用稀鹽酸(2N)調(diào)pH2、用乙酸乙酯萃取(30mlx3)。合并的乙酸乙酯相用飽和NaCl水溶液洗至中性，無水Na2S04干燥。過濾，濾液減壓濃縮至干，得0.339g(90%)標(biāo)題化合物，為米黃色固體。MS:375.3[M]-，[a]D20=-2.1644(c=l,CH3OH)3)Boc-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl的制備按照Boc-Arg(N02)-Gly-OMe的制備方法由1.620g(5.0mmol)Boc-Asp(OBzl)-OH和1.6075g(5.0mmol)TosSer(Bzl)-OBzl得2.655(99%)標(biāo)題化合物，為米黃色固體。ESI-MS(m/z):591.4[M]+，[a]D20=-13.2108(c=l，CH3OH)4)HC1.Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl的制備將0.780g(1.491mmo1)Boc-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl溶解在15ml4mol/l氯化氫-乙酸乙酯溶液中，室溫?cái)嚢?小時(shí)，TLC(氯仿/甲醇，3/1)顯示原料點(diǎn)消失，減壓濃縮除去乙酸乙酯，殘留物反復(fù)加少量乙醚進(jìn)行減壓濃縮以除去氯化氫氣。最后加少量乙醚將殘留物研磨成0.570g(95.98%)標(biāo)題化合物，為固體粉末，直接用于下一步反應(yīng)。ESI-MS(m/z):491.3[M]+,[a]D2。=-55.4369(c=1.0，CH3OH)。5)Boc-Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl的制備按照Boc-Arg(N02)-Gly-OMe的制備方法由0.83lg(3.0mmo1)Boc-Arg(N02)-Gly-OH和1.5795g(3.0mmol)HCl.Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl得2.165g(85%)標(biāo)題化合物，為米黃色固體。ESI-MS(m/z):850[M]+，[a]D20=-16.3729(c=1.0,CHC13)6)HCl.Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl的制備按照HCl.Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl的制備方法，從0.849g(1.0mmo1)Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl制得0.712g(95%)標(biāo)題化合物，為米黃色固體。ESI-MS(m/z):750.1[M]+，[a]D20=-58.3196(c=1.0，CH3OH)。7)RGDS的制備將0.750g(lmmol)HClArg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl置于50ml茄形瓶中、用乙醇溶解、加200mgPd/C(5%)、通H2(0.02Mba)，室溫?cái)嚢柚猎宵c(diǎn)消失。濾除Pd/C、濾液減壓濃縮至干，殘留物反復(fù)用石油醚研磨，得0.389g(90%)標(biāo)題化合物，為無色固體粉末。ESI-MS(m/z):434.4[M]+，[a]2QD=6.0(c=1.0，H20).實(shí)施例2RGDV的制備1)Boc-Asp(OBzl)-Val-OBzl的制備按照Boc-Arg(N02)-Gly-OMe的制備方法由1.620g(5.0mmol)Boc-Asp(OBzl)-OH和1.895g(5.0mmol)TosVal-OBzl得2.5344g(99%)標(biāo)題化合物，為米黃色固體。ESI-MS(m/z):513.3[M]+，[a]D20=—14.2710(c=l，CH3OH)2)HC1.Asp(OBzl)-Val-OBzl的制備按照HClAsp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl的制備方法，從0.763g(1.491腿o1)Boc-Asp(OBzl)-Val-OBzl得0.662g(99%)標(biāo)題化合物，為固體粉末，直接用于下一步反應(yīng)。ESI隱MS(m/z):413.4[M]+，[a]D20=—47.8027(c=l,CH3OH)3)Boc-Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl的制備按照Boc-Arg(N02)-Gly-OMe的制備方法由0.831g(3.0mmol)Boc-Arg(NO2)-Gly-OH和1.3455g(3.0mmol)HClAsp(OBzl)-Val-OBzl得2.08(90%)標(biāo)題化合物，為米黃色固體。ESI-MS(m/z):771.6[M]+,[a]D20=—30.9346(c=l,CH3OH)4)HCl'Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl的制備按照HClAsp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl的帝[|備方法，從0.771g(l,0mmo1)Boc-Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl制得0.637g(95%)標(biāo)題化合物，為米黃色固體。ESI-MS(m/z):672.1[M〗+，[a]D20=—50.8685(c=l，CH3OH)5)RGDV的制備按照RGDS的制備方法，從0.672g(lmmol)HClArg(N02)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl得0.382g(85%)標(biāo)題化合物，為無色固體粉末。ESI-MS(m/z):446.4[M〗+，[a]2C)D=3.0(c=1.0，H20)。實(shí)施例3RGDF的制備1)Boc-Asp(OBzl)-Phe-OBzl的制備按照Boc-Arg(N02)-Gly-OMe的制備方法由1.620g(5.0mmol)Boc-Asp(OBzl)-OH和2.135g(5.0mmol)Tos'Phe-OBzl得2.77g(99%)標(biāo)題化合物，為米黃色固體。ESI-MS(m/z):561.4[M]+，[a]D20=—15.2842(c=l，CH3OH)2)HC1.Asp(OBzl)-Phe墨OBzl的制備按照HClAsp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl的制備方法，從0.835g(1.491mmo1)Boc-Asp(OBzl)-Phe-OBzl得0.703g(95%)標(biāo)題化合物，為固體粉末，直接用于下一步反應(yīng)。ESI-MS(m/z):461.3[M]+,[a]D2。=—44.8753(c=l，CH3OH)。3)Boc-Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl的制備按照Boc-Arg(N02)-Gly-OMe的制備方法由0.831g(3.0mmol)Boc-Arg(NO2)-Gly-OH和1.4895g(3.0mmol)HCl.Asp(OBzl)-Phe-OBzl得2.16g(88%)標(biāo)題化合物，為米黃色固體。ESI-MS(m/z):819.5[M]+，[a]D20=—20.3583(c=l，CH3OH).4)HClArg(N02)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl的制備按照HClAsp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl的制備方法，從0.819g(1.0mmo1)Boc-Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl制得0.717g(95%)標(biāo)題化合物，為米黃色固體。ESI-MS(m/z):719.4[M〗+，[a]D20=—10.6121(c=l，CH3OH).5)RGDF的制備按照RGDS的制備方法，從0.719g(lmmol)HC1Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-Obzl得0.443g(90%)標(biāo)題化合物，為無色固體粉末。ESI-MS(m/z):494.5[M]+，[a]2QD=4.0(c=2.0，H20).實(shí)施例4CH3(CH2)14CORGDS的制備1)CH3(CH2)14CO-Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl的制備按照Boc-Arg(N02)-Gly-OMe的制備方法由1.28g(5.0mmol)CH3(CH2)14CO2H和3.9275g(5.0mmol)HCl.Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl制得4.23g(85.7X)標(biāo)題化合物,為黃色蠟狀固體。ESI-MS(m/z):987.1[M]+，[a]D20=2.3987(c=l，CH3OH)2)CH3(CH2)14CO-Arg-Gly-Asp-Ser-OH的制備按照RGDS的制備方法由0.987g(lmmol)CH3(CH2)14CO-Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl制得0.46g(60^)標(biāo)題化合物，為黃色蠟狀固體。ESI-MS(m/z):672.1[M]+，[a]D20=—5.0968(c=l,CH3OH)實(shí)施例5CH3(CH2)14CORGDV的制備1)CH3(CH2)14CO-Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl的制備按照Boc-Arg(N02)-Gly-OMe的制備方法由1.28g(5.0mmol)CH3(CH2)14CO2H和3.53g(5.0mmol)HCl.Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl制得3.86g(85X)標(biāo)題化合物，為黃色蠟狀固體。ESI-MS(m/z):910.5[M]+.[a]D2。=—13.2265(c=l，CH3OH)2)CH3(CH2)14CO-Arg-Gly-Asp-Val-OH的制備按照RGDS的制備方法由0.910g(lmmol)CH3(CH2)14CO-Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl制得0.53g(78X)標(biāo)題化合物,為黃色蠟狀固體。ESI-MS(m/z):684.1[M]+,[a]D2()=—7.0289(c=l，CH3OH)。實(shí)施例6CH3(CH2)14CORGDF的制備1)CH3(CH2)14CO-Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl的制備按照Boc-Arg(N02)-Gly-OMe的制備方法由1.28g(5.0mmol)CH3(CH2)14CO2H和3.77g(5.0mmol)HClArg(N02)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl制得3.83g(80X)標(biāo)題化合物，為黃色蠟狀固體。ESI-MS(m/z):957.5[M]+，[a]D20=—8.6622(c=l，CH3OH)2)CH3(CH2)14CO-Arg-Gly-Asp-Phe-OH的制備按照RGDS的制備方法由0.957g(lmmol)CH3(CH2)14CO-Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)-116-0821制得0.4398(60%)標(biāo)題化合物，為黃色蠟狀固體。ESI-MS(m/z):732.0[M]+，[a]u20=—7.3279(c=l，CH3OH)實(shí)施例7RGDS-OCH2(CH2)14CH3的制備1)Boc-Ser(BZl)-OCH2(CH2)14CH3的制備按照Boc-Arg(N02)-Gly-OMe的制備方法由1.48g(5mmol)Boc-Ser(BZl)-OH和L21g(5.0mmol)CH3(CH2)14CH2OH制得2.47g(95%)標(biāo)題化合物,為無色油狀物。ESI-MS(m/z):520.3[M]+2)HClSer(Bzl)-OCH2(CH2)14CH3的制備按照HCl'Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl的制備方法，從0.52g(l.O腿ol)Boc-Ser(BZl)-OCH2(CH2)14CH3制得0.420g(100%)標(biāo)題化合物，為米黃色固體。ESI-MS(m/z):420.7[M]+3)Boc-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OCH2(CH2)14CH3的制備按照Boc-Arg(N02)-Gly-OMe的制備方法由1.615g(5mmol)Boc-Asp(OBzl)-OH和2.10g(5.0mmol)HCl'Ser(Bzl)-OCH2(CH2)14CH3制得3.33g(92%)標(biāo)題化合物，為無色油狀物。ESI-MS(m/z):724.6[M]+4)HClAsp(OBzl)-Ser(Bzl)-OCH2(CH2)14CH3的制備按照HCl'Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-()Bzl的制備方法，從0.72g(l.O薩ol)Boc-Asp(OBzl)-Ser(BZl)OCH2(CH2)14CH3制得0.62g(99%)標(biāo)題化合物，為米黃色固體。ESI-MS(m/z):624.7[M]+5)Boc-Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(BZl)-OCH2(CH2)14CH3的制備按照Boc-Arg(N02)-Gly-OMe的制備方法由1.885g(5.0mmo1)Boc-Arg(N02)-Gly-OH和3.12g(5.0mmol)HClAsp(OBzl)-Ser(Bzl)-OCH2(CH2;h4CH3制得4.23g(86%)標(biāo)題化合物，為無色固體。ESI-MS(m/z):983.9[M]+，[a]D20=—8.6285(c=l，CH3OH)6)HCl.Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OCH2(CH2)14CH3的制備按照HCl.Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl的制備方法，從0.984g(l.Ommol)Boc-Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OCH2(CH2)14CH3制得0.85g(96%)標(biāo)題化合物，為米黃色固體。ESI-MS(m/z):883.9[M]+7)RGDS-OCH2(CH2)14CH3的制備按照RGDS的制備方法由0.88g(lmmol)HCl'Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OCH2(CH2)14CH3制得0.52g(70X)標(biāo)題化合物,為無色固體。ESI-MS(m/z):658.2[M]+，[a]D20=—3.8645(c=l，CH3OH)實(shí)施例8RGDV-OCH2(CH2)14CH3的制備1)Boc-Val-OCH2(CH2)14CH3的制備按照Boc-Arg(N02)-Gly-OMe的制備方法由1.085g(5mmol)Boc-Val-OH和1.21g(5.0mmol)CH3(CH2)14CH2OH制得2.17g(98%)標(biāo)題化合物,為無色油狀物。ESI-MS(m/z):442.4[M]+2)HClVal-OCH2(CH2)14CH3的制備按照HClAsp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl的制備方法，從0.442g(l.Ommol)Boc-Val-OCH2(CH2),4CH3制得0.318g(93%)標(biāo)題化合物，為無色固體。ESI-MS(m/z):342.4[M]+3)Boc-Asp(OBzl)-Val-OCH2(CH2)14CH3的制備按照Boc-Arg(N02)-Gly-OMe的制備方法由1.605g(5mmol)Boc-Asp(OBzl)-OH和1.6g(5.0mmol)HCl'Val-OCH2(CH2)14CH3制得2.91g(90%)標(biāo)題化合物，為無色油狀物。ESI-MS(m/z):647.3[M]+4)HClAsp(OBzl)-Val-OCH2(CH2)14CH3的制備按照HClAsp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl的制備方法，從0.647g(l.Ommol)Boc-Asp(OBzl)-Val-OCH2(CH2)14CH3制得0.492g(90%)標(biāo)題化合物，為米黃色固體。ESI-MS(m/z):547.3[M]+5)Boc-Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OCH2(CH2)14CH3的制備按照Boc-Arg(N02)-Gly-OMe的帝ij備方法由1.885g(5.0mmo1)Boc-Arg(N02)-Gly-OH禾卩2.74g(5.0mmol)HClAsp(OBzl)-Val-OCH2(CH2)14CH3制得3.604g(87%)標(biāo)題化合物，為無色固體。ESI-MS(m/z):906.4[M]+.[a]D20=—11.1938(c=l,CH3OH)6)HClArg(N02)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OCH2(CH2)14CH3的制備按照HClAsp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl的制備方法，從0.907g(l.Ommol)Boc-Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OCH2(CH2)14CH3制得0.766g(95%)標(biāo)題化合物，為米黃色固體。ESI-MS(m/z):806.4[M]+7)RGDV-OCH2(CH2)14CH3的制備按照RGDS的制備方法由0.81g(lmmol)HCl'Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OCH2(CH2)14CH3制得0.536g(80%)標(biāo)題化合物，為無色固體。ESI-MS(m/z):670.4[M]+.[a]D20=—9.1265(c=l，CH3OH)實(shí)施例9RGDF-OCH2(CH2)14CH3的制備1)Boc-Phe-OCH2(CH2)14CH3的制備按照Boc-Arg(N02)-Gly-OMe的制備方法由1.325g(5腿ol)Boc-Phe-OH和1.21g(5.0mmol)CH3(CH2)14CH2OH制得2.33g(95%)標(biāo)題化合物,為無色油狀物。ESI-MS(m/z):490.6[M]+2)HClPhe-OCH2(CH2)14CH3的制備按照HCl.Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl的制備方法，從0.491g(l.Ommol)Boc-Phe-OCH2(CH2)14CH3制得0.37g(95%)標(biāo)題化合物，為米黃色固體。ESI-MS(m/z):390.6[M]+3)Boc-Asp(OBzl)-Phe-OCH2(CH2)14CH3的制備按照Boc-Arg(N02)-Gly-OMe的制備方法由1.605g(5mmol)Boc-Asp(OBzl)-OH和1.95g(5.0mmol)HCl'Phe-OCH2(CH2)14CH3制得3.13g(90%)標(biāo)題化合物,為無色油狀物。ESI-MS(m/z):695.8[M]+4)HClAsp(OBzl)-Phe-OCH2(CH2)14CH3的制備按照HCl'Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl的制備方法，從0.69g(l.Ommol)Boc-Asp(OBzl)-Phe-OCH2(CH2)14CH3制得0.54g(90%)標(biāo)題化合物，為米黃色固體。ESI-MS(m/z):595.6[M〗+5)Boc-Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OCH2(CH2)14CH3的制備按照Boc-Arg(N02)-Gly-OMe的帝ij備方法由1.885g(5.0mmo1)Boc-Arg(N02)-Gly-OH和2.978g(5.0mmol)HCl.Asp(OBzl)-Phe-OCH2(CH2)14CH3制得4.0g(84%)標(biāo)題化合物，為無色固體。ESI-MS(m/z):953.6[M]+，[a]D20=—10.0278(c=l，CH3OH)6)HClArg(N02)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OCH2(CH2)14CH3的制備按照HClAsp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl的制備方法，從0.954g(l.Ommol)Boc-Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OCH2(CH2)14CH3制得0.78g(92%)標(biāo)題化合物，為米黃色固體。ESI-MS(m/z):853.6[M:|+7)RGDF-OCH2(CH2)14CH3的制備按照RGDS的制備方法由0.85g(lmmol)HCl'Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OCH2(CH2)wCH3制得0.574g(80X沐j^題化合物，為無色固體。ESI-MS(m/z):718.1[M]+，[a〗D20=6.3946(c=l，CH3OH)實(shí)施例10RGDS-NHCH2(CH2)14CH3的制備1)Boc-Ser(BZl)-NHCH2(CH2)14CH3的制備按照Boc-Arg(N02)-Gly-OMe的制備方法由1.48g(5mmol)Boc-Ser(BZl)-OH和1.20g(5.0mmol)CH3(CH2)14CH2NH2制得2.49g(96%)標(biāo)題化合物，為無色固體。ESI-MS(m/z):520.2[M]+2)HClSer(BZl)-NHCH2(CH2)14CH3的制備按照HClAsp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl的制備方法，從0.52g(l.Ommol)Boc-Ser(BZl)-NH2CH2(CH2)14CH3制得0.38g(90%)標(biāo)題化合物，為米黃色固體。ESI-MS(m/z):420[M]+3)Boc-Asp(OBzl)-Ser(BZl)NHCH2(CH2)14CH3的制備按照Boc-Arg(N02)-Gly-OMe的制備方法由1.615g(5mmol)Boc-Asp(OBzl)-OH和2.1g(5.0mmol)HCl'Ser(BZl)-NHCH2(CH2)14CH3制得3.33g(92%)標(biāo)題化合物,為無色固體。ESI-MS(m/z):723.8[M]+.4)HClAsp(OBzl)-Ser(BZl)NHCH2(CH2)14CH3的制備按照HCl'Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl的制備方法，從0.72g(l.Ommol)Boc-Asp(OBzl)-Ser(BZl)NHCH2(CH2)14CH3制得0.59g(95%)標(biāo)題化合物，為米黃色固體。ESI-MS(m/z):623.8[M]+.5)Boc-Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(BZl)NHCH2(CH2)14CH3的制備按照Boc-Arg(N02)-Gly-OMe的制備方法由1.885g(5.0mmo1)Boc-Arg(N02)-Gly-OH和3.12g(5.0mmol)HCl.Asp(OBzl)-Ser(BZl)NHCH2(CH2)14CH3制得4.17g(83%)標(biāo)題化合物，為無色固體。ESI-MS(m/z):1004.3[M+Na].[a]D20=8.3623(c=l,CH3OH)6)HCl.Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(BZl)NHCH2(CH2)14CH3的制備按照HClAsp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl的制備方法，從1.004g(l.Ommol)Boc-Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(BZl)NHCH2(CH2;h4CH3制得0.79g(90%)標(biāo)題化合物，為米黃色固體。ESI-MS(m/z):881.3[M]+7)RGDS-NHCH2(CH2)14CH3的制備按照RGDS的制備方法由0.881g(lmmol)HClArg(N02)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(BZl)NHCH2(CH2)14CH3制得0.53g(80X)標(biāo)題化合物，為無色固體。ESI-MS(m/z):657.0[M]+.[a〗D20=—7.5289(c=l，CH3OH)實(shí)施例11RGDV-NHCH2(CH2)14CH3的制備1)Boc-Val-NHCH2(CH2)14CH3的制備按照Boc-Arg(N02)-Gly-OMe的制備方法由1.085g(5mmol)Boc-Val-OH和L205g(5.0mmol)CH3(CH2)14CH2NH2制得2.11g(96%)標(biāo)題化合物,為無色固體。ESI-MS(m/z):441.2[M]+2)HClVal-NHCH2(CH2)14CH3的制備按照HClAsp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl的制備方法，從0.384g(l.Ommol)Boc-Val-NHCH2(CH2)14CH3制得0.32g(95%)標(biāo)題化合物，為米黃色固體。ESI-MS(m/z):341.6[M]+3)Boc-Asp(OBzl)-Val-NHCH2(CH2)14CH3的制備按照Boc-Arg(N02)-Gly-OMe的制備方法由1.615g(5mmol)Boc-Asp(OBzl)-OH和1.7g(5.0mmol)HCl'Val-NHCH2(CH2)14CH3制得3.10g(96%)標(biāo)題化合物,為無色固體。ESI誦MS(m/z):647.3[M]+4)HClAsp(OBzl)-Val-NHCH2(CH2)14CH3的制備按照HCl-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-()Bzl的制備方法，從0.589g(l.Ommol)Boc-Asp(OBzl)-Val-NHCH2(CH2)14CH3制得0.51g(93%)標(biāo)題化合物，為米黃色固體。ESI-MS(m/z):547[M〗十5)Boc-Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)-Val-NHCH2(CH2)14CH3的制備按照Boc-Arg(N02)-Gly-OMe的制備方法由1.885g(5.0mmo1)Boc-Arg(N02)-Gly-OH和2.73g(5.0mmol)HCl.Asp(OBzl)-Val-NHCH2(CH2)14CH3制得3.61g(80%)標(biāo)題化合物，為無色固體。ESI-MS(m/z):904.9[M]+.[a]D20=—13.3931(c=l,CH3OH)6)HClArg(N02)-Gly-Asp(OBzl)-Val-NHCH2(CH2)14CH3的制備按照HCl.Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl的制備方法，從0'905g(l.Ommol)Boc-Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)-Val-NHCH2(CH2;h4CH3制得0.76g(94%)標(biāo)題化合物，為米黃色固體。ESI-MS(m/z):804.6[M]+7)RGDV-NHCH2(CH2)14CH3的制備按照RGDS的制備方法由0.805g(lmmol)HCl'Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)-Val-NHCH2(CH2)14CH3制得0.55g(82X)標(biāo)題化合物,為無色固體。ESI-MS(m/z):669.7[M]+.[a]%=—13.5230(c=l，CH3OH)實(shí)施例12RGDF-NHCH2(CH2)14CH3的制備1)Boc-Phe-NHCH2(CH2)14CH3的制備按照Boc-Arg(N02)-Gly-OMe的制備方法由L325g(5mmol)Boc-Phe-OH和1.20g(5.0mmol)CH3(CH2)14CH2NH2制得2.37g(97%)標(biāo)題化合物,為無色固體。ESI-MS(m/z):489.4[M]+2)HClPhe-NHCH2(CH2)14CH3的制備按照HClAsp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl的制備方法，從0.49g(l.Ommol)Boc-Phe隱NHCH2(CH2)14CH3制得0.39g(99%)標(biāo)題化合物，為米黃色固體。ESI-MS(m/z):389.6[M]+.3)Boc-Asp(OBzl)-Phe-NHCH2(CH2)14CH3的制備按照Boc-Arg(N02)-Gly-OMe的制備方法由1.615g(5mmol)Boc-Asp(OBzl)-OH和1.95g(5'0mmol)HCl'Phe-NHCH2(CH2)14CH3制得3.02g(87%)標(biāo)題化合物,為無色固體。ESI掘(m/z):694.5岡+4)HCl.Asp(OBzl)-Phe-NHCH2(CH2)14CH3的制備按照HClAsp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl的制備方法，從0.695g(l.Ommol)Boc-Asp(OBzl)-Phe-NHCH2(CH2)14CH3制得0.56g(95%)標(biāo)題化合物，為米黃色固體。ESI掘(m/z):594.8[M]+.5)Boc-Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-NHCH2(CH2)14CH3的制備按照Boc-Arg(N02)-Gly-OMe的制備方法由1.885g(5.0mmo1)Boc-Arg(N02)-Gly-OH和2.97g(5.0mmol)HCl.Asp(OBzl)-Phe-NHCH2(CH2)14CH3制得4.05g(85%)標(biāo)題化合物，為無色固體。ESI-MS(m/z):952.7[M]+.[a]D20=—11.1601(c=l，CH3OH)6)HClArg(N02)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-NHCH2(CH2)14CH3的制備按照HClAsp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl的制備方法，從0.953g(l.Ommol)Boc-Arg(N02)匿Gly-Asp(OBzl)-Phe-NHCH2(CH2),4CH3制得0.8lg(95%)標(biāo)題化合物，為米黃色固體。ESI-MS(m/z):852.6[M]+7)RGDF-NHCH2(CH2)14CH3的制備按照RGDS的制備方法由0.85g(lmmol)HCl'Arg(N02)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OCH2(CH2)14CH3制得0.57g(80%)標(biāo)題化合物，為無色固體。ESI-MS(m/z):717.6[M]+"[a]D20=—2.7974(c=l，CH3OH)試驗(yàn)例l本發(fā)明化合物口服給藥的抗血栓活性試驗(yàn)1)大鼠手術(shù)與器械SD大鼠(雄性,220230g)按10nmoHcg—'劑量口服本發(fā)明的化合物，30min后按1200mg-kg—'劑量腹腔注射烏拉坦溶液進(jìn)行麻醉。麻醉大鼠仰臥位固定，分離右頸總動(dòng)脈，于近心端夾動(dòng)脈夾，近心端和遠(yuǎn)心端分別穿入手術(shù)線，將遠(yuǎn)心端的手術(shù)線于皮毛用止血鉗夾緊，準(zhǔn)備在遠(yuǎn)心端插管。2)插管插管為硅垸化過的聚乙烯膠管，分三段，中段為聚乙烯膠管,長(zhǎng)60.0mm，內(nèi)徑3.5mm;兩端為相同的聚乙烯管,管長(zhǎng)IOO.0mm，內(nèi)徑1.0mm,外徑2.Omm該管的--端拉成尖管(用于插入大鼠頸動(dòng)脈或靜脈)，外徑為1.0mm。將編好號(hào)的干凈青霉素小瓶中分別裝入6cm長(zhǎng)的黑色手術(shù)線，稱重；然后取出絲線，按照編號(hào)放入準(zhǔn)備好的插管的中段較粗的插管中。打開大鼠右側(cè)動(dòng)脈夾，用注射器通過尖管端將管中注滿肝素生理鹽水溶液(50IU-kg—1),然后將插管的動(dòng)脈端插入大鼠右側(cè)頸總動(dòng)脈，將計(jì)算量的肝素緩緩注入大鼠體內(nèi)。3)給藥溶液藥品生理鹽水(3mLkg—、口服給予)、阿斯匹林(劑量為30mg/kg，按試驗(yàn)例l的方法靜脈給予)的生理鹽水溶液、本發(fā)明化合物(劑量為10nmol/kg，口服給予)的生理鹽水溶液。4)血栓稱重計(jì)時(shí)開始15分鐘后，剪斷動(dòng)靜脈插管，停止循環(huán)，用眼科鑷小心取出絲線，在濾紙上輕輕蘸掉血滴，放入事先稱重好的青霉素小瓶中，精確稱重并記錄。計(jì)算出血栓的濕重。每個(gè)藥品重復(fù)ll次給藥。統(tǒng)計(jì)各組的血栓濕重(X士SD)，并做/檢驗(yàn)。5)結(jié)果經(jīng)口服給藥,本發(fā)明的化合物都具有很好的抗栓活性。結(jié)果列入表l。表l.本發(fā)明化合物經(jīng)口服給藥的抗血栓活性<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>n=10;NS=生理鹽水；a.與生理鹽水相比，P<0.01。試驗(yàn)例2本發(fā)明化合物RGDF-NHCH2(CH2)14CH3口服給藥的量效關(guān)系1)大鼠手術(shù)與器械SD大鼠(雄性，220230g)按10nmol'kg',0.1nmol'kg—'和O.OOlnmol'kg—'劑量口服RGDF-NHCH2(CH2;h4CH3,30min后按1200mg-kg—'劑量腹腔注射烏拉坦溶液進(jìn)行麻醉。麻醉大鼠仰臥位固定，分離右頸總動(dòng)脈，于近心端夾動(dòng)脈夾，近心端和遠(yuǎn)心端分別穿入手術(shù)線，將遠(yuǎn)心端的手術(shù)線于皮毛用止血鉗夾緊，準(zhǔn)備在遠(yuǎn)心端插管。2)插管插管為硅烷化過的聚乙烯膠管，分三段，中段為聚乙烯膠管，長(zhǎng)60.0mm，內(nèi)徑3.5mm;兩端為相同的聚乙烯管,管長(zhǎng)100.0mm，內(nèi)徑1.0mm,外徑2.0mm該管的一端拉成尖管(用于插入大鼠頸動(dòng)脈或靜脈)，外徑為l.Omm。將編好號(hào)的干凈青霉素小瓶中分別裝入6cm長(zhǎng)的黑色手術(shù)線，稱重；然后取出絲線，按照編號(hào)放入準(zhǔn)備好的插管的中段較粗的插管中。打開大鼠右側(cè)動(dòng)脈夾，用注射器通過尖管端將管中注滿肝素生理鹽水溶液(50IU-kg—^，然后將插管的動(dòng)脈端插入大鼠右側(cè)頸總動(dòng)脈，將計(jì)算量的肝素緩緩注入大鼠體內(nèi)。3)給藥溶液藥品將RGDF-NHCH2(CH2)mCH3按10nmolkg_'，O.lnmol.kg_'和0.001nmolkg—1劑量配置生理鹽水溶液，供口服給藥。4)血栓稱重計(jì)時(shí)開始15分鐘后，剪斷動(dòng)靜脈插管，停止循環(huán)，用眼科鑷小心取出絲線，在濾紙上輕輕蘸掉血滴，放入事先稱重好的青霉素小瓶中，精確稱重并記錄。計(jì)算出血栓的濕重。每個(gè)藥品重復(fù)ll次給藥。統(tǒng)計(jì)各組的血栓濕重(^士SD)，并做f檢驗(yàn)。5)結(jié)果經(jīng)口服給藥，在10nmolkg—'，O.lnmol.kg—!，0.001nmol.kg—1和0.0001nmol'kg_1劑量下，RGDF-NHCH2(CH2)14CH3劑量依賴地發(fā)揮抗血栓作用。結(jié)果列入表2。表2.口服給予RGDF-NHCH2(CH2)14CH3的量效關(guān)系<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>試驗(yàn)例3本發(fā)明的化合物在水相中組裝成為納米球試驗(yàn)1)本發(fā)明的9種陽離子藥質(zhì)體按照0.5mg/ml的濃度配置成為水溶液，在激光散射粒度儀(型號(hào))上連續(xù)測(cè)定8天，觀察粒徑及粒徑變化，結(jié)果見表3。得到的數(shù)據(jù)表明，這9種陽離子藥質(zhì)體在水相中可以自組裝成為穩(wěn)定的納米球，因而是優(yōu)秀的微乳和脂質(zhì)體藥物的制備材料。表3本發(fā)明的9種陽離子藥質(zhì)體在水中自組裝成為穩(wěn)定的納米球的粒經(jīng)<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>2)本發(fā)明的化合物在水相組裝的納米球的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果見圖2。3)按照掃描電鏡的測(cè)定要求，配置9種陽離子藥質(zhì)體的水溶液，置于銅網(wǎng)上揮發(fā)干后測(cè)定本發(fā)明的化合物在水相組裝的納米球的圖。結(jié)果表明，由這9種陽離子藥質(zhì)體組裝的納米球在掃描電鏡下可以看到均勻的粒狀態(tài)。這里給出的是代表性化合物RGDF-NHCH2(CH2;h4CH3的掃描電鏡圖(圖3)。試驗(yàn)例4本發(fā)明的化合物在脂相中組裝成為納米球試驗(yàn)1)選擇正辛醇為脂相，將本發(fā)明的9種陽離子藥質(zhì)體按照0.5mg/ml的濃度配置成為正辛醇溶液，在激光散射粒度儀(型號(hào))上連續(xù)測(cè)定8天,觀察粒徑及粒徑變化，結(jié)果見表4。得到的數(shù)據(jù)表明，這9種陽離子藥質(zhì)體在脂相中可以自組裝成為穩(wěn)定的納米球,因而是優(yōu)秀的微乳和脂質(zhì)體藥物的制備材料。表4本發(fā)明的9種陽離子藥質(zhì)體在正辛醇中自組裝成為穩(wěn)定的納米球的粒經(jīng)<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>2)本發(fā)明的化合物在脂相組裝的納米球的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果見圖4。3)按照掃描電鏡的測(cè)定要求，配置9種陽離子藥質(zhì)體的正辛醇溶液，置于銅網(wǎng)上揮發(fā)干后測(cè)定本發(fā)明的化合物在脂相組裝的納米球的圖。結(jié)果表明，由這9種陽離子藥質(zhì)體組裝的納米球在掃描電鏡下可以看到均勻的粒狀態(tài)。這里給出的是代表性化合物RGDF-NHCH2(CH2;h4CH3的掃描電鏡圖(圖5)。權(quán)利要求1.靶向陽離子藥質(zhì)體，為通式CH3(CH2)14R1所示，其中R1選自CORGDS、CORGDV、CORGDF、RGDSOCH2、RGDVOCH2、RGDFOCH2、RGDSNHCH2、RGDVNHCH2或RGDFNHCH2。2、一種制備權(quán)利要求1靶向陽離子藥質(zhì)體的方法，包括(1)按照常規(guī)液相接肽技術(shù)分別合成RGDS、RGDV和RGDF;(2)將CH3(CH2)14COOH、CH3(CH2)14CH2OH和CH3(CH2)14CH2NH2分別與保護(hù)基保護(hù)的RGDS、RGDV和RGDF偶聯(lián)，脫去保護(hù)基，即得。3、權(quán)利要求l的靶向陽離子藥質(zhì)體在制備抗血栓藥物中的用途。4、權(quán)利要求1的靶向陽離子藥質(zhì)體制備微乳或脂質(zhì)體藥物載體的制劑材料中的用途。5、權(quán)利要求1的靶向陽離子藥質(zhì)體制備微乳、脂質(zhì)體藥物載體的靶向制劑材料中的用途。全文摘要本發(fā)明公開了以正十五烷基和RGD肽為基本構(gòu)件，通過羰基、甲氨基及甲氧基組構(gòu)的靶向陽離子藥質(zhì)體，公開了其制備方法及其用途。本發(fā)明靶向陽離子藥質(zhì)體為通式CH₃(CH₂)₁₄R₁所示的結(jié)構(gòu)，其中R₁為羰基、甲氨基及甲氧基修飾的RGD肽。本發(fā)明的靶向陽離子藥質(zhì)體除具有優(yōu)秀的口服抗血栓活性外，還具有優(yōu)秀的靶向性能和自組裝性能，可作為制備微乳、脂質(zhì)體等藥物載體的制劑材料或靶向制劑材料。文檔編號(hào)A61K38/06GK101240028SQ200710063669公開日2008年8月13日申請(qǐng)日期2007年2月7日優(yōu)先權(quán)日2007年2月7日發(fā)明者傅征然,崔國輝,彭師奇,明趙申請(qǐng)人:首都醫(yī)科大學(xué)