載體發(fā)酵技術(shù)制備乙醇的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種載體發(fā)酵技術(shù)制備乙醇的方法，包括以下步驟：將釀酒酵母和黑曲霉分別進行培養(yǎng)；將釀酒酵母接種到黑曲霉的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)形成混合菌絲球；將混合菌絲球倒入發(fā)酵培養(yǎng)基中，在30℃、40-60r/min的條件下同步糖化發(fā)酵制備乙醇。本發(fā)明將同步糖化發(fā)酵工藝和微生物固定化技術(shù)進行了巧妙的結(jié)合，降低了發(fā)酵液的黏度，有效防止了雜菌污染，降低了廢糟液的COD值，提高了乙醇的收率。
【專利說明】載體發(fā)酵技術(shù)制備乙醇的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種載體發(fā)酵技術(shù)制備乙醇的方法，具體涉及一種將固定化載體作為發(fā)酵菌種與同步糖化發(fā)酵技術(shù)有機結(jié)合在一起的一種發(fā)酵制備乙醇的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]燃料乙醇最早是采用玉米為原料發(fā)酵制成，但這一過程使用玉米量較大，對國家糧食安全構(gòu)成了威脅。2006年以來我國出臺了一系列政策，強調(diào)發(fā)展燃料乙醇應(yīng)堅持“非糧”原則，控制玉米產(chǎn)品深加工產(chǎn)業(yè)的盲目發(fā)展。菊芋(俗稱洋姜、姜不辣、鬼子姜)主要成分是菊粉，是最簡單的一類果聚糖，含糖量為其干重的60%~70%。菊芋水解比淀粉質(zhì)原料還容易，不需要高溫液化，直接用菊粉酶水解即可獲得可發(fā)酵性糖，工藝流程簡單，能耗低，與目前人們普遍關(guān)注的以農(nóng)作物秸桿為代表的木質(zhì)纖維素類生物質(zhì)相比，更易于實現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化。菊芋與其他農(nóng)作物相比有許多明顯的優(yōu)點，如適應(yīng)性強、耐貧瘠、耐寒、耐旱、種植簡易、產(chǎn)量高等?？稍谏衬Ⅺ}堿地或灘涂地種植生長，可利用海水養(yǎng)殖廢水非灌溉水資源灌溉。菊芋作為一種極具潛力的乙醇發(fā)酵原料，與淀粉質(zhì)原料相比，菊芋低溫條件下即可實現(xiàn)糊化，在節(jié)能方面具有優(yōu)勢。在2007年在國務(wù)院辦公廳轉(zhuǎn)發(fā)的國家發(fā)改委《生物產(chǎn)業(yè)發(fā)展“十?一五”規(guī)劃》中明確提出“支持以甜高粱、木薯和菊芋等非糧原料生產(chǎn)燃料乙醇”，鼓勵非糧原料燃料乙醇技術(shù)的開發(fā)和產(chǎn)業(yè)發(fā)展。
[0003]以菊芋為原料制備乙醇的生物發(fā)酵所用菌種一般為酵母菌，因為菊芋不能直接利用，需要先糖化，所以發(fā)酵方法有同步糖化發(fā)酵和先糖化后發(fā)酵，所謂同步糖化發(fā)酵是指糖化菌種和發(fā)酵菌種混合培養(yǎng)，邊糖化邊發(fā)酵，先糖化后發(fā)酵是指先利用糖化菌種將菊糖水解，再利用發(fā)酵菌種進行發(fā)酵。同步糖化發(fā)酵的優(yōu)點為使發(fā)酵醪中水解下來的可發(fā)酵性糖被及時發(fā)酵為乙醇，在過程中不積累，防止糖積累而抑制菊粉酶分泌，避免底物抑制現(xiàn)象出現(xiàn)，可以有效防止雜菌污染，提高乙醇收率，但是目前國內(nèi)以菊芋為原料酒精發(fā)酵技術(shù)工藝技術(shù)水平低，菊糖利用率不高，損失較大。另外，菌種游離存在菌種難以回收的問題，造成生產(chǎn)成本過高、環(huán)境污染，而固定化細胞技術(shù)能很好的解決這一問題，所謂固定化細胞技術(shù)是指將具有一定生理功能的生物細胞，用一定的方法將其固定，作為固體生物催化劑而加以利用的一門技術(shù)。在乙醇制備中，將酵母固定化會大大提高了酶促反應(yīng)效率，因此具有很好的應(yīng)用前景。但是目前公開的酵母固定化技術(shù)成本高、固定技術(shù)單一。
[0004]大連理工大學(xué)的常寶磊的碩士生論文中對菊芋生產(chǎn)乙醇的方法進行了研究，其用絮凝酵母作為發(fā)酵菌種制備乙醇，該方法缺點是對菌種要求較高，既要有絮凝活性、糖化能力，又要有發(fā)酵能力，這樣菌種對底物的利用效率和發(fā)酵能力都受到一定的影響，影響乙醇的收率。
[0005]葛向陽等(葛向陽、張偉國，同步糖化發(fā)酵菊芋生產(chǎn)酒精中黑曲霉菌株的選育，食品與生物技術(shù)學(xué)報，第25卷第2期，2006年3月)利用黑曲霉和釀酒酵母采用同步糖化法制備乙醇。該方法的缺點是菌種沒有固定化，無法進行高密度發(fā)酵，影響設(shè)備的利用率；沒有進行發(fā)酵菌種的回收，造成發(fā)酵菌種的浪費，而且容易造成環(huán)境污染。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明提供了一種載體發(fā)酵技術(shù)制備乙醇的方法，該方法將載體固定的菌種作為發(fā)酵菌種和同步糖化發(fā)酵技術(shù)進行結(jié)合和改進，簡化了工藝路線，提高了乙醇收率，減輕了環(huán)境污染。
[0007]所述載體發(fā)酵技術(shù)是指將發(fā)酵菌種用微生物載體進行固定，并用載體固定的菌種進行發(fā)酵制備乙醇的方法，目前，沒有將載體發(fā)酵技術(shù)與同步糖化發(fā)酵技術(shù)結(jié)合進行乙醇制備的技術(shù)公開，一般這兩種技術(shù)都是單獨使用；也沒有任何固定化載體作為發(fā)酵菌種使用技術(shù)的相關(guān)報道，本發(fā)明首次提出將載體固定的菌種作為發(fā)酵菌種這一概念和技術(shù)操作方法。本發(fā)明在采用產(chǎn)菊粉酶的黑曲霉和釀酒酵母作為菌種采用同步糖化發(fā)酵技術(shù)制備乙醇的基礎(chǔ)上，經(jīng)過創(chuàng)造性的研究，根據(jù)菊芋需要先糖化再發(fā)酵的特性，將黑曲霉和釀酒酵母進行了混合培養(yǎng)，形成了黑曲霉包裹釀酒酵母的菌種混合體，該菌種混合體將釀酒酵母包裹在黑曲霉中，即實現(xiàn)了釀酒酵母的固定，又實現(xiàn)了同步糖化，節(jié)約了細胞固定化成本，簡化了工藝，提高了酵母細胞對于乙醇的耐受性，降低發(fā)酵液黏度，降低了廢糟液的C0D，提高了乙醇產(chǎn)率。
[0008]本發(fā)明具體技術(shù)方案如下:
一種載體發(fā)酵技術(shù)制備乙醇的方法，其特征是包括以下步驟:
(1)將釀酒酵母按照5-8%的接種量接種到種子培養(yǎng)基中，在30°C、100r/min的條件下培養(yǎng)30 h，所得發(fā)酵液離心后收集釀酒酵母細胞；
(2)將黑曲霉的孢子懸浮液按照2-5%的接種量接種到產(chǎn)酶培養(yǎng)基中，在30°C、40r/min的條件下培養(yǎng)至OD6tltl為0.3-0.5，得到黑曲霉培養(yǎng)液；
(3)將步驟(1)收集到的酵母細胞接入到步驟(2)的黑曲霉培養(yǎng)液中，使黑曲霉和釀酒酵母的菌種個數(shù)比為1:3~10，補充菊芋粉、蛋白胨和(NH4)2SO4使它們的濃度分別為25g/L、10g/L和5g/L，然后在30°C，100~200r/min的條件下混合培養(yǎng)至OD6tltl為0.6_1，實現(xiàn)黑曲霉對釀酒酵母的包裹，得到混合菌絲球；
(4)將步驟(3)制得的混合菌絲球過濾后按照10%的接種量倒入發(fā)酵培養(yǎng)基中，在30°C、40-60r/min的條件下同步糖化發(fā)酵制備乙醇。
[0009]在上述使用黑曲霉包裹釀酒酵母的混合菌絲球同步糖化發(fā)酵乙醇的方法基礎(chǔ)上，本發(fā)明又進一步的進行了大量的實驗，對各工藝條件進行了優(yōu)選，從而保證了發(fā)酵結(jié)果的進一步提升。具體如下:
步驟(4)中，發(fā)酵結(jié)束后，將混合菌絲球過濾出來，蒸餾水清洗后，重新加入新的發(fā)酵培養(yǎng)基中進行發(fā)酵制備乙醇，菌種混合體能夠重復(fù)循環(huán)使用25-30次。菌種可循環(huán)使用，大大降低了生產(chǎn)成本。
[0010]步驟(1)中，種子培養(yǎng)基組成優(yōu)選為:酵母膏10 g/L，蛋白胨20 g/L，葡萄糖20 g/L，水余量，自然pH。
[0011]步驟(2)中，產(chǎn)酶培養(yǎng)基組成優(yōu)選為:菊芋粉25g/L，(NH4)2SO4 5g/L，蛋白胨10g/L，KH2PO4 6 g/L, NaCl 5 g/L，MgSO4 ? 7H20 0.5g/L, FeSO4 ? 7H20 0.001 g/L, pH 5,0.1Mpa滅菌15min。
[0012]步驟(2)中，黑曲霉的孢子懸浮液中，黑曲霉的個數(shù)是1(T107個/ml。[0013]步驟(3)中，黑曲霉和釀酒酵母的菌種個數(shù)比優(yōu)選為1:6~10。
[0014]步驟(3)中，在補充菊芋粉、蛋白胨和(NH4)2SO4的同時，優(yōu)選向培養(yǎng)液中還加入甘露醇、亞硒酸鈉和硼酸成分，使它們的濃度分別為8g/L、0.3g/L和0.lg/L。這樣形成的菌絲球發(fā)酵性能更好。
[0015]步驟(4)中，發(fā)酵培養(yǎng)基組成優(yōu)選為:菊芋粉30-40g/L，(NH4)2SO4 4_6g/L，玉米漿4-6g/L, KH2PO4 5-10g/L, MgSO4 ? 7H20 0.3-0.6g/L, FeSO4 ? 7H20 0.001-0.003 g/L, pH 4.5，
0.1Mpa滅菌15min。進一步的，發(fā)酵培養(yǎng)基組成最優(yōu)選為:菊芋粉35g/L，(NH4)2SO4 5g/L，玉米漿 5g/L, KH2P O4 6 g/L, MgSO4 ? 7H20 0.5g/L, FeSO4 ? 7H20 0.001 g/L, pH 4.5,0.1Mpa滅菌15min。
[0016]采用本發(fā)明工藝后，發(fā)酵時間可縮短為48h。 [0017]本發(fā)明將同步糖化發(fā)酵工藝和微生物固定化技術(shù)進行了巧妙的結(jié)合，根據(jù)菌種自身的特性，不需引進額外的載體對菌種進行固定，這一工藝思路在國內(nèi)外未見相關(guān)報道，本發(fā)明首次提出，具有以下優(yōu)點:
1、本發(fā)明邊產(chǎn)酶邊糖化，使發(fā)酵醪中水解下來的可發(fā)酵性糖被及時發(fā)酵為乙醇，在過程中不積累，防止糖積累而抑制菊粉酶分泌，避免底物抑制現(xiàn)象出現(xiàn)，可以有效防止雜菌污染，提高乙醇收率；
2、本發(fā)明采用菌絲球作為固定化手段，降低了固定化成本，降低了發(fā)酵液的黏度。在菊芋發(fā)酵乙醇的過程中，由于菊芋干粉吸水溶脹，當(dāng)?shù)孜餄舛燃哟笠院螅弦吼ざ仍龃?，流動混合困難，影響傳質(zhì)傳熱，固形物濃度成為發(fā)酵的限制因素。高黏度料液影響發(fā)酵過程中的傳熱與傳質(zhì)效果，發(fā)酵過程產(chǎn)生的CO2也會因排出不暢而積累，導(dǎo)致發(fā)酵速度減緩，發(fā)酵時間長(60 h以上)，反應(yīng)不完全，乙醇收率明顯降低。而本發(fā)明將菌種經(jīng)過特殊培養(yǎng)制成了混合菌絲球，菌絲球的形狀使其流動阻力比細胞要小的多，可以明顯降低發(fā)酵液黏度，提高乙醇的收率。
[0018]3、本發(fā)明將發(fā)酵菌種進行了集合，形成菌絲球，而非游離的菌種，可以在發(fā)酵罐中達到較高的細胞濃度，大大提高了乙醇發(fā)酵過程的發(fā)酵速率，相應(yīng)提高了發(fā)酵罐的設(shè)備生產(chǎn)強度，減少了設(shè)備總?cè)莘e規(guī)模和發(fā)酵罐固定資產(chǎn)建設(shè)投資。
[0019]4、本發(fā)明利用黑曲霉對釀酒酵母實現(xiàn)了固定化，不用額外的載體，節(jié)約了細胞固定化成本，釀酒酵母從發(fā)酵系統(tǒng)中容易回收，使用壽命長且能反復(fù)使用，操作方便粗放，成本低廉，容易實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)；
5、由于將釀酒酵母包裹在黑曲霉中形成菌絲球，黑曲霉菌絲體富含能提高酵母活力和耐酒精能力的脂蛋白，使固定化后釀酒酵母細胞所處的微環(huán)境改變，釀酒酵母細胞對于乙醇的耐受性增強。
[0020]6、釀酒酵母包裹在黑曲霉中實現(xiàn)了完全固定化后，可回收利用，發(fā)酵液酒精精餾后產(chǎn)生廢糟液的COD從現(xiàn)有酒精發(fā)酵工藝的50000-60000ppm降低到了 20000-30000ppm，為酒精發(fā)酵工業(yè)實現(xiàn)污染物源頭減廢、清潔生產(chǎn)創(chuàng)造了有利條件。
【具體實施方式】
[0021]下面通過具體實施例對本發(fā)明進行進一步的闡述，應(yīng)該明白的是，下述說明僅是為了解釋本發(fā)明，并不對其進行限定。[0022]本發(fā)明所用黑曲霉(CMCC98003)購自南京便診儀器設(shè)備有限公司，所用釀酒酵母購自安琪酵母股份有限公司。
[0023]實施例1
一種菌絲球為載體和發(fā)酵菌種的同步糖化發(fā)酵生產(chǎn)乙醇的方法:
1、將釀酒酵母菌種按照5%的接種量接種到裝有100ml種子培養(yǎng)基的250ml三角瓶中，30°C, 100r/min的搖床中培養(yǎng)30 h,發(fā)酵液在5000r/min離心5min,收集酵母細胞；種子培養(yǎng)基為酵母膏10 g/L,蛋白胨20 g/L,葡萄糖20 g/L,自然pH。
[0024]2、將黑曲霉用無菌水配成孢子懸浮液，按照4%的接種量接種到裝有100ml產(chǎn)酶培養(yǎng)基的250ml三角瓶中，30°C，40r/min的搖床中培養(yǎng)18h，孢子懸浮液的擴大培養(yǎng)后的OD6tltl值為0.4。其中，產(chǎn)酶培養(yǎng)基的配方為菊芋粉25g/L，(NH4)2SO4 5g/L，蛋白胨10g/L，KH2PO4 6 g/L, NaCl 5 g/L，MgSO4 ? 7H20 0.5g/L, FeSO4 ? 7H20 0.001 g/L, pH 5,0.1Mpa 滅菌 15min ；
3、將酵母細胞接種到步驟2的黑曲霉擴大培養(yǎng)液中，使黑曲霉和釀酒酵母的菌種個數(shù)比為1:6，然后再補充菊芋粉、蛋白胨和(NH4)2SO4培養(yǎng)基成分至25g/L、10g/L和5g/L，30°C,140r/min的搖床中培養(yǎng)30 h，在黑曲霉菌絲球的形成過程中，將釀酒酵母包裹在里面，獲得包埋有釀酒酵母的混合菌絲球的0D600值為0.6 ;
4、將制得的混合菌絲球過濾后按照10%的接種量倒入發(fā)酵培養(yǎng)基中，30°C、40r/min的搖床中進行同步糖化發(fā)酵生產(chǎn)乙醇；裝液量為200ml的500ml三角瓶中，發(fā)酵培養(yǎng)基組成為:菊芋粉 35g/L，(NH4)2SO4 5g/L，玉米漿 5g/L，KH2P O4 6 g/L，MgSO4 ? 7H20 0.5g/L,FeSO4 ? 7H20 0.001 g/L, pH 4.5,0.1Mpa 滅菌 15min ；
5、48h后發(fā)酵結(jié)束，過濾回收混合菌絲球，蒸餾水清洗后，然后重復(fù)步驟四25次，循環(huán)使用混合菌絲球進行乙醇發(fā)酵，發(fā)酵結(jié)束后，乙醇濃度達到了 12.48 g/L，乙醇得率(每克菊芋粉產(chǎn)乙醇的量)為0.357g/g。
[0025]實施例2
采用下述方法制備乙醇:
1、將釀酒酵母菌種按照8%的接種量接種到裝有100ml種子培養(yǎng)基的250ml三角瓶中，30°C, 100r/min的搖床中培養(yǎng)30 h,發(fā)酵液在5000r/min離心5min,收集酵母細胞；種子培養(yǎng)基為酵母膏10 g/L,蛋白胨20 g/L,葡萄糖20 g/L,自然pH。
[0026]2、將黑曲霉用無菌水配成孢子懸浮液，按照2%的接種量接種到裝有100ml產(chǎn)酶培養(yǎng)基的250ml三角瓶中，30°C，40r/min的搖床中培養(yǎng)18h，孢子懸浮液的擴大培養(yǎng)后的0D_值為0.5。其中，產(chǎn)酶培養(yǎng)基的配方為菊芋粉25g/L，(NH4)2SO4 5g/L，蛋白胨10g/L，KH2PO4 6 g/L, NaCl 5 g/L，MgSO4 ? 7H20 0.5g/L, FeSO4 ? 7H20 0.001 g/L, pH 5,0.1Mpa 滅菌 15min ；
3、將酵母細胞接種到步驟2的黑曲霉擴大培養(yǎng)液中，使黑曲霉和釀酒酵母的菌種個數(shù)比為1:10，然后再補充菊芋粉、蛋白胨和(NH4)2SO4培養(yǎng)基成分至25g/L、10g/L和5g/L，30°C,180r/min的搖床中培養(yǎng)30 h，在黑曲霉菌絲球的形成過程中，將釀酒酵母包裹在里面，獲得包埋有釀酒酵母的混合菌絲球的0D_值為0.8 ;
4、將制得的混合菌絲球過濾后按照10%的接種量倒入發(fā)酵培養(yǎng)基中，30°C、60r/min的搖床中進行同步糖化發(fā)酵生產(chǎn)乙醇；裝液量為200ml的500ml三角瓶中，發(fā)酵培養(yǎng)基組成為:菊芋粉 35g/L，(NH4)2SO4 5g/L，玉米漿 5g/L，KH2P O4 6 g/L, MgSO4 ? 7H20 0.5g/L，F(xiàn)eSO4 ? 7H20 0.001 g/L, pH 4.5,0.1Mpa 滅菌 15min ；
5、48h后發(fā)酵結(jié)束，過濾回收混合菌絲球，蒸餾水清洗后，然后重復(fù)步驟四28次，循環(huán)使用混合菌絲球進行乙醇發(fā)酵，發(fā)酵結(jié)束后，乙醇濃度達到了 13.12 g/L，乙醇得率為
0.375g/g。
[0027]實施例3
研究不同的轉(zhuǎn)速條件下形成混合菌絲球?qū)Πl(fā)酵效果的影響
按照實施例1的方法發(fā)酵制備乙醇，不同的是:步驟3中，黑曲霉與釀酒酵母進行混合培養(yǎng)時，搖床轉(zhuǎn)速按照80r/min、100r/min、180r/min進行混合培養(yǎng),最終所得乙醇性能參數(shù)如下表。
【權(quán)利要求】
1.一種載體發(fā)酵技術(shù)制備乙醇的方法，其特征是包括以下步驟: (1)將釀酒酵母按照5-8%的接種量接種到種子培養(yǎng)基中，在30°C、100r/min的條件下培養(yǎng)30 h，所得發(fā)酵液離心后收集釀酒酵母細胞； (2)將黑曲霉的孢子懸浮液按照2-5%的接種量接種到產(chǎn)酶培養(yǎng)基中，在30°C、40r/min的條件下培養(yǎng)至OD6tltl為0.3-0.5，得到黑曲霉培養(yǎng)液； (3)將步驟(1)收集到的酵母細胞接入到步驟(2)的黑曲霉培養(yǎng)液中，使黑曲霉和釀酒酵母的菌種個數(shù)比為1:3~10，補充菊芋粉、蛋白胨和(NH4)2SO4使它們的濃度分別為25g/L、10g/L和5g/L，然后在30°C，100~200r/min的條件下混合培養(yǎng)至OD6tltl為0.6_1，實現(xiàn)黑曲霉對釀酒酵母的包裹，得到混合菌絲球； (4)將步驟(3)制得的混合菌絲球過濾后按照10%的接種量倒入發(fā)酵培養(yǎng)基中，在30°C、40-60r/min的條件下同步糖化發(fā)酵制備乙醇。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是:步驟(4)中，發(fā)酵結(jié)束后，將混合菌絲球過濾出來，蒸餾水清洗后，重新加入新的發(fā)酵培養(yǎng)基中進行發(fā)酵制備乙醇，菌種混合體能夠重復(fù)循環(huán)使用25-30次。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是:步驟(1)中，種子培養(yǎng)基組成為:酵母膏10g/L，蛋白胨20 g/L，葡萄糖20 g/L，水余量，自然pH。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是:步驟(2)中，產(chǎn)酶培養(yǎng)基組成為:菊芋粉25g/L，(NH4)2SO4 5g/L，蛋白胨 10g/L，KH2PO4 6 g/L, NaCl 5 g/L，MgSO4 ? 7H20 0.5g/L，F(xiàn)eSO4 ? 7H20 0.001 g/L, pH 5,0.1Mpa 滅菌 15min。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的方法，其特征是:步驟(2)中，黑曲霉的孢子懸浮液中，黑曲霉的個數(shù)是IO6-1O7個/ml。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是:步驟(4)中，發(fā)酵培養(yǎng)基組成為:菊芋粉30-40g/L, (NH4)2SO4 4_6g/L，玉米漿 4_6g/L，KH2PO4 5-lOg/L，MgSO4 ? 7H20 0.3-0.6g/L,FeSO4 ? 7H20 0.001-0.003 g/L, pH 4.5,0.1Mpa 滅菌 15min。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征是:步驟(4)中，發(fā)酵培養(yǎng)基組成為:菊芋粉35g/L, (NH4)2SO4 5g/L，玉米漿 5g/L，KH2P O4 6 g/L，MgSO4 ? 7H20 0.5g/L，F(xiàn)eSO4 ? 7H20 0.001g/L, pH 4.5,0.1Mpa 滅菌 15min。
8.根據(jù)權(quán)利要求1、6或7所述的方法，其特征是:步驟(4)中，發(fā)酵時間為48h。
9.根據(jù)權(quán)利要求1_4、6或7中任一項所述的方法，其特征是:步驟(3)中，補充菊芋粉、蛋白胨和(NH4)2SO4的同時，向培養(yǎng)液中加入甘露醇、亞硒酸鈉和硼酸，使它們的濃度分別為8g/L、0.3g/L和 0.1g/Lo
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是:步驟(3)中，黑曲霉和釀酒酵母的菌種個數(shù)比為I:6~10。
【文檔編號】C12P7/06GK103642890SQ201310721968
【公開日】2014年3月19日 申請日期:2013年12月25日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月25日
【發(fā)明者】張超, 陳文兵, 武道吉, 張貴芹, 祁鋒, 馬永山, 趙海濤 申請人:山東建筑大學(xué)