基于聚合物電化學(xué)發(fā)光信號(hào)放大的核酸檢測(cè)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種基于聚合物電化學(xué)發(fā)光信號(hào)放大的核酸檢測(cè)方法。該方法包括如下步驟：三聯(lián)吡啶釕的合成與活化、聚賴氨酸-三聯(lián)吡啶釕復(fù)合物的制備、DNA探針標(biāo)記聚賴氨酸-三聯(lián)吡啶釕復(fù)合物和磁捕捉檢測(cè)目標(biāo)DNA序列；本發(fā)明是將基于聚合物電化學(xué)發(fā)光信號(hào)放大技術(shù)運(yùn)用于核酸檢測(cè)，有機(jī)多聚物（如聚賴氨酸）具有較好的物理及化學(xué)性質(zhì)，可運(yùn)用到電化學(xué)發(fā)光信號(hào)放大領(lǐng)域；本發(fā)明采用聚賴氨酸作為三聯(lián)吡啶釕信號(hào)放大的連接骨架，體系穩(wěn)定，不易發(fā)生聚集且容易保存；DNA探針標(biāo)記的聚賴氨酸-三聯(lián)吡啶釕復(fù)合物性質(zhì)穩(wěn)定，便于修飾及儲(chǔ)存。該方法操作簡(jiǎn)單、快速、穩(wěn)定、可控，不僅適用于核酸檢測(cè)，也可作為免疫分析中抗體標(biāo)記的方法，以提高靈敏度。
【專利說明】基于聚合物電化學(xué)發(fā)光信號(hào)放大的核酸檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于核酸電化學(xué)檢測(cè)【技術(shù)領(lǐng)域】，特別涉及一種基于聚合物電化學(xué)發(fā)光信號(hào)放大的核酸檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]核酸電化學(xué)檢測(cè)技術(shù)是重要的檢測(cè)手段，廣泛運(yùn)用于免疫診斷、病原微生物篩查及環(huán)境監(jiān)控等領(lǐng)域。該方法以分子生物學(xué)技術(shù)為檢測(cè)基礎(chǔ)(常利用核酸擴(kuò)增技術(shù))、以電化學(xué)發(fā)光原理為支撐，旨在于構(gòu)建高靈敏度、快速及可靠的檢測(cè)方法。得益于電化學(xué)發(fā)光原理的優(yōu)越性，該方法具有較寬的檢測(cè)范圍、高靈敏度、反應(yīng)體系可控及高信噪比等特點(diǎn)。
[0003]然而，核酸電化學(xué)檢測(cè)技術(shù)以單個(gè)三聯(lián)吡啶釕為發(fā)光基團(tuán)。因此，建立一種多個(gè)三聯(lián)吡啶釕發(fā)光基團(tuán)，對(duì)于提高核酸電化學(xué)檢測(cè)技術(shù)的靈敏度具有積極作用。目前，電化學(xué)發(fā)光信號(hào)的放大常采用納米金放大技術(shù)，在單個(gè)膠體金表面標(biāo)記多個(gè)三聯(lián)吡啶釕發(fā)光基團(tuán)，以達(dá)到提聞檢測(cè)靈敏度的目的。
[0004]但是，納米金放大技術(shù)存在一些不足:(1)納米金放大技術(shù)以巰基與金球表面形成硫-金鍵，反應(yīng)過程復(fù)雜、耗時(shí)；(2)納米金放大技術(shù)在探針制備時(shí)，納米金表面常標(biāo)記多個(gè)DNA探針，且不可控，導(dǎo)致單個(gè)納米金球上標(biāo)記上多個(gè)DNA探針，因此，不能達(dá)到理想的放大效果；(3)納米金放大技術(shù)在標(biāo)記過程，常發(fā)生納米金聚集，標(biāo)記過程不穩(wěn)定且與納米金合成的質(zhì)量好壞直接相關(guān)。因此，該過程技術(shù)要求較高。終上所述，發(fā)展一種簡(jiǎn)單、快速、穩(wěn)定、可控的電化學(xué)發(fā)光信號(hào)放大技術(shù)，對(duì)于核酸電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)技術(shù)具有重要意義。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]為了克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)與不足，本發(fā)明的目的在于提供一種基于聚合物電化學(xué)發(fā)光信號(hào)放大的核酸檢測(cè)方法。本發(fā)明是將基于聚合物電化學(xué)發(fā)光信號(hào)放大技術(shù)運(yùn)用于核酸檢測(cè)，通過研究發(fā)現(xiàn)，有機(jī)多聚物(如聚賴氨酸)具有較好的物理及化學(xué)性質(zhì)，運(yùn)用到電化學(xué)發(fā)光信號(hào)放大領(lǐng)域，將具有以下優(yōu)點(diǎn):(I)分子量可控，可根據(jù)實(shí)際需求，選擇合適的分子量，以控制三聯(lián)吡啶釕的標(biāo)記量；(2)性質(zhì)穩(wěn)定，便于修飾及儲(chǔ)存，操作簡(jiǎn)單；(3)標(biāo)記可控，可實(shí)現(xiàn)聚賴氨酸與DNA探針按1:1的比例標(biāo)記。該方法簡(jiǎn)單、快速、穩(wěn)定、可控。
[0006]本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):一種基于聚合物電化學(xué)發(fā)光信號(hào)放大的核酸檢測(cè)方法，包括以下具體步驟:
[0007]( I)三聯(lián)吡啶釕的合成:
[0008]①稱取:二氯雙(2，2’-聯(lián)吡啶)釕(Ru(bpy)2Cl2) 0.05g, NaHCO30.05g，4_ 羧酸-2，2’ -聯(lián)吡啶 0.0375g ；
[0009]②加入IOmL體積分?jǐn)?shù)80%甲醇水溶液，混合液在硅油浴下回流；
[0010]③所得溶液在冰浴(冰水混合物)中冷卻2h ；
[0011 ] ④用lmol/L的H2SO4將pH值調(diào)到4.4 (精密pH試紙定標(biāo))，形成沉淀；
[0012]⑤形成的沉淀進(jìn)行過濾，收集濾液；[0013]⑥向⑤中所得濾液中加入3.125mL NaPF6溶液(2.5g NaPF6溶于12.5mL水中)，攪拌后置于4°C環(huán)境中揮發(fā)濾液，觀察晶體產(chǎn)生；可反復(fù)加入純甲醇，使其重結(jié)晶，收集所得結(jié)晶即為二(2，2’-聯(lián)吡啶)(4-羧酸-2，2’-聯(lián)吡啶)釕的二 (六氟磷酸鹽)(紫紅色)；
[0014](2)三聯(lián)吡啶釕的活化:(稱量是根據(jù)晶體量調(diào)整的)
[0015]①稱取:二環(huán)己基碳二亞胺(DCC) 1.1635g，N-羥基琥珀酰亞胺(NHS) 0.5947g ；
[0016]②攪拌條件下溶解于7.7568mL 二甲基甲酰胺(DMF)中，然后冰浴冷卻Ih ；
[0017]③加入0.1616g步驟(1)合成的二(2，2’_聯(lián)吡啶)(4_羧酸_2，2’-聯(lián)吡啶)釕的二 (六氟磷酸鹽)，混合物冰浴攪拌混勻；[0018]④室溫下密封振蕩；
[0019]⑤通過吸濾裝置除去所得沉淀，濾液中含有活性的釕配合物，即活化三聯(lián)吡啶釕；
[0020](3)聚賴氨酸-三聯(lián)吡啶釕復(fù)合物的制備:
[0021]①取一管聚賴氨酸固體粉末離心；
[0022]②打開管蓋,并加入75 μ L0.1M硼酸鈉,調(diào)整pH值至8.5,蓋上管蓋；
[0023]③充分上下振蕩5min，離心收集；
[0024]④加入30 μ L的步驟(2)⑤中所得到的活化三聯(lián)吡啶釕；
[0025]⑤室溫避光孵育12h ；
[0026]⑥用超濾管分離除去體系中的小分子化合物；
[0027]⑦離心，倒去濾液，加入0.5mL預(yù)冷無(wú)水乙醇，放入超低溫冰箱中Ih,用超濾管分離除去體系中的小分子化合物；
[0028]⑧離心，倒去濾液，加入ImL預(yù)冷體積分?jǐn)?shù)80%乙醇水溶液，放入超低溫冰箱中Ih,用超濾管分離除去體系中的小分子化合物；
[0029]⑨離心，倒去濾液，加入ImL預(yù)冷體積分?jǐn)?shù)80%乙醇水溶液，放入超低溫冰箱中Ih,用超濾管分離除去體系中的小分子化合物；
[0030]⑩離心，將所得沉淀，加100 μ L水稀釋，得到聚賴氨酸-三聯(lián)吡啶釕復(fù)合物，放入-20°C冰箱保存；
[0031](4) DNA探針標(biāo)記聚賴氨酸-三聯(lián)吡啶釕復(fù)合物:
[0032]該反應(yīng)體系中，將聚賴氨酸-三聯(lián)吡啶釕復(fù)合物、DNA探針及1-(3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(EDC)混勻，調(diào)整pH值至6 ;避光孵育；最后，用超濾管離心除去小分子化合物；得到DNA探針標(biāo)記的聚賴氨酸-三聯(lián)吡啶釕復(fù)合物，并用純水保存在-20°C冰箱；
[0033](5 )磁捕捉檢測(cè)目標(biāo)DNA序列:
[0034]本部分以傳統(tǒng)的磁捕捉及“sandwich”模型為基礎(chǔ)，構(gòu)建了一種以聚賴氨酸-三聯(lián)吡啶釕為信號(hào)放大基團(tuán)的核酸檢測(cè)方法；
[0035]( I )取生物素探針、靶序列溶解于水中，終濃度為10 μ M ;
[0036](II)構(gòu)建磁捕捉核酸檢測(cè)體系:體系總體積為IOOyL,生物素探針及聚賴氨酸-三聯(lián)吡啶釕復(fù)合物的終濃度為100nM，PBS緩沖液的終濃度為IX，加水補(bǔ)充至100 μ L ;
[0037](III)信號(hào)檢測(cè):將步驟(II)的產(chǎn)物，放入分析儀中檢測(cè)電化學(xué)發(fā)光信號(hào)。
[0038]步驟(1)②所述的回流的條件優(yōu)選為80°C下回流加熱IOh ；[0039]步驟(1)⑤中所述的過濾優(yōu)選為用濾紙過濾；
[0040]步驟(2)中所述的室溫優(yōu)選為20~30°C ；
[0041]步驟(2)④所述的振蕩的條件優(yōu)選為在1500r/min下振蕩5h ；
[0042]步驟(3)①所述的聚賴氨酸固體粉末優(yōu)選為5mg ；
[0043]步驟(3)①和步驟(3)③中所述的離心的條件優(yōu)選為12000r/min離心5min ；
[0044]步驟(3)②和步驟(4)所述的調(diào)整pH值優(yōu)選用稀鹽酸調(diào)整；
[0045]步驟(3)中所述的超低溫冰箱的溫度優(yōu)選為-60°C以下；
[0046]步驟(3)⑦、⑧、⑨、⑩中所述的離心的條件優(yōu)選為在4°C下，12000rpm離心20min ；
[0047]步驟(3)和步驟(4)中所述的超濾管的截留分子量?jī)?yōu)選為IOOKDa ;步驟(3)⑤和步驟(4)中所述的避光優(yōu)選為用黑膠布或錫箔紙進(jìn)行避光；
[0048]步驟(4)所述的將聚賴氨酸-三聯(lián)吡啶釕復(fù)合物、DNA探針、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺混勻優(yōu)選按照聚賴氨酸-三聯(lián)吡啶釕復(fù)合物:DNA探針:1_ (3-二甲氨基丙基)-3_乙基碳二亞胺為體積比1:10:2000的比例混勻；
[0049]步驟(4)中所述的避光孵育的條件優(yōu)選為37°C避光孵育12h ；
[0050]步驟(5)中所述的生物素探針優(yōu)選為DNA探針；
[0051]步驟(5) (III)所述的分析儀優(yōu)選為羅氏EleCSyS2010電化學(xué)發(fā)光全自動(dòng)免疫分析儀；
[0052]本發(fā)明相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)具有如下的優(yōu)點(diǎn):
[0053](I)本發(fā)明采用聚賴氨酸作為三聯(lián)吡啶釕信號(hào)放大的連接骨架，體系穩(wěn)定，不易發(fā)生聚集且容易保存。
[0054](2)本發(fā)明嚴(yán)格按照聚賴氨酸-三聯(lián)吡啶釕復(fù)合物:DNA探針=1:1的標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)記DNA探針，體系可控。
[0055](3)本發(fā)明的DNA探針標(biāo)記的聚賴氨酸-三聯(lián)吡啶釕復(fù)合物性質(zhì)穩(wěn)定，便于修飾及儲(chǔ)存，操作簡(jiǎn)單。
[0056](4)適用于核酸檢測(cè):該實(shí)驗(yàn)原理可用于DNA及RNA的檢測(cè)。
[0057](5)本發(fā)明亦可作為免疫分析中抗體標(biāo)記的方法，以提高靈敏度。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0058]圖1為聚合物/電化學(xué)發(fā)光探針的合成制備過程圖。
[0059]圖2為實(shí)施例1獲得的活化三聯(lián)吡啶釕的吸收光譜圖。
[0060]圖3為實(shí)施例2獲得的聚賴氨酸-三聯(lián)吡啶釕復(fù)合物的吸收光譜圖。
[0061]圖4為實(shí)施例3的磁捕捉核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果圖。
【具體實(shí)施方式】
[0062]下面結(jié)合實(shí)施例及附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。
[0063]實(shí)施例1三聯(lián)吡啶釕的合成及活化
[0064]( I)三聯(lián)吡啶釕的合成過程如下:[0065]①電子天平稱取:二氯雙(2，2’-聯(lián)吡啶)釕(Ru(bpy)2Cl2)(CAS: 15746-57-3)
0.05g,NaHCO30.05g，2, 2’ -聯(lián)吡啶 _4，4’ 二羧酸(dcbpy)(CAS:6813-38_3)0.0375g 于 50mL
圓底燒瓶中。
[0066]②加入IOmL體積分?jǐn)?shù)80%甲醇水溶液(MeOH)，混合液在硅油浴80°C下回流加熱10h。
[0067]③所得溶液在冰浴(冰水混合物)中冷卻2h。
[0068]④用lmol/L的H2SO4將pH值調(diào)到4.4 (精密pH試紙定標(biāo))，形成沉淀。
[0069]⑤形成的沉淀用濾紙過濾，收集濾液。
[0070]⑥向⑤中所得濾液中加入3.125mL NaPF6 (CAS:21324-39-0)溶液(2.5gNaPF6 溶于12.5mL水中)，攪拌后置于冰箱4°C環(huán)境中揮發(fā)濾液，觀察晶體產(chǎn)生?？煞磸?fù)加入純甲醇，使其重結(jié)晶，收集所得結(jié)晶即為Ru(bpy)2(dcbpy) (PF6)2 (紫紅色)。
[0071](2)三聯(lián)吡啶釕的活化:
[0072]①電子天平稱取:(稱量是根據(jù)晶體量調(diào)整的)
[0073]二環(huán)己基碳二亞胺(DCC) (CAS:538-75-0) 1.1635g，N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)(CAS:6066-82-6)0.5947g ；
[0074]②攪拌條件下溶解于7.7568mL 二甲基甲酰胺(DMF)中，然后冰浴冷卻Ih。
[0075]③加入0.1616g步驟(1)合成的`二(2，2’_聯(lián)吡啶)(4_羧酸_2，2’-聯(lián)吡啶)釕的二 (六氟磷酸鹽)，混合物冰浴攪拌混勻。
[0076]④室溫下密封振蕩5h。
[0077]⑤通過吸濾裝置除去所得沉淀，濾液中含有活性的釕配合物，即活化三聯(lián)吡啶釕；可用于標(biāo)記DNA、蛋白或抗體。
[0078]將所得活化三聯(lián)吡啶釕用吸收光譜去表征質(zhì)量的好壞；活化三聯(lián)吡啶釕在480nm處具有明顯的吸收峰，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2所示。
[0079]實(shí)施例2聚賴氨酸-三聯(lián)吡啶釕復(fù)合物的制備:
[0080]①取一管聚賴氨酸固體粉末(5mg)12000r/min離心5min，使粘在管壁上的聚賴氨酸固體粉末落入管底。
[0081]②輕輕的打開管蓋，并迅速加入75 μ L0.1M硼酸鈉(用稀鹽酸調(diào)整pH值至8.5)，立
即蓋上管蓋。
[0082]③充分上下振蕩5min, 12000r/min離心5min收集,使粘在管壁上的液體落入管。
[0083]④加入30 μ L實(shí)施例1得到的活化三聯(lián)吡啶釕。
[0084]⑤纏上黑膠布，置離心管架上室溫避光孵育12h。
[0085]⑥用超濾管(IOOKDa)分離除去體系中的小分子化合物。
[0086]⑦離心，12000rpm,4?, 20min。
[0087]⑧倒去橙色溶液，加入0.5mL預(yù)冷無(wú)水乙醇，放入超低溫冰箱中l(wèi)h，用超濾管(IOOKDa)分離除去體系中的小分子化合物。
[0088]⑨離心，12000rpm,4?, 20min。
[0089]⑩倒去淺黃色溶液，加入ImL預(yù)冷體積分?jǐn)?shù)80%乙醇水溶液，放入超低溫冰箱中l(wèi)h，用超濾管(IOOKDa)分離除去體系中的小分子化合物。[0090]
【權(quán)利要求】
1.一種基于聚合物電化學(xué)發(fā)光信號(hào)放大的核酸檢測(cè)方法，其特征在于包括以下具體步驟: (1)三聯(lián)吡啶釕的合成: ①稱取:二氯雙(2，2’-聯(lián)吡啶)釕0.05g, NaHCO30.05g, 4-羧酸-2，2’ -聯(lián)吡啶.0.0375g ； ②加入IOmL體積分?jǐn)?shù)80%甲醇水溶液，混合液在硅油浴下回流； ③所得溶液在冰浴中冷卻2h； ④用lmol/L的H2SO4將pH值調(diào)到4.4，形成沉淀； ⑤形成的沉淀進(jìn)行過濾，收集濾液； ⑥向⑤中所得濾液中加入3.125mL NaPF6溶液，攪拌后置于4°C環(huán)境中揮發(fā)濾液，觀察晶體產(chǎn)生；收集所得結(jié)晶即為二(2，2’ -聯(lián)吡啶)(4-羧酸-2，2’ -聯(lián)吡啶)釕的二(六氟磷酸鹽)； (2)三聯(lián)吡啶釕的活化: ①稱取:二環(huán)己基碳二亞胺1.1635g, N-羥基琥拍酰亞胺0.5947g ； ②攪拌條件下溶解于7.7568mL 二甲基甲酰胺中，然后冰浴冷卻Ih ； ③加入0.1616g步驟(1)合成的二(2，2’ -聯(lián)吡啶)(4-羧酸-2，2’ -聯(lián)吡啶)釕的二(六氟磷酸鹽)，混合物冰浴攪拌混勻； ④室溫下密封振蕩； ⑤通過吸濾裝置除去所得沉淀，濾液中含有活性的釕配合物，即活化三聯(lián)吡啶釕； (3)聚賴氨酸-三聯(lián)吡啶釕復(fù)合物的制備: ①取一管聚賴氨酸固體粉末離心； ②打開管蓋，并加入75μ L0.1M硼酸鈉,調(diào)整pH值至8.5,蓋上管蓋； ③充分上下振蕩5min,離心收集； ④加入30μ L的步驟(2)⑤中所得到的活化三聯(lián)吡啶釕； ⑤室溫避光孵育12h； ⑥用超濾管分離除去體系中的小分子化合物； ⑦離心，倒去濾液，加入0.5mL預(yù)冷無(wú)水乙醇，放入超低溫冰箱中l(wèi)h，用超濾管分離除去體系中的小分子化合物； ⑧離心，倒去濾液，加入ImL預(yù)冷體積分?jǐn)?shù)80%乙醇水溶液，放入超低溫冰箱中Ih,用超濾管分離除去體系中的小分子化合物； ⑨離心，倒去濾液，加入ImL預(yù)冷體積分?jǐn)?shù)80%乙醇水溶液，放入超低溫冰箱中Ih,用超濾管分離除去體系中的小分子化合物； ⑩離心，將所得沉淀，加100μ L水稀釋，得到聚賴氨酸-三聯(lián)吡啶釕復(fù)合物，放入-20°C保存； (4)DNA探針標(biāo)記聚賴氨酸-三聯(lián)吡啶釕復(fù)合物: 該反應(yīng)體系中，將聚賴氨酸-三聯(lián)吡啶釕復(fù)合物、DNA探針及1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞 胺混勻，調(diào)整pH值至6 ;避光孵育；最后，用超濾管離心除去小分子化合物；得到DNA探針標(biāo)記的聚賴氨酸-三聯(lián)吡啶釕復(fù)合物，并用純水保存在_20°C ； (5 )磁捕捉檢測(cè)目標(biāo)DNA序列:以傳統(tǒng)的磁捕捉及“sandwich”模型為基礎(chǔ)，構(gòu)建了一種以聚賴氨酸-三聯(lián)吡啶釕為信號(hào)放大基團(tuán)的核酸檢測(cè)方法； (I )取生物素探針、靶序列溶解于水中，終濃度為10 μ M ; (II)構(gòu)建磁捕捉核酸檢測(cè)體系:體系總體積為100μ L，生物素探針及聚賴氨酸的終濃度為IOOnM, PBS緩沖液的終濃度為I X，加水補(bǔ)充至100 μ L ； (III)信號(hào)檢測(cè):將步驟(II)的產(chǎn)物，放入分析儀中檢測(cè)電化學(xué)發(fā)光信號(hào)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于聚合物電化學(xué)發(fā)光信號(hào)放大的核酸檢測(cè)方法，其特征在于:步驟(4)所述的將聚賴氨酸-三聯(lián)吡啶釕復(fù)合物、DNA探針、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺混勻按照聚賴氨酸-三聯(lián)吡啶釕復(fù)合物:DNA探針:1_ (3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺為體積比1:10:2000的比例混勻。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于聚合物電化學(xué)發(fā)光信號(hào)放大的核酸檢測(cè)方法，其特征在于:步驟(2)中所述的活化三聯(lián)吡啶釕用于標(biāo)記DNA、蛋白或抗體。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于聚合物電化學(xué)發(fā)光信號(hào)放大的核酸檢測(cè)方法，其特征在于:步驟(5)中所述的生物素探針為DNA探針。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于聚合物電化學(xué)發(fā)光信號(hào)放大的核酸檢測(cè)方法，其特征在于:步驟(3)和步驟(4)中所述的超濾管的截留分子量為lOOKDa。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于聚合物電化學(xué)發(fā)光信號(hào)放大的核酸檢測(cè)方法，其特征在于:步驟(1)②所述的回流的條件為80°C下回流加熱10h。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述 的基于聚合物電化學(xué)發(fā)光信號(hào)放大的核酸檢測(cè)方法，其特征在于: 步驟(1)⑥所述的NaPF6溶液是將2.5g NaPF6溶于12.5mL水中得到的； 步驟(1)⑤中所述的過濾為用濾紙過濾； 步驟(2)中所述的室溫為20~30°C ； 步驟(2)④所述的振蕩的條件為在1500r/min下振蕩5h。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于聚合物電化學(xué)發(fā)光信號(hào)放大的核酸檢測(cè)方法，其特征在于:步驟(3)①所述的聚賴氨酸固體粉末為5mg ； 步驟(3)①和步驟(3)③中所述的離心的條件為12000r/min離心5min ； 步驟(3)②和步驟(4)所述的調(diào)整pH值用稀鹽酸調(diào)整。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于聚合物電化學(xué)發(fā)光信號(hào)放大的核酸檢測(cè)方法，其特征在于:步驟(3)⑦、⑧、⑨、⑩中所述的離心的條件為在4°C下，12000rpm離心20min。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于聚合物電化學(xué)發(fā)光信號(hào)放大的核酸檢測(cè)方法，其特征在于:步驟(3)⑤和步驟(4)中所述的避光為用黑膠布或錫箔紙進(jìn)行避光； 步驟(4)中所述的避光孵育的條件為37°C避光孵育12h ； 步驟(5) (III)所述的分析儀為羅氏Elecsys2010電化學(xué)發(fā)光全自動(dòng)免疫分析儀。
【文檔編號(hào)】C12Q1/68GK103695551SQ201310721893
【公開日】2014年4月2日 申請(qǐng)日期:2013年12月24日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月24日
【發(fā)明者】邢達(dá), 周小明, 廖玉輝 申請(qǐng)人:華南師范大學(xué)