酶法合成辛伐他汀的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種用酶法合成辛伐他汀的制備方法，包括將洛伐他汀進(jìn)行堿水解、制得的堿水解產(chǎn)物在固定化水解酶存在下進(jìn)行酶水解，其中所述的固定化水解酶是將洛伐他汀水解酶固定到多孔樹脂上后的復(fù)合體，再將制得的酶水解產(chǎn)物與2,2-二甲基丁?；?S-丙酸甲酯在固定化酰化酶存在下進(jìn)行?；磻?yīng)，其中所述的固定化?；甘菍⒙宸ニ□；腹潭ǖ蕉嗫讟渲虾蟮膹?fù)合體，以及將制得的?；a(chǎn)物進(jìn)行環(huán)合得到辛伐他汀等步驟。本發(fā)明方法生產(chǎn)的辛伐他汀，總摩爾收率達(dá)到80％，產(chǎn)品總雜≤0.5%，單個雜質(zhì)≤0.2%，洛伐他汀≤0.2%，工藝顯著優(yōu)于現(xiàn)有辛伐他汀生產(chǎn)工藝。
【專利說明】酶法合成辛伐他汀的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及降血脂類藥物辛伐他汀的合成方法，具體地說，提供一種酶法合成辛伐他汀的制備方法。屬于藥物領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]辛伐他汀為羥甲基戊二酰輔酶A (HMG — CoA)還原酶抑制劑，臨床主要用于治療高膽固醇和高甘油三酯血癥。1988年該藥首先在瑞典上市，1995年已在70多個國家廣泛應(yīng)用。近年來發(fā)現(xiàn)除調(diào)血脂作用外，它還具有其他方面的作用，如抗氧化、抗炎、抑制細(xì)胞增殖、促進(jìn)骨合成代謝、治療心衰等作用。現(xiàn)有的辛伐他汀生產(chǎn)工藝，如CN1290261A、CN1612872A、CN1493570A等，主要是化學(xué)合成法，不僅反應(yīng)步驟多、復(fù)雜，而且產(chǎn)品雜質(zhì)很高，工藝對環(huán)境污染嚴(yán)重。CN102703539A公開了由洛伐他汀經(jīng)包含酶促水解反應(yīng)和酶促?；磻?yīng)步驟的工藝制得辛伐他汀的方法以及該方法中所用到的酶，然而，該方法得到的產(chǎn)物中副產(chǎn)物較多，制得的辛伐他汀產(chǎn)品中雜質(zhì)個數(shù)和含量難于滿足藥用級辛伐他汀原料質(zhì)量要求，而且方法中所用的酶以及一些試劑或原料在國內(nèi)不易獲得，工藝成本比較高，難于產(chǎn)業(yè)化。

【發(fā)明內(nèi)容】
[0003]本發(fā)明的目的就是針對上述現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，提供了一種減少反應(yīng)步驟、減少對環(huán)境的污染、提高產(chǎn)品質(zhì)量的制備方法。
[0004]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的技術(shù)方案為用酶法合成辛伐他汀的制備方法，具體如下:
[0005]本發(fā)明提供了一種用酶法合成辛伐他汀的方法，其特征在于包括如下步驟:
[0006]( I)將洛伐他汀進(jìn)行堿水解；
[0007](2)將步驟(1)制得的堿水解產(chǎn)物在固定化水解酶存在下進(jìn)行酶水解，其中所述的固定化水解酶是將洛伐他汀水解酶固定到多孔樹脂上后的復(fù)合體；
[0008](3)將步驟(2)制得的酶水解產(chǎn)物與2，2- 二甲基丁?；?S-丙酸甲酯在固定化?；复嬖谙逻M(jìn)行酰化反應(yīng)，其中所述的固定化酰化酶是將洛伐他汀?；腹潭ǖ蕉嗫讟渲虾蟮膹?fù)合體；
[0009](4)將步驟(3)制得的?；a(chǎn)物進(jìn)行環(huán)合，得到辛伐他汀。
[0010]上述所述的方法，其中步驟(1)中水解反應(yīng)至洛伐他汀殘留< 0.5%時，反應(yīng)產(chǎn)物不經(jīng)分離進(jìn)行下一步的酶水解反應(yīng)。
[0011]上述所述的方法，其中步驟(2)或(3)中的反應(yīng)溫度為室溫至40°C，pH為8.5~
9.5 ;優(yōu)選所述的反應(yīng)溫度為35°C，pH為8.9~9.1。
[0012]上述所述的方法，其中步驟(2)酶水解反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)產(chǎn)物過濾分離出所述的固定化水解酶，濾液不經(jīng)分離進(jìn)行下一步的?；磻?yīng)。
[0013]上述所述的方法，其中步驟(3)?；磻?yīng)結(jié)束后，反應(yīng)產(chǎn)物過濾分離出所述的固定化?；?，濾液冷卻后，得到?；a(chǎn)物辛伐他汀酸或其鹽。
[0014]上述所述的方法，其中步驟(4)中辛伐他汀酸或其鹽在有機(jī)溶劑中進(jìn)行加熱回流，得到辛伐他汀。
[0015]上述所述的方法，其中步驟(2)或(3)中用濃氨水或NH4/NH4C1溶液調(diào)節(jié)pH。
[0016]上述所述的方法，其中步驟(2)或(3)中，所用的固定化水解酶或固定化酰化酶的用量與洛伐他汀重量相同。
[0017]作為本發(fā)明一個最優(yōu)選實(shí)施方式，所述的方法中:
[0018]所述步驟(1)為:將洛伐他汀加入不銹鋼反應(yīng)罐中，同時加入純化水和氫氧化鈉，加入純化水的量與洛伐他汀的重量相等，加入氫氧化鈉的量是洛伐他汀重量的1/15，攪拌，反應(yīng)至洛伐他汀殘留< 0.5%，得到的反應(yīng)混合溶液進(jìn)入下一步驟；
[0019]所述步驟(2)為:將步驟(1)得到的反應(yīng)混合液降溫至30°C，加入NH4/NH4C1,調(diào)PH8.9-9.1,升溫至35°C，加入所述的固定化水解酶，固定化水解酶的用量與洛伐他汀重量相等，待水解反應(yīng)結(jié)束后過濾分離出固定化水解酶，濾液進(jìn)入下一步驟；
[0020]所述步驟(3)為:將步驟(2)得到的濾液加入不銹鋼反應(yīng)罐中，降溫至25°C，加入所述的固定化?；?，固定化?；赣昧颗c洛伐他汀重量相等，攪拌后得到的混合物中加入2，2- 二甲基丁?；?S-丙酸甲酯，2，2- 二甲基丁酰基-S-丙酸甲酯用量與洛伐他汀重量相等，得到的混合物保持25°C恒溫，用濃氨水調(diào)整并保持PH8.9-9.1，直到酰化反應(yīng)結(jié)束后，得到的反應(yīng)混合物進(jìn)行過濾，分離出固定化酰化酶，濾液進(jìn)入下一步驟；
[0021]所述步驟(4)為:將步驟(3)得到的濾液降溫至10°C，得到的產(chǎn)物依次用稀氨水和乙酸乙酯洗滌，過濾得白色粉末即為辛伐他汀銨鹽，將制得的辛伐他汀銨鹽加入不銹鋼反應(yīng)罐中，加入甲苯，加入甲苯的量是加入辛伐他汀銨鹽重量的20倍，攪拌，加熱至回流，得到的混合物冷卻至35°C，加入活性炭，加入活性炭的重量是加入辛伐他汀銨鹽重量的I /10，得到的混合物過濾，分離出活性炭，得到的濾液減壓濃縮，溫度<65°C，當(dāng)濃縮至甲苯溶液粘稠時，濃縮結(jié)束，濃縮液降溫至8°C，放置后結(jié)晶，即為辛伐他汀。
[0022]其中，上述所述的方法，其中所述的步驟(4)還包括制得的辛伐他汀粗品純化步驟，所述純化步驟為:將得到的辛伐他汀粗品加入不銹鋼反應(yīng)罐中，加入乙醇，加入乙醇的量是加入辛伐他汀粗品重量的3.5倍，加入活性炭，加入活性炭的重量是加入辛伐他汀粗品重量的I / 20，攪拌并加熱回流，趁熱過濾，分離出活性炭，得到的濾液降溫至55°C，向?yàn)V液中滴加純化水，當(dāng)濾液出現(xiàn)渾濁而無固體析出時，結(jié)束滴加純化水，得到的混合物降溫至5°C，放置后析出晶體，過濾得到結(jié)晶即辛伐他汀精品，干燥后得辛伐他汀成品。
[0023]本發(fā)明上述所述方法中，所用的所述的固定化水解酶和所述的固定化?；?，優(yōu)選使用石藥集團(tuán)有限公司商業(yè)出售的洛伐他汀固定化水解酶(是將洛伐他汀水解酶固定到多孔樹脂上后形成的復(fù)合體)和洛伐他汀固定化?；?是將洛伐他汀?；腹潭ǖ蕉嗫讟渲虾笮纬傻膹?fù)合體)。
[0024]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，由洛伐他汀為原料，通過用所述的固定化水解酶進(jìn)行水解，再將水解產(chǎn)物和2，2- 二甲基丁?；?S-丙酸甲酯用所述的固定化?；高M(jìn)行?；?，不僅大大減少了現(xiàn)有技術(shù)的反應(yīng)步驟，而且大大降低了制得的辛伐他汀產(chǎn)品中的雜質(zhì)個數(shù)和雜質(zhì)含量，生產(chǎn)的辛伐他汀`符合《中國藥典》的要求，且生產(chǎn)工藝簡單易操作、反應(yīng)條件溫和、安全、環(huán)保。本發(fā)明所用的固定化水解酶和固定化酰化酶，國內(nèi)可以商業(yè)購得，成本較低，而且容易獲得。目前，現(xiàn)有技術(shù)生產(chǎn)得到的辛伐他汀產(chǎn)品，其產(chǎn)品總雜< 1.0%，單個雜質(zhì)(0.4%，洛伐他汀< 0.5%，生產(chǎn)辛伐他汀的總摩爾收率不到80%。而本發(fā)明生產(chǎn)的辛伐他汀產(chǎn)品，其產(chǎn)品總雜< 0.5%，單個雜質(zhì)< 0.2%，洛伐他汀< 0.2%，產(chǎn)品的純度和質(zhì)量顯著優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)生產(chǎn)得到的辛伐他汀，而且本發(fā)明生產(chǎn)辛伐他汀的總摩爾收率超過80 %，生產(chǎn)工藝中所用的酶和試劑可以在國內(nèi)商業(yè)購得，成本較低，因此工藝在產(chǎn)業(yè)上更有優(yōu)勢和顯著進(jìn)步。
【具體實(shí)施方式】
[0025]實(shí)施例1
[0026]用酶法合成辛伐他汀的制備方法，包括以下步驟:
[0027]I)將洛伐他汀加入不銹鋼反應(yīng)罐中，同時加入純化水和氫氧化鈉，開攪拌，升溫600C，30分鐘，加入純化水的量與洛伐他汀的重量相等，加入氫氧化鈉的量是洛伐他汀重量的 1/15 ；
[0028]2)將步驟I)得到的混合溶液，取樣，檢測洛伐他汀殘留，洛伐他汀殘留< 0.5%時，進(jìn)入下一步驟；
[0029]3)將步驟2)得到的溶液降溫至30°C ；
[0030]4)將步驟3)得到的溶液加入20mM的NH4/NH4CL，調(diào)PH8.9-9.1,升溫至35°C ；
[0031]5)將步驟4)得到的濾液加入洛伐他汀固定化水解酶(購自石藥集團(tuán)有限公司)，固定化水解酶的加量與洛伐他汀重量相等；
[0032]6)將步驟5)得到的混合物進(jìn)行化驗(yàn)，直到水解結(jié)束；
[0033]7)將步驟6)得到的混合物進(jìn)行過濾，分離出固定化水解酶，濾液進(jìn)入下一步驟；
[0034]8)將步驟7)得到濾液加入不銹鋼反應(yīng)罐中，降溫至25°C，加入洛伐他汀固定化酰化酶(購自石藥集團(tuán)有限公司)，開攪拌，固定化?；讣恿颗c洛伐他汀重量相等；
[0035]9)將步驟8)得到的混合物加入2，2- 二甲基丁?；?S-丙酸甲酯，2，2_ 二甲基丁?；?S-丙酸甲酯加量與洛伐他汀重量相等；
[0036]10)將步驟9)得到的混合物保持25°C恒溫，用濃氨水調(diào)整并保持PH8.9-9.1 ；11)將步驟10)得到的混合物，進(jìn)行化驗(yàn)，直到?；Y(jié)束；
[0037]12)將步驟11)得到的混合物進(jìn)行過濾，分離出固定化?；?，濾液進(jìn)入下一步驟；
[0038]13)將步驟12)得到的濾液降溫至10°C，保持2小時；
[0039]14)將步驟13)得到的產(chǎn)物用稀氨水洗滌，過濾得白色粉末；
[0040]15)將步驟14)得到的產(chǎn)物用乙酸乙酯洗滌，過濾得白色粉末；
[0041]16)重復(fù)步驟14)和步驟15)；
[0042]17)將步驟16)得到的產(chǎn)物干燥，得到白色粉末，即辛伐他汀銨鹽；
[0043]18)將步驟17)得到的辛伐他汀銨鹽加入不銹鋼反應(yīng)罐中，同時向不銹鋼反應(yīng)罐中加入甲苯，加入甲苯的量是加入辛伐他汀銨鹽重量的20倍，開攪拌；
[0044]19)將步驟18)得到的混合物加熱至回流，3小時；
[0045]20)將步驟19)得到的混合物冷卻至35°C，加入活性炭，加入活性炭的重量是加入辛伐他汀銨鹽重量的I / 10，攪拌30分鐘；[0046]21)將步驟20)得到的混合物過濾，分離出活性炭，得濾液；
[0047]22)將步驟21)得到的濾液減壓濃縮，溫度≤65°C，當(dāng)濃縮至甲苯溶液粘稠時，濃縮結(jié)束；
[0048]23)將步驟22)得到的甲苯濃縮液降溫至8°C，2小時；
[0049]24)將步驟23)得到的混合物過濾，得結(jié)晶即辛伐他汀粗品；
[0050]25)將步驟24)得到的辛伐他汀粗品加入不銹鋼反應(yīng)罐中，同時向不銹鋼反應(yīng)罐中加入乙醇，加入乙醇的量是加入辛伐他汀粗品重量的3.5倍，加入活性炭，加入活性炭的重量是加入辛伐他汀粗品重量的1 / 20，開攪拌；
[0051]26)將步驟25)得到的混合物加熱回流30分鐘，趁熱過濾，分離出活性炭，得濾液；
[0052]27)將步驟26)得到的濾液降溫至55°C，向?yàn)V液中滴加純化水，當(dāng)濾液出現(xiàn)渾濁而無固體析出時,結(jié)束滴加純化水；
[0053]28)將步驟27)得到的混合物降溫至5°C，5小時；
[0054]29)將步驟28)得到的混合物過濾，得到結(jié)晶即辛伐他汀精品；
[0055]30)將步驟29)得到的辛伐他汀精品干燥，得辛伐他汀成品。
[0056]按上述生產(chǎn)工藝生產(chǎn)三批辛伐他汀，三批產(chǎn)品數(shù)據(jù)如表1。
[0057]表1實(shí)施例1方法生產(chǎn)的辛伐他汀三批產(chǎn)品數(shù)據(jù)
[0058]
【權(quán)利要求】
1.一種用酶法合成辛伐他汀的方法，其特征在于包括如下步驟: (1)將洛伐他汀進(jìn)行堿水解； (2)將步驟(1)制得的堿水解產(chǎn)物在固定化水解酶存在下進(jìn)行酶水解，其中所述的固定化水解酶是將洛伐他汀水解酶固定到多孔樹脂上后的復(fù)合體； (3)將步驟(2)制得的酶水解產(chǎn)物與2，2-二甲基丁?；?S-丙酸甲酯在固定化酰化酶存在下進(jìn)行?；磻?yīng)，其中所述的固定化?；甘菍⒙宸ニ□；腹潭ǖ蕉嗫讟渲虾蟮膹?fù)合體； (4)將步驟(3)制得的?；a(chǎn)物進(jìn)行環(huán)合，得到辛伐他汀。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟(1)中水解反應(yīng)至洛伐他汀殘留<0.5%時，反應(yīng)產(chǎn)物不經(jīng)分離進(jìn)行下一步的酶水解反應(yīng)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1一 2所述的方法，其中步驟(2)或(3)中的反應(yīng)溫度為室溫至40°C，pH為8.5~9.5 ;優(yōu)選所述的反應(yīng)溫度為35°C，pH為8.9~9.1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1一 3所述的方法，其中步驟(2)酶水解反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)產(chǎn)物過濾分離出所述的固定化水解酶，濾液不經(jīng)分離進(jìn)行下一步的酰化反應(yīng)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1一 4所述的方法，其中步驟(3)?；磻?yīng)結(jié)束后，反應(yīng)產(chǎn)物過濾分離出所述的固定化酰化酶，濾液冷卻后，得到?；a(chǎn)物辛伐他汀酸或其鹽。
6.根據(jù)權(quán)利要求1一 5所述的方法，其中步驟(4)中辛伐他汀酸或其鹽在有機(jī)溶劑中進(jìn)行加熱回流，得到辛伐他汀。
7.根據(jù)權(quán)利要求1一 6所述的方法，其中步驟(2)或(3)中用濃氨水或NH4/NH4C1溶液調(diào)節(jié)pH。
8.根據(jù)權(quán)利要求1一 7所述的方法，其中步驟(2)或(3)中，所用的固定化水解酶或固定化酰化酶的用量與洛伐他汀重量相同。
9.根據(jù)權(quán)利要求1一 8所述的方法，其中: 所述步驟(1)為:將洛伐他汀加入不銹鋼反應(yīng)罐中，同時加入純化水和氫氧化鈉，加入純化水的量與洛伐他汀的重量相等，加入氫氧化鈉的量是洛伐他汀重量的1/15，攪拌，反應(yīng)至洛伐他汀殘留< 0.5%，得到的反應(yīng)混合溶液進(jìn)入下一步驟； 所述步驟(2)為:將步驟(1)得到的反應(yīng)混合液降溫至30°C，加入NH4/NH4C1，調(diào)PH8.9-9.1,升溫至35°C，加入所述的固定化水解酶，固定化水解酶的用量與洛伐他汀重量相等，待水解反應(yīng)結(jié)束后過濾分離出固定化水解酶，濾液進(jìn)入下一步驟； 所述步驟(3)為:將步驟(2)得到的濾液加入不銹鋼反應(yīng)罐中，降溫至25°C，加入所述的固定化?；?，固定化?；赣昧颗c洛伐他汀重量相等，攪拌后得到的混合物中加入2，2- 二甲基丁?；?S-丙酸甲酯，2，2- 二甲基丁?；?S-丙酸甲酯用量與洛伐他汀重量相等，得到的混合物保持25°C恒溫，用濃氨水調(diào)整并保持PH8.9-9.1，直到?；磻?yīng)結(jié)束后，得到的反應(yīng)混合物進(jìn)行過濾，分離出固定化酰化酶，濾液進(jìn)入下一步驟； 所述步驟(4)為:將步驟(3)得到的濾液降溫至10°C，得到的產(chǎn)物依次用稀氨水和乙酸乙酯洗滌，過濾得白色粉末即為辛伐他汀銨鹽，將制得的辛伐他汀銨鹽加入不銹鋼反應(yīng)罐中，加入甲苯，加入甲苯的量是加入辛伐他汀銨鹽重量的20倍，攪拌，加熱至回流，得到的混合物冷卻至35°C，加入活性炭，加入活性炭的重量是加入辛伐他汀銨鹽重量的I / 10，得到的混合物過濾，分離出活性炭，得到的濾液減壓濃縮，溫度< 65°C，當(dāng)濃縮至甲苯溶液粘稠時，濃縮結(jié)束，濃縮液降溫至8°C，放置后結(jié)晶，即為辛伐他汀。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述的步驟(4)還包括制得的辛伐他汀粗品純化步驟，所述純化步驟為:將得到的辛伐他汀粗品加入不銹鋼反應(yīng)罐中，加入乙醇，加入乙醇的量是加入辛伐他汀粗品重量的3.5倍，加入活性炭，加入活性炭的重量是加入辛伐他汀粗品重量的I / 20，攪拌并加熱回流，趁熱過濾，分離出活性炭，得到的濾液降溫至55°C，向?yàn)V液中滴加純化水，當(dāng)濾液出現(xiàn)渾濁而無固體析出時，結(jié)束滴加純化水，得到的混合物降溫至5°C，放置后析出晶體，過濾`得到結(jié)晶即辛伐他汀精品，干燥后得辛伐他汀成品。
【文檔編號】C12P17/06GK103725726SQ201310721674
【公開日】2014年4月16日 申請日期:2013年12月24日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月24日
【發(fā)明者】葛祥斌, 李賢坤, 楊俊發(fā), 馬金鳳, 張健 申請人:煙臺只楚藥業(yè)有限公司