專利名稱：一種快速檢測展青霉素的試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及生物檢測領(lǐng)域，特別是涉及一種快速檢測展青霉素的試劑盒。
背景技術(shù)：
展青霉素(Patulin，Pat)是曲霉、青霉和絲衣霉產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物，對(duì)動(dòng)物有致畸、致突變和致癌性，廣泛存在于食品和飼料中，展青霉素對(duì)動(dòng)物的危害引起了人們的注意。展青霉素主要污染蘋果、山楂及其果汁制品，并且已成為判斷蘋果果汁質(zhì)量的一個(gè)重要指標(biāo)。展青霉素污染物被認(rèn)為是當(dāng)今世界危及人類食品安全的五大毒素之一。中國和歐盟等國家規(guī)定蘋果、山植制品中展青霉素最聞允許量為50 μ g/kg。目前，展青霉素的檢測方法有薄層色譜法(TLC)、氣相色譜法(GC)、高效液相色譜法(HPLC)等，雖然靈敏度高，但是樣本前處理及測定操作繁瑣，費(fèi)用高，不利于推廣應(yīng)用； 而酶聯(lián)免疫檢測法，雖然檢出限較低，但檢測前、后都需要做必要的儀器清洗及保養(yǎng)工作，檢測時(shí)間長，并且要求本領(lǐng)域?qū)I(yè)技術(shù)人員來操作。免疫膠體金技術(shù)(Immunogold labelling techique)是上世紀(jì)80年代繼突光素、放射性同位素和酶三大標(biāo)記技術(shù)后發(fā)展起來的固相標(biāo)記免疫測定技術(shù)。該技術(shù)主要利用了金顆粒具有高電子密度的特性，當(dāng)這些標(biāo)記物在相應(yīng)的配體處大量聚集時(shí)，形成肉眼可見的紅色或粉紅色斑點(diǎn)，因而用于定性或半定量的快速免疫檢測方法中?？焖僭\斷試紙條是20世紀(jì)90年代以來在單克隆抗體技術(shù)、膠體金免疫層析技術(shù)和新型層析材料基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一項(xiàng)新型體外診斷技術(shù)，近年來發(fā)展迅速，在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域特別是醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中得到了廣泛應(yīng)用。該技術(shù)主要是將特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在硝酸纖維膜上，膠體金標(biāo)記試劑吸附在結(jié)合墊上，當(dāng)待測樣品加到試紙條一端的樣品墊上后，通過毛細(xì)作用向前移動(dòng)，溶解結(jié)合墊上的膠體金標(biāo)記試劑后相互反應(yīng)，再移動(dòng)至固定的抗原或抗體區(qū)域時(shí)，待測物金標(biāo)試劑復(fù)合物與之發(fā)生特異性結(jié)合而被截留，膠體金標(biāo)記聚集在檢測帶上，可通過目測得到直觀的顯色結(jié)果。而游離的標(biāo)記物則越過檢測帶，從而達(dá)到與檢測物自動(dòng)分離的目的。競爭抑制法可用于測定抗原或抗體，以測定抗原為例，其原理為標(biāo)本中的受檢抗原和固相的包被抗原競爭與標(biāo)記抗體結(jié)合，當(dāng)標(biāo)本中的受檢抗原的量大于等于試劑的閾值，標(biāo)記抗體則不會(huì)與固相的包被抗原結(jié)合；若標(biāo)本中無受檢抗原，則標(biāo)記抗體直接與固相的包被抗原結(jié)合。免疫膠體金層析技術(shù)操作簡單、快速、靈敏和特異性好，用于展青霉素的快速檢測，此項(xiàng)技術(shù)雖然是一種較為成熟的技術(shù)，但膠體金試紙條容易受到污染，不好保存，使得在檢測和使用觀察過程中存在足多不便。

實(shí)用新型內(nèi)容為解決上述領(lǐng)域的需求和空白，本實(shí)用新型旨在提供一種快速檢測展青霉素的試劑盒，用于果品類食品中展青霉素的檢測，本實(shí)用新型試劑盒采用競爭抑制法和免疫膠體金技術(shù)相結(jié)合快速檢測展青霉素。一種快速檢測展青霉素的試劑盒，包括盒體、盒蓋構(gòu)成的盒封閉體和置于盒體內(nèi)的膠體金試紙條，所述盒蓋上具有加樣孔、測試項(xiàng)標(biāo)識(shí)和結(jié)果觀察孔；其特征在于所述測試項(xiàng)標(biāo)識(shí)設(shè)在所述加樣孔和所述結(jié)果觀察孔之間，所述盒封閉體上下表面的一對(duì)對(duì)角為弧形，所述盒封閉體上還設(shè)有透氣孔，所述膠體金試紙條的金標(biāo)纖維墊包被有膠體金標(biāo)記的展青霉素單抗，所述膠體金試紙條的纖維素藥膜上的檢測線T線和對(duì)照線C線上分別包被有展青霉素-牛血清蛋白BSA偶聯(lián)物和兔抗小鼠IgG多抗。所述透氣孔設(shè)在所述盒封閉體盒蓋一面。所述透氣孔為多個(gè)，呈扇形排列。 所述盒體內(nèi)設(shè)有安裝膠體金試紙條的定位槽，當(dāng)所述膠體金試紙條放置于盒體內(nèi)的定位槽時(shí)，對(duì)應(yīng)于盒蓋加樣孔處為樣品纖維墊；對(duì)應(yīng)于測試項(xiàng)標(biāo)識(shí)處為金標(biāo)纖維墊，對(duì)應(yīng)于所述結(jié)果觀察孔處為纖維素藥膜。所述盒體設(shè)有連接裝置，所述盒蓋和盒體通過連接裝置可拆卸式連接。所述盒蓋上對(duì)應(yīng)于盒體的一面設(shè)有多個(gè)小孔,所述所述盒體對(duì)應(yīng)于盒蓋的一面設(shè)有與所述盒體一體的凸起，所述凸起與所述盒蓋上的小孔數(shù)量大小相適配。所述盒體上設(shè)有樣品編號(hào)。所述樣品編號(hào)設(shè)在所述盒封閉體盒蓋一面，并且靠近所述結(jié)果觀察孔的一側(cè)。技術(shù)效果本實(shí)用新型的快速檢測展青霉素的試劑盒，包括盒體、盒蓋構(gòu)成的盒封閉體和置于盒體內(nèi)的膠體金試紙條，所述盒蓋上具有加樣孔、測試項(xiàng)標(biāo)識(shí)和結(jié)果觀察孔；其特征在于所述測試項(xiàng)標(biāo)識(shí)設(shè)在所述加樣孔和所述結(jié)果觀察孔之間，便于觀察和使用，便于識(shí)別具體檢測項(xiàng)目，所述盒封閉體上下表面的一對(duì)對(duì)角為弧形，節(jié)省材料空間，并且美觀大方，所述盒封閉體上還設(shè)有透氣孔，使得盒體內(nèi)能夠與外界保持氣流相通，在檢測時(shí)，保證反應(yīng)膜正常發(fā)揮毛吸作用，使檢測物能夠完全地快速地定向移動(dòng)至透氣孔端，避免了阻滯或者不完全泳動(dòng)等現(xiàn)象，保證了檢測的靈敏性、準(zhǔn)確性和高效率。所述膠體金試紙條的金標(biāo)纖維墊包被有膠體金標(biāo)記的展青霉素單抗用于識(shí)別樣品中的展青霉素或檢測線T線上包被的展青霉素抗原-牛血清蛋白BSA偶聯(lián)物，所述膠體金試紙條的纖維素藥膜上所設(shè)的檢測線T線和對(duì)照線C線上分別包被有展青霉素抗原-牛血清蛋白BSA偶聯(lián)物和兔抗小鼠IgG多抗，用于具體的特異性反應(yīng)的顯色。本實(shí)用新型優(yōu)選將透氣孔開在所述盒蓋上。防止檢測液從透氣孔滴漏出來染到操作人員的皮膚上。本實(shí)用新型進(jìn)一步優(yōu)選透氣孔為多個(gè)小孔，呈扇形排列。多個(gè)小孔的設(shè)計(jì)使通氣孔既起到通氣的作用，又不會(huì)讓反應(yīng)膜暴露出來，從而避免污染到人的皮膚。扇形排列較為美觀。本實(shí)用新型所述盒體內(nèi)設(shè)有安裝膠體金試紙條的定位槽，當(dāng)所述膠體金試紙條放置于盒體內(nèi)的定位槽時(shí)，對(duì)應(yīng)于盒蓋加樣孔處為樣品纖維墊，對(duì)應(yīng)于測試項(xiàng)標(biāo)識(shí)處為金標(biāo)纖維墊，對(duì)應(yīng)于所述結(jié)果觀察孔處為纖維素藥膜。所述盒封閉體設(shè)有連接裝置，所述盒蓋和盒體通過連接裝置可拆卸式連接，一方面方便使用，另一方面盒體和盒蓋可重復(fù)使用，節(jié)省資源。[0022]所述盒蓋上對(duì)應(yīng)于盒體的一面設(shè)有多個(gè)小孔，所述盒體對(duì)應(yīng)于盒蓋的一面設(shè)有與所述盒體一體的凸起，所述凸起與所述盒蓋上的小孔數(shù)量大小相適配，加工制作簡單，方便拆卸，不易污染。所述盒封閉體上還設(shè)有樣品編號(hào)，便于查找、區(qū)分，便于識(shí)別產(chǎn)品類別及測試項(xiàng)目。本實(shí)用新型優(yōu)選所述樣品編號(hào)設(shè)在所述盒封閉體盒蓋一面，并且靠近所述結(jié)果觀察孔的一側(cè)，便于使用及觀察。本實(shí)用新型操作簡單，使用方便，拿來即用，不需要本領(lǐng)域的專業(yè)人員，不需要任何儀器，能夠滿足不同層次人員的需要，容易普及到食品行業(yè)及普通家庭，以符號(hào)顯示結(jié)果，擺脫了對(duì)設(shè)備、儀器、人員及貯存和運(yùn)輸環(huán)境的特殊要求，并且具有快速、簡便、靈敏、準(zhǔn)確、特異的特點(diǎn)。

圖I本實(shí)用新型試劑盒盒蓋示意圖圖2本實(shí)用新型試劑盒優(yōu)選方案盒蓋示意圖圖3本實(shí)用新型試劑盒示意圖圖4本實(shí)用新型試劑盒優(yōu)選方案示意圖圖5本實(shí)用新型試劑盒盒體示意圖[0031 ] 圖6本實(shí)用新型膠體金試紙條示意圖其中I-盒蓋，2-盒體，3-加樣孔，4-測試項(xiàng)標(biāo)識(shí)，5-結(jié)果觀察孔，6_盒封閉體，7-樣品編號(hào)，8-膠體金試紙條，9-凸起，10-樣品纖維墊，11-金標(biāo)纖維墊，12-纖維素藥膜，13-吸水材料墊，14-透氣孔。
具體實(shí)施方式
提供下述實(shí)施例是為了更好地進(jìn)一步理解本實(shí)用新型，并不局限于所述最佳實(shí)施方式，不對(duì)本實(shí)用新型的內(nèi)容和保護(hù)范圍構(gòu)成限制，任何人在本實(shí)用新型的啟示下或是將本實(shí)用新型與其他現(xiàn)有技術(shù)的特征進(jìn)行組合而得出的任何與本實(shí)用新型相同或相近似的產(chǎn)品，均落在本實(shí)用新型的保護(hù)范圍之內(nèi)。本實(shí)用新型操作簡單、使用方便，美觀大方、成本低廉，具有快捷、準(zhǔn)確、方便、價(jià)廉的特點(diǎn)。說明書附圖中Pat是指展青霉素標(biāo)示項(xiàng)。實(shí)施例I.本實(shí)用新型的快速檢測展青霉素的試劑盒，包括盒體2、盒蓋I構(gòu)成的盒封閉體6和置于盒體2內(nèi)的膠體金試紙條8，所述盒蓋I上具有加樣孔3、測試項(xiàng)標(biāo)識(shí)4和結(jié)果觀察孔5 ;其特征在于所述測試項(xiàng)標(biāo)識(shí)4設(shè)在所述加樣孔3和所述結(jié)果觀察孔5之間，便于觀察和使用，便于識(shí)別具體檢測項(xiàng)目，所述盒封閉體6上下表面的一對(duì)對(duì)角為弧形，節(jié)省材料空間，并且美觀大方，所述盒封閉體6上還設(shè)有透氣孔14，使得盒體2內(nèi)能夠與外界保持氣流相通，在檢測時(shí)，保證反應(yīng)膜正常發(fā)揮毛吸作用，使檢測物能夠完全地快速地定向移動(dòng)至透氣孔14端，避免了阻滯或者不完全泳動(dòng)等現(xiàn)象，保證了檢測的靈敏性、準(zhǔn)確性和高效率。所述膠體金試紙條8的金標(biāo)纖維墊11包被有膠體金標(biāo)記的展青霉素單抗用于與待檢液中的展青霉素或檢測線T線上包被的展青霉素偶聯(lián)抗原進(jìn)行特異性結(jié)合，所述膠體金試紙條8的纖維素藥膜12上所設(shè)的檢測線T線和對(duì)照線C線上分別包被有展青霉素抗原-牛血清蛋白BSA偶聯(lián)物和兔抗小鼠IgG多抗，用于具體特異性反應(yīng)的顯色。本實(shí)用新型優(yōu)選將透氣孔14開在所述盒蓋I上。防治檢測液從透氣孔14滴漏出來染到操作人員的皮膚上。本實(shí)用新型進(jìn)一步優(yōu)選透氣孔14為多個(gè)小孔，呈扇形排列。多個(gè)小孔的設(shè)計(jì)使通氣孔既起到通氣的作用，又不會(huì)讓反應(yīng)膜暴露出來，從而避免污染到人的皮膚。扇形排列較為美觀。本實(shí)用新型所述盒體2內(nèi)設(shè)有安裝膠體金試紙條8的定位槽，當(dāng)所述膠體金試紙條8放置于盒體2內(nèi)的定位槽時(shí)，對(duì)應(yīng)于盒蓋I加樣孔3處為樣品纖維墊，對(duì)應(yīng)于測試項(xiàng)標(biāo)識(shí)4處為金標(biāo)纖維墊11，對(duì)應(yīng)于所述結(jié)果觀察孔5處為纖維素藥膜12。 所述盒封閉體6設(shè)有連接裝置，所述盒蓋I和盒體2通過連接裝置可拆卸式連接，一方面方便使用，另一方面盒體2和盒蓋I可重復(fù)使用，節(jié)省資源。所述盒蓋I上對(duì)應(yīng)于盒體2的一面設(shè)有多個(gè)小孔,所述盒體2對(duì)應(yīng)于盒蓋I的一面設(shè)有與所述盒體2—體的凸起，所述凸起與所述盒蓋I上的小孔數(shù)量大小相適配，加工制作簡單，方便拆卸，不易污染。所述盒封閉體6上還設(shè)有樣品編號(hào)7，便于查找、區(qū)分，便于識(shí)別產(chǎn)品類別及測試項(xiàng)目。本實(shí)用新型優(yōu)選所述樣品編號(hào)7設(shè)在所述盒封閉體6盒蓋I 一面，并且靠近所述結(jié)果觀察孔5的一側(cè)，便于使用及觀察。實(shí)驗(yàn)例2.本實(shí)用新型試紙條的制備方法試紙條的制備程序如下步驟I.纖維素藥膜的包被I、將兔抗鼠IgG多抗作為對(duì)照線C線，展青霉素-牛血清蛋白BSA偶聯(lián)物作為檢測線T線，兩個(gè)試劑分別按照所需的濃度(范圍I. 5-2mg/ml)，用20mM的PBS進(jìn)行稀釋。2、將配制好的上述試劑，按照C、T線位置分別包被到硝酸纖維素膜上，然后干燥6小時(shí)，溫度為30°C，濕度< 35%，從而制得纖維素藥膜。步驟2.金標(biāo)纖維層的標(biāo)記I、取40nm的膠體金溶液，按終濃度8-12 μ 1/ml加入O. 2M K2CO3，加入一定濃度的展青霉素單抗，放置室溫反應(yīng)15-30分鐘，然后按照濃度20 μ Ι/ml加入20%BSA的溶液，用于飽和游離的膠體金。最后lOOOOrpm，離心30分鐘，去除上清液中未結(jié)合的蛋白質(zhì)。用等體積的O. 5m硼酸溶液(含l%Tween、5%蔗糖、1%水解BSA、1%水解酪蛋白、O. 1%PVA)復(fù)溶沉淀的膠體金標(biāo)記原液。2、將上述膠體金標(biāo)記原液按照10-20%濃度，用O. 5m硼酸溶液進(jìn)行稀釋，從而配制成標(biāo)記后的膠體金工作液。然后再將該工作液鋪于30*30cm玻璃纖維墊上,干燥6小時(shí),溫度為30°C，濕度彡35%，從而制得金標(biāo)墊。步驟3.試紙條的組裝I、將塑料板平放在操作臺(tái)上，貼上雙面膠帶。[0055]2、撕掉雙面膠帶襯紙，在距塑料板上端30mm處貼上已包被有展青霉素-牛血清蛋白BSA偶聯(lián)物和兔抗小鼠IgG多抗的硝酸纖維素膜。3、將粗纖維吸水紙壓硝酸纖維素膜上端2mm貼上，上端與塑料板上端取齊。4、將小無紡布?jí)合跛崂w維素膜下端O. 5mm處貼上。5、將金標(biāo)墊取齊壓于小無紡布上面。 6、將玻璃纖維墊壓于金標(biāo)墊上約一半，下端距塑料板下端2mm處貼上。7、將大無紡布與金標(biāo)墊上端取齊，下端與塑料板下端取齊貼上。8、將箭頭膠帶壓硝酸纖維素膜I. 5-2mm貼上。9、將手持端膠帶壓粗纖維吸水紙貼上。本實(shí)用新型一種快速檢測展青霉素的試劑盒采用競爭抑制法原理和免疫膠體金技術(shù)相結(jié)合快速檢測食品中的展青霉素。本實(shí)用新型試紙條操作簡單，使用方便，拿來即用，不需要本領(lǐng)域的專業(yè)人員，能夠滿足不同層次人員的需要，容易普及到食品行業(yè)及普通家庭，本實(shí)用新型以符號(hào)顯示結(jié)果，擺脫了對(duì)設(shè)備、儀器、人員及貯存和運(yùn)輸環(huán)境的特殊要求，用于果品類食品中展青霉素的快速檢測。本實(shí)用新型試劑盒簡捷、靈敏、準(zhǔn)確，并且容易保存，使用方便，美觀大方。
權(quán)利要求1.一種快速檢測展青霉素的試劑盒，包括盒體、盒蓋構(gòu)成的盒封閉體和置于盒體內(nèi)的膠體金試紙條，所述盒蓋上具有加樣孔、測試項(xiàng)標(biāo)識(shí)和結(jié)果觀察孔；其特征在于所述測試項(xiàng)標(biāo)識(shí)設(shè)在所述加樣孔和所述結(jié)果觀察孔之間，所述盒封閉體上下表面的一對(duì)對(duì)角為弧形，所述盒封閉體上還設(shè)有透氣孔，所述膠體金試紙條的金標(biāo)纖維墊包被有膠體金標(biāo)記的展青霉素單抗，所述膠體金試紙條的纖維素藥膜上的檢測線T線和對(duì)照線C線上分別包被有展青霉素-牛血清蛋白BSA偶聯(lián)物和兔抗小鼠IgG多抗。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的快速檢測展青霉素的試劑盒，其特征在于，所述透氣孔設(shè)在所述盒封閉體盒蓋一面。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的快速檢測展青霉素的試劑盒，其特征在于，所述透氣孔為多個(gè)，呈扇形排列。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的快速檢測展青霉素的試劑盒，其特征在于，所述盒體內(nèi)設(shè)有安裝膠體金試紙條的定位槽，當(dāng)所述膠體金試紙條放置于盒體內(nèi)的定位槽時(shí)，對(duì)應(yīng)于盒蓋加樣孔處為樣品纖維墊；對(duì)應(yīng)于測試項(xiàng)標(biāo)識(shí)處為金標(biāo)纖維墊；對(duì)應(yīng)于所述結(jié)果觀察孔處為纖維素藥膜。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的快速檢測展青霉素的試劑盒，其特征在于，所述盒體設(shè)有連接裝置，所述盒蓋和盒體通過連接裝置可拆卸式連接。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的快速檢測展青霉素的試劑盒，其特征在于，所述盒蓋上對(duì)應(yīng)于盒體的一面設(shè)有多個(gè)小孔，所述盒體對(duì)應(yīng)于盒蓋的一面設(shè)有與所述盒體一體的凸起，所述凸起與所述盒蓋上的小孔數(shù)量大小相適配。
專利摘要本實(shí)用新型“一種快速檢測展青霉素的試劑盒”屬于食品行業(yè)檢測耗材，其特征在于，所述測試項(xiàng)標(biāo)識(shí)設(shè)在所述加樣孔和所述結(jié)果觀察孔之間，所述盒封閉體上下表面的一對(duì)對(duì)角為弧形，所述盒封閉體上還設(shè)有透氣孔，所述膠體金試紙條的金標(biāo)纖維墊包被有膠體金標(biāo)記的展青霉素單抗，所述膠體金試紙條的纖維素藥膜上的檢測線T線和對(duì)照線C線上分別包被有展青霉素-牛血清蛋白BSA偶聯(lián)物和兔抗小鼠IgG多抗。本實(shí)用新型試紙條采用競爭抑制法原理以及膠體金技術(shù)快速檢測展青霉素，用于果品類食品中展青霉素的快速檢測。本實(shí)用新型試劑盒簡捷、靈敏、準(zhǔn)確、特異，并且容易保存，使用方便，美觀大方。
文檔編號(hào)G01N33/577GK202710570SQ20122029128
公開日2013年1月30日 申請日期2012年6月15日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月15日
發(fā)明者張春山, 張永勝 申請人:北京中檢葆泰生物技術(shù)有限公司